染料木黄酮对成骨细胞内游离钙、钙调素水平及ALP、ATP酶的影响

目的研究不同浓度的染料木黄酮（genistein，GEN）对体外培养大鼠成骨细胞游离钙、钙调素、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、ATP酶的影响。方法采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞，加入不同浓度的染料木黄酮（10^-8mol／L，10^-7mol／L，10^-6mol／L，10^-5mol／L），以妊马雌酮（商品名：倍美力）（10^-8mol／L，10^-7mol／L，10^-6mol／L，10^-5mol／L）作为阳性对照组，用PNPP（对硝基苯磷酸盐）法测定ALP活性、放射生物法测定钙调素水平、激光扫描共聚焦显微镜测定细胞游离钙、比色法测定ATP酶活性。结果染料木黄酮对成骨细胞钙调素、ALP、Ca^2＋-ATP、细胞内游离钙水平的影响呈正相关性，并与其剂量成正相关性，但这些作用均低于雌激素水平（P〈0．01）。结论染料木黄酮能增加成骨细胞ALP、Ca^2＋-ATP活性和钙调素水平、钙离子震荡波，并与其浓度有关，作用与雌激素相似。     

二磷酸盐和骨碎补总黄酮对诱导后成骨细胞影响的实验研究

目的探索二磷酸盐和骨碎补总黄酮联合作用如何在分子水平发挥作用于成骨细胞,揭示其效果如何。方法使用诱导方法作用于骨髓基质干细胞,使之转化为成骨细胞;用RT-PCR检验成骨细胞;不同浓度的二磷酸盐或骨碎补总黄酮配制成条件培养基,作用于成骨细胞,并分析生长曲线,分析细胞基因碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ALP）和胶原酶Ⅰ（collagenase colⅠ）表达情况。结果骨髓基质细胞经过4周诱导可转化为表达colⅠ和ALP的成骨细胞,经过生长曲线分析,二磷酸盐和骨碎补总黄酮10^-4^-10-6mmol·L^-1时,对诱导后的成骨细胞有抑制作用;10^-8mmol·L^-1有促进作用;10^-10-10^-12mmol·L^-1不明显,其中10^-8mmol·L^-1作用最强;基因分析后,发现二磷酸盐和骨碎补总黄酮促进成骨细胞表达colⅠ和ALP,且两者合用效果大于单独用药。结论二磷酸盐和骨碎补总黄酮合用均可促进成骨细胞基因表达,且两者合用效果大于单独用药。     

持续给予hPTH1-34对体外成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究持续给予人甲状旁腺激素（human parathyroid hormone,hPTH）1-34对体外培养成骨细胞增殖与分化的干预作用。方法体外培养乳鼠成骨细胞,将细胞分为空白培养液对照组和10^-6、10^-7、10^-8mol·L^-1hPTH（1-34）3个不同剂量的给药组。每48h换1次液,换液时采用MTT法进行细胞增殖测定,同时检测细胞裂解液中的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和骨钙素（bone gla protein,BGP）的水平,持续培养6d。结果持续给予hPTH1-34作用48h后,各给药组的MTT均明显高于对照组且各给药组间差异均有显著性（P〈0.05）,至第6天时各给药组则均明显低于对照组（P〈0.05）。ALP和BGP测定结果显示持续给予hPTH1-34作用48h后,10^-6mol·L^-1PTH给药组的BGP含量明显高于对照组（P〈0.01）,其余各组ALP及BGP含量与对照组比较差异虽无显著性,但均值高于对照组,至第6天各给药组均明显低于对照组（P〈0.05）。结论持续给予hPTH（1-34）对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响与作用的时间和给药浓度密切相关。短期持续用药有促进作用,并且在10^-6-10^-8mol·L^-1浓度范围内呈剂量依赖性;长期持续用药抑制成骨细胞的增殖与分化,给药浓度越高抑制作用越强。     

Effect of estrogen on MMPs mRNA expression of osteoclasts

目的本实验通过体外分离培养兔破骨细胞，观察不同浓度雌激素对兔破骨细胞基质金属蛋白酶MMPmRNA表达的影响。方法体外分离培养出生24h内的新西兰兔破骨细胞，用含有不同浓度17β-雌二醇（0、10^-5～10^-13mol·L^-1）的M199培养液分别作用于破骨细胞，观察不同浓度雌激素及相同浓度雌激素不同时间对破骨细胞活性的影响，采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观察兔破骨细胞MMP-9 mRNA、MMP-8 mRNA表达状况。结果不同浓度17β-雌二醇对破骨细胞的活性有不同程度的抑制，同时对MMP-9 mRNA的表达有明显抑制作用，以10^-5、10^-6、10^-7mol·L^-1（P〈0．05）最为显著。所有破骨细胞均未表达MMP-8mRNA。结论不同浓度的雌激素呈时间和剂量依赖性地抑制破骨细胞的活性，对兔破骨细胞基质金属蛋白酶表达的调控作用随其浓度变化而不同。     

淫羊藿苷对小鼠骨髓源性破骨细胞诱导生成及骨吸收功能的影响

目的探讨淫羊藿苷对破骨细胞诱导产生及骨吸收功能的影响。方法用终浓度分别为25ng·mL^-1、30ng·mL^-1、10^-8mol·L^-1的M—CSF、RANKL、1，25（OH）2VitD3体外诱导培养小鼠骨髓源性破骨细胞，在此过程中加入终浓度分别为0、10^-7mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-5mol·L^-1的淫羊藿苷。倒置相差显微镜下观察活体细胞、HE染色、TRAP染色及降钙素受体染色鉴定破骨细胞，计数骨片上骨吸收陷窝数及面积，玻片上TRAP阳性多核细胞数。结果加药组随淫羊藿苷浓度的增加，骨片上形成的骨吸收陷窝数及面积，玻片上的TRAP阳性多核细胞数呈量的依赖性的减少，与非加药组比较，10^-5mol·L^-1、10^-5mol·L^-1浓度的淫羊藿苷组，差异有显著性（P〈0．05）。结论淫羊藿苷具有抑制破骨细胞诱导产生及骨吸收功能的作用，并随浓度增加抑制作用增强。     

棕榈酸及亚油酸对人成骨肉瘤细胞MG63作用的研究

目的探讨棕榈酸及亚油酸对人成骨肉瘤细胞MG63的作用。方法取对数生长期的MG63细胞分5组进行干预,分别是：①对照（CON）组;②棕榈酸1.0×10^-4mol·L^-1组;③棕榈酸5.0×10^-4mol·L^-1组;④棕榈酸10.0×10^-4mol·L^-1组;⑤棕榈酸5.0×10^-4mol·L^-1＋亚油酸1.0×10^-5mol·L^-1组。干预24h后用AO/PI荧光双染和TUNEL法观察细胞凋亡的形态学改变;用Annexin-V/FITC流式细胞技术检测早期细胞凋亡;用单细胞凝胶电泳评估细胞损伤和凋亡情况。结果随着棕榈酸浓度的增加,细胞凋亡比例增加,呈浓度梯度效应。棕榈酸组细胞凋亡百分比明显高于对照组及同时给予亚油酸组（P均〈0.05）。结论棕榈酸能引起成MG63细胞凋亡,亚油酸则对其有保护作用。     

地塞米松对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响

目的观察体外培养的不同月龄雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平的差异及地塞米松（1×10^-8mol/L）对不同月龄雌性大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法采用酶消化法分别提取、纯化和培养新生（24h以内）、2、4、8、12月龄雌性Wistar大鼠成骨细胞,并且用Western-blot、ECL法检测体外培养成骨细胞雌激素受体的水平。结果提取的大鼠成骨细胞生长情况良好,碱性磷酸酶染色阳性,具有成骨细胞特性。Western-blot结果显示：雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体水平在新生鼠和8月龄鼠较高,在2、4、12月龄鼠较低;地塞米松组成骨细胞雌激素受体表达水平在新生和2月龄低于对照组,在4、8、12月龄高于对照组。结论不同月龄雌性大鼠体外培养的成骨细胞雌激素受体的表达水平不同;1×10^-8mol/L地塞米松对体外培养的雌性大鼠成骨细胞雌激素受体水平有影响且与大鼠的月龄有关。     

补肾方剂拮抗地塞米松促骨髓基质细胞向成脂细胞分化的实验研究

目的观察补肾方剂对地塞米松促骨髓基质干细胞成脂作用的影响。方法从成年SD大鼠分离出骨髓基质干细胞体外培养,取第三代细胞用于实验。分别在培养液其中加入1×10^-7mol·L^-1的地塞米松（A组）、1×10^-7mol·L^-1的地塞米松和80mg·L^-1的补肾方剂（B组）,C组为对照组。分别应用MTT、碱性磷酸酶活性与三酰甘油含量法检测MSCs增殖与分别向成骨和成脂方向分化的能力。结果实验组（A组和B组）的MSCs增殖能力较对照组明显降低（P〈0.05）,但A组与B组之间差异无显著意义（P〉0.05）;B组MSCs硷性磷酸酶活性较A组增高（P〈0.05）,而三酰甘油含量低于A组（P〈0.05）。结论补肾方剂不能干预地塞米松对MSCs增殖的抑制作用,但具有抑制地塞米松促进MSCs向成脂方向分化的作用。     

脱氢表雄酮在体外对成骨细胞代谢和IL-1β的影响

目的探讨脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone,DHEA）对离体大鼠成骨细胞和IL-1β的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,取传一代细胞,分别给予10^-5mmoL／L、10^-7mmoL／L、10^-9mmol／LDHEA培养72h,以10^-8mmoL／L雌二醇（estradiol,E2）为阳性对照,另设空白对照组。碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色鉴定成骨细胞,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,PNPP法测定ALP活性。ELISA法测定不同浓度DHEA培养液中IL-1β的水平。结果不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力和ALP的活性均有上升,其中以10^-7mmoL／LDHEA组最显著（P〈0．01）,其作用和E2相似（P〉0．05）;10^-9mmoL／LDHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组（P〈0．05）。不同浓度的DHEA组IL-1β呈下降趋势,成骨细胞增殖能力及ALP活性和IL-1β成负相关。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖,提高ALP活性,其作用可能和抑制IL-1β有关。     

雄激素对大鼠胎颅盖骨成骨细胞雌激素受体基因表达的影响

目的 通过研究雄激素（十一酸睾酮）对成骨细胞雌激素受体基因表达的影响，探讨雄激素对成骨细胞增殖和分化的调控机制。方法 通过对体外培养的胎鼠颅盖骨成骨细胞实施含10^-10mol／L、10^-9mol／L、10^-8mol／L三种浓度雄激素的培养液干预，采用RT-PCR的方法半定量观察成骨细胞中雌激素受体基因mRNA表达的变化，用以分析雄激素对成骨细胞中雌激素受体的影响，并进而探讨雄激素对成骨细胞的影响。结果 实验选用的各浓度组均未出现细胞毒性反应，雄激素干预使成骨细胞中雌激素受体alpha基因表达上调，而雌激素受体beta基因表达轻微下调。结论 雄激素可以特异性地在转录水平调节成骨细胞中雌激素受体基因的表达。     

膝关节后交叉韧带断裂治疗临床分析

目的 对35例膝关节后交叉韧带断裂治疗进行临床分析,重点探讨了有关交叉韧带断裂的治疗问题。方法 经明确诊断后,分析采用胫骨附着处撕脱骨折复位固定手术治疗26例、早期髌韧带中1／3移植重建3例、单纯长腿石膏固定6例。结果 本组病例全部进行随访,随访时间13个月－5年,胫骨附着处撕脱骨折复位固定及髋韧带中1／3移植重建29例为优良、单纯长腿石膏固定6例为差。结论 后交叉韧带断裂后应该及时给予手术修复;膝后外侧手术入路,操作简单,暴露充分;少于3个月的陈旧性病例仍适应手术治疗。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。