丹参注射液联合消瘤颗粒对子宫肌瘤大鼠激素水平的影响及机制研究

目的 探讨丹参注射液联合消瘤颗粒对子宫肌瘤大鼠激素水平的影响,并分析其机制.方法 以30只成年雌性未孕无特定病原体级SD大鼠为研究对象,采用苯甲酸雌二醇联合黄体酮肌注建立子宫肌瘤模型,并按照随机数字表法分为4组:模型对照组(n=7),腹腔注射和灌胃等量0.9％氯化钠溶液)、治疗A组(n=7),腹腔注射1 mL丹参注射液...     

葛根素对急性肝衰竭小鼠脾脏淋巴细胞亚型和肝脏炎症反应的影响

目的 探究葛根素对急性肝衰竭(ALF)小鼠脾脏淋巴细胞亚型和肝脏炎症反应的影响.方法 60只8～10周龄C57/BL6雄性小鼠按照随机数字表法分为对照组(正常小鼠,腹腔注射等量的0.9％氯化钠溶液),ALF组(ALF模型小鼠,腹腔注射等量的0.9％氯化钠溶液),葛根素治疗组(ALF模型小鼠,腹腔注射100 mg·kg-...     

桂枝茯苓胶囊对子宫肌瘤大鼠子宫系数和激素水平的影响相关机制研究

目的探讨桂枝茯苓胶囊对子宫肌瘤大鼠的保护作用及其机制是否与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-核因子E2相关因子2 (Nrf2)通路有关。方法选择50只无特定病原体(SPF)级健康雌性未孕SD大鼠为研究对象,由西安交通大学提供,体重180～220 g。按照随机数字表法均分为5组:对照组、模型组、桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量组,各10只。对照组不建模,前肢腋下皮下注射0.9%氯化钠溶液1 mL 30 d,再灌胃0.9%氯化钠溶液1 mL 42 d。模型组、桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量组通过前肢腋下皮下注射己烯雌酚0.2 mg·kg^-1·d^-1,30 d,建立子宫肌瘤模型。模型组再灌胃0.9%氯化钠溶液1 mL 42 d,桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量组分别再灌胃桂枝茯苓胶囊0.8、1.6、3.2 g·kg^-1·d^-1,42 d。观察各组大鼠子宫系数的变化,苏木精和伊红染色观察子宫肌瘤大鼠子宫平滑肌形态,酶联免疫分析测定血清雌二醇和孕酮水平,实时荧光定量PCR检测AMPK、Nrf2、Bcl-2和Bax的mRNA表达...     

脐带间充质干细胞对妊娠期糖尿病大鼠血脂代谢及免疫功能的影响

目的 探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠血脂代谢及免疫功能的影响。方法 分离人UC-MSCs,分别在2D及3D条件下进行培养,观察细胞形态并进行细胞表面标志物检测。加入γ干扰素(INF-γ)进行预处理,分为IFN-γ组、IFN-γ+2D UC-MSC组、IFN-γ+3D UC-MSC组。采用酶联免疫吸附试验检测上清中白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)和前列腺素E2(PGE-2)水平。采用随机数字表法将50只SD雌性大鼠分为：对照组(n=10)、妊娠糖尿病组(GDM组,n=10)、妊娠糖尿病+0.9%氯化钠溶液组(GDM+NS组,n=10)、2D培养UC-MSC移植组(2D UC-MSCs移植组,n=10)、3D培养UC-MSC移植组(3D UC-MSCs移植组,n=10),除对照组普通饲料喂养外,其余4组均采用高脂饮食喂养4周后交配,建立GDM大鼠模型。GDM模型成功后2D UC-MSCs移植组及3D UC-MSCs移植组进行尾静脉注射UC-MSCs, GDM+NS组注射同等量的0.9%氯化钠溶液。移植14 ...     

参麦注射液对早期脓毒症大鼠血清C反应蛋白和促炎性介质水平的影响

目的研究参麦注射液(shenmai,SM)对盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)脓毒症大鼠模型早期促炎性介质IL-6、IL-8和C反应蛋白(CRP)水平的影响。方法96只SD大鼠随机分为A组(假手术组,n=32)、B组(0.9%氯化钠溶液组,n=32)和C组(参麦注射液组,n=32),分别于CLP造模后1/2、12、24、36 h A组、B组皮下注射0.9%氯化钠溶液(5 ml/kg),C组皮下注射参麦注射液(5 ml/kg),并于术后12、24、36、48 h测量三组SD大鼠血清中IL-6、IL-8、CRP水平。结果CLP造模后B、C两组血清IL-6、IL-8、CRP水平均明显升高,C组在各时点的IL-6、IL-8、CRP水平显著低于B组(P<0.01)。结论参麦注射液可显著降低早期脓毒症大鼠血清CRP、IL-6、IL-8水平,可能对早期脓毒症大鼠具有保护作用。     

六味补气胶囊对COPD模型大鼠JAK/STAT通路及炎性反应的影响及相关机制研究

目的探讨六味补气胶囊对COPD模型大鼠JAK/STAT通路及炎性反应的影响及相关的分子机制。方法体外构建大鼠COPD模型,45只大鼠随机分为3组,对照组,模型组和实验组,每组15只。对照组只灌胃处理等量0.9%氯化钠溶液。模型组利用香烟暴露法制作大鼠COPD模型,灌胃处理等量0.9%氯化钠溶液。实验组在造模成功后采用六味补气胶囊对COPD模型大鼠进行灌胃治疗2周。利用Western blot法检测JAK2/p-JAK2和STAT3/pSTAT3的蛋白表达,利用ELISA法检测炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和干扰素γ(IFN-γ)水平,以及化学定量法检测基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-12水平。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,模型组大鼠JAK2/p-JAK2和STAT3/p-STAT3的蛋白表达显著提高,与模型组比较,六味补气胶囊显著抑制COPD模型大鼠JAK2/p-JAK2和STAT3/p-STAT3的蛋白表达(P0.05);ELISA结果显示,与对照组比较,模型组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6以及IFN-γ水平显著提高,六味补气胶囊显著下调COPD模型大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6以及IFN-γ水平(P0.05);化学定量法检测结果显示,与对照组比较,模型大鼠MMP-9、MMP-12水平显著提高,而六味补气胶囊显著下调COPD模型大鼠MMP-9、MMP-12水平(P0.05)。结论六味补气胶囊能显著抑制COPD大鼠炎症反应,其分子机制可能与抑制JAK/STAT通路相关。     

西红花苷对去卵巢骨质疏松大鼠Wnt/β-Catenin信号通路的影响

目的分析西红花苷对去卵巢骨质疏松大鼠Wnt/β-Catenin信号通路的影响。方法选取10只健康SD大鼠为对照组,并选取45只健康SD大鼠建模。采用双侧卵巢切除法最终成功构建40只去卵巢骨质疏松SD模型大鼠,按照随机数字表法分为低剂量组、中剂量组、高剂量组、模型组,每组各10只,其中低剂量组每日给予20 mg/kg的西红花苷,中剂量组每日给予40 mg/kg的西红花苷,高剂量组每日给予80 mg/kg的西红花苷,模型组每日给予等量0.9%氯化钠溶液,对照组每日给予等量0.9%氯化钠溶液。各组大鼠连续12周均每日腹腔注射不同浓度西红花苷和等量0.9%氯化钠溶液。比较12周后各组大鼠各部位骨密度水平、血清骨保护素(OPG)、骨钙素(BGP)、钙离子(Ca²⁺)、磷离子(P³⁺)、碱性磷酸酶(ALP)水平、生物力学水平、Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白灰度值及mRNA相对表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠的血清OPG、Ca²⁺、P³⁺水平、腰椎、右股骨近端、左股骨近端的骨密度水平、股骨和腰椎...     

脊痛消胶囊对神经根型颈椎病模型大鼠脊髓组织白细胞介素-1β、白细胞介素-6及组胺的影响

目的研究脊痛消胶囊对神经根型颈椎病模型大鼠脊髓组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及组胺(HA)的影响。方法通过手术植入异物使神经根受到卡压的方式建立神经根型颈椎病大鼠模型,将大鼠随机分成脊痛消胶囊组(中药组)、布洛芬缓释对照组(西药组)、模型组,空白对照组,为排除手术创伤所致疼痛对实验结果的影响加设假手术组。于造模3 d后中药组和西药组分别给予不同配比的脊痛消胶囊和布洛芬混悬液灌胃;空白组、假手术组及模型对照组每日给予等量0.9%氯化钠注射溶液灌胃。观测给药后第7天和第14天分批处死实验大鼠取C5至T1脊髓组织,采用酶联免疫法检测IL-1β、IL-6、HA表达量。结果给药后第7、14天模型组大鼠脊髓组织IL-1β、IL-6、HA含量明显升高,与空白对照组比较差异有统计学意义,而中药组大鼠上述物质的表达量与模型组比较相对较少,两组比较差异有统计学意义。结论脊痛消胶囊能有效降低神经根型颈椎病模型大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6及HA的含量。     

双氯芬酸钠对骨关节炎大鼠模型软骨细胞炎症和滑膜巨噬细胞极化的影响

目的探究双氯芬酸钠对骨关节炎(OA)大鼠模型软骨细胞炎症和滑膜巨噬细胞极化的影响。方法 45只6周龄雄性Sprague-Dawley大鼠用于本研究,大鼠左膝关节的髌韧带关节内注射单碘乙酸(MIA)溶液诱导OA模型。根据实验目的将实验大鼠分为3组:对照组(关节内注射无菌0.9%氯化钠溶液作为实验对照,n=15),OA模型组(大鼠左膝关节的髌韧带关节内注射MIA诱导OA模型,n=15),双氯芬酸钠组(MIA注射后14 d,用双氯芬酸钠口服治疗8 d,n=15)。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测大鼠血清炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-12和IL-10浓度。使用相应试剂盒测定大鼠血清丙二醛、还原型谷胱甘肽(GSH)和过氧化物歧化酶(SOD)浓度。通过蛋白印迹分析炎症介质相关蛋白的表达。通过免疫组织化学分析检测CD86和Arg1的蛋白表达。通过免疫细胞化学测定检查大鼠滑膜组织中CD86⁺和CD163⁺巨噬细胞的数量。组织学和免疫组织化学分析大鼠关节组织。通过膝弯曲试验和步态分析得分评估各组大鼠的关节疼痛。...     

高渗盐水对心搏骤停后脑复苏大鼠血脑屏障的作用研究

目的 观察高渗盐水对心搏骤停后脑复苏大鼠血脑屏障的作用.方法 将72只SD大鼠随机分为正常对照组(S组)、模型组(MS组)、高渗盐水(3％氯化钠溶液)静脉注射组(HS组)、0.9％氯化钠注射液静脉注射组(NS组),各18只.MS组、NS组和HS组均采用改良窒息心搏骤停法建立急性脑缺血模型,并进行心肺复苏操作.S组和MS...     

骨桥蛋白与冠状动脉钙化积分的相关性分析

目的：探讨骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）与冠状动脉钙化积分的相关性。方法：采用ELISA法检测正常人和冠状动脉不同钙化积分冠心病患者血清中OPN水平,比较其差异性。结果：OPN在不同钙化积分疾病组和对照组之间其血清水平浓度差异显著,疾病组OPN血清浓度与对照组比较,差异显著。结论：OPN与冠状动脉钙化关系密切,OPN对冠心病诊断价值明显。     

重组慢病毒载体转染羊骨髓间充质干细胞及成骨基因表达量的变化简

背景：碱性成纤维细胞生长因子具有促进骨髓基质细胞分裂增殖作用,而骨形态发生蛋白2在诱导新骨形成方面有重要的研究意义。目的：分析骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子基因单独和联合转染对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化的影响,比较Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因于转染前后骨髓间充质干细胞相对表达量的差别,为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。 方法：构建碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2慢病毒载体,分别转染羊骨髓间充质干细胞,得到碱性成纤维细胞生长因子组、骨形态发生蛋白2组、联合组、对照组细胞,提取RNA后采用实时定量PCR的方法检测Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因的mRNA水平相对表达量的变化。 结果与结论：对照组、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2及联合组4组间非特异性成骨基因表达量存在明显差异（P ＜0.05）,且碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白2具有交互作用（P ＜0.05）,碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2联合组的Ⅰ型胶原蛋白和骨钙蛋白基因表达量明显高于其他3组,且差异有显著性意义（P ＜0.05）;但是骨桥蛋白基因中差异无显著性意义（P ＞0.05）。体外实验结果显示联合转染组中的Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因mRNA水平相对表达量较多,该组细胞的成骨功能最强,适合作为组织工程骨的种子细胞。     

人骨形态发生蛋白-2重组慢病毒载体转染羊骨髓间充质干细胞及其成骨调节作用

目的探讨人骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2,BMP-2）基因转染对体外培养的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖和骨向分化的影响。方法构建携带人BMP2基因的慢病毒载体,转染诱导羊第4代BMSCs为转染组,选择未转染的BMSCs为对照组。采用Western blot检测2组细胞BMP-2与成骨相关蛋白表达情况,采用实时定量PCR法检测细胞I型胶原、骨钙素、骨桥蛋白mRNA相对表达量的变化情况。结果转染组骨钙素、骨桥蛋白mRNA及蛋白表达量较对照组增高,差异有统计学意义（P〈0．05）,2组I型胶原mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论BMP-2基因转染可增强羊BMSCs增殖和骨向分化的能力,可作为组织工程骨的种子细胞。     

糖尿病肾病尿毒症患者成纤维细胞生长因子23和骨保护素与桡动脉血管钙化的相关性

目的检测糖尿病肾病尿毒症患者血清及桡动脉成纤维细胞生长因子-23(FGF-23)和骨保护素(OPG)的表达,探讨其与桡动脉血管钙化(VC)的相关性。方法选取36例糖尿病肾病尿毒症且尚未开始血液透析的患者为研究对象,并选取年龄、性别与之相匹配的健康人群40例作为对照组。在病例组建立自体动静脉内瘘吻合手术时留取修剪下的桡动脉,行von kossa染色检测有无钙化,并计算钙化积分;免疫组织化学检测桡动脉FGF-23和OPG的表达。测定两组血清FGF-23、OPG、血红蛋白浓度(Hb)、白蛋白(ALB)、钙(Ca)、磷(P)、全段PTH(i PTH)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、C反应蛋白(CRP)的水平。结果病例组血清FGF-23、OPG水平明显高于对照组(P0.05)。随着血管钙化程度加重,FGF-23和OPG在血清的水平升高,并且在血管壁免疫组织化学染色阳性表达吸光度值升高,病例组血P、FGF-23、OPG与桡动脉血管钙化有相关性。结论糖尿病肾病尿毒症患者普遍存在桡动脉血管钙化,FGF-23和OPG与桡动脉血管钙化呈正相关。     

Significance of coronary artery calcification score (CACS) for the detection of coronary artery disease (CAD) in chronic dialysis patients

BACKGROUND: Coronary artery disease (CAD) is a principal cause of death in patients with end-stage renal disease (ESRD). The coronary artery calcification score (CACS), determined by electron-beam computed tomography (EBCT), is useful for the detection of CAD in non-ESRD patients. There are few reports on the usefulness of EBCT for the detection of CAD, however, in ESRD patients. We examined the relation between CACS and CAD in ESRD patients. METHODS: Coronary angiography (CAG) was used to diagnose CAD in patients with significant coronary artery stenosis (>or=50%). We examined 76 ESRD patients on chronic dialysis therapy from 1997 to 2005, of which 51 are men, 25 are women, mean (S.D.) age of 57.9 (12.1) years and mean (S.D.) HD duration of 7.7 (6.6) years. There were 50 (35 men, 15 women) patients with CAD and 26 (16 men, 10 women) without CAD. RESULTS: The median CACS was 1290 in all patients, 1689 in the CAD group and 527 in the non-CAD group; the mean (S.D.) CACS was 1833 (2003) in all patients, 2338 (2209) in the CAD group and 861 (991) in the non-CAD group. CACS was significantly higher in the CAD group than in the non-CAD group. The CACS cutoff values for predicting CAD were calculated at intervals of 100. At the cutoff values of >or=100, >or=500, >or=1000, >or=2000, and >or=3000, the sensitivity was 98%, 90%, 68%, 42%, and 32% and the specificity was 35%, 50%, 69%, 85%, and 96%, respectively. CONCLUSIONS: EBCT is not adequate for screening asymptomatic ESRD patients. Because EBCT is less invasive than CAG, further study is necessary to determine whether CAG should be performed in all high-risk ESRD patients on chronic dialysis.     

Runx2过表达慢病毒对人牙周韧带细胞体外增殖和成骨能力的影响

【目的】探讨Runx2过表达慢病毒对人牙周軔带细胞(PDLCs)体外增殖和成骨能力的影响。【方法】体外培养PDLCs,取对数期细胞分为空白对照组(BC组,不做任何处理)、阴性对照组[NC组,用感染复数(MOI)=50的不含Runx2基因的慢病毒感染细胞]、Runx2组(用MOI=50的Runx2过表达慢病毒转染细胞)。转染48h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率。采用噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞体外增殖情况,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western Blot)检测各组细胞Runx2、骨形成蛋白-2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)表达。【结果】转染48h后,BC组未见绿色荧光蛋白,Runx2组和NC组可见大量细胞表达绿色荧光蛋白。Runx2组和NC组转染效率分别为(88.57±3.07)%和(89.43±2.09)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Rimx2组在不同时间点的活细胞数目OD值均明显大于NC组和BC组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而NC组和BC组的活细胞数目OD值比较差异无统计学意义(P>0.05);Runx2组Runx2、BMP-2、ALP和OPN的mRNA、蛋白表达量显著高于NC组和BC组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而NC组和BC组的Runx2、BMP-2、ALP和OPN的mRNA表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Runx2过表达慢病毒能够促进PDLCs体外增殖和增强其成骨能力,在牙周组织修复、再生中有重要应用前景。     

TGF-beta 1 and 25-hydroxycholesterol stimulate osteoblast-like vascular cells to calcify.

Previous studies in our laboratory demonstrated messenger RNA for bone morphogenetic protein-2a in human calcified plaque, suggesting that arterial calcification is a regulated process, similar to osteogenesis. To further test this hypothesis, we have isolated and cloned a subpopulation of cells from bovine aortic media that show osteoblastic potential. These novel cells are primarily distinguished from smooth muscle cells by expression of a surface marker preliminarily identified as a modified form of the ganglioside sialyl-lactosylceramide (GM3). Osteoblastic potential was indicated by high levels of alkaline phosphatase and collagen I, expression of osteopontin and osteonectin (SPARC), and production of bone-specific osteocalcin and hydroxyapatite. Cultures of these cells were stimulated to form increased numbers of calcium-mineral-producing nodules by the oxysterol 25-hydroxycholesterol as well as by transforming growth factor-beta 1, both known to be present in atherosclerotic lesions. The stimulation of calcifying vascular cells in the artery wall by these two factors suggests a possible mechanism for the colocalization of calcification with atherosclerosis in vivo.     

终末期肾病患者行开胸心脏外科手术的临床分析

目的分析行开胸心脏外科手术的终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)患者的临床特征及转归,探讨患者围手术期肾脏替代治疗的方式。方法:对北京大学第一医院在2004年9月至2011年1月期间行开胸心脏手术的终末期肾脏病病例进行单中心回顾性分析。结果共有16例(ESRD)患者行开胸心脏外科手术。8例患者行冠状动脉搭桥术(coronary artery bypass grafting,CABG),5例患者行瓣膜置换术,3例患者同时行CABG和瓣膜置换术。14例患者术后6.7±5.1h开始行床旁持续性肾脏替代治疗(延长低效血液透析滤过)(4.83±2.95)次,平均每次治疗时间(9.71±3.75)h,单次治疗总置换液量(33.0±11.6)L。手术当日行无肝素治疗,术后第2d根据病情选择抗凝方式和药物。病情稳定后转为常规血液透析/滤过。患者住院死亡率25%(4/16),死亡原因分别为围手术期心肌梗死(1例)、心包填塞(1例)和低排综合征(2例)。存活的12例患者术后随访33个月(3-65个月),3例患者分别因肝癌、脑出血和心力衰竭死亡。结论经过强化肾脏替代治疗和其他综合支持治疗,ESRD患者经过充分准备可以耐受心脏外科开胸手术并达到长期存活;心血管病变和外科手术复杂的高龄患者围手术期死亡率较高。     

Osthole-mediated cell differentiation through bone morphogenetic protein-2/p38 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 pathway in human osteoblast cells

The survival of osteoblast cells is one of the determinants of the development of osteoporosis in patients. Osthole (7-methoxy-8-isopentenoxycoumarin) is a coumarin derivative present in many medicinal plants. By means of alkaline phosphatase (ALP) activity, osteocalcin, osteopontin, and type I collagen, enzyme-linked immunosorbent assay, we have shown that osthole exhibits a significant induction of differentiation in two human osteoblast-like cell lines, MG-63 and hFOB. Induction of differentiation by osthole was associated with increased bone morphogenetic protein (BMP)-2 production and the activations of SMAD1/5/8 and p38 and extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2 kinases. Addition of purified BMP-2 protein did not increase the up-regulation of ALP activity and osteocalcin by osthole, whereas the BMP-2 antagonist noggin blocked both osthole and BMP-2-mediated ALP activity enhancement, indicating that BMP-2 production is required in osthole-mediated osteoblast maturation. Pretreatment of osteoblast cells with noggin abrogated p38 activation but only partially decreased ERK1/2 activation, suggesting that BMP-2 signaling is required in p38 activation and is partially involved in ERK1/2 activation in osthole-treated osteoblast cells. Cotreatment of p38 inhibitor SB203580 [4-(4-fluorophenyl)-2-(4-methylsulfinylphenyl)-5-(4-pyridyl)-1H-imidazole] or p38 small interfering RNA (siRNA) expression inhibited osthole-mediated activation of ALP but only slightly affected osteocalcin production. In contrast, the production of osteocalcin induced by osthole was inhibited by the mitogen-activated protein kinase kinase inhibitor PD98059 (2'-amino-3'-methoxyflavone) or by expression of an ERK2 siRNA. These data suggest that BMP-2/p38 pathway links to the early phase, whereas ERK1/2 pathway is associated with the later phase in osthole-mediated differentiation of osteoblast cells. In this study, we demonstrate that osthole is a promising agent for treating osteoporosis.