以反相离子对HPLC法同时测定大鼠内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶

目的建立测定血清中内源性嘧啶类物质尿嘧啶(U)及二氢尿嘧啶(UH2)的反相离子对HPLC方法。方法:实验动物血清用5%高氯酸一步沉淀蛋白,分离并通过微孔滤膜后进样。色谱柱为迪马C18色谱柱(250mm×4.6mm),柱温10℃;流动相为含磷酸根0.03mol/L、含庚烷磺酸钠0.03mol/L及含6%甲醇的缓冲液(pH=3.0),流速0.5ml/min。检测波长210nm,灵敏度为0.1AUFS。结果本文色谱条件可很好地分离尿嘧啶(U)及二氢尿嘧啶(UH2)。测定10只不同年龄不同性别来自不同实验动物中心的动物具有不同的U/UH2比值。结论以反相离子对HPLC法可精密测定大鼠内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶的比值。     

HPLC法测定血浆中尿嘧啶和二氢尿嘧啶的含量

目的：建立人血浆中内源性尿嘧啶（U）和二氢尿嘧啶（UH2）的HPLC测定方法，为通过UH2／U比值评价体内二氢嘧啶脱氢酶活性提供方法学基础。方法：采用Shim-packCLC—ODS柱（6mm×150mm，5μm），以0．05mol·L^-1磷酸盐缓冲液（pH值为4．0）为流动相，测定U的检测波长为260nm，测定UH2的检测波长205nm。以含3％牛血清白蛋白（BSA）的水溶液配制标准样品和质控样品。以溴尿嘧啶为内标，采用叔丁基甲醚／正丙醇（75：25）为提取溶剂进行两次提取，氮气吹干、复溶后进样分析。结果：U在5—200μg·L^-1的范围内线性良好（r=0．9995，n=6），测定的批内变异RSD在1．73％-3．45％之间，批间变异RSD在1．76％～2．53％之间，回收率为96．15％-105．09％；UH2在10-400μg·L^-1的范围内线性良好（r=0．9996，n=6），测定的批内变异RSD在3．67％-3．80％之间，批间变异RSD在3．40％～5．74％之间，回收率为101．51％～104．06％。结论：本方法灵敏度高，操作简便易行，为测定体内尿嘧啶和二氢尿嘧啶，进而评价二氢嘧啶脱氢酶活性提供方法学基础。     

高效液相色谱法测定人血浆中内源性尿嘧啶二氢尿嘧啶含量

目的建立准确测定内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶血药浓度的高效液相色谱法.方法以氟尿嘧啶(5-FU)为内标,醋酸乙酯-异丙醇混合液(8515)为提取溶剂;色谱柱Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 靘);流动相A-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.5),B-乙腈,梯度洗脱;流速为0.8 mL·min-1;柱温为4 ℃;检测波长为204 nm(0～14.5 min),254 nm(14.5～35 min).结果尿嘧啶和二氢尿嘧啶线性范围为8～500 靏稬-1,线性回归方程分别为C(UH2)=61.760 8Y 0.506 5,r=0.999 8;C(U)=95.201 1Y-3.064 0,r=0.999 3,(n=7).最低检测质量浓度均为5 靏稬-1.尿嘧啶方法回收率为99.3%～107.0%,二氢尿嘧啶方法回收率为95.0%～98.3%.尿嘧啶日内RSD小于6.5%,日阍RSD小于11.7%,二氢尿嘧啶目内RSD小于9.2%,日间RSD小于12.4%.结论本方法可用于内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶血药浓度的常规监测.     

以反相离子对HPLC法同时测定大鼠内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶

目的建立测定血清中内源性嘧啶类物质尿嘧啶（U）及二氢尿嘧啶（UH2）的反相离子对HPLC方法。方法：实验动物血清用5％高氯酸一步沉淀蛋白,分离并通过微孔滤膜后进样。色谱柱为迪马C。。色谱柱（250mm×4．6mm）,柱温10℃;流动相为含磷酸根0．03mol／L、含庚烷磺酸钠0．03mol／L及含6％甲醇的缓冲液（pH=3．0）,流速0．5ml／min。检测波长210nm,灵敏度为0．1AUFS。结果本文色谱条件可很好地分离尿嘧啶（U）及二氢尿嘧啶（UH2）。测定10只不同年龄不同性别来自不同实验动物中心的动物具有不同的U／UH2比值。结论以反相离子对HPLC法可精密测定大鼠内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶的比值。     

在体微透析结合HPLC测定小鼠纹状体细胞外尿嘧啶含量

目的利用在体微透析结合高效液相色谱法建立检测小鼠纹状体细胞外尿嘧啶含量的方法。方法色谱柱为反向VertiSep GES-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠(2:98),调pH值为3～4,流速为0.8 mL/min,检测波长为260 nm。柱温:0～5℃。结果尿嘧啶的保留时间约为4.5 min,且在0.05～1.0μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.998 4)。结论该方法准确、灵敏、方便,重复性好,可用于脑微透析样品中尿嘧啶的含量测定。     

肿瘤患者血浆内源性二氢尿嘧啶及尿嘧啶的测定

目的测定肿瘤患者血浆中的二氢尿嘧啶(H2U)与尿嘧啶(U)的比值来间接估计二氢尿嘧啶脱氢酶(DPD)的活性。方法采用HPLC法测定肿瘤患者血浆中内源性物质H2U和U的比值。色谱柱:反相C18柱(300mm×4.6mm,5μm);流动相:0.01mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH3.0),5μmol·L-1磷酸三乙胺;检测波长204nm。结果202例肿瘤患者入选,其H2U/U为(2.50±1.25)(0.53~7.51),男性为(2.58±0.85),女性为(2.41±0.98);有50例的H2U/U低于2.0,其中男性患者为29例,女性为21例。DPD酶活性与年龄、性别不存在相关性(P>0.05)。结论通过HPLC法测定血浆DPD酶活性来调节氟尿嘧啶的剂量,从而达到个体化给药的目的。     

内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶的简易高效液相色谱测定法

目的建立测定内源性嘧啶类物质尿嘧啶(U)及二氢尿嘧啶(HU2)的反相高效液相色谱法,并应用于癌症病人5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗前的嘧啶代谢缺陷及毒性预测.方法色谱柱大连依利特ODS2(250mm×4.6mm,5μm).以5-Fu作内标,经沉淀蛋白并以异丙醇与乙酸混合液提取,进行色谱分析.流动相为0.01mol.L-1KH2PO4-H3PO4缓冲液（pH=3.0）,流速0.5ml.min-1,检测波长204nm.xf js UH2的线性方程为Y=136.70X-9.42(r=0.9909,n=7)U的线性方程为Y=78.05X+1.03(r=0.9993,n=7),线性浓度范围为8μg.L-1～500μg.L-1,UH2最低检测浓度为6μg.L-1,U最低检测浓度为4μg.L-1.平均回收率UH2为66.6%,U为70.4%.结论本方法在同一色谱条件下完全分离二种痕量内源性嘧啶类物质,并予以定量分析,结果可作为确定行5-氟尿嘧啶化疗方案的肿瘤病人个体化给药剂量的依据.     

UHPLC-MS/MS测定人血浆中尿嘧啶与二氢尿嘧啶的浓度

目的 建立同时测定人血浆中尿嘧啶(U)和二氢尿嘧啶(UH₂)含量的超高效液相色谱串联质谱（UHPLC-MS/MS）方法。方法 在Agilent 6460A串联质谱仪上采用正离子检测模式,以氯尿嘧啶为内标,3%牛血清蛋白为代血浆基质,样本经乙酸乙酯液液萃取后在Agilent poroshell 120 SB-Aq (2.1 mm×100 mm,2.7 μm)色谱柱上采用梯度洗脱进行色谱分离。流动相为5 mmol/L醋酸铵水溶液和乙腈溶液;流速0.3 ml/min;柱温为30 ℃;进样量为5 μl。结果 尿嘧啶和二氢尿嘧啶的线性范围为10.0~1500.0 ng/ml,线性关系良好,其相关系数r>0.990,日内与日间精密度偏差均<15%。结论 该方法操作简单、选择性好,可用于测定人血浆中尿嘧啶和二氢尿嘧啶的含量。     

尿嘧啶有关物质测定方法的研究

目的：建立高效液相色谱法测定尿嘧啶的有关物质。方法：采用迪马C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为0．34％磷酸二氢钾溶液-甲醇（94：6），检验波长258nm。结果：尿嘧啶的线性范围为0．1014—4．0560mg·L^-1，检测限为0．9mg·L^-1，精密度为0．11％。结论：该方法简便，灵敏，准确，快速，专属强，可用于尿嘧啶的质量控制。     

反相高效液相色谱法同时测定藤三七不同部位中尿嘧啶和假鹰爪黄酮的含量

目的建立测定藤三七不同部位(包括珠芽、茎、叶和花)中尿嘧啶和假鹰爪黄酮含量的反相高效液相色谱法。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈(A)-0.05%磷酸溶液(B),进行梯度洗脱,程序为:3%A(0～6 min),3%～60%A(6～8 min),60%～80%A(8～13 min),80%A(13～20 min);流速为1 mL.min-1;检测波长为254 nm;柱温:35℃。结果尿嘧啶在0.705～7.05μg.mL-1与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9(n=6),平均回收率(n=9)为99.2%(RSD=1.3%);假鹰爪黄酮在0.792～7.92μg.mL-1与峰面积呈良好线性关系r=0.999 9(n=6),平均回收率(n=9)为99.0%(RSD=1.2%)。结论该方法简单、准确,为藤三七药材质量评价提供了可靠依据。     

LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷和酪醇的浓度及其药动学研究

目的:建立LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷及其代谢物酪醇的浓度,并应用于药动学研究.方法:血浆样品经氯仿、苯酚和异戊醇混合溶剂萃取,Shimadzu Shim-pack Velox PFPP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)分离,以水(A相)-含20％乙腈的甲醇溶液(B相)为流动相,梯度洗脱(...     

HPLC/MS/MS法测定人血浆中内源性尿嘧啶及二氢尿嘧啶

目的　为评价人体内二氢嘧啶脱氢酶的活性,建立高效液相色谱 串联质谱联用的分析方法,测定该酶的底物以及催化产物在血浆中的基础浓度。方法　血浆样品液 液萃取后,以纯水为流动相,以DiscoveryAmideC₁₆ 色谱柱初步分离,经气动辅助电喷雾离子源负离子化,在三级四极杆质量分析器上以多反应离子监测(MRM)方式检测尿嘧啶(MRM m/z 111.0→41.9)和二氢尿嘧啶(MRM m/z 113.0→42.0 )。结果　尿嘧啶和二氢尿嘧啶的最低定量浓度分别为0.5ng·mL^-1 和5ng·mL^-1 ;线性范围分别为0.5 - 100ng·mL^-1 和5 - 1000ng·mL^-1 ,精密度和准确度符合生物样品分析要求。结论　此法专属、灵敏、准确,适用于测定生物样本中内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶的基础浓度。     

大鼠血浆中利培酮及9-羟基利培酮的LC-MS/MS法测定

建立了LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的利培酮和9-羟基利培酮.用蛋白沉淀法处理血样,采用C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-甲醇(40:60)为流动相,盐酸苯海拉明为内标,使用多反应监测,检测离子对分别为m/z 411.3→191.4(利培酮)、m/z 427.2→207.1(9-羟基利培酮)和m/z 256.2→167.3(苯海拉明).利培酮和9一羟基利培酮在0.5～1 000 ng/ml范围内线性关系良好,批内、批间RSD均小于5%,回收率为90%～110%.     

人血浆中孟鲁司特的LC-MS/MS法测定

建立了液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的孟鲁司特.采用C18色谱柱,以辛伐他汀为内标,乙腈-水-甲酸(86∶14∶0.3)为流动相,ESI源正离子检测方式,多反应监测,监测离子对m/z 586.3→422.5(孟鲁司特)、m/z441.4→325.2(辛伐他汀).孟鲁司特在1～1 000 ng/ml浓度范围内线性关系良好.回收率为96.7％～110.6％,RSD小于7.0％.     

液相色谱-串联质谱法快速测定兔血清及组织中痕量氟尿嘧啶

目的建立灵敏、快速的液相色谱-串联质谱法测定兔血清及组织中氟尿嘧啶的浓度。方法血清及组织样本经乙酸乙酯一步提取后,以乙腈-水(70:30,V/V)为流动相,Hypercarb C_(18)柱分离,采用电喷雾电离源,以多反应离子检测(MRM)方式进行负离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z128.9→m/z41.9(氟尿嘧啶)和m/z188.7→m/z41.9(内标,溴尿嘧啶)。结果测定血清中氟尿嘧啶的线性范围为0.25～50μg·L~(-1),定量下限为0.25μg·L~(-1)。日内、日间精密度(RSD)均小于11%。食管组织中氟尿嘧啶的线性范围为0.5～100μg·L~(-1),定量下限为0.50μg·L~(-1)。日内、日间精密度(RSD)均小于10%。结论该法选择性强、灵敏度很高、操作简便、分析时间短,且可同时测定血清及组织中药物浓度,适用于极低浓度氟尿嘧啶生物样本的大批量检测。     

大鼠血浆中奥昔布宁及其N-去乙基代谢物的UPLC-MS/MS法测定

建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时测定大鼠血浆中的奥昔布宁及其主要代谢物N-去乙基奥昔布宁.用液-液萃取法处理血样,以盐酸奥昔布宁-D11为内标,采用ESI源正离子模式、多反应监测进行测定.检测离子对分别为m/z 358.2→124.1(奥昔布宁)、m/z 330.2→96.1 (N-去乙基奥昔布宁)和m/z 369.3→142.1(奥昔布宁-D11).奥昔布宁及N-去乙基奥昔布宁在0.5～100 ng/ml和0.2～40 ng/ml浓度范围内线性关系良好,日内、日间RSD均小于8％.     

LC-MS/MS法测定抑郁症患者晨尿中9种氨基酸类内源性物质的浓度

目的:建立测定人体尿液中5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、酪胺、缬氨酸浓度的方法。方法:采集抑郁症患者的晨尿,加入内标可的松,以乙腈处理后取上清液进行浓缩,采用液相色谱-质谱串联法(LC-MS/MS)进行分析。色谱柱为XTerra RP18;流动相A相为0.1%乙酸-水,流动相B相为0.1%乙酸-乙腈(梯度洗脱);柱温为40℃;流速为0.45mL/min;采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测方式(MRM)进行定量分析,5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、酪胺、缬氨酸和内标可的松在正离子模式下定量分析离子对分别为质荷比(m/z)192.2→146.1、147.2→130.0、180.1→105.1、161.1→125.2、116.1→70.2、205.2→188.2、138.2→121.1、182.0→123.0、118.2→72.1、361.2→163.0。结果:5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、缬氨酸、庚二酸、脯氨酸、酪胺的检测质量浓度范围为10.00~3 200 ng/mL(r=0.993 8~0.998 9,n=6),定量下限为10 ng/mL;色氨酸、酪氨酸、马尿酸的检测质量浓度范围为1 600~51 200 ng/mL(r=0.999 2~0.999 7,n=6),定量下限为1 600ng/mL,准确度试验结果为86.29%~98.65%(n=6),日内、日间精密度试验的RSD均不高于14.65%(n=6),基质效应的CV为6.18%~14.37%(n=6),提取回收率为86.21%~98.14%(n=6),稳定性试验的RE均<14.71%(n=3~6)。结论:该方法灵敏、准确,可用于测定人体内上述9种物质的浓度。     

UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中阿魏酸和芍药苷的含量

目的:建立一种同时测定人体血浆中阿魏酸和芍药苷的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测技术,分别以羟甲香豆素和栀子苷为内标,采用正离子方式检测,多反应监测模式扫描,检测离子通道为阿魏酸m/z 195.1→151.2和羟甲香豆素m/z 177.1→161.2、芍药苷m/z 503.1→219.2和栀子苷m/z 411.1→216.1。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.5%冰醋酸-乙腈(82∶18,V/V),流速为0.3 ml/min,柱温为40℃。结果:两种成分均在3 min内完成检测。阿魏酸、芍药苷的质量浓度分别在4.5²50.0、37.5250.0、37.5² 000.0 ng/ml范围内与指标成分和内标峰面积比呈良好线性关系,定量限分别为4.5、37.5 ng/ml;高、中、低质量浓度阿魏酸平均加样回收率分别为(91.2±5.7)%、(93.8±7.6)%、(92.7±7.5)%,芍药苷平均加样回收率分别为(90.5±7.6)%、(90.2±4.4)%、(91.7±4.2)%;精密度RSD在5.3%2 000.0 ng/ml范围内与指标成分和内标峰面积比呈良好线性关系,定量限分别为4.5、37.5 ng/ml;高、中、低质量浓度阿魏酸平均加样回收率分别为(91.2±5.7)%、(93.8±7.6)%、(92.7±7.5)%,芍药苷平均加样回收率分别为(90.5±7.6)%、(90.2±4.4)%、(91.7±4.2)%;精密度RSD在5.3%⁹.4%范围内;稳定性RSD<±10%。结论:所建方法分析时间短、专属性好、准确度高,适用于同时测定人血浆中阿魏酸和芍药苷的含量。     

UPLC-MS/MS法同时测定人血浆中卡马西平、拉莫三嗪、氯硝西泮、地西泮及其代谢物奥沙西泮浓度

目的 建立同时测定人血浆中卡马西平、拉莫三嗪、氯硝西泮、地西泮及其代谢物奥沙西泮浓度的方法。方法 采用超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS/MS）,以磺胺甲噁唑（SMZ）为内标,血浆经甲醇直接沉淀后进样分析。色谱柱为WatersACQUITYUPLCHSSPFP柱（2.1mm×100mm,1.8μm）,流动相为0.1%甲酸的5mmol·L1乙酸铵水溶液-0.1%甲酸的甲醇溶液（0~5min,35∶65→10∶90）,流速为0.2mL·min1。电喷雾离子源,正离子多反应监测扫描分析,卡马西平、拉莫三嗪、氯硝西泮、地西泮和奥沙西泮的离子对分别为m/z237.0→194.06、m/z255.98→144.95、m/z316.01→270.0、m/z285.04→193.07和m/z287.02→241;内标磺胺甲噁唑的离子对为m/z253.96→91.97。结果 卡马西平、拉莫三嗪、氯硝西泮、地西泮和奥沙西泮血药浓度分别在2.4~600ng·mL1（r=0.9997）,2.52~630ng·mL1（r=0.9920）,2.08~520ng·mL1（r=0.9979）,2.28~570ng·mL1（r=0.9982）,8.0~800ng·mL1（r=0.9992）线性关系良好;最低检出限分别为0.24,0.63,0.52,0.57,3.2ng·mL1。日内、日间精密度均〈15%;提取回收率均〉70%,且RSD〈15%。结论 该方法灵敏、快速、专属性强,可用于临床血药浓度测定及药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中硫酸沙丁胺醇浓度及其药动学研究

目的:建立以高效液相色谱电喷雾串联质谱法测定人血浆中硫酸沙丁胺醇浓度的方法,并研究其在健康人体内的药动学。方法:血浆样品碱化后经乙酸乙酯萃取,再进样测定,以甲醇-5%甲酸(85∶15)为流动相,苯海拉明为内标,AgilenTC-C18柱进行分离。多反应方式检测,定量分析的离子反应分别为m/z240.3→m/z148.1(硫酸沙丁胺醇)和m/z256.1→m/z167.2(苯海拉明)。结果:沙丁胺醇检测浓度在0.2～20ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9968),定量下限为0.2ng·mL-1;回收率为95.3%～98.2%,日内、日间RSD分别为3.75%～5.94%、3.15%～9.31%。健康受试者口服硫酸沙丁胺醇口腔崩解片后的药-时数据符合一级吸收的二室模型。结论:本方法简便、快速、灵敏,适用于硫酸沙丁胺醇的临床药动学研究。