基于GRP78/PERK/ATF4的泽泻汤改善脂质诱导肝细胞内质网应激作用机制研究

目的:基于GRP78/PERK/ATF4通路探讨泽泻汤改善肝细胞内质网应激的潜在机制。方法:采用油酸(OA)及高脂饮食诱导高脂细胞及动物内质网应激(Endoplasmic reticulum stress, ERS)模型。ER与Ca²⁺荧光共定位观察泽泻汤对ER-Ca²⁺稳态的调节情况；流式细胞术及Tunel法检测泽泻汤对凋亡的影响；Q-PCR检测ER核心信号1(Ern1)、转录激活因子6(Atf6)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,Chop)、Grp78、Perk、X-盒结合蛋白1(Xbp1)、热休克蛋白90β1(Hsp90β1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员10B(Tnfrsf10b)的mRNA表达；Western bolt法检测葡萄糖调节蛋白78/B细胞免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/BIP)GRP78、类PKR的内质网激酶(PERK)、p-PERK和转录激活因子4(ATF4)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比，模型对照组ER-Ca     

慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠内质网应激PERK-ATF4通路的影响

目的 探讨慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾脏组织的保护作用及机制.方法 60只雄性Wistar大鼠,随机选取7只为正常组,其余53只采用2.5％腺嘌呤悬浮液灌胃建立肾间质纤维化模型,21d后将50只造模成功的大鼠随机分为模型组、氯沙坦组[10 mg/(kg·d)]、慢肾康宁低剂量组[7.5g/(kg·d)]、慢肾康宁中剂量组[15 g/(kg·d)]、慢肾康宁高剂量组[30g/(kg·d)],每组10只,分别给予相应药物灌胃,正常组和模型组以等量蒸馏水灌胃,连续30d.实验结束后,检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、24小时尿蛋白定量(24hMTP),估算肾小球滤过率(eGFR),HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组织化学方法检测肾组织内质网应激标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡水平,实时定量PCR测定肾组织GRP78、转录激活因子4(ATF4)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP) mRNA表达水平.结果 与模型组比较,氯沙坦组和慢肾康宁各剂量组SCr、BUN、24hMTP均显著下降(P＜0.01),eGFR上升(P＜0.01).病理观察,模型组可见肾小管上皮细胞凋亡、坏死、脱落,肾小管扩张、炎性细胞浸润,肾间质内腺嘌呤代谢产物沉积和胶原纤维增生,氯沙坦组和慢肾康宁各组较模型组病理变化轻.与模型组比较,各给药组GRP78表达水平及细胞凋亡水平均下降(P＜0.05或P＜0.01).各给药组GRP78、ATF 4、CHOP mRNA表达水平较模型组降低(P＜0.05).结论 慢肾康宁对肾间质纤维化大鼠肾脏组织内质网应激PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路过度表达有很好的抑制作用,具有肾脏保护功能,这可能是它减轻肾间质纤维化的重要机制之一.     

糖络宁对DPN大鼠和雪旺细胞内质网应激PERK通路的影响

目的:观察糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠和雪旺细胞内质网应激RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)通路相关蛋白和mRNA表达的影响。方法:60只SD雄性大鼠,除空白组外,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg·kg~(-1))复制DPN大鼠模型,随机分为模型组,氧化三甲胺组,糖络宁低、高剂量组,连续给药12周。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠坐骨神经病理学改变,免疫荧光染色法检测大鼠坐骨神经中p-PERK,磷酸化的真核翻译起始因子2a(p-eIF2a)和转录活化因子4(ATF4)蛋白的表达;建立高糖诱导的雪旺细胞模型,分为25 mmol·L~(-1)葡萄糖组(control),150 mmol·L~(-1)葡萄糖组(model),150 mmol·L~(-1)葡萄糖+0.1%,1%和10%糖络宁组,分别干预24,48 h。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中PERK,核转录因子E2相关因子2(Nrf2),血红素加氧酶-1(HO-1),B淋巴细胞瘤-2相关的X蛋白(Bax)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平。结果:坐骨神经病理学改变:空白组大鼠坐骨神经有髓神经纤维的髓鞘结构完整致密,形态规则,排列整齐。模型组出现严重脱髓鞘现象,结构松散,形态不规则,排列紊乱。糖络宁组有轻微脱髓鞘现象,结构近似完整,形态近似规则。经积分吸光度统计,与空白组相比,模型组明显降低(P0.01);雪旺细胞PERK,Nrf2,HO-1,Caspase-3和Bax mRNA表达水平,与空白组比较,同时相的模型组中PERK,Bax和Caspase-3 mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01),与模型组比较,同时相的糖络宁3个含药血清剂量组中以上3个指标表达明显降低(P0.05,P0.01),而Nrf2和HO-1 mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01);坐骨神经中p-PERK,p-eIF2a和ATF4蛋白表达,与空白组比较,模型组蛋白表达量显著增加(P0.01);与模型组比较,糖络宁组蛋白表达量显著减少(P0.01)。结论:糖络宁能够减轻坐骨神经组织的病理损伤,其防治DPN的作用机制可能与调节内质网应激时PERK相关途径包括抑制PERK/eIF2a途径同时促进PERK/Nrf2途径有关。     

黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠内质网应激介导影响

目的:探讨黄芪甲苷(ASIV)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用,并初步探讨其抑制内质网应激介导的细胞凋亡的作用。方法:随机将50只SD大鼠分成5组,每组10只。对照组(静注生理盐水1mg/kg),ALI组(静注LPS,5mg/kg),ASIV组(注射LPS前,给药3、6、12mg/kg ASIV连续灌胃7天)。观察注射12h后肺组织湿干重(W/D)、western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的蛋白表达。结果:ALI组W/D值较对照组上升(P0.01),GRP78、ChOP蛋白表达较对照组升高(P0.01);ASIV组W/D值较ALI组下降(P0.01),GRP78、ChOP蛋白表达较ALI组降低(P0.01),并呈一定的剂量依赖性。结论:黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠有保护作用,其作用机制可能与内质网应激有关。     

丹芍化纤胶囊对大鼠肺纤维化内质网应激相关蛋白GRP78及NF-κB表达的影响

目的:观察内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及核因子-κB(NF-κB)在盐酸博来霉素诱导的肺纤维化中的变化及中药丹芍化纤胶囊对其表达的影响。方法:选取SD大鼠30只,随机分为正常组、肺纤维化模型组和丹芍化纤胶囊治疗组,每组各10只。正常组气管内滴注生理盐水,模型组和丹芍组气管内一次性灌注盐酸博来霉素5mg/kg诱导肺纤维化,丹芍组于造模第2天给予丹芍化纤胶囊混悬液灌胃(0.8g.kg-1.d-1)治疗,正常组及模型组则给予等量生理盐水灌胃。实验第28天称大鼠体质量,处死各组大鼠,称肺湿重并收集肺组织,行HE和Masson染色观察肺组织病理变化;采用免疫组织化学的方法检测肺组织中GRP78及NF-κB蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织中GRP78及NF-κB表达明显升高(P<0.01);经丹芍化纤治疗后,大鼠肺组织中GRP78及NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:GRP78及NF-κB可能参与了盐酸博来霉素诱导的肺纤维化过程。丹芍化纤胶囊对肺纤维化的干预机制可能与抑制肺组织中GRP78及NF-κB的表达,减轻内质网应激所引起的损伤有关。     

滋补脾阴方药对脾阴虚痴呆大鼠脑组织内质网应激影响的研究

目的:观察滋补脾阴方药(ZBPYR)对脾阴虚痴呆大鼠不同脑区内质网应激的影响.方法:通过证病结合的方法建立脾阴虚痴呆大鼠模型,以免疫组化方法检测各组大鼠海马(CA1、CA3、DG区)、大脑皮质中内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78( GRP78)、凋亡促进因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达变化.结...     

心衰合剂对大鼠心肌细胞肥大模型内质网应激因子Grp78、Caspase-12表达的影响

目的观察心衰合剂对大鼠体外心肌细胞肥大模型细胞内质网应激因子Grp78及Caspase-12表达的影响。方法培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)建立肥大心肌细胞模型(模型组),分别用心衰合剂(10%含药血清组)卡托普利(卡托普利组)干预细胞。Western-blot测定胞内Grp78及Caspase-12表达的蛋白表达水平。结果模型组心肌细胞Grp78、Caspase-12蛋白表达水平明显上调(P0.01);与模型组比较,10%含药血清组及卡托普利组可以显著下调Grp78、Caspase-12蛋白表达水平(P0.01),2组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论心衰合剂可下调内质网应激相关蛋白Grp78、Caspase-12表达水平,提示心衰合剂通过减轻内质网应激防止细胞发生凋亡,保护心肌细胞。     

冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的机制。方法 选取胰腺癌SW1990和Panc-1细胞株作为研究对象。采用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况,蛋白印迹法检测内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（C/EBP-homologous protein,CHOP）、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-12(cleaved cystein aspartate specific proteinase-12,cleaved Caspase-12)、活化的（active）Caspase-3、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸多聚酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]的蛋白表达水平,实时荧光定量RCR检测GRP78、CHOP、Caspase-12的m RNA表达水平。结果 冬凌草甲素浓度和时间相关性抑制SW1990和Panc-1细胞增...     

水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶表达的影响

目的 探讨水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）表达的影响。方法 建立单侧输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型;将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,水苏碱高、中、低剂量组;于术后第14天处死大鼠收集血清测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;采用HE染色观察肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积,判断肾间质纤维化程度;采用免疫组织化学方法检测肾组织中PERK、激活转录因子4（ATF4）、C/EBP 同源蛋白（CHOP）的表达。结果 各治疗组与模型组比较,BUN、Scr均明显降低,肾小管损伤程度明显减轻,肾间质胶原相对面积和PERK、ATF4、CHOP的表达显著降低（P<0.05、0.01）。与依那普利组比较,水苏碱高剂量组的抗肾间质纤维化作用更为显著（P<0.05）。结论 水苏碱能够抑制PERK信号通路介导ATF4蛋白表达水平升高及ATF4激活CHOP的蛋白表达,阻止细胞凋亡,从而减缓了肾间质纤维化的发生和发展。     

基于PERK/ATF4/CHOP的益肾通络方抑制内质网应激改善肾小管上皮细胞凋亡的作用机制

目的：验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响，并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制。方法：将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·kg^-1·d-1)、YSTLP低、中、高剂量组(1、2.5、5 g·kg^-1·d^-1)给予药物干预8周后取材。同窝的db/m小鼠作为正常组。体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2)，分为正常组、糖基化终产物(AGEs)组、AGEs+益肾通络方低、中、高质量浓度组(100、200、400 mg·L^-1)；原位末端标记(TUNEL)染色检测HK-2细胞的凋亡情况；细胞活力测定实验检测HK-2细胞存活率；钙离子荧光探针染色，以及荧光素酶报告基因法检测为折叠蛋白反应元件(UPRE)荧光素酶活力，检测内质网应激情况；免疫组化法(IHC)检测小鼠肾脏中磷酸化(p)-PERK蛋白的表达(p-PERK)、CHOP、ATF4的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应...     

加味升降散对糖尿病肾病大鼠肾脏内质网应激和Sirt1/PERK通路的影响

目的 探讨加味升降散减轻糖尿病肾病（DN）大鼠内质网应激,降低尿蛋白的分子机制。方法 将75只SD大鼠随机分为正常组、模型组、加味升降散低、中、高剂量组（4.37、8.73、17.46 g·kg^-1）和厄贝沙坦组（0.014 g·kg^-1）,每组10只。分别给予相应剂量药物或者蒸馏水灌胃,每日1次,连续给药8周。末次给药后检测大鼠血糖（GLU）、24 h尿蛋白（UTP）含量,肾脏组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平;苏木素-伊红（HE）染色、过碘酸-雪夫（PAS）染色和透射电镜观察大鼠肾脏病理学改变;免疫组化法（IHC）检测大鼠肾脏中肾病蛋白（Nephrin）、足细胞裂隙膜蛋白（Podocin）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和激活转录因子4（ATF4）蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾脏中沉默调节蛋白1（Sirt1）、磷酸化（p）-蛋白激酶RNA样内质网激酶（PERK）、p-真核翻译起始因子（eIF2α）蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾脏病理损伤较重,GLU、UTP水平明显升高（P<0.05）,大鼠肾脏中GRP78、CHOP、ATF4、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达水平升高、Sirt1蛋白表达下降（P<0.05）;与模型组比较,加味升降散各剂量组及厄贝沙坦组大鼠GLU、24 h UTP水平有不同程度的降低（P<0.05）,肾脏病理损伤明显减轻,GRP78、CHOP、ATF4、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达水平均下降（P<0.05）,Sirt1蛋白表达上升（P<0.05）。结论 加味升降散上调DN大鼠肾脏组织中Sirt1表达,抑制PERK/eIF2α通路蛋白的磷酸化,减轻肾组织ER应激反应和氧化应激,是其减轻DN大鼠肾脏病理损伤和尿蛋白的作用机制。     

针刺对创伤后应激障碍大鼠海马蛋白激酶R样内质网激酶/真核细胞起始因子2α信号通路相关蛋白的影响

目的:观察针刺对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核细胞起始因子2α(eIF2α)信号通路的影响,探讨针刺治疗PTSD的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、舍曲林组,每组7只。采用单次延长应激法制备PTSD大鼠模型。针刺组针刺“百会”“大椎”,每次10 min,每日1次,连续7 d;舍曲林组给予盐酸舍曲林溶液(10 mg/kg)灌胃,连续7 d。采用高架十字迷宫实验、新物体识别实验检测大鼠行为学变化;Western blot法检测大鼠海马PERK、磷酸化(p)-PERK、eIF2α、p-eIF2α、转录激活因子4(ATF4)蛋白表达;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构。结果:与正常组比较,模型组大鼠高架十字迷宫实验开臂次数百分比和开臂时间百分比、新物体识别指数显著降低(P<0.01);海马p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,针刺组、舍曲林组大鼠高架十字迷宫实验开臂次数百分比和开臂时间百分比、新物体识别指数显著升高(P<0.05,P<0.01),海马p-PE...     

艾灸联合贝那普利对慢性心力衰竭大鼠心肌内质网应激相关蛋白磷酸化表达的影响

目的：观察艾灸“心俞”“肺俞”联合贝那普利对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心功能及心肌组织中蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、真核启动因子2α(eIF2α)蛋白磷酸化的影响,探讨艾灸联合贝那普利防治CHF的潜在机制。方法：采用腹腔注射盐酸多柔比星复制CHF大鼠模型,将造模成功的SD大鼠随机分为模型组、艾灸组、药物组、艾药组,并设立空白组,每组10只。艾灸组予以艾条温和灸双侧“心俞”“肺俞”,每次20 min;药物组予以贝那普利（0.86 mg/kg）灌胃治疗;艾药组艾灸上述穴位同时予以贝那普利灌胃治疗。各组均每日治疗1次,连续干预3周。超声心动图检测大鼠心脏射血分数（EF）、左室内径缩短率（FS）;HE染色法观察心肌组织病理变化;ELISA法检测大鼠血清B型脑钠肽（BNP）和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）含量;Western blot法检测大鼠心肌组织磷酸化（p）-PERK、p-eIF2α的表达水平。结果：与空白组比较,模型组大鼠EF、FS降低（P<0.01）;血清BNP和AngⅡ含量升高（P<0.01）;p-PERK、p-eIF2α蛋白表达水平升高（P<0.01）;镜下可见...     

小柴胡汤对大鼠肝细胞脂肪变性及葡萄糖调节蛋白表达的影响

目的 探讨小柴胡汤防治大鼠肝细胞脂肪变性的疗效及作用机制.方法健康Wister大鼠分为正常组、模型组及小柴胡汤低、高剂量组和东宝肝泰组,除正常组以外,其他各组采用四氯化碳联合高脂饮食诱导大鼠脂肪肝模型,各组大鼠给药干预4周后,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用全自动生化仪及分光光度计测定血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝组织中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,采用RT-PCR和Western blot检测肝组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达.结果 小柴胡汤低、高剂量组的肝指数、血清ALT、AST水平及肝组织中TC、TG含量较模型组明显降低(P＜0.05);病理HE染色显示,小柴胡汤组肝脂肪变性程度较模型组明显减轻;RT-PCR 和Western blot检测结果表明,小柴胡汤组肝组织中GRP78的表达显著低于模型组.结论 小柴胡汤具有抑制大鼠肝细胞脂肪变性的作用,其作用机制可能与内质网应激有关.     

姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤时内质网应激的影响

目的:探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤(RIRI)时内质网应激(ERS)的影响。方法:选取清洁级SpragueDawley(SD)雄性大鼠96只,采用随机数字表法分为3组(n=32):对照组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)和姜黄素组(CUR组)。I/R组和CUR组采用前房灌注法使眼内压升高而制备大鼠RIRI模型,缺血60 min,再灌注24 h后结束实验。于缺血前60 min时,CUR组腹腔注射姜黄素100 mg/kg,C组和I/R组腹腔注射等容量生理盐水。各组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,光镜下观察病理学改变;采用TUNEL法检测视网膜组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)。3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,电镜下观察大鼠视网膜组织超微结构改变。3组于再灌注24h时处死8只大鼠,取视网膜组织,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织中CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)、活化的转录因子4(ATF4)和X-盒结合蛋白-1(XBP1)mRNA表达。3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠视网膜组织中、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的蛋白表达,计算Bcl-2/Bax比值。结果:与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显上调(P0.05);与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显下调(P0.05)。与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均下降,与C组比较,差异均有统计学意义(P0.05),CUR组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均升高,与I/R组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织出现形态结构及超微结构损伤,AI值升高(P0.05)。与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织形态结构及超微结构损伤均减轻,AI值降低(P0.05)。结论:姜黄素可减轻大鼠RIRI,其机制可能与抑制ERS介导的细胞凋亡有关。     

茅苍术通过抑制内质网应激途径减轻AR42J细胞炎症反应

目的 研究茅苍术对急性胰腺炎的治疗作用及可能机制。方法 通过体外培养大鼠胰腺腺泡细胞系AR42J细胞,采用CCK-8方法检测不同浓度苍术对细胞活力的影响;通过雨蛙肽刺激AR42J细胞复制体外急性胰腺炎模型,ELISA方法观察苍术对急性胰腺炎腺泡细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量影响,及Western Blot检测细胞内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及核因子-κB (NF-κB)的蛋白表达的变化。结果 苍术1 mg/mL以下浓度对AR42J细胞活力无影响;苍术能减轻雨蛙肽引起的细胞炎性水肿,降低细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量;苍术降低雨蛙肽引起的细胞内GRP78高表达,抑制NF-κB核转移。结论 苍术能抑制腺泡细胞内质网应激,降低炎性细胞因子缓解急性胰腺炎的病理改变。     

酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及内质网应激PERK/ATF4/CHOP通路的影响

目的:研究酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠行为学及内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化的转录因子4(ATF4)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)通路的影响,并探讨其抗抑郁作用的机制。方法:将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组,模型组,盐酸文拉法辛组(0.008 g·kg^-1),酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组(16,8,4 g·kg^-1),每组15只。除正常组外,其余5组采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)结合孤养的方式建立抑郁模型,造模的同时给予正常组和模型组大鼠等体积的蒸馏水灌胃,各给药组大鼠予相应剂量的药物灌胃,连续21 d。于实验的第1天和第21天进行旷场实验和糖水消耗实验观察各组大鼠行为学变化;采用透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构变化;采用原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠海马区神经元凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测大鼠海马组织PERK,CHOP,B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场实验得分、糖水消耗率显著下降(P<0.01);与模型组大鼠比较,酸枣仁-合欢花各剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠旷场实验得分、糖水消耗率均显著升高(P<0.01);透射电镜显示,与正常组比较,模型组大鼠海马区神经元损伤明显,与模型组比较,酸枣仁-合欢花各剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠海马区神经元损伤减轻;TUNEL显示,与正常组比较,模型组大鼠海马区神经元凋亡数量增加(P<0.01),与模型组比较,酸枣仁-合欢花各剂量组及盐酸文拉法辛组大鼠海马区神经元凋亡数量减少(P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组大鼠比较,模型组大鼠海马PERK,CHOP,Bax,Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组大鼠比较,盐酸文拉法辛组和酸枣仁-合欢花各剂量组大鼠海马PERK,CHOP,Bax,Caspase-3蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:酸枣仁-合欢花可能通过调节内质网应激PERK/ATF4/CHOP通路而发挥抗抑郁作用。     

中医药干预内质网应激治疗慢性心力衰竭的研究进展

<正>心力衰竭(heart failure,HF)是各种心脏功能或者结构出现异常后所导致的心室充盈或射血分数降低而表现出的一系列综合征,主要表现为呼吸困难、体力活动受限和体液潴留^[1]。其中,慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是     

不同强度及时程电针干预对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏PERK/ATF4/CHOP通路的影响

目的：基于肝脏蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）-活化转录因子4(ATF4)-转录因子C/EBP同源蛋白（CHOP）信号通路,分析不同强度、不同时程电针“丰隆”“足三里”对非酒精性脂肪肝病大鼠的影响,探讨其作用机制。方法：将SD大鼠随机分为普通饮食组、高脂模型组、假电针组、强刺激电针组、弱刺激电针组,每组15只,每组再分为2、3、4周3个亚组。采用高脂饲料喂养建立非酒精性脂肪肝病大鼠模型。造模成功后电针双侧“丰隆”“足三里”,疏密波（4 Hz/20 Hz）,电流强度分别为4 mA、2 mA,持续20 min,1次/d,每周治疗5 d,休息2 d;假电针组只连接电针仪,不通电。不同时程亚组分别干预2、3、4周。干预结束后采用全自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）含量,油红O染色观察肝组织形态学变化,实时荧光定量PCR、Western blot法检测大鼠肝脏组织PERK、ATF4、CHOP mRNA与蛋白的表达。结果：高脂模型组大鼠肝细胞红色脂滴聚积明显,强刺激电针组4周时大鼠肝细胞红色脂滴明显减少。与同时程普通饮食组比较,高脂模型组大鼠血清ALT、AST含...     

当归多糖对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元内质网应激的影响

目的:探讨当归多糖对阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)大鼠学习记忆能力、海马组织形态以及内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)相关因子葡萄糖调节蛋白78(Glucose Regulating Protein 78,GRP78)、基因转录调节因子CCAAT增强子结合蛋白的同源蛋白(C/EBP Homologous Protein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Cysteine Aspartate Protease-12,Caspase-12)的影响。方法:70只大鼠进行水迷宫实验学习记忆能力筛选,去除不合格大鼠。将筛选合格大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、当归多糖低剂量组、当归多糖中剂量组、当归多糖高剂量组,每组10只。模型组及药物干预组大鼠双侧海马区定向注射β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)复制阿尔茨海默模型,假手术组定向注射生理盐水。5 d后进行水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力。连续灌胃28 d,假手术组和模型组均给予生理盐水,其他药物干预组均给予相应药液。末次给药后再次进行水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力。取材观察海马及大脑皮质形态学变化以及检测GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,海马GRP78、CHOP以及Caspase-12蛋白的表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05),HE染色可见海马区神经元细胞损伤;与模型组比较当归多糖各组可不同程度缩短阿尔茨海默大鼠逃避潜伏期,增加穿越原平台次数,同时可抑制海马GRP78、CHOP以及Caspase-12蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.05),HE染色可见海马区神经元细胞损伤减轻。结论:当归多糖可能通过抑制内质网应激,减少神经细胞凋亡,提高大鼠学习记忆能力,从而在阿尔茨海默病理过程中发挥保护作用。