人肺腺癌A549细胞系多重抗药性的形成

本文采用阿霉素逐步诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系，在体外持续培养６个月，获得了具有抗药性的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌ ＡＤＭ下持续增殖。通过测定抗癌药物作用的５０％抑制浓度发现，Ａ５４９／Ｒ２细胞对ＡＤＭ的抗药性为Ａ５４９的７－１１８倍，同时对表阿霉素、长春新碱、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著抗药性，对氮芥、丝裂霉素和卡铂低度抗药、对５－氟脲嘧啶、氨甲喋呤和平阳霉素无抗药性。Ａ５     

丁硫氨酸亚砜胺逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用机理的研究

应用阿霉素诱导的人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞Ａ５４９／Ｒ２，对丁硫氨酸亚砜胺（ＢＳＯ）逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用机理进行了初步探讨。研究发现：非细胞抑制剂量ＢＳＯ能使Ａ５４９／Ｒ２细胞的ＩＣ５０值显著下降（Ｐ＜０．０１）；大剂量ＢＳＯ能直接抑制癌细胞增殖，且对抗药细胞更有效；Ａ５４９／Ｒ２细胞内总体谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量和谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）活性均非常显著地高于其敏感细胞（Ａ５４９／Ｐ）水平（Ｐ＜０．０１）；ＢＳＯ能使Ａ５４９／Ｒ２细胞内总ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活性非常显著地下降（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ＢＳＯ能有效地逆转Ａ５４９／Ｒ２细胞的抗药性或对其直接产生细胞毒作用；ＢＳＯ阻断细胞内ＧＳＨ合成，降低抗药细胞内ＧＳＨ水平或干扰ＧＳＴ活性，是对抗药细胞产生抗药性逆转或发挥直接杀伤效应的重要原因。     

丁硫氨酸亚砜胺逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用机理…

应用阿霉素诱导的人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞Ａ５４９／Ｒ２，对硫氨酸亚砜胺逆转多重抗药细胞的抗性作用及其作用同理进行了初步探讨。研究发现，非细胞抑制剂量ＢＳＯ能使Ａ５４９／Ｒ２细胞的ＩＣ５０值显著下降；大剂量ＢＳＯ直接了制癌细胞增殖，且对抗药细胞更有效；Ａ５４９／Ｒ２细胞内总体谷胱甘肽含量和谷胱甘肽Ｓ－转移酶活性均非常显著地高于其敏感细胞３水平；ＢＳ能使Ａ５４９／Ｒ２细胞内总ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活性     

细胞因子联合抗癌药抑制肺腺癌细胞的研究

目的 检测白细胞介素２（ＩＬ－２）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与顺铂（ＤＤＰ）合用对肺腺癌Ａ５４９细胞株（Ａ５４９）和耐顺铂Ａ５４９细胞株（Ａ５４９／ＤＤＰ）的细胞毒性作用。方法 采用四氯唑蓝快速比色法（ＭＴＴ法）进行体外细胞毒性实验。结果ＩＬ－２与顺铂使用后顺铂对两株细胞的毒性作用无明显变化；ＴＮＦα与顺铂用后顺铂对两株细胞的毒性作用明显增强；ＩＬ－２、ＴＮＦα与顺铂三者合用后顺铂对两株细胞的毒     

Ｍｉｒ－１６对人肺腺癌Ａ５４９细胞增殖及凋亡的影响

【目的】 探讨基因Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞株Ａ５４９中的表达状况以及Ｍｉｒ－１６对Ａ５４９细胞生物学行为的影响。【方法】 Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中的含量采用实时荧光定量ＰＣＲ的检测,后将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞,用ＭＴＳ、流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡及细胞周期。构建野生型及突变型ＷＩＰ１３’－ＵＴＲ的荧光素酶报告载体,检测荧光素酶的相对活性,验证在肺腺癌中ＷＩＰ１是Ｍｉｒ－１６的作用靶点。【结果】 在人肺腺癌Ａ５４９细胞中Ｍｉｒ－１６呈低表达;将Ｍｉｒ－１６转染至Ａ５４９细胞后表达上升,并可促进Ａ５４９细胞的增值率明显降低;早期凋亡的细胞比例增加;处于Ｇ１期的细胞比例明显增加,处于Ｓ期的细胞比例明显减少。与各对照组相比,Ｍｉｒ－１６显著抑制野生型ＷＩＰ１－３’ＵＴＲ表达载体的荧光素酶活性。【结论】Ｍｉｒ－１６在肺腺癌细胞中低表达,并抑制肺腺癌细胞的增殖及促进细胞的早期凋亡,有望成为肺腺癌靶向治疗的新靶点。     

抗CD3McAb诱导外周血单个核细胞活化增殖的观察

目的：观察抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖过程中的影响因素及抗ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）免疫学特性的变化。方法：采用ＭＴＴ法和苔盼蓝染色法，ＩＬ－２依赖细胞株（ＣＴＬＬ细胞）增殖实验、ＴＮＦ－α（双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法）试剂盒以及间接免疫荧光法检测ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性，ＩＬ－２，ＴＮＦ－α的产生及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ－２Ｒ等的表达。结果：     

抗CD_3McAb诱导外周血单个核细胞活化增殖的观察

目的：观察抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖过程中的影响因素及抗ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）免疫学特性的变化。方法：采用ＭＴＴ法和苔盼蓝染色法、ＩＬ－２依赖细胞株（ＣＴＬＬ细胞）增殖实验、ＴＮＦ－α（双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法）试剂盒以及间接免疫荧光法分别检测ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性、内源性ＩＬ－２、ＴＮＦ－α的产生及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ－２Ｒ等的表达。结果：抗ＣＤ３ＭｃＡｂ对ＨＰＢＭＣ有很强的丝裂原作用，该作用与其诱导浓度、时间及外源性ＩＬ－２的协同作用密切相关。ＣＤ３ＡＫ细胞可产生内源性ＩＬ－２、ＴＮＦ－α，ＩＬ－２Ｒ表达及ＣＤ８＋细胞百分率显著增多。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有很强的增殖能力，但需要外源性ＩＬ－２的协同作用，增殖细胞以ＣＤ８＋细胞为主。     

人食管癌细胞抗药机制的探讨

目的：在建立 体外多药抗药细胞株的基础上，研究其抗药性形成机制，寻求克服抗药性的方法。方法：用人食管癌上皮细胞Ｅｃａ－１０９细胞，在无诱导剂的情况下，以递加培养液中阿霉素（ＡＤＭ）质量浓度的方法，建立了Ｅｃａ－１０９／ＡＤＭ多药抗药细胞株。用荧光光度法测定抗药细胞内还原性谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量及ＡＤＭ的累积量。结果：研究发现Ｅｃａ－１０９／ＡＤＭ细胞内ＧＳＨ含量增加、降低细胞内ＧＳＨ的含量，细胞的     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的：探讨α－干扰素（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞株Ａ５４９细胞周期和Ｐ５３蛋白表达的影响。方法：用２种不 同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,１００ μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,并设空白为对照。用流式细胞仪测定ＩＦＮ－α对Ａ５４９细 胞细胞周期的影响,用免疫荧光标记法测定Ｐ５３蛋白的表达。结果：ＩＦＮ－α作用后的Ａ５４９细胞,细胞周期明显改变,Ｓ期细 胞数显著降低,且Ｐ５３蛋白表达明显减少。结论： ＩＦＮ－α能阻止Ａ５４９细胞细胞周期的进程,抑制Ｐ５３蛋白的表达。     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的：探讨干扰素α（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：用不同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,７５μｇ／Ｌ,１００μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,记录细胞数目,进行甲基绿－派洛宁染色,测定软琼脂集落形成率。结果：ＩＦＮ－α能明显抑制Ａ５４９细胞的增殖,药物组与对照组之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）,药物组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落     

家兔肠缺血—再灌注损伤时脂质过氧化的变化及其意义

目的：探讨肠缺血－再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤时血浆及组织脂质过氧化的变化及其意义。方法：复制家兔肠Ｉ／Ｒ损伤模型，检测超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）活性及丙二醛（ＭＤＡ）含量。实验分为Ｉ／Ｒ损伤组及假手术（Ｓｈａｍ）对照组，并进行比较。结果：缺血前两组动物ＳＯＤ、ＸＯ及ＭＤＡ值均无统计学差异，Ｉ／Ｒ组再灌注后２ｈ与缺血前及Ｓｈａｍ组相比，ＳＯＤ活性显著下降，ＸＯ活性及ＭＤＡ含量明显增加（Ｐ〈０．０１）；此外，肺、肝等组织ＭＤＡ含量亦明显高于Ｓｈａｍ组（Ｐ〈０．０１）。结论：家兔肠Ｉ／Ｒ损伤时体内脂质过氧化过程加强，且在Ｉ／Ｒ损伤过程中起重要作用。     

双丁酰环腺苷酸对肺腺癌细胞的诱导分化作用及对其表达的凝集素受体影响

目的：研究双丁酰环腺苷酸（ＤＢｃＡＭＰ）对人肺腺癌细胞的诱导分化作用，及其与癌细胞表达凝集素受体的关系。方法：用双丁酰ｃＡＭＰ作用人肺腺癌细胞ＡＧＺＹ－８３ａ，观察细胞的生长、形态、超微结构的变化；用凝集素组化方法检测双丁酰ｃＡＭＰ对细胞表达凝集素受体的影响。结果：０．３ｍｍｏｌ／Ｌ双丁酰ｃＡＭＰ对癌细胞的生长有明显抑制作用，使细胞间接抑制有所恢复，形态结构向成熟分化；同时使细胞表达的凝集素（ＤＢＡ、ＵＥＡ－１、ｃｏｎＡ、ＷＧＡ、ＲＣＡ）受体降低。结论：双丁酰ｃＡＭＰ对人肺腺癌细胞有诱导分化作用；双丁酰ｃＡＭＰ对癌细胞表达凝集素受体的影响可能在其抑制细胞，恢复细胞识别功能，诱导细胞分化过程中有重要意义。     

RG50864对PDGF诱导的PASMC DNA含量及增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ含量及增殖细胞核抗原表达的影响。方法：应用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,用流式细胞仪分析ＲＧ５０８６４对ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣＤＮＡ百分含量及增殖细胞核抗原的变化。结果：与对照组相比,ＲＧ５０８６４处理组可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达的荧光强度及荧光指数（Ｐ＜０．００１）,增加ＰＡＳＭＣ生长周期中的Ｇ０／Ｇ１期的ＤＮＡ百分含量,抑制Ｓ期及Ｇ２Ｍ期ＤＮＡ百分含量（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．００１）。结论：ＲＧ５０８６４可显著地抑制ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ增殖细胞核抗原表达,抑制ＰＡＳＭＣ周期Ｓ期及Ｇ２Ｍ期ＤＮＡ百分含量,阻止ＰＡＳＭＣ周期由Ｇ０／Ｇ１向ＤＮＡ合成的Ｓ期及Ｇ２Ｍ期转化。     

针对NHE—1基因的反义核酸诱导人肺癌细胞酸化及凋亡的研究

研究Ｎａ＋／Ｈ＋交换泵（Ｎａ＋／Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ，ＮＨＥ）基因家族第一亚型ＮＨＥ－１基因表达在肿瘤细胞内ｐＨ（ｐＨｉ）调节及凋亡调控中的作用。方法：在细胞培养中，以针对ＮＨＥ－１基因的硫代型反义核酸处理人肺腺癌Ａ５４９细胞，采用荧光标记法研究反义核酸对细胞的酸化效应；细胞凋亡原位检测法研究反义核酸诱导细胞凋亡。结果：Ａ５４９细胞酸化效应与ＮＨＥ－１反义核酸呈一定的剂量效应关系，当反义核酸浓度为２０μＭ时，可导致ｐＨｉ下降至６．５５，并诱发细胞凋亡，在处理时间为２４，４８，７２小时，其凋亡发生率分别为３０．１％，９１．２％，９９．６％。结论：①细胞酸化（ｐＨｉ下降至６．５５）能诱发人肺癌细胞凋亡；②人肺癌细胞ＮＨＥ－１基因表达能通过阻止其胞内酸化，对维持其抗凋亡生长性质具有重要作用     

长春新碱诱导人脑胶质瘤细胞的耐药性

本文报告以细胞周期特异化疗药长春新碱（ＶＣＲ）对人脑胶质瘤Ｕ２５１ＭＧ细胞进行体外分步诱导法造成细胞的耐药性。细胞集落实验表明，经ＶＣＲ诱导的胶质瘤细胞Ｕ２５１ＶＲ—４０在１０～４０ｎｇ／ｍＬＶＣＲ培养液中，其细胞形成相当率是未诱导组Ｕ２５１ＭＧ细胞的２～１３倍（Ｐ＜０．０１）。同时，耐ＶＣＲ的Ｕ２５１ＶＲ—４Ｑ细胞对阿霉素（ＡＤＭ）亦有交叉耐药性，但与卡氮芥（ＢＣＮＵ）无耐药性产生。另外，５ｕｇ／ｍＬ尼卡地平（ＮＣＤＰ）能使其反转成药敏细胞。诱导过程中还发现，Ｕ２５１ＭＧ胶质瘤细胞直接在高浓度ＶＣＲ（６０ｎｇ／ｍＬ培养液中被杀伤和发生明显形态变化后，仍有少数细胞在无化疗药培养环境７～１０天可以复苏并且再增殖。研究结果不仅表明ＶＣＲ诱导的胶质瘤细胞能够产生多药耐受性（ＭＤＲ），而且提示该胶质瘤细胞中可能还存在一种修复微管系统的抗药机理。     

9-顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察９－顺维甲酸（９－ｃｉｓ－ＲＡ）处理前后人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９维甲酸受体（ＲＡＲｓ）及维甲类Ｘ受体　（ＲＸＲｓ）不同时相ｍＲＮＡ转录水平的表达。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ相对定量检测人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９加９－ｃｉｓ－ＲＡ前后ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ　ｍＲＮＡ转录水平。结果：应用９－ｃｉｓ－ＲＡ后，两细胞株的ＲＡＲα和ＲＡＲβ－ｍＲＮＡ转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体ＲＡＲα和ＲＡＲβ可能与９－ｃｉｓ－ＲＡ对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

人肺腺癌细胞系中P—糖蛋白表达与抗药程度的关系

应用抗Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）ＭｃＡｂ４Ｅ３，采用免疫细胞化学方法，研究Ｐ－ｇｐ在Ａ５４９，ＰＬＡ８０１及ＬＣ－３等３种人肺腺癌细胞系中的表达，并检测这些细胞系对几种抗肿瘤药物的敏感性，结果显示，Ｐ－ｇｐ表达强弱与抗药程度相关。     

人肺腺癌细胞系中P─糖蛋白表达与抗药程度的关系

应用抗Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）ＭｃＡｂ４Ｅ３，采用免疫细胞化学方法，研究Ｐ－ｇｐ在Ａ５４９、ＰＬＡ８０１及ＬＣ－３等３种人肺腺癌细胞系中的表达，并检测这些细胞系对几种抗肿瘤药物的敏感性。结果显示，Ｐ－ｇｐ表达强弱与抗药程度相关     

人膀胱癌耐药细胞系BIU—87／A,BIU—87／V的建立及耐药分析

为研究人膀胱癌细胞株耐药机制，应用阿霉素（ＡＤＭ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）低浓度持续递增法，在体外持续培养１０个月，逐步诱导人膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７，获得具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／Ａ、ＢＩＵ－８７／Ｖ细胞。通过检测抗药药物５０％抑制率剂量，ＢＩＵ－８７／Ａ、ＩＢＵ－８７／Ｖ细胞分别对ＡＤＭ，ＶＰ－１６的耐药程度较亲本细胞提高５７．４２倍、５．４４倍，两种耐药株显示了相似的耐药谱，均对ＡＤＭ，     

姜黄素类似物对正常动物细胞和肿瘤细胞间通讯传递的影响

采用正常中国仓鼠肺细胞（Ｖ７９）、Ｂａｌｂ／ｃ小鼠成纤维细胞（Ｂａｌｂ／ｃ－３Ｔ３）、大鼠肝上皮细胞（ＷＢ）、人胚肺细胞（２８Ｓ）观察了间隙连接介导的细胞间通讯功能（ＧＪＩＣ）以及促癌剂ＴＰＡ对ＧＪＩＣ的抑制作用和药物对ＴＰＡ的拮抗作用。结果表明：Ｖ７９、ＷＢ以及３Ｔ３、２ＢＳ细胞均具有中等强度的细胞间隙通讯传导功能，ＴＰＡ对其均呈一定的抑制作用，姜黄素类似物９１０２２、９１０２２－Ｓ对ＴＰＡ具有一定的拮抗作用，即可增强上述４种细胞的通讯传导功能，同时观察到人肺腺癌Ａ５４９和ＧＬＣ无明显间隙连接通讯。９１０２２之所以增强Ａ５４９的传导功能，可能与其具有抗肿瘤作用有关。