MALDiI Botyper与API20E对克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的鉴定结果比较

目的:评价MALDI-TOF MS Biotyper鉴定克罗诺杆菌的效果。方法:应用MALDI-TOF MS Biotyper与API20E分别对32株克罗诺杆菌(28株分离株,4株参考菌株)与相近菌株阴沟肠杆菌、产气肠杆菌进行鉴定,并对鉴定结果分析比较。结果:MALDI-TOF MS Biotyper2.0将32株克罗诺杆菌鉴定到种、属水平分别为56.2%和37.5%;API20E为75%、21.9%。3株菌未获得鉴定结果,其余29株菌的鉴定结果相符。结论:MALDI-TOF MS Biotyper作为一种新的细菌鉴定手段,可用于克罗诺杆菌的鉴定。     

API20E、PCR方法在沙门菌鉴定中的应用

为了评价API 20E试条、PCR方法在沙门菌鉴定中的应用，本研究利用API 20E、PcR方法对54株疑似沙门菌进行鉴定，利用常规生化和血清学方法对鉴定结果进行确认。结果发现API20E、PCR方法与常规鉴定方法的结果一致，51株为沙门菌，3株非沙门菌（1株为柠檬酸杆菌，2株为河生肠杆菌）。API20E、PCR方法具有简便、特异、敏感的特点，可适用于沙门菌鉴定。     

保健食品中检出铜绿假单胞菌的情况分析

目的了解市场保健食品的卫生状况。方法依据《中国药典》2010年版,对市场随机抽检的51批保健食品中检出的疑似阴性杆菌,用绿脓杆菌生化管、API 20E、VITEK-2 Compact全自动微生物分析鉴定系统进行鉴定。结果确认有5批保健食品被检出铜绿假单胞菌,这5株菌的氧化酶试验和绿脓菌素试验均为阳性反应。API 20E鉴定结果显示,其中4株菌与阳性对照菌的鉴定数码相同。VITEK-2 Compact鉴定结果显示,5株菌的VITEK生物号码与阳性对照菌存在较大的差异。而其在API 20E与VITEK-2 Compact上相同生化试验的反应结果均一致。结论保健食品受铜绿假单胞菌污染,已存在潜在危害,建议加强卫生监督管理,在修订保健食品卫生学国家标准中增加铜绿假单胞菌的检验项目。     

革兰阴性细菌编码系统(GN-27)对肠杆菌科细菌的鉴定评价

目的:用常规细菌鉴定方法和API20系统两种方法对我们自行设计的革兰阴性细菌鉴定编码系统(GN-27)进行评价。方法:用3种方法对16株质控菌株(14株全国质控菌株,2株省质控菌株),42株临床菌株进行重新鉴定,分析鉴定结果。结果:GN-27细菌鉴定板与常规鉴定方法符合率为100%,API20E系统与常规鉴定方法、GN-27系统完全符合者55株,符合率为94.83%,3种方法在统计学上无显著性差异(P>0.05)。结论:GN-27系统在肠杆菌科细菌鉴定方面使用较为满意,可作为一种适用于各级医院临床常规细菌鉴定的较为可靠的方法。     

血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的探讨

目的探讨血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏可行性. 方法采用全自动血液培养系统Bact/Alert3D和自动细菌鉴定系统VITEK-32前瞻性研究的方法,对359例血培养阳性标本经染色,根据形态、数量多少,选择出290例Bact/Alert3D血培养阳性标本,经多次离心处理后,菌悬液直接用VITEK-32细菌鉴定和药敏,同时用VITEK-32细菌鉴定和药敏的标准法进行,二者阳性球菌均用GPI、GPS-106,阴性杆菌用GNI＋、GNS-506. 结果290例细菌包括223株甲型副伤寒沙门菌、8株大肠埃希菌、30株金黄色葡萄球菌、12株表皮葡萄球菌、9株溶血葡萄球菌、8株腐生葡萄球菌;直接法和标准法符合率：细菌鉴定总符合率93.1%,其中杆菌95.7%,球菌83.1%;药敏：重要误差：杆菌1.3%,球菌5.1%;主要误差：杆菌2.2%,球菌3.4%;次要误差：杆菌3.1%,球菌3.4%;总误差率7.6%. 结论 Bact/Alert血培养阳性标本直接VITEK-32细菌鉴定和药敏对肠杆菌和葡萄球菌是可行的,可大幅度缩短时间,为临床及时修正用药提供依据,结合革兰染色和临床表现,Bact/Alert血培养阳性标本直接VITEK-32细菌鉴定和药敏具有较高应用价值.     

棒杆菌属细菌分类鉴定的方法学比较及对四环素与大环内酯类抗菌药物耐药机制的研究

目的 评价全自动微生物鉴定系统鉴定棒杆菌属的准确率及可靠性;分析棒杆菌属的耐药状态,探讨其对大环内酯类、四环素类抗菌药物的主要耐药机制,为临床合理使用相关抗菌药物提供依据.方法 选用VITEK-2Compact系统、API CORY系统、VITEK-32系统对分离的37株纹带棒杆菌、5株无枝菌酸棒杆菌进行分类鉴定并比较,采用微量稀释法进行药敏试验,对ermX、tetAB基因进行PCR扩增及双向测序后,在GenBank中比对.结果 API鉴定为纹带棒杆菌的37株菌,VITEK-32均错误地鉴定为干燥棒杆菌,VITEK-2 Compact鉴定正确;37株菌对红霉素、四环素的耐药率分别为83.8％、75.7％;28株菌在染色体DNA中检测到tetAB基因,31株菌染色体DNA检测到ermX基因.结论 VITEK-2 Compact在鉴定纹带棒杆菌方面较准确可靠,但在鉴定其他棒杆菌方面有限制;纹带棒杆菌对大环内酯类、四环素的耐药率较高,染色体中获得ermX基因、tetAB基因决定簇是其耐药的主要原因.     

革兰阴性杆菌鉴定结果比较研究

细菌数值分类法的发展为细菌的自动化鉴定打下了基础.数值鉴定的应用,为细菌鉴定的标准化、系统化、微量化、简易化、商品化创造了条件.本研究用临床分离到的120株革兰阴杆菌用GNW 21E和API20E同时鉴定作结果比较.     

VITEK-2 Compact在食源性致病菌检测中的应用

目的探讨VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统对致病菌鉴定能力的准确性。方法应用国家标准GB4789中的方法及美国食品药品管理局(FDA)推荐的常规API生化鉴定方法,对从食源性致病菌中检测分离的20株沙门菌、40株单增李斯特菌、30株金黄色葡萄球菌,30株蜡样芽孢杆菌应用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统进行复检测。结果 2种鉴定方法的检测结果一致,对4种食源性致病菌的符合率为100%。结论 VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统对食源性致病菌的鉴定准确、快速、简便,适用于食源性疾病的检测及突发事件的监测。     

39株腹泻病病原菌鉴定报告

为了明确现阶段腹泻病原菌的流行特点,对39株由地方医院送检菌株进行了调查鉴定工作.在菌株鉴定中,我们利用常规生化反应与API生物鉴定新技术相对照的方法,分别鉴定致病性肠道弧菌25株,致病性肠道杆菌14株,对于肠道致病菌的流行趋势进行了系统的分析.     

黏液玫瑰单胞菌16S rRNA基因序列及耐药性分析

目的对常规方法不易鉴定的一株临床细菌进行16S rRNA基因序列分析,并探讨该细菌的耐药性。方法菌株分离培养后进行常规的鉴定及药物敏感性分析,同时选择细菌的16S rRNA基因为靶序列,进行PCR扩增并测序,测序结果与GenBank比对。结果 API 20NE板条(法国生物梅里埃公司)将该菌鉴定为嗜中温甲基杆菌;细菌的16S rRNA基因序列与黏液玫瑰单胞菌相似性为99.5%;细菌的药敏试验显示对三代头孢耐药性高。结论黏液玫瑰单胞菌引起的感染比较罕见,菌株对三代头孢的高耐药应引起临床重视;16S rRNA基因序列分析方法可以较好地鉴定常规方法难以鉴定的不典型及罕见菌株。     

Molecular epidemiological survey of Citrobacter freundii misidentified as Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) and Enterobacter hormaechei isolated from powdered infant milk formula

A total of 75 powdered infant milk formula (PIF) samples collected from pharmacies and drugstores in Western Sicily, Italy, and representative of 12 different brands were analyzed in this study to evaluate their microbiological quality. According to the U.S. Food and Drug Administration protocol, 32 samples out of 75 were contaminated by enterobacteria. Commercial biochemical API(r) 20E-system identification method indicated that six PIF samples were presumptively contaminated by Cronobacter spp., but further characterization by alpha-glucosidase based polymerase chain reaction (PCR) assay identification strongly suggested that these strains did not belong to the genus Cronobacter. Phylogenetic analysis of partial 16S rRNA (rrs) sequences combined with the results of biochemical tests allowed to identify the six strains as Citrobacter freundii. Similarly, rrs sequence analysis identified as Enterobacter hormaechei 23 strains originally ascribed to Enterobacter cloacae by the API 20E system. Characterization of C. freundii and E. hormaechei PIF isolates by the DiversiLab(r) repetitive sequence-based PCR (rep-PCR) typing method revealed a variety of amplification patterns, but the recovery of the same rep-PCR genotype in several products might indicate a special adaptation of genetic clones to this food or cross-contamination through common ingredients. Antibiotic-resistance profiles were also determined, but none of the strains tested was resistant to third-generation cephalosporins or fluoroquinolones and extended-spectrum beta-lactamase activity was not detected. Our results confirm that E. hormaechei contamination of PIF is widespread, thus making it a cause for concern. Similarly to what was demonstrated for E. hormaechei, we suggest that C. freundii also may be an under-reported cause of bacterial infection, especially in high-risk neonates, due to misidentification.     

能与沙门菌及O157诊断血清交叉凝集的细菌分离与鉴定

目的:研究能与沙门菌、大肠埃希菌O157发生交叉凝集的细菌,为防止误诊提供参考。方法:采用观察形态、血清学凝集、以及API20E生化鉴定试剂盒进行系统生化鉴定的方法。结果:生化鉴定符合变形杆菌、阴沟肠杆菌、柠檬酸杆菌的18株肠杆菌,其中11株能与沙门菌多价血清发生交叉反应凝集,7株能与大肠埃希菌O157血清发生交叉凝集。结论:在肠杆菌科细菌的鉴定中,单凭血清学反应做出判定,容易产生错误的结论,为确保菌株鉴定的准确性,应当血清学反应和全面生化检验结合的方法。     

从食物中毒患者标本中分离鉴定海藻和腐败施万菌

目的 对两起食物中毒调查中分离到的施万菌属(Shewanella spp.)菌株进行生化和分子生物学鉴定.方法 对2007年9月29日至10月3日间,马鞍山市的两起食物中毒患者的肛拭、从业人员手拭和剩余食物标本进行采集,按照国标方法(GB/T4789),对所有标本进行增菌和选择性培养基分离培养,疑似菌落用VITEK-32和AP120E系统鉴定,用辅助生化、生长、溶血和药敏实验分析菌株特性,同时扩增16S rDNA并测序,用MEGA 4.0软件建立进化树并进行分群.结果 所有标本经增菌后接种选择性培养基,共有8份标本在TCBS和BP培养基上长出单一的菌落,在三糖铁琼脂(TSI)斜面上的主要生长特征为:产硫化氢、不产气,氧化酶阳性.8株菌经VITEK-32鉴定仪鉴定为海藻施万菌(S.algae)或腐败施万菌(S.putrefaciens),经AP120E系统鉴定为腐败施万菌.在WS、SS和EMB培养基均未检测到施万菌生长.比较施万菌的16S rDNA序列表明,其中7株为海藻施万菌,1株为腐败施万菌.没有从这8份标本中检测到其他肠道病原菌,包括霍乱弧菌、沙门菌、副溶血性弧菌、变形杆菌和金黄色葡萄球菌.结论 从食物中毒患者中分离到施万菌,为该菌作为可能的食物中毒病原菌提供了线索.     

Molecular identification of coliform bacteria isolated from drinking water reservoirs with traditional methods and the Colilert-18 system

The accuracy of a traditional method (lactose utilization with acid and gas production) for the detection of coliform bacteria and E. coli was tested in comparison with method ISO 9308-1 (based on acid formation from lactose) and the Colilert-18 system (detection of beta-galactosidase). A total of 345 isolates were identified after isolation from water samples using API 20E strips. The Colilert-18 led to the highest number of positive findings (95% of the isolates were assigned to coliforms), whereas the ISO-9308-1 method resulted only in 29% coliform findings. With the traditional method only 15% were rated positive. Most of the isolates were identified by the API 20E system as Enterobacter spp. (species of the Enterobacter cloacae complex), Serratia spp., Citrobacter spp.and Klebsiella spp.; but species identification remained vague in several cases. A more detailed identification of 126 pure cultures by using 16S rRNA gene sequence analysis and analysis of the hsp60 gene resulted in the identification of Enterobacter nimipressuralis, E. amnigenus, E. asburiae, E. hormaechei, and Serratia fonticola as predominat coliforms. These species are beta-galactosidase positive, but show acid formation from lactose often after a prolonged incubation time. They are often not of fecal origin and may interfere with the ability to accurately detect coliforms of fecal origin.     

哌拉西林/他唑巴坦对血流感染肠杆菌科细菌体外抗菌活性研究

目的 调查血液中肠杆菌科细菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率变化,了解哌拉西林/他唑巴坦对肠杆菌科细菌的耐药情况.方法 收集2003年1月-2008年12月从医院患者血液标本中分离的肠杆菌科细菌.使用VITEK-32全自动微生物分析仪进行菌种的鉴定,采用K-B法对哌拉西林/他唑巴坦进行药敏试验,对结果进行回顾性调查.结果 自血液中分离到肠杆菌科细菌344株,大肠埃希菌175株(50.9%),肺炎克雷伯菌120株(34.9%),阴沟肠杆菌39株(11.3%),奇异变形菌10株(2.9%),肠杆菌科细菌对哌拉西林/他唑巴坦耐药率为15.1%,其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌对哌拉西林/他唑巴坦耐药率分别为16.0%、16.7%和10.3%,奇异变形菌全部敏感;大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率从2005年的9.1%和8.0%上升至2008年的22.7%和21.6%;阴沟肠杆菌耐药率无明显变化.结论 血液中检出肠杆菌科细菌以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主,哌拉西林/他唑巴坦对肠杆菌科细菌具有强大的抗菌活性,但是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率呈上升趋势.     

两种仪器在微生物室间质评中的应用与比较

目的通过VITEK-32和Microscan AS-4微生物鉴定系统对室间质控菌株的鉴定,了解两种仪器的差异性及与质评结果的符合程度。方法对39株不同批次的质控菌株按操作规程进行分离与培养,用VITEK-32和Microscan AS-4进行鉴定并作比较。结果VITEK-32和Microscan AS-4能直接鉴定到种的菌株与39株质控株的符合率分别为76.9%和69.5%,经血清学或进一步生化验证后符合率分别为89.7%和76.9%,其中,二者对22株革兰阴性菌的鉴定符合率分别为90.9%和81.8%,对17株革兰阳性菌的鉴定符合率则分别为88.2%和58.8%。结论VITEK-32对微生物的检出率和准确性均优于Microscan AS-4,尤其在肠球菌属和链球菌属鉴定方面;二者对革兰阴性菌的鉴定准确性较好,对革兰阳性球菌的鉴定准确性稍差,而对需要血清学证实的沙门菌属、志贺菌属都不能鉴定到种。     

老年患者肠球菌属感染的临床分布及耐药性分析

目的 了解医院老年患者肠球菌属感染的临床分布特点及耐药性.方法 使用法国生物梅里埃公司VITEK-32型全自动微生物分析仪及配套的GPI鉴定卡进行鉴定,并用K-B法进行抗菌药物敏感试验;数据处理应用WHONET5.4软件分析.结果 临床老年患者感染的136例肠球菌属中粪肠球菌67株,占49.3％,屎肠球菌52株,占38.2％,主要发生在老年病科、ICU、肾内科和呼吸科,标本类型中尿液66株占44.1％,其次是痰液47株占34.5％;粪肠球菌对抗菌药物耐药性比屎肠球菌低,但粪肠球菌对四环素的耐药性却高于屎肠球菌,未发现耐万古霉素和替考拉宁的肠球菌属.结论 肠球菌属对抗菌药物的耐药性不同,临床抗感染治疗应根据本地区分离菌株的体外抗菌药物敏感性试验结果为依据,选择敏感抗菌药物对其感染进行治疗.     

Serotypes and biochemical profiles of British hospital strains of Enterobacter cloacae in relation to site of infection and antibiotic susceptibility

Comparisons were made between the O-serotype, API 20E profile, site of isolation and antimicrobial resistance of clinical isolates of Enterobacter cloacae. Correlations were found between autoagglutinable strains and urinary-tract infection, and API 20E profile 3305573 and strains isolated from blood. The proportion of strains sensitive to amikacin, gentamicin, cefotaxime, cefuroxime and trimethoprim were 100%, 93%, 91%, 83% and 89%, respectively. No individual resistances or patterns of resistance were associated with O-serotype or biochemical profile. Strains isolated from urinary-tract infections were the most resistant, 40% being resistant to five or more antimicrobials compared to 18%, 12% and 4% for strains from blood, wounds and sputum, respectively. There were no readily identifiable phenotypes within E. cloacae that possessed unique characteristics that could contribute to infections in hospitals.