亚甲基四氢叶酸还原酶对胃癌细胞基因表达的影响

目的 分析亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因的真核表达质粒对人胃癌细胞生存力、DNA甲基化酶基因及肿瘤相关基因转录水平的影响。方法 分别构建含有人野生型（正义）MTHFR（W）和反义MTHFR（A）的真核表达质粒，将其转染入人胃癌MKN45细胞，噻唑蓝（MTT）法检测细胞生存活力，定量PCR检测DNA甲基化酶及胃癌相关基因的转录水平。结果 转染野生型MTHFR质粒的胃癌细胞生存活力增高（P〈0、01），而转染反义质粒者生存活力降低（P〈0．01）。野生型MTHFR质粒下调c-myc、p21WAF1a和hMLH1基因表达，反义MTHFR质粒的转染则无明显的基因调控作用。结论 重组MTHFR表达质粒可影响细胞生存活力及人胃癌细胞相关基因的表达，可望成为肿瘤基因防治的新靶点。     

siRNA靶向沉默PcG蛋白EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响

背景：PcG蛋白是一组转录抑制因子,其核心成分EZH2在胃癌组织中表达增高,并与胃癌的进展相关。目的：应用RNA干扰（RNAi）技术研究EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响,从细胞水平探讨EZH2参与胃癌发生的机制。方法：使用EZH2小干扰RNA（siRNA）转染MKN45细胞,以实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测EZH2mRNA和蛋白表达,CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期．MatrigelTM侵袭实验检测细胞侵袭力。结果：EZH2siRNA能有效抑制MKN45细胞的EZH2mRNA和蛋白表达。与阴性对照siRNA组相比,EZH2siRNA组MKN45细胞增殖抑制率为14．7％（P＜0．05）,侵袭能力显著降低[穿过Transwell小室膜细胞数：（38．5±3．4）个／HPF对（92．7±9．7）个／HPF,P＜0．05）,细胞周期阻滞于G0／G1和G2／M期。结论：EZH2siRNA可抑制人胃癌细胞的增殖和侵袭力,证实EZH2通过促进细胞增殖和侵袭在胃癌发生中发挥作用。     

曲格列酮诱导胃癌MKN45细胞株凋亡

目的:研究不同浓度曲格列酮对胃癌MKN45细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)激活水平变化及细胞凋亡的作用.方法:胃癌MKN45细胞培养后分为4组,分别为生理盐水对照组和1、5、10μmol/L曲格列酮实验组.用EMSA测定不同浓度曲格列酮对胃癌MKN45细胞PPARγ激活水平的变化,用流式细胞术检测caspase-3蛋白的表达、细胞周期的变化及凋亡.结果:随曲格列酮浓度的增加,PPARγ活性明显升高,以对照组活性为100.1、5、10μmol/L曲格列酮组的PPARγ平均活性分别为155.8、21 8.7和307.6(P<0.01).流式细胞术证实MKN45细胞经1,5,10μmol/L曲格列酮的作用后,随着曲格列酮剂量的增加,Caspase-3蛋白的表达均值分别为4.51,10.95,20.49,33.56(P<0.01),G_0/G_1期细胞逐渐增加,S期细胞下降,凋亡细胞增多.结论:曲格列酮通过对胃癌MKN45细胞PPARγ的激活可引发胃癌MKN45细胞株细胞周期抑制及凋亡,可为胃癌的治疗提供新的靶点.     

下调gankyrin通过调节β-catenin/cyclin D1信号通路抑制胃癌细胞增殖

背景:Gankyrin是一个含锚蛋白重复序列的原癌蛋白,其高表达参与了多种恶性肿瘤的发生、发展进程。目的:探讨下调gankyrin表达对胃癌细胞增殖能力的影响及其可能机制。方法:以携带gankyrin siRNA的慢病毒载体转染人胃癌细胞株MKN28,分别采用MTT实验、流式细胞术和蛋白质印迹法检测下调gankyrin表达对MKN28细胞增殖、细胞周期分布及其β-catenin/cyclin D1信号通路的影响。结果:慢病毒载体的转染效率在90%以上,转染gankyrin siRNA后,MKN28细胞gankyrin蛋白表达显著受抑(P0.01)。与未转染慢病毒和转染对照病毒的细胞相比,转染gankyrin siRNA的MKN28细胞体外生长于第3天起显著受抑,细胞周期G1期细胞比率增高,S期细胞比率降低,细胞中的β-catenin和cyclin D1表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:下调胃癌细胞中的gankyrin表达可通过抑制β-catenin/cyclin D1信号通路引起细胞周期G1期阻滞和细胞增殖抑制,gankyrin有望成为胃癌靶向治疗的新靶点。     

节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的 探讨节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 构建针对Bmal1序列的shRNA,用脂质体介导转染入胃癌细胞BGC-823,G418筛选稳定细胞株(转染组),同时设对照组(空白组).用克隆形成率检测细胞生长,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测相关基因及蛋白表达.结果 转染组克隆形成率低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bmal1总凋亡率升高(P＜0.05),其细胞周期再分布出现G1期缩短(P＜0.05),G2期延长(P＜0.05),同时发现Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05),c-Myc mRNA表达上调(P＜0.05).结论 Bmal1可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖,促进细胞凋亡,有可能成为诱导胃癌细胞凋亡的新靶点.     

癌性锚蛋白重复序列在胃癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)在人胃癌细胞的表达,以及在尼美舒利诱导细胞凋亡过程中的改变.方法 培养不同分化程度的人胃癌细胞系[MKN28(高分化)、AGS(低分化)、MKN45(低分化)和SGC7901(中分化)],以尼美舒利处理细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验和流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡,实时PCR和Western印迹法检测Gankyrin基因和蛋白表达.结果 在4种不同分化程度的人胃癌细胞系中,均存在不同水平的Gankyrin基因和蛋白表达.尼美舒利以时间-剂量依赖方式抑制AGS、FYGC7901细胞增殖.与对照组相比,尼美舒利400 μmol/L处理48 h可诱导AGS、SGC7901细胞显著凋亡(细胞凋亡率分别为0.57%±0.19%比23.30%±2.50%和0.88%±0.17%比16.80%±1.55%,P均<0.01).在AGS细胞凋亡过程中,Gankyrin基因和蛋白表达水平下降,以尼美舒利作用后24 h(0.0035±0.0014)和36 h(0.0980±0.0160)改变最为显著(对照组为0.4690±0.1190,P值均<0.01).结论 在人胃癌细胞中存在Gankyrin基因和蛋白表达.Gankyrin可能参与尼美舒利诱导的AGS胃癌细胞凋亡.     

下调EZH2表达对胃癌细胞株MKN1增殖作用的研究

目的 下调EZH2的表达,探讨EZH2在胃癌细胞株MKN1增殖、细胞周期中的作用,研究EZH2在胃癌发生与发展中的作用.方法 将EZH2的siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6(+)通过Lipofect AUINE 2000转入人胃癌细胞MKN1中,G418选择培养,建立EZH2低表达的胃癌细胞系MKN1/Silence(+);RT-PCR和Western blot检测EZH2在MKN1、MKN1/Silence(+)和MKN1/Silence(-)细胞表达,MTT法检测细胞增殖的活性,流式细胞观察其对MKN1细胞周期的影响.结果 构建成功稳定表达EZH2 siRNA细胞MKN1/Silence(+):EZH2在MKN1/Silenc(+)的mRNA和蛋白的表达明显下降,MKN1/Silence(+)细胞增殖明显抑制.在细胞周期试验中,MKN1/Silence(+)细胞G2/M期(36.08±1.34)比MKNI(16.59 ±0.71)、空载体MKNI/Silence(-)(18.35 ±0.35)显著增高(P＜0.01),Go/G1期细胞显著减少(P＜0.01),而S期细胞无明显变化,EZH2 siRNA作用下阻滞于G2/M期.结论 下调EZH2的表达显著性阻滞了MKN1细胞的增殖,诱导细胞阻滞细胞于G2/M期     

shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的影响

目的:研究shRNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞MKN-45体内外生物学特性的作用.方法:应用本实验室已构建并鉴定的STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT3),使用脂质体转染MKN-45细胞,实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT3转染组3组.通过RT-PCR和Western blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响;MTT比色法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪分析MKN-45细胞周期分布.用各组MKN-45细胞建立移植瘤裸鼠模型,筛选转染psiRNA-H1和psiRNA-H1/STAT3的MKN-45稳定细胞株观察裸鼠移植瘤的生长情况.结果: 成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT3 mRNA和蛋白表达明显下降(0.612±0.074 vs 1.937±0.043,P<0.05;0.668±0.054 vs 2.005±0.064,P<0.01).G0/G=期细胞比例增高,另一方面S期细胞比例降低,细胞的增殖系数明显降低(25.42±3.48 vs 33.54±2.91,P<0.05).移植瘤裸鼠模型显示,psiRNA-H1/STAT3组瘤体在体积上明显减小(4.47 cm3±0.18 cm3 vs 13.65 cm3±5.64 cm3,P<0.05).结论:针对STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞系STAT3 mRNA和蛋白表达,细胞增殖能力减弱,在体内明显抑制肿瘤生长,为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据.     

RNA干扰HIF-1α对食管癌细胞株TE13的生物学特性的影响

目的:探讨HIF-1α仅沉默后对食管癌细胞株TE13的生物学行为的影响.方法:应用倒置荧光显微镜观察HIF-1α的干扰质粒转染食管癌细胞TE13后绿色荧光蛋白的表达:采用、Western blot方法检测HIF-1α蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化:Transwell方法检测干扰前后细胞迁移能力的变化;流式细胞术检测干扰前后细胞周期的变化.结果:TE13/12单克隆干扰效果好,Westernblot结果显示无HIF-1α表达.HIF-1α被干扰后,细胞增殖能力明显减弱(p<0.05),运动迁移能力显著下降,与未转染的细胞相比穿过人工基底膜的细胞数明显减少(18.2±3.7 VS 103.8±8.5,P<0.05).与未转染组相比,TE13/12的细胞周期发生变化,G2/M期细胞明显减少(5.99%±1.19% vs 20.47%±4.30%,P<0.05),S期增加(64.67%±1.98%VS 48.53%±3.89%,P<0.05).结论:RNA干扰可引起TE13中HIF-1α的沉默,而HIF-1α表达下调后食管癌细胞株TE13的增殖与迁移能力均减弱.推测阻断HIF-1α通路有可能成为治疗人食管鳞癌的新靶点.     

PEBP1基因对胃癌细胞生物学特性影响的体外实验研究

目的探讨PEBP1基因对于胃癌细胞增殖状态、细胞周期、凋亡状态等生物学特性及成瘤、浸润转移能力等恶性表型的影响。方法将PEBP1基因插入载体pcDNA3.1构建PC-PEBP1真核表达载体。脂质体转染胃癌细胞系MKN45建立稳定转染细胞系(MKN-PEBP1),而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪、细胞迁徙实验法等分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立pcDNA3.1空载体转染组(MKN-PC)和空白MKN45细胞组(MKN45)为对照。结果与MKN-PC组和MKN45组相比,转染MKN-PEBP1载体的稳定表达细胞株生长显著减慢,MKN-PC组和MKN45组之间无显著差异,平板克隆形成实验结果显示,MKN-PEBP1转染组平均克隆形成率显著低于MKN-PC组和MKN45组(P<0.05),细胞周期检测显示MKN-PEBP1组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的MKN45组细胞和MKN-PC组细胞(P<0.05),而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其他两组(P<0.05),其他各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示各组细胞的凋亡比例均为2.0%左右,统计学检验无显...     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.