组蛋白去乙酰化酶介导PM_(2.5)加重哮喘的研究

目的探究PM_(2.5)是否通过组蛋白乙酰化途径加重大鼠哮喘。方法选择雄性SD大鼠45只,随机分为5组,分别为生理盐水对照组、哮喘组、PM_(2.5)低、中、高剂量刺激哮喘组。采用qRT-PCR、Western blot方法分别检测HDAC1、HDAC2 mRNA及蛋白表达水平,ELISA、免疫组织化学法测定组蛋白H3K9、H3K18乙酰化水平。结果 PM_(2.5)中、高剂量刺激哮喘组HDAC2 mRNA水平、PM_(2.5)中剂量刺激哮喘组HDAC1蛋白表达量、PM_(2.5)高剂量刺激哮喘组HDAC2蛋白表达量均低于哮喘组(P0.05)。PM_(2.5)低、中、高剂量刺激哮喘组H3K9ac水平高于哮喘组(P0.05),PM_(2.5)高剂量刺激哮喘组H3K18ac水平高于哮喘组、PM_(2.5)低、中剂量刺激哮喘组(P0.05);H3K9ac、H3K18ac蛋白表达主要集中在支气管上皮细胞,哮喘组表达量高于生理盐水对照组(P0.05);PM_(2.5)中、高剂量刺激哮喘组高于哮喘组(P0.05)。结论 PM_(2.5)可能通过降低HDAC2基因和HDAC1、HDAC2蛋白的表达,使组蛋白H3K9、H3K18乙酰化水平升高,从而加重大鼠哮喘。     

交通相关PM2.5不同组分对哮喘大鼠肺部炎症及外周血中Treg细胞比例的影响

目的研究交通相关PM_(2.5)不同组分对哮喘大鼠肺部炎症、Treg细胞及其相关细胞因子分泌水平的影响,以探讨PM_(2.5)不同组分诱导哮喘加重的机制。方法通过卵清蛋白腹腔注射致敏、雾化吸入激发构建大鼠哮喘模型,激发后分别予以3 mg/kg PM_(2.5)和1.8、7.2 mg/kg PM_(2.5)水溶组分及0.6、2.4 mg/kg PM_(2.5)有机组分气管滴注染毒,每3 d一次,共5次。观察肺组织病理改变,以流式细胞术检测外周血Treg细胞的比例。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以ELISA法检测BALF中IL-10和TGF-β1的含量。结果与生理盐水对照组、哮喘组、哮喘+PM_(2.5)组、哮喘+1.8 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组相比,哮喘+7.2 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组外周血中Treg细胞比例明显降低(P0.05);哮喘+0.6 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组外周血中Treg细胞比例明显低于哮喘+DMSO溶剂对照组和哮喘+PM_(2.5)组(P0.05)。与生理盐水对照组、哮喘组、哮喘+PM_(2.5)组相比,哮喘+7.2 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组BALF中IL-10的含量明显升高(P0.05);哮喘+0.6 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组BALF中IL-10的含量低于哮喘+PM_(2.5)组(P0.05)。哮喘+PM_(2.5)组BALF中TGF-β1表达明显高于哮喘组和哮喘+1.8 mg/kg PM_(2.5)水溶组分染毒组(P0.05);与哮喘+DMSO溶剂对照组相比,哮喘+PM_(2.5)组、哮喘+0.6 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组、哮喘+2.4 mg/kg PM_(2.5)有机组分染毒组BALF中TGF-β1表达明显升高(P0.05)。结论交通相关PM_(2.5)水溶组分和有机组分可抑制哮喘大鼠Treg细胞的增殖分化,引起其分泌的相关细胞因子的改变,进而加重哮喘肺部炎症反应。     

富硒酵母对大气细颗粒物致大鼠肺损伤的干预作用

目的探讨富硒酵母对大气细颗粒物(PM_(2.5))致大鼠肺损伤的干预作用。方法 56只健康成年SD大鼠随机平均分为7组:生理盐水对照组(气管滴注生理盐水);PM_(2.5)染毒组(气管滴注PM_(2.5)混悬液,40 mg/kg,隔天一次,共3次);溶剂对照组(1%羧甲基纤维素灌胃);低、中、高剂量干预组(气管滴注PM_(2.5)混悬液,末次滴注24h后,分别灌胃给予富硒酵母8.75、17.5和35 mg/kg,每天1次,共7d);干预对照组(35 mg/kg富硒酵母灌胃)。末次灌胃24 h后,收集肺泡灌洗液(BALF),测定BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、总蛋白(TP)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)及碱性磷酸酶(AKP)活性,并计数细胞。未灌洗肺叶制作病理切片。结果与对照组相比,PM_(2.5)染毒组及低、中、高剂量干预组BALF中中性粒细胞百分比、TNF-α、IL-1β、TP及MDA含量,LDH及AKP活性增高,GSH-Px及T-SOD活性下降(P0.05)。与PM_(2.5)染毒组相比,干预组BALF中中性粒细胞百分比、TNF-α、IL-1β、TP及MDA含量,LDH及AKP活性降低,GSH-Px及T-SOD活性升高(P"0.05),随干预剂量增加,中性粒细胞百分比、TNF-α、IL-1β、TP及MDA含量,LDH及AKP活性降低,GSH-Px、T-SOD活性升高幅度增加。结论富硒酵母可适当减轻PM_(2.5)所致大鼠肺组织炎性损伤及氧化应激损伤。     

PM_(2.5)对运动大鼠肺氧化损伤和炎症反应相关指标的影响

目的探讨细颗粒物(PM_(2.5))对运动大鼠肺氧化损伤和炎症相关指标的影响。方法将20只健康清洁级雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为生理盐水对照组、PM_(2.5)组、PM_(2.5)+运动组、PM_(2.5)+运动加强组,每组5只。PM_(2.5)组气道滴注染毒剂量为6.0 mg/kg,每周染毒5 d,每天1次,休息2 d;连续4周;PM_(2.5)+运动组在滴注PM_(2.5)后游泳1 h;PM_(2.5)+运动加强组大鼠先游泳4周,再滴注染毒和1 h游泳。测定肺组织中氧化损伤指标[肺总抗氧化能力(T-AOC)、血红素氧合酶-1(HO-1)、一氧化氮(NO)]和炎症相关指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、表面活性物质蛋白(SP-A)]的水平。结果与对照组相比,PM_(2.5)组、PM_(2.5)+运动组和PM_(2.5)+运动加强组大鼠肺组织中T-AOC和SP-A的含量均下降,而HO-1的活力及NO、TNF-α的含量均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);而PM_(2.5)+运动加强组大鼠肺组织中NO的含量无明显变化。与PM_(2.5)组相比,PM_(2.5)+运动组大鼠肺组织中T-AOC降低,而HO-1活力和NO的含量较高,差异均有统计学意义(P0.05);而PM_(2.5)+运动加强组大鼠肺组织中的T-AOC和HO-1的活力及NO的含量均无明显改变。与PM_(2.5)+运动组相比,PM_(2.5)+运动加强组大鼠肺T-AOC水平有所回升,而HO-1活力和NO的含量均降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。与PM_(2.5)组比较,PM_(2.5)+运动组大鼠肺组织中TNF-α的含量均增加,差异有统计学意义(P0.05)。PM_(2.5)组、PM_(2.5)+运动组和PM_(2.5)+运动加强组大鼠肺组织中SP-A的含量间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 PM_(2.5)可诱发大鼠肺组织氧化损伤和炎症效应,PM_(2.5)暴露下运动会加剧此效应。适宜的加强运动在一定程度上减轻了PM_(2.5)污染造成的肺组织损伤。     

苏州市独墅湖高教区PM_(2.5)对大鼠呼吸系统急性损伤的研究

目的研究大气细颗粒物对大鼠呼吸系统急性损伤特征和可能的损伤机制。方法将24只Wistar雄性大鼠随机分为4组,即对照组、PM_(2.5)低、中、高剂量组(2.5 mg/kg、5.0 mg/kg和10.0 mg/kg)。以从苏州市独墅湖高教区某校区采集的PM_(2.5)配制不同浓度的PM_(2.5)悬液,急性染毒大鼠,采用气管滴注法连续染毒3 d。最后一次染毒结束24 h后处死实验动物,固定左肺组织并收集右肺的支气管肺泡灌洗液(BALF)。观察肺组织的病理学改变;检测BALF中乳酸脱氢酶(LDH),酸性磷酸酶(ACP),碱性磷酸酶(AKP),促炎因子TNF-α、IL-8,抗炎因子IL-4、IL-10水平;以流式细胞仪检测肺细胞线粒体膜电位(MMP),钙离子浓度(Ca~(2+)),活性氧(ROS)含量变化。结果肺组织病理学结果表明,PM_(2.5)会引起肺部炎症反应,肺间质增宽,肺泡腔内分泌物增多,且随着染毒剂量的增加,病变程度有加重的趋势;大鼠肺泡灌洗液中酶、细胞因子基本没有变化,仅5.0 mg/kg和10.0 mg/kg PM_(2.5)染毒后大鼠肺泡灌洗液中碱性磷酸酶(AKP)含量显著低于对照组;PM_(2.5)染毒组钙离子浓度增高、线粒体膜电位降低,5.0 mg/kg PM_(2.5)染毒组活性氧含量升高。结论采自苏州市独墅湖高教区的PM_(2.5)急性染毒可引起机体肺实质损伤,诱导氧化损伤,导致急性炎症性病变。     

大豆肽下调Notch 1信号通路抑制哮喘大鼠气道炎症反应

目的探讨大豆肽(soybean peptide,SP)通过下调Notch 1信号通路防治哮喘大鼠气道炎症反应的作用机制。方法将60只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松(Dexamethasone,Dex)0.5 mg/kg组及大豆肽600、300及150 mg/kg剂量组。采用卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)+氢氧化铝(Aluminum hydroxide,Al(OH)_3)法复制大鼠哮喘动物模型,同时给予相应剂量的大豆肽进行干预,每天给药1次,连续7 d。末次给药24 h后收集大鼠肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavge fluid,BALF),进行白细胞分类计数;取大鼠右下叶肺组织常规HE染色,观察肺组织病理学改变及气道重塑变化;采用逆转录PCR和Western-blot法检测大鼠肺组织Notch 1、Jagged 1、Hes 1及NF-κB mRNA和蛋白表达水平。结果与哮喘模型组比较,大豆肽600 mg/kg剂量组大鼠BALF中的中性粒细胞、淋巴细胞及嗜酸性粒细胞计数显著降低(P0.01);大鼠肺组织病理损伤较模型组明显改善,炎性细胞浸润明显减少;大鼠肺组织Notch 1、Jagged 1、Hes 1及NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显下调(P0.05,P0.01)。结论大豆肽对哮喘大鼠炎症反应具有防治作用,其机制与下调Notch 1/Jagged 1/Hes 1/NF-κB信号通路有关。     

PM_(2.5)致大鼠肺氧化应激损伤及硫辛酸保护作用

目的探讨PM_(2.5)对大鼠肺氧化应激损伤及不同剂量硫辛酸(ALA)的保护作用。方法 SPF级雄性SD大鼠48只随机分为对照组、PM_(2.5)组、低、中、高剂量硫辛酸组。不同剂量硫辛酸预处理大鼠24 h后,气管滴注PM_(2.5)连续3 d,禁食8 h后处死,取肺泡灌洗液及肺组织,试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)等指标。结果与对照组比较,PM_(2.5)组大鼠体重增重[(63.5±3.69)g]下降;与PM_(2.5)组比较,高剂量硫辛酸组大鼠体重增重[(93.56±4.31)g]明显增加。与对照组比较,PM_(2.5)组大鼠血清SOD、GSH水平显著降低(P 0.05);与PM_(2.5)组比较,中、高剂量硫辛酸组大鼠血清SOD、GSH-Px、GSH水平升高,差异有统计学意义(P 0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)组大鼠肺泡灌洗液中GSH-Px、GSH水平显著降低,MDA含量、GSSG/GSH比值增加(P 0.05);与PM_(2.5)组比较,中、高剂量硫辛酸组大鼠肺泡灌洗液中GSH-Px、GSH升高,GSSG/GSH比值降低(P 0.05)。与对照组比较,PM_(2.5)组大鼠肺组织中SOD、GSH-Px、GSH水平显著降低,MDA含量、GSSG/GSH比值增加(P 0.05);与PM_(2.5)组比较,高剂量硫辛酸组大鼠肺组织中SOD、GSH水平升高,GSSG/GSH比值明显降低(P 0.05)。结论一定剂量PM_(2.5)可导致大鼠肺氧化损伤,硫辛酸对PM_(2.5)导致的肺氧化损伤具有一定程度的保护作用。     

沙漠干热环境中暑大鼠肺损伤与NO、iNOS mRNA的变化研究

目的研究沙漠干热环境中暑大鼠肺损伤性变化与肺组织一氧化氮(NO)浓度、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达量之间的关系。方法将48只雄性SD大鼠以随机数字表按简单随机分组法分为6组:沙漠干热环境轻度、中度、重度中暑组及各组相应的常温(室温25℃,湿度35%)对照组,然后将6组大鼠分别进行麻醉、固定、置管、接多导生理信号记录仪,3个中暑组放置在人工实验舱模拟的沙漠干热环境中,3个对照组放置在常温环境中,干热环境组分别在轻度、中度、重度中暑3个阶段的3个时间点麻醉处死大鼠,并留取血液标本和肺组织,相应对照组取材和时间点同实验组,依据分组相应时间点,打开胸腔,留取肺灌洗液、肺组织。应用HE染色观察肺组织病理学改变,应用一步法检测肺组织NO浓度,荧光定量PCR检测iNOS mRNA表达量的变化。结果沙漠干热环境各中暑组大鼠肺组织NO浓度和iNOS mRNA表达量与肺病理学评分和肺湿干重比的变化趋势一致,各个指标除了肺湿干重比(W/D)与中度中暑组和重度中暑组之间比较,差异无统计学意义外(P0.05),在其他各个中暑组之间差异均有统计学意义(P0.01),各项指标中暑组与其对应的对照组之间差异均有统计学意义(P0.01)。相关性分析提示,沙漠干热环境各中暑组肺损伤病理学评分与NO浓度、iNOS mRNA表达量之间显著相关,NO浓度、iNOS mRNA(P0.01)。结论沙漠干热环境下中暑可造成继发性急性肺损伤,随着中暑的发生发展而肺损伤逐渐加重,NO和iNOS可能在沙漠干热环境急性肺损伤过程中起重要作用,提示抑制iNOS的药物可能在减轻急性肺损伤过程中具有潜在的应用价值。     

阿魏酸对大气PM2.5诱导哮喘大鼠氧化损伤和TGF-β1/Smads信号通路改变的拮抗及机制研究

目的探讨阿魏酸(ferulic acid)对大气细颗粒物(PM_(2.5))加重哮喘大鼠呼吸道损伤的干预作用及干预机制。方法SPF级12周龄的雄性SD大鼠随机分为阴性对照组、哮喘模型组、PM_(2.5)染毒组(6.0 mg/kg)、阳性对照组(6.0 mg/kg PM_(2.5)+0.1mg/kg地塞米松)、PM_(2.5)+阿魏酸低剂量组(19.4mg/kg)、PM_(2.5)+阿魏酸中剂量组(38.8 mg/kg)、PM_(2.5)+阿魏酸高剂量组(77.6mg/kg),以卵清蛋白(OVA)皮下注射建模,气管滴注PM_(2.5),阿魏酸或地塞米松灌胃,OVA雾化,实验连续34 d,以比色法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)的含量,以ELISA法检测肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、Smad2和Smad7含量,同时观察肺组织病理损伤。结果与阴性对照组相比,模型组血清的MDA含量增加,SOD活力降低(P0.05);与模型组相比,PM_(2.5)染毒组血清的MDA含量增加,SOD活力降低(P0.05);与PM_(2.5)染毒组相比,阳性对照组和PM_(2.5)+阿魏酸低、中剂量干预组血清MDA含量降低(P0.05),SOD活力升高;PM_(2.5)+阿魏酸低、中剂量干预组血清MDA含量均低于PM_(2.5)+阿魏酸高剂量组,PM_(2.5)+阿魏酸中剂量组血清SOD活力高于PM_(2.5)+阿魏酸高剂量组(P0.05)。与阴性对照组相比,模型组肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3含量增加(P0.05),而Smad7含量显著降低(P0.05);与模型组相比,PM_(2.5)染毒组肺组织TGF-β1、Smad3含量增加(P0.05);与PM_(2.5)染毒组相比,阳性对照组和PM_(2.5)+阿魏酸低、中剂量组肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3含量降低(P0.05),Smad7含量增加(P0.05);PM_(2.5)+阿魏酸低、中剂量组肺组织Smad7含量均高于PM_(2.5)+阿魏酸高剂量组(P0.05)。结论表明一定浓度的阿魏酸能够有效拮抗PM_(2.5)对哮喘大鼠呼吸道损伤作用,可以通过减轻氧化损伤,重新调节TGF-β1/Smads信号通路发挥保护作用。     

地塞米松对哮喘大鼠气道炎症及CD4+ CD25+ 调节性T细胞的影响

目的 观察地塞米松对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Tr)的影响,探讨地塞米松治疗哮喘的机制.方法 30只Wistar大鼠随机分成正常对照组,哮喘组,地塞米松组.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用HE染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+ CD25+ Tr的比例.结果 地塞米松组BALF细胞总数及淋巴细胞(Lym)、中性粒细胞(Neu)和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组明显减少(P＜0.05,P＜0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).病理组织学显示:地塞米松组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.哮喘组PBMCs中CD4+ CD25+ Tr比例较正常对照组明显减少(P＜0.05),地塞米松组CD4+ CD25+ Tr比例较哮喘组明显增加(P＜0.05).结论 地塞米松可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4+ CD25+ Tr产生有关.     

交通污染相关PM_(2.5)亚急性染毒对大鼠免疫功能的影响

目的建立交通污染相关PM_(2.5)大鼠亚急性染毒模型,研究其对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能、体液免疫和细胞免疫功能的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组(生理盐水组)及低、中、高剂量PM_(2.5)染毒组(剂量分别为1.5、6、24 mg/kg)。采用气管内滴注PM_(2.5)混悬液的方式对大鼠进行染毒,隔天染毒1次,共染毒6次。采用中性红比色法测定肺泡巨噬细胞吞噬功能,MTT法检测T淋巴细胞增殖功能,ELISA法测定血清中IgG、IgM、IgA水平。结果大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能随着染毒剂量的增加而下降,24 mg/kg PM_(2.5)染毒组大鼠的肺泡巨噬细胞吸光度(OD值)低于1.5 mg/kg PM_(2.5)组,差异有统计学意义(P0.05)。大鼠脾脏T淋巴细胞增殖功能随着染毒剂量的增加而下降,各剂量PM_(2.5)染毒组大鼠刺激指数(SI)均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。大鼠血清IgG、IgM、IgA水平随着染毒剂量的增加而降低,6、24 mg/ml PM_(2.5)染毒组大鼠血清IgG水平低于对照组,1.5、6、24 mg/ml PM_(2.5)染毒组血清IgM、IgA水平低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论交通污染相关PM_(2.5)可能抑制大鼠的肺泡巨噬细胞吞噬功能、细胞免疫功能和体液免疫功能。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对哮喘大鼠气道炎症的影响

目的观察CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法将卵白蛋白（OVA）免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞过继转移给哮喘大鼠,然后观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数及分类,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5和IFN-1及血清OVA特异性IgE含量,HE染色观察肺组织的病理改变。结果与哮喘组比较,过继转移CD4^＋CD25^＋Treg细胞后哮喘大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞百分率降低（P〈0．05）,嗜酸性粒细胞（Eos）百分率明显降低（P〈0．01）;BALF中IL4和IL-5含量明显降低,IFN-1含量明显升高,血清OVA特异性IgE含量明显降低（P〈0．05）;气道炎症明显减轻。结论过继转移OVA免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞可以明显抑制哮喘的慢性气道炎症。     

槐杞黄联合孟鲁司特钠干预对哮喘大鼠气道炎症以及IL-17表达的影响

目的探讨槐杞黄辅助孟鲁司特钠治疗哮喘的作用机制。方法取40只雄性Spra—gue—Dawley（SD）大鼠随机分为对照组（Control）、模型组（Model）、孟鲁司特钠组（MK）、槐杞黄组（H）、孟鲁司特钠＋槐杞黄组（MK＋H）,每组8只。除对照组外,其他各组建立哮喘模型。各药物干预组每天分别予以孟鲁司特钠、槐杞黄、孟鲁司特钠＋槐杞黄灌胃处理。取右肺上叶组织行病理学检查,分析气道炎症,免疫组化方法测定肺组织IL-17表达,计数BALF细胞总数和细胞分类,ELISA方法测定血浆及BALF上清液中IL-17的浓度。结果建模成功后（1）模型组支气管周围炎症细胞浸润程度较对照组显著增强（P〈0．05）;（2）各药物干预组支气管周围炎症细胞浸润程度较模型组明显减轻（P〈0．05）;（3）MK＋H组与MK组比较,支气管周围炎性细胞浸润程度明显减轻（P〈0．05）,IL-17蛋白表达量（11．60±1．58）明显下降（P〈0．05）,BALF细胞总数以及血浆和BALF中IL-17浓度均降低（P〈0．05）;（4）血浆与BALF中IL-17浓度及肺组织IL-17表达量呈正相关（P〈0．05）。结论槐杞黄颗粒联合孟鲁司特钠干预哮喘大鼠能进一步降低血浆及BALF中IL—17浓度,下凋肺组织IL—17蛋白的表达量,抑制气道炎症,其抗炎作用可能是通过下调IL-17来实现。     

环境细颗粒物亚慢性染毒对大鼠炎症损伤及免疫功能的影响研究

目的建立细颗粒物的亚慢性暴露动物模型,探讨PM2.5对大鼠炎症损伤及免疫功能的影响。方法应用气管滴注建立细颗粒物的亚慢性暴露动物模型;光镜下观察各脏器病理学变化;采用相应的试剂盒测定肺泡灌洗液中的总蛋白和唾液酸水平;ELISA方法检测细胞因子IL-6和TNF-α水平,采用RT-PCR方法检测肺组织中这两种细胞因子的表达水平;收集肺泡巨噬细胞,采用孔雀绿比色法检测巨噬细胞的吞噬功能;取脾脏,采用MTT方法检测淋巴细胞的增殖功能。结果在染毒后的大鼠肺内均观察到异物性肉芽肿形成;在肝脏血窦内观察到有单核吞噬细胞聚集形成肉芽肿的趋势;在肺门淋巴结和肝脏、肾脏血管内观察到明显的吞噬PM2.5的巨噬细胞和游离的PM2.5。总蛋白和唾液酸水平随着暴露时间和剂量升高而增加。在观察的前3个月,染毒组TNF-α表达水平逐渐升高,而在6个月时,TNF-α水平明显降低;IL-6表达水平随着染毒剂量的增加而升高,并呈现明显的剂量-效应关系,染毒3个月后最高,而在6个月后表达水平回落。肺泡巨噬细胞的吞噬功能随着剂量的增加而下降。淋巴细胞增殖功能没有出现显著性变化。结论细颗粒物的亚慢性暴露可以引起机体的持续炎症损伤;细颗粒物对免疫系统的损伤随着剂量和暴露时间的增加而增加,细颗粒物引起的细胞因子网络紊乱会加重免疫系统的损伤;细颗粒物引起巨噬细胞吞噬功能下降,是肺部慢性疾病的致病机制之一。     

大剂量N-乙酰半胱氨酸对染尘大鼠肺组织的影响

目的 观察大剂量N-乙酰半胱氨酸(NAC)对矽肺形成过程中炎症和纤维化反应的影响.方法 将Wisar大鼠随机分为模型组、干预组、对照组,每组32只.模型组和干预组以二氧化硅结晶体诱发染尘大鼠模型,干预组以大剂量NAC进行干预.分别在染尘后的第3、7、14、28天处死8只大鼠.对大鼠肺组织进行HE染色及Masson染色,观察肺组织病理变化.用酶联免疫法(EusA)测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的含量.结果 NAC干预组病理观察显示,肺泡炎症和纤维化程度均较模型组明显减轻.与模型组(13.84±1.61、9.23±0.87、11.23±1.25、9.56±0.76)比较,第3、7、14、28天十预组肺脏系数(9.30±0.78、6.29±0.74、7.63±0.88、6.06±1.16)均明显降低.差异有统计学意义(P＜0.01.与对照组相比,各时间点模型组肺泡灌洗液中TNF-α和IL-8含量均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比,各时间点干预组的TNF-α和IL-8含量均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 早期大剂量NAC干预能够明显减轻染尘大鼠的肺组织炎症,降低肺泡灌洗液中TNF-α和IL-8含量,抑制和延缓肺纤维化的发生.

Abstract：

Objective To explore the effects of high-dose N-acetylcysteine on the lung tissues of rats exposed to silica. Methods Ninety-six Wistar rats were randomly divided into model group, intervention group and control group (32 rats for each group). The rats of model group and intervention group were exposed to silica by intratracheal infusion of silica dust suspension. The rats in the intervention group were orally given high dose N-acetylcysteine. In 3,7,14,28 days after exposure, eight rats in each group were sacrificed, respectively and the lung samples were collected. The pathological changes of lung were evaluated by HE and Masson staining methods. The levels of TNF-α and IL-8 in the BALF were detected by ELISA. Results Compared with the control group, the alveolitis and pulmonary fibrosis in the intervention group were significantly reduced. In 3,7,14,28 days after exposure, the lung/body coefficients in the intervention group were 9.30±0.78, 6.29±0.74,7.63±0.88,6.06+1.16 respectively, which were significantly lower than those (13.84±1.61,9.23±0.87, 11.23±1.25,9.56±0.76, P＜0.01 )in the model group (P＜0.01). At the different time points, the levels of TNF-α and IL-8 in the BALF in the intervention group were significantly higher than those in the control group (P＜0.01), but were significantly lower than those in the model group (P＜0.01). Conclusion The intervention with high dose N-acetylcysteine can significantly reduce the alveolitis and the TNF-α and IL-8 levels in the BALF, therefore, inhibit and delay the development of pulmonary fibrosis of rats exposed to silicon dioxide.     

地塞米松预处理对大鼠光气吸入性肺损伤基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的 探讨地塞米松对大鼠光气吸入性急性肺损伤(ALI)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法 将SD大鼠随机分为3组:正常对照组(吸入与光气染毒组同等流量的空气)、光气染毒组(吸入8.33 mg/L的光气)、地塞米松预处理组(尾静脉注入2.5 mg/kg地塞米松1 h后,吸入8.33 mg/L的光气).染毒2 h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)测定中性粒细胞细胞数、蛋白含量和肺湿/干重比(W/D).用放射免疫法测定各组血清和BALF中MMP-9水平.进行肺组织的病理学检查,用免疫组化法和实时定量聚合酶链反应(PCR)测定MMP-9表达的变化.结果 与染毒组比较,预处理组大鼠肺W/D、BALF中中性粒细胞数和蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).与染毒组[血清:(9.439±0.100)μg/L、BALF:(20.640±0.446)μg/L]比较,预处理组MMP-9含量[血清(4.799±0.043)μg/L、BALF:(15.052±0.029)μg/L]明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).与染毒组(2.789±0.282)比较,预处理组MMP-9mRNA的表达量(1.183±0.260)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒组肺泡壁明显充血、增厚,肺泡壁和肺间质内可见较多白细胞浸润以及肺泡结构破坏;预处理组肺泡结构较为清晰,肺泡壁稍增厚,伴少量炎性细胞浸润.正常对照组大鼠肺、支气管组织中MMP-9蛋白表达呈弱阳性,染毒组MMP-9蛋白表达呈强阳性,预处理组肺、支气管组织中MMP-9蛋白表达明显减弱.结论 地塞米松能有效地保护大鼠光气吸入性ALT,可能通过抑制MMP-9表达而达到肺保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of dexamethasone on expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in rats with acute lung injury induced by phosgene. Methods The rats were randomly divided into 3 groups: normal control group that consists of the rats with air exposure, phosgene group that consists of the rats with phosgene exposure and dexamethasone group that consists of the rats with phosgene exposure after 2.5 mg/kg dexamethasone being injected. Wet and dry ratio of the lung (W/D) was calculated, and leukocyte count and total protein content of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were recorded at 2 h after exposure. The concentrations of MMP-9 in the serum and BALF were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The pathologic changes of lung tissues were observed under light microscopy. The immunohistochemistry and the RT-PCR were used to detect the contents of MMP-9 in the lung tissue. Results Compared with phosgene group, the lung W/D, protein content and WBC count in of BALF dexamethasone group was significantly decreased (P＜0.01). MMP-9 levels of the serum and BALF in dexamethasone group were (4.799±0.043) μg/L and (15.052±0.029) μg/L, respectively, which were significantly lower than those [(9.439±0.100) and (20.640±0.446) μg/L] in phosgene group (P＜0.01). Compared with phosgene group (2.789±0.282), the expression level(1.183±0.260) of lung M MP-9 mRNA in dexamethasone group was significantly lower than that in phosgene group (P＜0.01).Histological experimental results showed the marked hyperemia and thickening of alveolar wallsand stroma cells infiltrating and more visible alveolar structure damage of alveolar walls in phosgene group while the alveolar structure and the alveolar walls were clear and slightly thickened with inflammatory cells in dexamethasone group. Immunohistochemical results showed that MMP-9 protein expression levels of lung and brochus tissues in normal control group and dexamethasone group were weakly positive, which in phosgene group were strongly positive. Conclusion Dexamethasone has a beneficial effects on acute lung injury induced by phosgene in rats due to the inhibiting MMP-9.     

交通相关PM2.5及其水溶成分诱导哮喘大鼠脾脏自噬及NLRP3炎症小体活化的机制研究

目的 探讨交通相关PM2.5及其水溶成分是否可诱导哮喘大鼠脾脏自噬,及NLRP3炎症小体的活化,导致脾脏损伤.方法 SD雄性大鼠25只,随机分为5组,分别为生理盐水组(NS组)、哮喘组(OVA组)、PM2.5混悬液组(PM2.5组)、PM2.5水溶成分低组(WSL组)和PM2.5水溶成分高组(WSH组);以OVA和氢氧...     

PM_(2.5)对小鼠肺急性损伤的试验研究

目的　研究PM2 5的急性毒效应 ,探讨免疫损伤和氧化损伤在PM2 5对肺损伤过程中的作用。方法　以昆明小鼠为试验对象 ,随机分成空白对照组 ,生理盐水对照组和低剂量、中剂量、高剂量PM2 5组共 5组 ,除空白对照组外 ,其他各组气管滴注染毒 2 4小时后 ,分析支气管肺灌洗液中乳酸脱氢酶 (LDH)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶 (ACP)、白蛋白 (ALB)、一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)等含量和细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF α)、白细胞介素 1(IL - 1)活性 ,以及测定肺巨噬细胞的吞噬功能 ,并观察肺组织病理学改变。结果　空白对照组和生理盐水对照组比较 ,各指标未见明显差异 ;试验组和生理盐水对照组比较 ,肺灌洗液中LDH、AKP、ACP、ALB、NO、NOS、MDA等含量和TNF α、IL 1活性有显著性增高 (P <0 0 5 ) ,SOD含量和肺巨嗜细胞的吞噬功能明显下降 (P <0 0 5 ) ,均呈现出剂量依赖性关系。结论　PM2 5的吸入引起机体的免疫反应和氧化应激反应 ,从而造成对小鼠肺实质细胞和膜性组织的毒作用。     

某部地下工程作业环境中空气颗粒物对肺脏的毒理学研究

目的研究地下工程作业环境空气中颗粒物对肺脏的毒理效应。方法将采集的PM10和PM2.5制成颗粒物悬液,采用气管滴注法对6组Wistar大鼠进行染毒,每天1次,连续染毒7d。最后一次染毒结束24h后,处死大鼠,取肺泡灌洗液进行分析,检测总蛋白(TP)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)的含量或活力。肺组织作病理切片。结果随染毒剂量的增大,各项指标均出现含量或活力增高,PM10高剂量组与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.01),PM10中剂量组与对照组相比,差异均有统计学意义的指标有TP(P0.05)、LDH(P0.01)和AKP(P0.05)。PM2.5中剂量组与对照组相比,差异有统计学意义的指标有LDH(P0.05)和AKP(P0.01)。而PM10低剂量组和PM2.5低剂量组与对照组相比,差异无统计学意义。结论地下工程作业环境中空气PM10和PM2.5能够引起肺部血管通透性改变和肺组织损伤。