L及T型钙离子通道α1亚基在风湿性房颤心房组织中的表达变化

目的研究正常窦律(NSR)、风湿性瓣膜病窦律(RSR)及风湿性瓣膜病房颤(RAF)三组患者右房组织中L型钙离子通道α1C和T型钙离子通道α1G、α1H亚基mRNA及蛋白的表达差异。方法术中获取各组患者(NSR=10,RSR=11,RAF=16)少量右房标本,实时荧光定量RT-PCR对各组α1C、α1G及α1H亚基的mRNA丰度相对定量(2-ΔΔCt法);蛋白免疫印迹法比较三种α1亚基蛋白表达水平。结果与NSR及RSR组相比,RAF组的α1C及α1H的mRNA丰度及蛋白水平显著上调(P0.05),α1G表达水平三组间差异不显著;三种α1亚基在NSR及RSR两组间表达水平无显著差异。结论房颤时,α1C及α1H亚基表达水平上调,而α1G亚基表达水平不变;风湿性因素对L及T型钙离子通道的表达并无直接影响,但不能排除其对钙离子通道功能发生影响的可能。     

心房颤动患者瞬间外向钾电流重构的分子基础

目的 研究心房颤动（AF）患者瞬间外向钾电流（Itol)重构的分子基础。方法 应用RT－PCR、免疫组化和免疫电镜方法检测持续窦性心律（SR）、阵发性AF（PAF）、慢性AF小于或等于6个月（AF≤6M）和大于6个月（AF＞6M）组患者右心耳组织电压依赖kv4.3钾通道α亚基（VDkv4.3α）基因和蛋白表达，并以图像分析系统对组化抗原表达进行半定量分析。结果 PAF、AF≤6M和＞6M组kv4.3αmRNA的表达明显低于SR组。kv4.3α mRNA表达与AF分数、左心房内径及平均心房率成明显负相关，经ANOVA剔除左心房内径的影响，各组mRNA表达较SR组仍显著下降（P＜0．05）。离子通道阳性表达为棕褐色的细颗粒状，主要分布在细胞膜和胞浆内的T管系统；免疫电镜检测，VDkv4.3α特异的阳性表达为电子密度高的黑色圆形胶体金颗粒，在细胞膜呈现不连续的点状分布，在胞浆T管内呈点状散在分布。组化结果半定量分析表明，PAF、AF≤6M和AF＞6M组中kv4.3α蛋白表达较SR组均明显下降，kv4.3α蛋白的表达与临床资料进行直线回归分析，发现kv4.3α蛋白表达较SR组均明显下降，kv4.3α蛋白的表达与临床资料进行直线回归分析，发现kv4.3α的蛋白表达仅与AF分数呈明显负相关；并且5例风湿性心脏病患者左、右心耳VDkv4.3α蛋白表达差别不明显。结论 VDkv4.3α钾通道除分布在细胞膜外，广泛分布在胞浆的T管系统。慢性AF伴发VDkv4.3α基因和蛋白表达同步下调，提示心房肌细胞VDkv4.3钾通道密度下调，可能是慢性AF患者Itol下降的分子基础。     

慢性房颤患者心房肌细胞KAch通道Kir3.4基因和蛋白表达变化及机制

目的研究慢性房颤（AF）患者心房肌细胞乙酰胆碱敏感钾通道（KAch）Kir3.4基因及蛋白表达变化,探讨其在AF离子通道重构机制中的作用。方法选择22例心脏瓣膜病手术患者,根据基础心律分为AF组9例和窦性心律（SR）组13例。术中AF组取左、右心房标本,SR组取右心房标本,用半定量RT-PCR技术检测心房肌细胞KAch基因Kir3.4 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Kir3.4表达的KAch蛋白亚基GIRK4表达。结果与SR组比较,AF组心房肌细胞Kir3.4 mRNA表达明显减少,GIRK4蛋白表达明显降低（P均〈0.05）。AF组左、右心房肌细胞Kir3.4 mRNA表达及GIRK4蛋白含量无统计学差异（P〉0.05）。结论慢性AF患者心房肌细胞KAch通道的Kir3.4基因及蛋白表达均下调,此变化可能是KAch通道电流密度减小的分子基础,是机体代偿保护机制反应。     

肺静脉源性房颤模型中L型钙通道α1、α2亚基mRNA表达的研究

目的:研究肺静脉源性房颤动物模型中L型钙通道α1、α2亚基mRNA的表达,以阐明肺静脉源性房颤发生的分子机制。方法:通过建立兔肺静脉源性房颤的动物模型,按房颤持续时间的不同分组,应用半定量逆转录聚合酶链反应测定各实验组的兔肺静脉和心房组织L型钙通道α1、α2亚基mRNA表达水平。结果:随着房颤持续时间的延长（0.5～6h）,兔肺静脉和心房组织L型钙通道α1亚基mRNA表达水平逐渐下调,至房颤发生后2h时,较对照组差异有显著性（P<0.05）;而同样实验条件下,兔肺静脉和心房组织L型钙通道α2亚基mRNA表达水平未出现明显变化,与对照组比较无显著性差异（P>0.05）。结论:兔肺静脉和心房组织L型钙通道α1亚单位基因转录下调可能是肺静脉源性房颤所致肺静脉和心房电重构的中心机制之一,而在引起L型钙通道功能性下调的因素中,其辅助性亚单位α2所起的调节作用较小。     

心房颤动患者离子重构的分子基础

目的　研究心房颤动 (AF)患者离子重构的分子基础。方法　以先天性心脏病 (CHD)和风湿性心脏病 (RHD)持续窦性心律 (SR)患者为对照 ,应用半定量RT PCR法检测RHD伴阵发性AF(PAF)慢性AF 6个月 (AF 6M )和慢性AF >6个月 (AF >6M )患者心房肌L 型电压依赖钙通道α1c亚基 (LVDCCα1c)、电压依赖KV4 3钾通道α亚基 (VDKV4 3α)和电压依赖钠通道α亚基 (VDSCα)mRNA的表达。结果　SR组内CHD患者与RHD患者LVDCCα1c、VDKV4 3α和VDSCα的mRNA表达差别无明显性 ;与对照组相比 ,各组AF患者VDSCα的表达没有改变 ;LVDCCα1c在AF >6M患者中的表达显著下降 ,而在PAF和AF 6M患者中的表达有不同程度下调 ,但无统计学意义 ;LVDCCα1cmRNA表达与心房率、左、右心房内径成明显负相关 ,并且其表达随AF分数增高逐渐下降 ;单因素协方差分析 (ANOVA)矫正心房内径的影响 ,AF >6M患者α1cmRNA表达仍明显下降 (P <0 0 1)。KV4 3αmRNA在PAF、AF 6M和AF >6M患者中的表达均显著降低。KV4 3钾通道α亚单位mRNA表达与AF分数、左心房内径和平均心房率均成明显负相关 ,经ANOVA剔除左心房内径的影响 ,各组mRNA表达较SR组仍显著下降 (P <0 0 5 )。结论　L 型钙通道和KV4 3钾通道转录水平下调是相应ICaL和Ito1重构的分子基础 ,基因表     

脯氨酰4-羟化酶α在肥厚型梗阻性心肌病合并房颤中的表达及意义

目的观察脯氨酰4-羟化酶α(P4Hα)在肥厚型梗阻性心肌病(HOCM)合并房颤(AF)的心房组织中的表达,探讨HOCM中AF发生的病理学机制。方法 HOCM合并AF患者术中切除左心房标本15例为房颤组,倾向性匹配单纯HOCM患者左心房标本15例为对照组,H-E染色及Masson染色检测两组心房组织的胶原表达。免疫组化及Western blot方法检测心房组织中P4Hα的表达情况及蛋白表水平。实时PCR检测两组标本中P4Hα的mRNA表达水平。结果房颤组心房细胞肥大,间质胶原纤维明显增生,且排列紊乱,分布不匀;胶原半定量分析结果显示房颤组胶原面积百分比高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。免疫组化结果显示房颤组P4Hα在心房壁各层均有表达,以内膜和成纤维细胞中阳性表达更显著。房颤组P4Hα的蛋白表达和RNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。P4Hα平均光密度与Masson染色胶原表达量呈正相关(r=0.84,P0.01)。结论 HOCM合并AF的患者心房组织中胶原表达量增加,纤维化明显,P4Hα的蛋白含量和mRNA水平增加,提示P4Hα在HCM合并房颤的发生过程中具有重要的作用,可能通过促进胶原的合成参与AF的发病。     

缺氧对过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的 研究不同程度缺氧条件下，肺癌A549细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达状况，及反义封闭HIF-1α后，对PPARα受体的影响，以了解PPARα和HIF-1α的相关性。方法 首先将A549细胞分为4组：正常对照组（A组）、缺氧24小时组（B组）、缺氧48小时组（C组）、缺氧72小时组（D组）。观察不同缺氧时间对PPARα及 HIF-1α蛋白和mRNA表达水平的影响。为观察HIF-1α对PPARα表达状况的影响，再设计4组：对照组2（E组），HIF-1α反义寡核苷酸组（F组），HIF-1α正义寡核苷酸组（G组），HIF-1α错义寡核苷酸组（H组）。结果 正常对照组，PPARα和HIF-1α蛋白及mRNA均有少量表达；随着缺氧时间的延长，两的表达水平逐渐升高。在缺氧24小时，两mRNA和蛋白开始较高，48小时明显增高，至72小时达到高峰。反义封闭HIF-1α后，PPARα蛋白及mRNA的表达水平明显下降。结论 PPARα及HIF—1α的表达水平随肿瘤缺氧信号的加强而增加，且PPARα受HIF-1α的调控。     

培菲康对实验性溃疡性结肠炎大鼠TNF-α、IL-10水平的影响

目的阐明培菲康对三硝基苯磺酸钠(TNBS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(UC)TNF-α、IL-10水平的影响,寻求UC治疗的有效新途径。方法成年雌性SD大鼠50只,随机分成5组(n=10):正常对照组(G1)、模型对照组(G2)、培菲康治疗组(G3)、奥沙拉嗪治疗组(G4)、培菲康和奥沙拉嗪联合治疗组(G5),经不同处理和治疗后,通过免疫组化染色观测各组大鼠结肠组织中TNF-α(两步法)、IL-10(S-P法)表达情况,通过实时荧光定量PCR分析结肠组织中TNF-α、IL-10mRNA的表达水平。结果G1组各指标显著低于G2组(P0.001),肠组织结构正常;与G2组相比,G3、G4、G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平显著降低(P0.001);与G3或G4组相比,G5组TNF-α、IL-10细胞阳性率和TNF-α、IL-10mRNA的表达水平也显著降低(P0.001);G3或G4组之间,TNF-α、IL-10细胞阳性率及TNF-αmRNA水平无差别(P0.05),而G4组IL-10mRNA水平明显低于G3组(P0.001)。结论TNF-α、IL-10在溃疡性结肠炎(UC)的发生、发展过程中起重要作用,培菲康能明显降低该过程中肠组织TNF-α、IL-10的表达水平,可能通过调控这两个细胞因子的表达而发挥疗效。     

异丁司特对脂多糖诱导小鼠急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制

目的：探讨异丁司特（AV411）对脂多糖（LPS）诱导的急性呼吸窘迫综合征（ARDS）小鼠的保护作用及作用机制。方法：将24只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组及治疗组,每组8只。模型组和治疗组小鼠尾静脉注射LPS诱导建立ARDS小鼠模型,造模成功后治疗组小鼠给予15mg/kgAV411灌胃,正常组及模型组小鼠用等量生理盐水灌胃,3组均3次/d,治疗15d后处死。经苏木素伊红(HE)染色观察3组小鼠肺组织病理变化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测3组小鼠肺泡灌洗液中白介素1β（IL1β）、肿瘤坏死因子α（TNFα）、白介素10（IL10）等炎症因子水平;采用实时定量聚合酶链反应(qRTPCR)及免疫蛋白印迹（WB）检测AV411对组织Toll样受体4（TLR4）表达影响及3组小鼠肺组织中IL1β、TNFα、IL10、核因子κB的抑制蛋白α（IκBα） 的mRNA及蛋白表达水平。结果：治疗组小鼠肺泡、肺泡隔结缔组织炎性细胞浸润较模型组显著减少;与模型组比较,治疗组小鼠肺组织中TLR4蛋白及TLR4 mRNA表达水平显著降低,肺泡灌洗液中IL1β、TNFα水平显著降低,IL10、IκBα水平升高;肺组织IL1β、TNFα的mRNA及蛋白表达量显著降低（均P<0.05）。结论：AV411可能通过诱导ARDS小鼠肺组织TLR4表达降低,抑制IκBα蛋白降解及相关炎症因子表达,发挥对ARDS小鼠的治疗作用。     

持续性心房颤动患者心房阿片肽受体亚型的表达和超微结构变化

目的 观察持续性心房颤动(AF)对心房k1阿片肽受体mRNA、蛋白表达和超微结构的影响.方法 24例窦性心律(SR)组和24例AF组患者,取心房组织,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法,观察其心房κ1阿片肽受体mRNA和蛋白表达的变化.分别采用4例SR组和4例AF组患者的心房组织,用电镜方法分析其线粒体结构和形态变化.结果 AF组患者心房κ1阿片肽受体mRNA表达量为262±20,低于SR组196±11,差异有统计学意义(P＜0.05)； AF组k1阿片肽受体棕色颗粒为(1261±90)个,少于SR组(2325±131)个,差异有统计学意义(P＜0.05)；平均线粒体形态减小,分别为(1.0±0.2)μm与(0.8±0.2)μm,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AF组k1阿片肽受体mRNA和蛋白表达下调相关,表明AF时心房组织自我保护能力减弱,并伴有线粒体超微结构重构.     

心房颤动患者心房组织囊性纤维化跨膜转运调节体氯通道基因表达

目的探讨心房颤动(简称房颤)患者心房组织囊性纤维化跨膜转运调节体(CFTR)氯通道基因的表达。方法应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)比较窦性心律(SR)组(n=31)、阵发性房颤(PAF)组(n=7)和慢性房颤(CAF)组(n=33)患者心房组织CFTR氯通道基因的表达。结果与SR组相比,PAF组CFTR的mRNA表达有增加但未达到统计学意义(P>0.05),CAF组的表达明显增加,CAF组较PAF组亦明显增加(1.20±0.12 vs1.08±0.18,P<0.05)。CFTR的mRNA表达与左房内径呈正相关(r=0.312,P=0.008)。结论慢性房颤患者心房组织CFTR氯通道基因表达上调,可能在房颤心房电重构中起作用。     

A myocardial Nox2 containing NAD(P)H oxidase contributes to oxidative stress in human atrial fibrillation

Human atrial fibrillation (AF) has been associated with increased atrial oxidative stress. In animal models, inhibition of reactive oxygen species prevents atrial remodeling induced by rapid pacing, suggesting that oxidative stress may play an important role in the pathophysiology of AF. NAD(P)H oxidase is a major source of superoxide in the cardiovascular system; however, whether this enzyme contributes to atrial oxidative stress in AF remains to be elucidated. We investigated the sources of superoxide production (using inhibitors and substrates of a range of oxidases, RT-PCR, immunofluorescence, and immunoblotting) in tissue homogenates and isolated atrial myocytes from the right atrial appendage (RAA) of patients undergoing cardiac surgery (n=54 in sinus rhythm [SR] and 15 in AF). A membrane-bound gp91phox containing NAD(P)H oxidase in atrial myocytes was the main source of atrial superoxide production in SR and in AF. NADPH-stimulated superoxide release from RAA homogenates was significantly increased in patients with AF in the absence of changes in mRNA expression of the p22phox and gp91phox subunits of the NAD(P)H oxidase. In contrast with findings in SR patients, NO synthases (NOSs) contributed significantly to atrial superoxide production in fibrillating atria, suggesting that increased oxidative stress in AF may lead to NOS "uncoupling." These findings indicate that a myocardial NAD(P)H oxidase and, to a lesser extent, dysfunctional NOS contribute significantly to superoxide production in the fibrillating human atrial myocardium and may play an important role in the atrial oxidative injury and electrophysiological remodeling observed in patients with AF.     

风湿性心脏病心房颤动患者血管紧张素Ⅱ受体表达

目的 探讨风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者心房重构的相关分子机制的表达情况.方法 取39例风湿性二尖瓣疾病换瓣手术患者的心房组织标本.其中房颤患者25例、窦性心律患者14例.应用RT.PCR技术测定左、右心房组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)和2型受体(AT2)mRNA的表达水平,应用免疫组化技术检测AT1和AT2的蛋白表达水平.结果 与窦性心律组相比,房颤患者组左心房内径明显增大.房颤组左心房的AT1 mRNA及蛋白表达水平均显著高于窦性心律组(P<0.05),而AT2 mRNA及蛋白表达水平却无显著差别.右心房AT1和AT2的mRNA及蛋白表达水平在两组患者间无显著差别.即房颤患者左心房AT1表达明显上调,而AT2表达并未受明显影响.结论 肾素.血管紧张素系统参与了房颤过程.由AT1激活介导的一系列效应可能是心房重构的相关分子机制之一.     

Calreticulin overexpression correlates with integrin-α5 and transforming growth factor-β1 expression in the atria of patients with rheumatic valvular disease and atrial fibrillation

Objectives

The aim of this study was to determine whether altered calreticulin expression and distribution contribute to the pathogenesis of atrial fibrillation (AF) associated with valvular heart disease (VHD).

Background

AF affects electrophysiological and structural changes that exacerbate AF. Atrial remodeling reportedly underlies AF generation, but the precise mechanism of atrial remodeling in AF remains unclear.

Methods

Right and left atrial specimens were obtained from 68 patients undergoing valve replacement surgery. The patients were divided into sinus rhythm (SR; n = 25), paroxysmal AF (PaAF; n = 11), and persistent AF (PeAF; AF lasting > 6 months; n = 32) groups. Calreticulin, integrin-α5, and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) mRNA and protein expression were measured. We also performed immunoprecipitation for calreticulin with either calcineurin B or integrin-α5.

Results

Calreticulin, integrin-α5, and TGF-β1 mRNA and protein expression were increased in the AF groups, especially in the left atrium in patients with mitral valve disease. Calreticulin interacted with both calcineurin B and integrin-α5. Integrin-α5 expression correlated with TGF-β1 expression, while calreticulin expression correlated with integrin-α5 and TGF-β1 expression. Despite similar cardiac function classifications, calreticulin expression was greater in the PeAF group than in the SR group.

Conclusions

Calreticulin, integrin-α5, and TGF-β1 expression was increased in atrial tissue in patients with AF and was related to AF type, suggesting that calreticulin is involved in the pathogenesis of AF in VHD patients.     

氯通道ClC-1、ClC-2在人心房肌的表达及与心房颤动的关系

目的研究氯通道ClC-1和ClC-2基因在人心房组织的表达及与心房颤动(AF)的关系。方法将71例风湿性心瓣膜病接受换瓣手术患者分为三组,窦性心律(SR)组31例,阵发性房颤(PAF)组7例,慢性房颤(CAF)组33例,于术中获取右心耳组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心房组织ClC-1和ClC-2的mR-NA相对含量。结果①ClC-1、ClC-2基因在人心房组织有表达。②与SR组比较,PAF组ClC-1的mRNA表达增加但无统计学意义(1.05±0.22vs1.01±0.13,P>0.05),CAF组的表达明显增加(1.25±0.18vs1.01±0.13,P<0.001),CAF组较PAF组亦明显增加(P<0.01)。ClC-1的mRNA表达水平与左房内径、AF持续时间呈正相关[(r=0.344,P=0.003)(r=0.405,P<0.001)]。③与SR组比较,PAF组ClC-2的mRNA表达无增加(1.03±0.14vs1.04±0.15,P>0.05),CAF组的表达明显增加(1.26±0.13vs1.04±0.15,P<0.001),CAF组较PAF组亦明显增加(P<0.01)。ClC-2的mRNA表达与左房内径、AF持续时间呈正相关[(r=0.441,P<0.001)(r=0.331,P=0.005)]。结论AF患者ClC-1、ClC-2的mRNA表达水平的增加可能是心房肌电重构的分子基础。     

The L-type Ca2+-channel subunits alpha1C and beta2 are not downregulated in atrial myocardium of patients with chronic atrial fibrillation

OBJECTIVE: Electrical remodeling as well as atrial contractile dysfunction after the conversion of atrial fibrillation (AF) to sinus rhythm (SR) are mainly caused by a reduction of the inward L-type Ca(2+) current (I(CaL)). We investigated whether the expression of L-type Ca2+-channel subunits was reduced in atrial myocardium of AF patients. METHODS: Right atrial appendages were obtained from patients undergoing coronary artery bypass graft surgery (CAD, n = 35) or mitral valve surgery (MVD, n = 37). Seventeen of the CAD patients and 18 of the MVD patients were in chronic (>3 months) AF, whereas the others were in SR. The protein expression of the L-type Ca2+-channel subunits alpha1C and beta2 was quantified by western blot analysis. Furthermore, we measured the density of dihydropyridine (DHP)-binding sites of the L-type Ca2+ channel using 3H-PN220-100 as radioligand. RESULTS: Surprisingly, the alpha1C and the beta2-subunit expression was not altered in atrial myocardium of AF patients. Also, the DHP-binding site density was unchanged. CONCLUSION: The protein expression of the L-type Ca2+-channel subunits alpha1C or beta2 is not reduced in atrial myocardium of AF patients. Therefore, the reduced I(CaL) might be due to downregulation of other accessory subunits (alpha2delta), expression of aberrant subunits, changes in channel trafficking or alterations in channel function.