O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子甲基化对脑胶质瘤患者化学治疗敏感性及生存的影响

目的 探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化对脑胶质瘤患者化学治疗敏感性及生存的影响。方法 选择2014年1月至2017年8月延安大学咸阳医院收治的90例脑胶质瘤患者为研究对象,所有患者进行手术切除胶质瘤,术后给予同步放射治疗、化学治疗联合替莫唑胺辅助化学治疗。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测患者胶质瘤组织和瘤旁组织中MGMT基因启动子甲基化水平,比较肿瘤组织与瘤旁组织中的MGMT基因启动子甲基化阳性率。所有患者术后随访36个月,比较复发与未复发患者的MGMT基因启动子甲基化阳性率,比较MGMT基因启动子甲基化阳性与阴性患者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,单因素和多因素Cox回归模型分析脑胶质瘤患者生存的影响因素。结果 90例脑胶质瘤患者中,胶质瘤组织和瘤旁组织中MGMT基因启动子甲基化阳性率分别为43.33%(39/90)、4.44%(4/90),胶质瘤组织中MGMT基因启动子甲基化阳性率显著高于瘤旁组织(χ²=37.430,P<0.05)。75例复发患者胶质瘤组...     

脑胶质瘤MGMT启动区甲基化的研究进展

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT）在脑胶质瘤对烷化剂的耐药中起着重要的作用,在肿瘤组织中的表达与肿瘤耐药密切相关。     

胶质瘤中MGMT和P53蛋白表达与临床病理的关系

目的初步探讨脑胶质瘤中MGMT、P53蛋白表达与胶质瘤临床病理的关系。方法免疫组织化学（Envision两步法）检测49例脑胶质瘤中MGMT蛋白表达及硝3蛋白表达。结果49例脑胶质瘤MGMT蛋白表达阳性率为55．10％（27／49）。脑胶质瘤病理分级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级MGMT蛋白表达阳性率分别为59．09％、50．0％、45．45％,各组间差异无统计学意义（P=0．754）,MGMT蛋白表达在男性为59．26％,女性为50．0％,两者之间差异无统计学意义（P=0．517）;MGMT蛋白表达在〉50岁患者中为53．84％,≤50岁患者中为61．11％,两者之间差异无统计学意义（P=0．915）。27例MGMT蛋白表达阳性的组织中7例P53蛋白表达阳性;22例MGMT蛋白表达阴性的组织中12例P53蛋白表达阳性,胶质瘤组织MGMT与P53的表达呈负相关（r=-0．292,P〈0．05）。结论MGMT蛋白表达可能与脑胶质瘤发生和预测放化疗敏感性有关,而与胶质瘤病理分级和临床特征无显著关系。     

多药耐药基因MGMT在脑胶质瘤干细胞中表达的实验研究

目的:探讨甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(Methylguanine-dna methyltransferase,MGMT)在脑胶质瘤细胞和胶质瘤干细胞(Brain glioma stem cells,BGSC)中的表达情况.方法:由手术切除的多形性胶质母细胞瘤中分离培养胶质瘤细胞和BGSC;应用免疫细胞化学染色和流式细胞...     

宫颈癌及宫颈上皮内瘤变MGMT基因甲基化及其相关性研究

目的：探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）患者宫颈脱落细胞中O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态在宫颈癌临床早期诊断和筛查中的作用。方法选取对照组20例,CINI、CINII、CINIII期患者各50例和宫颈癌患者50例,采用甲基化特异性PCR检测宫颈脱落细胞中MGMT基因启动子区甲基化状态并进行比较。结果宫颈癌和CINI、II、III期患者MGMT基因启动子区甲基化阳性率分别为82.0%（41/50）、24.0%（12/50）、50.0%（25/50）和80.0%（40/50）,而对照组未检测到MGMT基因启动子区甲基化。与对照组比,宫颈癌组和CINI、II、III期组MGMT基因启动子区甲基化阳性率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。宫颈癌组中MGMT基因启动子甲基化与其临床分期及组织分化程度有显著相关性（均P＜0.05）。结论 MGMT基因启动子区甲基化可能参与宫颈癌的发生、发展,有助于宫颈癌的早期辅助诊断和筛查。     

O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达与脑胶质瘤化疗的关系

胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤之一，目前临床多采取以手术治疗为主并辅以化学治疗和放射治疗。氯乙基亚硝脲类烷化剂（CNUs），以其高脂溶性，易于透过血脑屏障的特性，长期以来被视为治疗脑胶质瘤有效的化疗药物。但耐药性的产生使其临床有效率不足30％，而成为脑胶质瘤化疗失败的主要原因。     

脑胶质瘤MGMT启动区甲基化PCR检测方法的对比分析

<正>异常的甲基化和各种基因的失活在恶性肿瘤中很常见。甲基化的检测方法有很多种,近些年临床上常用的检测方法是甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法。     

MGMT蛋白在甲状腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT）在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：用免疫组织化学SP法检测61例甲状腺癌、21例甲状腺良性腺瘤、15例桥本氏甲状腺炎、8例结节性甲状腺肿和12例癌旁正常组织中MGMT蛋白的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果：MGMT在甲状腺癌组织中的表达与正常组织中的表达差异有统计学意义（P＜0.05）。MGMT表达从正常组织（16.67%,10/12）、结节性甲状腺肿（25.00%,2/8）、桥本氏甲状腺炎（60.00%,9/15）、甲状腺腺瘤（52.38%,11/21）到甲状腺癌（60.66%,38/61）中表达水平基本呈上升趋势。在甲状腺乳头状癌与甲状腺滤泡癌的表达差异有统计学意义（P＜0.05）,表达水平随甲状腺癌恶性程度的增加而降低,分别为乳头状癌（72.22%,26/36）、滤泡癌（50.00%,8/16）。MGMT在性别、年龄及民族组中表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：MGMT高表达现象可能与甲状腺癌恶性程度有关,可成为候选的临床分子诊断指标。甲状腺癌组织的MGMT蛋白在性别、年龄和民族组表达均无差异,有望成为通用的临床检测指标。     

RNA干扰抑制MGMT表达对人脑胶质瘤化疗的影响

目的应用小干扰RNA（siRNA）质粒载体抑制人脑胶质瘤T98细胞系中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基本的表达,了解其对胶质瘤细胞化疗敏感性的影响。方法通过LipofectimineTM2000将针对MG-MT的siRNA质粒载体转入T98细胞中。采用实时定量PCR法测定MGMT mRNA的表达,Western blot测定MGMT蛋白的表达。MTT法测定转染前后T98细胞系对卡氮芥（BCNU）的敏感性变化。结果成功构建针对MGMT基因的siRNA质粒载体;质粒载体转染T98细胞后,对其MGMT mRNA的抑制率达87%,MGMT蛋白表达量明显减少,转染后的T98细胞对BCNU的敏感性增加,提高了约6倍。结论针对MGMT基因的siRNA质粒载体可以靶向抑制MGMT基因在T98细胞系中的表达,增加T98细胞对BCNU的敏感性。     

脑胶质瘤组织时钟基因启动子区甲基化状态及意义

目的探讨脑胶质瘤组织中PER1、PER2、CRY1、CRY2、CLOCK、BMAL1和NPAS2时钟基因启动子区甲基化状态与脑胶质瘤发生、发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测脑胶质瘤组织及其癌旁正常组织（对照）PER1、CRY1、CRY2、CLOCK、BMAL1、NPAS2等时钟基因启动子区甲基化状态。结果脑胶质瘤组织与癌旁正常组织中PER1、CLOCK时钟基因启动子区均未有甲基化;脑胶质瘤组织中NPAS2、PER2时钟基因启动子区甲基化频率明显高于癌旁正常组织（均P＜0.05）;两种组织中CRY1、CRY2和BMAL1时钟基因启动子区甲基化频率比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。不同级别脑胶质瘤组织中PER1、CLOCK时钟基因启动子区均未有甲基化;高级别脑胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）组织中NPAS2时钟基因启动子区甲基化频率高于低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）组织（P＜0.05）;不同级别脑胶质瘤组织中CRY1、CRY2、BMAL1和PER2时钟基因启动子区甲基化频率比较,差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论NPAS2、PER2时钟基因启动子区甲基化频率明显增高;NPAS2时钟基因启动子区甲基化频率越高,脑胶质瘤的恶性程度越高。NPAS2、PER2时钟基因启动子区DNA甲基化修饰可能是脑胶质瘤发生、发展的重要机制。     

MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系的建立

目的：建立由O^6-甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）介导的人脑胶质瘤耐药细胞株U251／BCNU。方法：模拟卡氮芥（BCNU）的临床用药程序,采取恒定药物浓度、周期性使用的方式诱导U251的抗药性。检测U251／BCNU的耐药指数及MGMT mRNA的表达;比较U251及U251／BCNU细胞的体外增殖变化。结果：经过反复总共5次的用药过程,历时4个月,成功地建立了对BCNU具有稳定抗药性的U251／BCNU,其对BCNU的耐受程度约为U251的17倍。RT－PCR显示,U251／BCNU细胞有MGMTmRNA的表达。U251及U251／BCNU细胞的体外群体倍增时间差异无显著性。结论：在体外成功地建立了一株由MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系,为进一步探讨胶质瘤的耐药机制及逆转方式奠定了基础。     

散发性大肠癌O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子过甲基化状况及K-ras表达与临床病理特征相关性分析

目的 探讨散发性大肠癌中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的过甲基化状况、K-ras的表达及其相关性.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)及免疫组织化学的方法,检测130份病理证实的散发性大肠癌患者癌组织MGMT基因过甲基化状况、K-ras的表达及它们的相关性.结果 在130例散发性大肠癌组织中MGMT基因启动子甲基化率35%,K-ras的阳性表达率47%,呈正相关(r=0.765,P<0.01).在分化程度低、淋巴结转移、肥胖、P-TNM分期皿～Ⅳ期的患者中,MGMT基因过甲基化率较高,K-ras的阳性表达率亦高.另外K-ras的阳性表达在腺癌中高于非腺癌类型.结论 在散发性大肠癌中,MGMT基因启动子甲基化可能导致K-ras基因的激活,共同参与散发性大肠癌的发生、发展.     

MGMT反义RNA真核表达载体的构建与鉴定

目的：探讨反义ＲＮＡ逆转胶质瘤细胞耐药的可能性，构建ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的真核表达载体。方法：以ＸｈｏⅠ和ＰｖｕⅡ双酶切质粒ｐＨＭ１４，回收１７８ｂｐ的片段，定向插入以ＨｐａⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切ｐＬＸＳＮ所获得的线性化载体，构建针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ５＇端的反义表达载体ｐＬａＭＴ５ＳＮ；以ＥｃｏＲⅠ单酶切ｐＨＭ１４，回收７７９ｂｐ的片段，插入以ＥｃｏＲⅠ单酶切ｐＬＸＳＮ并经ＣＩＡＰ去磷酸化的线性载体，构建针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ全长序列的反义表达载体ｐＬａＭＴＳＮ。结果：ｐＬａＭＴ５ＳＮ经ＨｉｎｄⅢ酶切可见３７０ｂｐ的片段；ｐＬａＭＴＳＮ经ＰＣＲ扩增证明目的片段反向插入ｐＬＸＳＮ，鉴定结果表明构建成功。结论：成功构建了两个ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的真核表达载体，为研究ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ逆转胶质瘤耐药细胞的耐药表型提供了良好的实验材料。     

胶质瘤中MGMT和hMLH1甲基化与表达水平的变化及意义

目的探讨胶质瘤组织中,O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA methyltransferase,MGMT)和错配修复基因mutLhomolog1(Homo sapiens,hMLH1)的甲基化及蛋白水平的变化,及其在胶质瘤发生中的作用。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测了78例胶质瘤患者组织中MGMT和hMLH1的启动子区甲基化状态;应用免疫组织化学方法检测其蛋白表达水平。结果MGMT启动子区甲基化43例(55.1%),hMLH1启动子区甲基化32例(41.0%)。MGMT与hMLH1在胶质瘤中表达的阳性细胞百分比的中位数分别为15.9%和84.6%。两种基因的启动子区甲基化状态与蛋白表达的阳性率没有明显的相关性,且均与年龄、性别、病理类型无关。结论胶质瘤细胞中同属于DNA修复系统的MGMT蛋白表达率远低于hMLH1表达率,这提示胶质瘤发生发展过程中可能存在着与DNA修复系统紊乱有关的一些独特的路径。     

MGMT 基因与头颈肿瘤的相关研究

O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（ O6-methylguanine-DNA methyltransfe-rase, MGMT）是DNA烷化剂损伤的主要修复酶,可保护基因烷化剂损伤导致的致突变、致癌作用。 MGMT的表观遗传调控是影响其表达的主要机制。表达减少与肿瘤的发生发展的密切关系与其高表达增加肿瘤烷化剂化疗的耐药性成为一个互相矛盾的问题,此基因序列的单个核苷酸位点变异亦有可能与肿瘤发病风险相关。就MGMT基因在头颈肿瘤方面的研究做了综述。     

MGMT在散发性结直肠癌中表达的基础研究

目的检测MGMT在肠癌及正常对照组织中的表达,分析其可能原因及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测95例肠癌组织与49例正常大肠组织中MGMT的蛋白表达,分析它们与临床病理参数的关系。结果肠癌组MGMT蛋白的表达率为43.2%（41/95）,与正常结肠组织12.2%（6/49）的表达率相比差异显著（p=0.000）。结论MGMT表达高低可能代表肠癌组织DNA损伤程度。     

MGMT在散发性结直肠癌中表达的基础研究

目的 检测MGMT在肠癌及正常对照组织中的表达,分析其可能原因及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测95例肠癌组织与49例正常大肠组织中MGMT的蛋白表达,分析它们与临床病理参数的关系.结果 肠癌组MGMT蛋白的表达率为43.2%(41/95),与正常结肠组织12.2%(6/49)的表达率相比差异显著(p=0.000).结论 MGMT表达高低可能代表肠癌组织DNA损伤程度.     

肺癌组织中MGMT蛋白的表达及其与吸烟的关系

目的检测肺癌组织中MGMT蛋白的表达,探讨其与患者吸烟及临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测62例肺癌组织、32例肺部良性病变和8例癌旁正常组织中MGMT蛋白的表达。结果MGMT蛋白在肺癌组织、肺部良性病变和癌旁正常肺组织中阳性表达率和表达评分分别为45·2%(28/62)、87·5%(28/32)、75%(6/8)和1·85±1·906、3·31±1·554、2·75±2·550,两项指标在3组间差异均有显著性(P值分别为0·000、0.002)。MGMT蛋白表达与患者病理类型、临床分期、年龄、性别、淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。正常肺组织、肺部良性病变和肺癌患者中吸烟组与非吸烟组的MGMT蛋白表达评分之间差异均有显著性(P<0·05),正常肺组织和肺癌中吸烟组与非吸烟组的MGMT蛋白阳性表达率差异均有显著性(P<0·05),而肺良性病变中差异无显著性(P>0·05)。结论肺组织中MGMT蛋白的表达与吸烟相关,但与患者病理类型、临床分期、年龄、性别和淋巴结转移无相关性。