实验小鼠病毒抗体诊断试剂盒的研究及应用

对已研制的5种小鼠病毒(流行性出血热EHF;淋巴细胞脉络丛脑膜炎LCM;鼠痘Ect.;鼠肝炎MHV;仙台Sendai;)抗体ELISA试剂盒,从敏感性、特异性、稳定性、重复性等方面进行了全面评价。同时应用ELISA试剂盒对来自国内18省市26个单位的普通级小鼠进行了监测。冻干试剂便于保存,其实验的稳定性和实验结果的重复性均令人满意。在监测的26个鼠群中,MHV和Sendai的群感染率分别为15％和19％。     

实验小鼠和大鼠的病毒学监测(1984～1989)

1984～1989年连续地观察了本所饲养场的一、三级实验大、小鼠共1685只,其监测13种病毒的血清学流行情况,发现一级大、小鼠流行最广者为仙台病毒、冠状病毒(MHV和RCV/SDAV)和细小病毒(RV,H-1刊MVM);小鼠病毒的感染其次为PVM,GD_7,Polyoma,EDIM,Reo-3;LCM,Ect,MAd,KV偶有低检出率。大鼠病毒的感染,86年Reo-3检出阳性,LCM,EHF和MAd未检出阳性;三级小鼠只曾检出仙台病毒和鼠肝炎病毒阳性,其他均阴性,三级人鼠未检出有阳性例。     

鼠疫病毒抗体诊断试剂盒的研制和初步应用

鼠痘(俗称脱脚病)是一种严重危害小鼠生产的病毒性传染病,根据临床发病情况可分为急性、慢性和隐性。病毒可在鼠群中长期存在。因此研制特异而敏感的诊断试剂盒,对鼠群进行定期监测,将是预防和控制鼠痘的有效措施。本文报道用痘菌病毒(天坛株)为抗原的、用以检测鼠痘或痘苗病毒抗体的间接免疫荧光试验(IFA)和酶免疫试验(EIA)试剂盒的实验室研制结果和初步应用。     

小鼠肝炎病毒多价抗体ELISA试剂盒研制

作者用5株小鼠肝炎病毒(MHV-1、MHV-3、-JHM、-A_(59)和-沪_(79))研制了以多价抗原检测MHV抗体的ELISA试剂盒。该试剂盒与MHV-3抗体试剂盒对222份淘汰小鼠血清的MHV抗体检出率分别为60.81％(135/222)与49.55％(110/222),对44份普遍鼠群血清样本的检出率也表明该试剂盒较单价抗原敏感;试剂盒与Ect、LCM、EHF、Sendai和R_(eo)-3病毒的抗体无交叉反应,阻断试验结果也表明其特异性好;试剂盒在-20℃至少可保存4个月,在室温或2～8℃至少可保存5周;其重复性好,操作简便。     

抗小鼠白血病病毒单克隆抗体的研制及其初步应用

用密度梯度离心提纯的小鼠白血病病毒(Murine Leukemia Virus，MuLv)免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术获得6株分泌抗MuLv单克隆抗体的杂交瘤细胞。经检测，它们所分泌的抗体类型分别为IgM(F10，D6，C12，A8)和IgG1(A9，B6)。腹水效价为10^-8～10^-5。相对亲和力分别为1．25ug／ml(F10)，1．30μtg／ml(D6)，1．20μg／ml(C12)，1．0μg／ml(As)，0．07μg／ml(A9)，0．001μg／ml(B6)。F10,D6,C12，和A8能识别相同或相近的抗原表位，A9和B6识别不同的抗原位点。特异性测定结果表明：6株MeAb与11种鼠源性病毒抗原脑膜炎病毒(LCM)；流行性出血热病毒(EHF)；鼠痘病毒(Ect．)；鼠肝炎病毒(MHV)；仙台病毒(Sendai)；呼肠孤癌病毒(Reo3)；鼠肺炎病毒(PVM)；细小病毒(MVM)；鼠腺病毒(MAd)；多瘤病毒(Polyoma)；脑脊髓炎病毒(GDVII)均无反应。将MuLv MeAb标记荧光素应用于实际检测，取得较好的实验结果。     

西德的小鼠和大鼠群中病毒性疾病的发生和分布状况

1976～1978年对22群小鼠和26群大鼠进行了血清学调查。在小鼠群中均未检出抗淋巴细胞脉络丛脑炎(LCM)、小鼠肝炎疾病毒(MHV)和K-病毒感染等的抗体;仅分别在1和2个群中检出抗多瘤病毒和鼠痘(ectromelia)病毒的抗体。在常规和SPF条件下培育的小鼠群中感染的百分率为:小鼠肺炎病毒(PVM)68％,3     

实验小鼠痘病毒感染检测分析

小鼠痘病毒急性感染可导致实验小鼠脱脚病 (鼠痘 )发作 ,临床症状明显 ,发病动物短期内大量死亡。近 10年某地区鼠痘发生次数依次为昆明小鼠 (7次 )、NIH小鼠 (3次 )、ICR小鼠 (2次 )和BABL c小鼠 (1次 )。无明显临床症状慢性持续性感染 (隐性感染 ) ,是病毒传播或转化成急性感染主要原因 ,用免疫荧光技术 (IFA)可检测到病毒抗体 ,鸡胚病毒培养意义不大。流行病学调查证实IFA抗体阳性小鼠群体脱脚病发病率显著高于IFA抗体阴性小鼠群体 (P <0 0 0 1)。     

呼肠孤病毒Ⅲ型免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的 建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素最佳工作浓度。并进行特异性、敏感性和稳定性试验。结果选取BSC-1细胞作为Reo3敏感细胞,病毒感染力滴度(TCID50)为10-5.8/mL;免疫荧光素最佳工作浓度为1∶100;与小鼠鼠痘(Ect)病毒、小鼠肝炎(MHV)病毒均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1∶1280;可检测到的病毒滴度最低为10-4.1/mL。结论建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于人用动物源性生物材料及生物制品Reo3的检测。     

鼠痘病毒的分离

在实验动物疾病中,鼠痘是危害最大的一种病毒性疾病。作者于1981年5月开始,在常年发生尾部坏死、坏疽,短尾、断尾,眼结膜炎,面部、鼻端,躯体发生痘样病变、脚肿并断脚的鼠群中进行病源分离工作。采集典型自然发病鼠体毒进行人工接种感染,继代,同居感染,鸡胚细胞感染继代,细胞毒回归鼠体,测定细胞毒的毒价和保存期,细胞毒负染电镜检查,细胞毒包涵体检查,以及鸡胚绒毛尿囊膜感染等方面的实验研究,分离到鼠痘病毒。现将结果报告如下。材料与方法 (一)自然发病鼠鼠毒人工接种感染 1.鼠毒来源:采集某小鼠群中典型发病鼠三批(代号Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)共34只的背部、口部,鼻部,尾     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

鼠痘（小鼠传染性脱脚病）的流行形式和实验室诊断

本文报道了1982和1990年两次鼠痘发生的流行形式和实验室诊断，1982年为潜在感染引发急性发病，无论从发病鼠群，不发疯鼠群和从外单位购进的种鼠均查到鼠痘病毒抗体，抗休阳性率帮滴度顺序递减，1990年为急性暴发流行，从发现疑似鼠痘送检第一批标本，总8个鼠群只有2个鼠群封淋阳性，以后逐渐扩展，至距第一次送检3l天时才确证全部8个鼠群均感染上鼠痘病毒，文内探讨了两种流行形式的实验室诊断。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法

目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法 根据已发表的小鼠肝炎病毒（MHV）S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果 建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1pg/μl,可检测病毒最小滴度为10-3.ml-1。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与GenBank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论 建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

IVC换笼标准操作程序与小鼠病毒病原的传播风险

目的研究独立通风笼具换笼标准操作程序与实验动物负压屏障设施内使用IVC(individual ventilated cage,IVC)设备饲养小鼠的病毒感染风险。方法选择小鼠易感的小鼠肝炎病毒(MHV) A59株感染6周龄BALB/c雄性小鼠,按照IVC换笼标准操作程序进行换笼操作;使用IFA和ELISA血清学方法以及针对MHV的核酸检测方法测定同一笼架具相邻笼盒、同一IVC系统不同笼架具的不同位置、以及IVC系统外负压屏障设施内哨兵动物的MHV感染情况。结果接种病毒小鼠在感染6 d后出现临床症状,粪便中可检出MHV病原;动物感染3周后可检出MHV抗体阳性;其他监测组在5周实验终点均无MHV阳性检出。结论 IVC换笼标准操作程序可指导IVC换笼操作,用以控制病毒类病原对小鼠的感染风险。     

RT-PCR法对小鼠肝炎病毒垂直传播的应用研究

用4株小鼠肝炎病毒MHV1、MHV3、A59和JHM的混合液人工感染SCID妊娠小鼠和BALB／c和妊娠小鼠。接种病毒后1、2、3、4、5、8、10d分别取母鼠的血、肝、胎盘以及胎鼠的肝脏,用组织RNA抽提试剂盒提取各组织的总RNA,然后用RT-PCR方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：SCID孕鼠接种病毒后24h即可在母鼠胎盘、胎鼠肝脏中检出小鼠肝炎病毒,而BALB／c孕鼠于接种后5d才在胎盘和胎鼠肝中检出病毒。结果表明小鼠肝炎病毒可以通胎盘屏障垂直传播。     

湖南省2004～2006年实验动物病毒学质量监测结果分析

目的了解湖南省实验动物病毒学质量。方法按GB14922.2-2001和GB14926-2001进行,在相关单位生产繁殖群以单纯随机抽样原则采样检测。结果实验小鼠MHV和Sendai病毒出现抗体阳性并出现疫情;普通级兔出血症项目不合格;实验大鼠未检出相关病毒。结论实验动物病毒学质量存在较大问题,应加强监测。     

山东省实验动物质量监督检测现状及对策

目的 探讨目前山东省实验动物质量监督检测的现状及对策.方法 通过对近年来山东省实验动物质量监督检测情况,包括实验室建设,大、小鼠、SPF鸡(鸡胚)质量监督检测结果,以及检测过程中存在的困难进行统计、分析和总结,在肯定取得的成绩的同时,找出存在的不足并探讨解决办法.结果 2009～2011年检测的SPF级和清洁级大、小鼠中病原菌检出率很低,仅检出铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌和沙门氏菌各一例;病毒检出主要集中在MHV、SV、RCV、PVM、MVM、TEMV;体外寄生虫、鞭毛虫和蠕虫都有检出,而鞭毛虫检出率最高.2010～2011年SPF鸡(鸡胚)质量监督检测结果统计表明,病毒检出主要集中在REO、CAV、AEV、EDS等,尤其以REO检出率最高.结论 经过近几年的建设,山东省实验动物质量监督检测体系已逐步走向完善;但监督检测过程中仍然存在一些问题,比如抽检比例相对较低;受检测试剂的限制,检测方法比较单一等.     

三种小鼠肠道病毒核酸检测技术在小鼠健康监测中的应用

目的应用核酸检测技术检测小鼠盲肠内容物中MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒,并与血清学检测结果相比较,分析核酸检测在小鼠健康监测中的适用性。方法随机选取本实验室接收的小鼠盲肠内容物样品,提取核酸,应用荧光定量PCR技术检测MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒;并与其血清学抗体检测结果做关联分析。结果在272份样品中,MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒检出率分别为17.3%,18.8%,16.9%;MHV、Reo-3核酸检出量多呈低拷贝状态;与血清学抗体检测结果的关联分析表明3种病毒的核酸检测结果与抗体检测结果不完全相关。结论实验动物小鼠群体中存在携带MHV,Reo-3,MNV三种病毒的可能,作为血清学抗体检测技术的补充,核酸检测可作为高敏感性的方法应用于实验动物群体的健康监测。     

柯萨奇病毒B_3致病模型的建立

目的 :建立柯萨奇病毒 (CV)B3 的实验动物模型 ,以期为抗病毒药物筛选提供工具。方法 :雄性BALB/C鼠腹腔注射CVB3 后 ,观察小鼠发病症状 ,并在不同时间处死小鼠 ,取小鼠心、脾、肝、肾等组织进行病毒分离、病毒核酸检测、心肌组织病理检查。结果 :感染后第 3d小鼠即出现症状 ,第 5d在小鼠的心脏、脾脏、肾脏均可分离出感染性病毒 ,其滴度分别为 :10 4 .7,10 3.3 ,10 3.2 TCID50 / 0 .1ml,同时小鼠心、脾、肾、等组织及血清中CVB RNA检测为阳性 ,心肌组织出现典型炎性改变。结论 :雄性BALB/C鼠感染CVB3 后可引起病毒性心肌炎发生     

鼠肺炎病毒实时荧光定量聚合酶链反应方法的建立及其在新型冠状病毒感染模型用小鼠等动物检测中的应用

目的 建立鼠肺炎病毒（pneumonia virus of mice,PVM）实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR）检测方法,用于新型冠状病毒感染模型用小鼠等实验动物及其动物相关样本的检测。方法 选择PVM G基因保守序列设计合成引物和探针,建立Q-PCR方法。并进行方法的线性、特异性、敏感性、重复性、稳定性和可信度验证。应用建立的方法对包括用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠、63只裸鼹鼠和19只PVM感染小鼠的肺组织样本进行PVM检测。结果 建立的方法与仙台病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、汉坦病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒无交叉反应。方法的线性范围为1×101～1×108拷贝/μl,检测病毒质粒标准品灵敏度达101拷贝/μl;重复性、稳定性结果显示实验内和实验间平均变异系数均<5%。用建立的方法检测用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠和63只裸鼹鼠...     

实验动物大、小鼠冠状病毒的血清学调查与分析

实验动物是冠状病毒的重要自然宿主,具有较高的感染率。它可以引起小鼠的病毒性肝炎(MHV),大鼠冠状病毒病(RCV)感染,大鼠涎泪腺炎,猫传染性腹膜炎,还能引起犬和兔的感染。因此,调查目前实验动物的冠状病毒感染情况,对探究SARS病的起源和开展SARS病的防治以及模型研究是十分必要的。1　材料和方法11　大小鼠血清的采集　用摘眼球采血方法对各有关单位的实验大、小鼠进行采血,分离血清并置-20℃以下冰箱保存待检。12　MHV和RCV抗体ELISA检测试剂盒　购自中国药品生物制品鉴定所,该试剂盒由抗原包被板、稀释液、阴性血清对照、阳性血…