雌激素受体拮抗剂对垂体腺瘤GH3细胞增殖、凋亡、催乳素分泌及雌激素受体蛋白表达的影响

目的 通过检测雌激素受体拮抗剂对垂体腺瘤GH3细胞增殖、凋亡、催乳素(PRL)分泌及雌激素受体蛋白表达的影响,探讨雌激素在垂体催乳素腺瘤发生、发展中的作用机制.方法 对去激素培养条件及加入外源性E2培养条件下的GH3细胞采用不同方法进行检测:应用MTT 法检测OHTam与ICI对GH3细胞增殖的影响;ELISA法检测对GH3细胞PRL分泌的影响;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot检测对GH3细胞ERα、ERβ表达的影响.结果 E2对GH3细胞增殖有显著的生长刺激作用,低浓度E2(10-12mol/L)即显著高于去激素培养组;OHTam与ICI对GH3细胞增殖有抑制作用,当给药浓度达到10 -6mol/L时,增殖指数分别为0.62和0.47,呈剂量依赖性;OHTam与ICI可抑制E2对GH3细胞的生长刺激作用;以上结果与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).E2可促进GH3细胞的PRL的分泌,随着E2浓度的增高,PRL的分泌增加;OHTam与ICI可抑制GH3细胞PRL的分泌,并且能够抑制E2的促进作用.OHTam与ICI能够诱导GH3细胞凋亡,以早期凋亡为主.GH3细胞有ERα与ERβ的表达,E2可上调ERβ的表达水平,ICI可下调ERα的表达水平,而OHTam对ERα与ERβ的表达水平无显著影响.结论 雌激素受体拮抗剂是通过抑制细胞增殖、PRL分泌及抗雌激素而发挥抑瘤作用,而ICI的作用还与下调ERα的表达有关.     

4-羟基他莫昔芬对泌乳素腺瘤GH3细胞PTTG表达的影响

目的 探讨雌激素受体拮抗剂4-羟基他莫昔芬(OHTam)对泌乳素腺瘤GH3细胞中垂体瘤转化基因(PTTG)表达的影响. 方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和Westernblot法,测定GH3细胞中PTTG mRNA和PTTG蛋白表达.在去激素培养条件下观察不同浓度的4-羟基他莫昔芬(OHTam)和雌二醇(E2)对细胞生长速度、PTTG mRNA和PTTG蛋白表达水平的影响.结果 GH3细胞在去激素环境下细胞生长明显减慢,低浓度E2(1×10<'-8>mol/L)可促进其生长,OHTam(1×10<'-6>mol/L)可抑制E2(1×10<'-8>mol/L)的生长刺激作用;GH3细胞中存在PTTGmRNA和PTTG蛋白的表达,且OHTam(1×10<'-6>mol/L)可抑制它们的表达水平.结论泌乳素腺瘤GH3细胞的生长具有雌激素依赖性,应用雌激素受体拮抗剂OHTam能抑制GH3细胞生长和PTTG原癌基因的表达水平.     

氟维司群对泌乳素瘤GH3细胞系增殖和分泌的影响

目的探讨雌激素受体拮抗剂氟维司群对泌乳素腺瘤GH3细胞增殖和分泌泌乳素的影响。方法将GH3细胞分为对照组、不同浓度的氟维司群组（0．04、1、25、625nM）和雌二醇组。观察氟维司群和雌二醇对GH3细胞活力、泌乳素水平、凋亡以及转化生长因子-β3（Transforming growth factorβ3,TGF—β3）的影响。结果与对照组相比,雌二醇组GH3细胞活力明显增加（P〈0．01）,氟维司群25nM组和625nM组细胞活力分别下降35．3％和42．4％,差异显著（P〈0．01）。与对照组和雌二醇组相比,1nM组凋亡细胞增加,差异有统计学意义（P〈0．05）,25nM组和625nM组凋亡细胞数分别占总细胞数12．9％和17．3％．差异显著（P〈0．01）。与对照组相比,氟维司群能抑制泌乳素分泌,25nM组和625nM组分别下降62.3％和81．6％,差异佩著（P〈0．01）。蛋白印迹试验证实雌激素可抑制TGF—β3表达,随着氟维司群浓度增加,TGF-β3表达量逐渐上升。结论雌二醇可促进GH3细胞增殖和泌乳素分泌,而雌激素受体拮抗剂氟维司群能够有效抑制雌激素作用,期问有TGF—β3参与,为泌乳素瘤临床治疗提供新的药物选择。     

17β-雌二醇对垂体腺瘤GH3细胞增殖作用的实验研究

雌激素可能在泌乳素腺瘤的发生中起重要作用[1 ] 。本实验用不同浓度 17β-雌二醇 (E2 )作用于垂体腺瘤GH3细胞株 ,探讨E2与GH3细胞增殖的关系 ,建立E2对GH3细胞增殖活性检测平台 ,为筛选有效治疗泌乳素腺瘤的抗雌激素药物奠定基础。1　资料1 1　细胞培养[2 ] :GH3大鼠垂体腺瘤细胞株引自中国医学科学院基础所细胞中心 (由美国ATCC建株 )。E2 (Sigma)设 10 - 9～10 - 1 4mol/L 6个浓度 ,每个浓度设两个复孔 ,同时设溶媒对照孔(0 0 1%乙醇 )。在一组不同浓度的E2中同时加入 1μmol/L非选择性完全雌激素受体拮抗剂ICI182 780 (ICI…     

白黎芦醇对GH3细胞生长和泌乳素合成分泌的抑制作用及其与雌激素受体的关系

目的探讨白黎芦醇（RE）对垂体腺瘤GH3细胞增殖和泌乳素（PRL）合成分泌的影响，及其与雌激素受体（ERs）的关系。方法RE作用于GH3细胞．用免疫荧光法和Western印迹法测定ERs的表达情况．分别用ELISA法和Western印迹法测定培养基内和细胞内PRL水平，用MTT法测定细胞增殖，同时观察了雌二醇（E2）和特异性雌激素受体激动剂对RE的拮抗作用。结果RE改变ERs表达水平，减少PRL合成分泌，抑制GH3细胞增殖，E2和特异性雌激素受体激动剂对RE有拮抗作用。结论RE通过ERs抑制PRL合成、分泌及细胞增殖，从而发挥抗肿瘤作用，两种效应的信号转导途径不尽相同。     

雌激素与垂体泌乳素腺瘤

泌乳素 (PRL)瘤是人类最常见的功能性垂体腺瘤 ,女性明显多于男性 ,且临床上观察到孕期妇女的泌乳素腺瘤增大 ,变性人长期服用雌激素可以引起泌乳素腺瘤和高PRL血症。可见雌激素可能在人类泌乳素腺瘤的发生上起重要作用[1 ,2 ] 。大鼠的腺垂体为研究雌激素对泌乳素细胞的增殖、生存和肿瘤形成机制提供了极好的模型[3] 。1　雌激素对腺垂体的生理作用腺垂体含有 5种不同类型的分泌细胞 ,即生长激素 (GH)细胞、泌乳素 (PRL)细胞、促肾上腺皮质激素 (ACTH)细胞、促甲状腺素 (TSH)细胞和促性腺激素 (LH/FSH)细胞。泌乳素和生长激素细…     

雌激素受体拮抗剂氟维司群对MMQ细胞系的抗肿瘤作用及机制

目的探讨雌激素受体拮抗剂氟维司群对大鼠泌乳素瘤MMQ细胞系的作用及机制。方法体外培养MMQ细胞系并分为实验组和对照组。实验组分别加入浓度为0.04、1、25、625 nmol/L氟维司群,对照组加入等量DMSO。MTS法检测各组MMQ细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测泌乳素水平,RT-PCR和Western blot分别检测雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、β-catenin和WIF-1的mRNA及蛋白表达水平。采用Wnt-β-catenin通路抑制剂SB 216763和Decitabine,观察其对细胞增殖以及β-catenin和WIF-1表达的影响。结果氟维司群可抑制细胞增殖和泌乳素的分泌,促进细胞凋亡,均呈剂量依赖性(P0.05),IC50=32.4 nmol/L;并诱导细胞ERα和β-catenin的mRNA及蛋白的低表达,WIF-1的mRNA及蛋白的高表达(P0.05)。与氟维司群组比较,SB 216763+氟维司群组细胞增殖明显,β-catenin的mRNA及蛋白表达升高(P0.05)。Decitabine处理后细胞WIF-1的mRNA及蛋白表达升高,细胞增殖受到明显抑制(P0.001)。结论氟维司群能够抑制MMQ细胞系的增殖和泌乳素的分泌,促进细胞凋亡,可能与抑制ERα的表达和抑制Wnt-β-catenin通路的激活有关。     

垂体腺瘤中雌激素受体基因的表达

目的　研究人垂体腺瘤中雌激素受体基因 (estrogenreceptorgene ,ER)mRNA与蛋白水平的表达及其与垂体腺瘤生物学特性的关系。方法　用免疫组化法和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR法 ) ,检测 6 0例各种类型垂体腺瘤标本中ER蛋白的表达 ,比较不同类型垂体腺瘤ER蛋白表达的差异及ER蛋白表达与mRNA表达的差异。结果　泌乳素腺瘤、促性腺激素细胞瘤中均有ER蛋白表达 ,其表达与mRNA表达一致 ;无功能腺瘤中 2例有ER蛋白表达 ,其蛋白表达与mRNA表达不一致 ;其它类型垂体腺瘤未发现ER基因表达。结论　ER基因表达的检测可有助于评价PRL腺瘤的增殖活性及筛选抗雌激素治疗对象。ER基因的表达异常可能与PRL腺瘤及促性腺激素细胞瘤的发生、发展有关     

纳曲酮对小鼠脾淋巴细胞增值的影响

目的考察阿片受体拮抗剂纳曲酮（naltrexone）对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法应用3H-TdR掺入法检测纳曲酮对淋巴细胞和IL-2反应细胞（ConA活化的脾细胞）增殖反应的作用。结果（1）纳曲酮（10-4mol／L）和淋巴细胞、ConA或IL-2同时反应，其对淋巴细胞增殖无明显抑制作用（P＞0．05）。（2）纳曲酮（10(-4)mol／L）预处理淋巴细胞几小时后，对淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用（P＜0．01）。3）纳曲酮的浓度变化对两种细胞的抑制作用不同；对淋巴细胞的抑制作用随浓度（10(-6)～10(-4)mol／L）的增加而增强（P＜0．05，P＜0．01），低浓度（＜10(-7)mol／L）时抑制作用消失；对IL-2反应细胞，在本组实验药物的所有浓度下（10(-8)～10(-4)）均有抑制作用（P＜0．01）。结论阿片受体拮抗剂纳曲酮对小鼠脾淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用，而且这种抑制作用较为缓慢、强烈而持久。     

垂体泌乳素腺瘤中ER基因表达与肿瘤增殖活性的关系

目的 通过研究人泌乳素腺瘤中雌激素受体（ER）基因蛋白水平的表达和肿瘤中细胞核增殖抗原（PCNA）的表达阐明垂体腺瘤中ER蛋白表达与瘤增殖能力的关系。方法 用免疫组化法检测26例垂体泌乳素腺瘤中ER和PCNA的表达,对二表达的程度做相关性分析,比较ER蛋白表达与PCNA表达的关系。结果 ER蛋白表达与肿瘤PCNA表达成负相关。肿瘤的增殖能力增强,ER表达水平越低。结论 ER基因表达的检测可有助于评价PRL腺瘤的增殖活性及筛选抗雌激素治疗对象。ER基因的表达可能与PRL腺瘤的发生、发展有关。     

白黎芦醇对GH3细胞增殖和PRL合成的影响

目的 探讨白黎芦醇对垂体腺瘤GH3细胞增殖和泌乳素合成的影响，及其对雌激素的拮抗作用。方法 在无血清无酚红的培养条件下，白黎芦醇单独或与雌二醇联合作用于GH3细胞，用MTT法测定细胞增殖，用免疫荧光法、RT-PCR和Western印迹法测定泌乳素的表达情况。结果 白黎芦醇对GH3细胞增殖具有刺激和抑制双相作用，呈时间一剂量依赖性。并且白黎芦醇使GH3细胞中PRL阳性细胞比例下降。同时，白黎芦醇抑制泌乳素的合成。白黎芦醇对雌二醇诱发的细胞增殖和泌乳素合成均有拮抗作用．但对泌乳素合成的拮抗作用较强，而雌二醇刺激细胞增殖作用较其诱发泌乳素合成作用强。结论 白黎芦醇对GH3细胞增殖和泌乳素合成均有抑制作用，从两方面发挥着抗肿瘤作用。     

催乳素对神经母细胞瘤细胞系Neuro2a增殖的调节作用

目的:探讨催乳素(Prolactin,PRL)对小鼠神经母细胞瘤细胞系Neuro2a细胞增殖的影响。方法:用不同浓度PRL作用于无血清培养的各Neuro2a细胞实验组,通过细胞计数,观察PRL对细胞增殖的影响。采用RT-PCR方法检测PRL受体基因在Neuro2a细胞的表达。结果:与对照组比较,10-7mol/LPRL对Neuro2a细胞的增殖具有明确的时间依赖性调节作用。应用PRL第一天可见Neuro2a细胞数明显增加(P<0.01),第三天时Neuro2a细胞增殖达最大峰值,较对照组增高228%(P<0.001)。第四天时实验组与对照组细胞数无明显差异。PRL受体基因在Neuro2a细胞中有明确的表达。结论:PRL能够促进Neuro2a细胞的增殖。提示PRL可能在神经母细胞瘤的发生和发展中发挥了一定作用。     

120例垂体生长激素腺瘤及多激素腺瘤的临床和病理学特点分析

目的分析120例垂体生长激素（GH）腺瘤及多激素腺瘤患者的临床及病理学特征。方法回顾性分析120例免疫组化证实的垂体GH腺瘤及多激素腺瘤患者的临床资料,包括临床表现、生化改变、病理分型及侵袭性等。结果垂体腺瘤的好发年龄为20~50岁,男女发病比约为1：2,主要的临床表现为肢端肥大、头痛头晕、视力下降、视野缺损,女性患者表现有闭经、泌乳或月经紊乱。本组各种类型的垂体腺瘤的侵袭性比例：GH（＋）腺瘤为59.57%（28/47）、GH（＋）及PRL（＋）二种激素混合性瘤为35.48%（11/31）、GH（＋）和ACTH（＋）为33.33%（1/3）、GH（＋）和TSH（＋）为0（0/4）、GH（＋）和LH（＋）为33.33%（1/3）,以及GH（＋）及其它二种以上激素（＋）的多激素腺瘤34.38%（11/32）。单纯GH垂体腺瘤的侵袭性明显高于GH（＋）伴其它激素（＋）的垂体腺瘤的侵袭性（P0.05）。结论本组病例女性多于男性,单纯GH垂体腺瘤侵袭性明显高于其他类型的垂体腺瘤;病理免疫组化提示GH腺瘤除GH（＋）外,常常伴随其他激素（＋）。     

BMP-4及其拮抗剂对PRL腺瘤细胞分泌、增殖和凋亡的影响

目的研究骨形态生成蛋白4（BMP-4）及其拮抗剂Noggin对PRL腺瘤细胞分泌、增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的BMP-4和Noggin对原代培养的PRL腺瘤细胞进行干预,观察不同时间的细胞形态,测量PRL的浓度。以免疫细胞化学、Western blot及RT-PCR检测BMP-4蛋白和BMP-4mRNA在PRL腺瘤细胞的表达,甲基噻唑基四唑（MTT）法计算Noggin对PRL腺瘤细胞生长的半最大抑制浓度（IC50）值,透射电镜,流式细胞仪观察检测Noggin处理后的细胞形态和周期改变,计算凋亡率。结果 5ng/ml的BMP-4培养基可促进PRL腺瘤细胞分泌,最大效应浓度为20ng/m·l MTT法测定IC50值为18μg/m·l 加入Noggin后;免疫细胞化学,Western blot显示,与对照组相比,作用后24hPRL腺瘤细胞表达BMP-4无明显差异,但作用48h和72h的表达显著降低（P〈0.05）,RT-PCR示Noggin作用24h,48h和72h后BMP-4mRNA基因扩增条带亮度逐渐减弱,电镜观察显示。Noggin作用24h、48h后PRL腺瘤细胞形态无明显改变,72h时可见典型的凋亡细胞。结论 BMP-4在一定浓度范围内呈剂量依赖性地促进PRL腺瘤细胞生长,增殖与分泌,其拮抗剂Noggin呈时间依赖性地诱导PRL腺瘤细胞的凋亡     

姜黄素诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞增殖的研究

目的研究姜黄素对脑胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用10、20、40、60、80μmol/L姜黄素分别处理U87细胞72h后,MTT法检测姜黄素对U87细胞增殖的影响。流式细胞术检测40μmol/L姜黄素处理前后U87细胞周期和凋亡变化。提取40μmol/L姜黄素处理前后不同时间点U87细胞总蛋白,Westernblot检测自噬相关蛋白LC3的表达。结果姜黄素呈剂量依赖性抑制U87细胞增殖(P0.05),半数抑制浓度(IC50)为42.44μmol/L。姜黄素诱导G2-M期细胞周期阻滞,实验组G2-M期细胞比例为(47.71±2.67)%,对照组为(17.96±0.88)%(P0.01);实验组细胞凋亡率为(3.93±0.82)%,对照组为(1.80±0.65)%,两组差异无统计学意义(P0.05)。姜黄素给药12、24、48h,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为(0.89±0.004)、(0.93±0.01)、(1.09±0.02),高于对照组(0.76±0.04)(P0.05);3-MA能减弱姜黄素对U87细胞增殖的抑制作用。结论姜黄素通过诱导自噬抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖。     

塞来昔布影响胶质瘤细胞增殖及运动、侵袭的生物特性研究

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对胶质瘤U251细胞的COX-2蛋白表达及细胞增殖、运动、侵袭能力的影响,找出其时间和浓度规律。方法用不同浓度的塞来昔布处理培养的U251细胞不同时间,采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测对U251细胞的生长抑制率,用激光共聚焦显微镜检测U251细胞的COX-2蛋白表达;用免疫组化技术检测U251细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达;设计胶质瘤细胞体外运动侵袭模型研究塞来昔布对U251细胞运动、侵袭能力的影响。结果 MTT法表明,浓度为50μmol/L的塞来昔布作用12h后即对U251细胞增殖产生抑制作用,不同浓度以及不同作用时间对细胞的抑制率有显著性差异(P<0.01)。塞来昔布作用不同时间的U251细胞COX-2的荧光强度有显著性差异(P<0.01)。U251细胞经100μmol/L的塞来昔布处理后中PCNA的表达明显下降,与空白组比差异显著(P<0.01)。塞来昔布处理后细胞较空白组细胞的趋化运动和组织侵袭能力明显下降。结论塞来昔布通过抑制胶质瘤细胞内COX-2蛋白的表达从而抑制肿瘤细胞的生长、增殖及运动、侵袭能力,并呈时间、浓度依赖性。     

雌二醇与氟西汀对大鼠体质量及在强迫游泳实验中行为的影响

目的观察雌二醇与氟西汀对去卵巢大鼠体质量及在强迫游泳实验（FST）中行为的影响。方法将42只雌性SD大鼠随机分为去卵巢组（OVX）与假手术组（Sham）,根据药物干预不同,OVX组分为油剂对照组（oil）、雌二醇组（E2）、氟西汀组（FLX）和雌二醇＋氟西汀组（E2＋FLX）,假手术组分为生理盐水组（NS）和氟西汀组（FLX）,每组7只。去卵巢手术与假手术后饲养3周,从第4周开始慢性给药14d,第15d进行15min FST并摄像,行为学分析。隔天称量、记录大鼠体质量。结果（1）在绝经模型建立期,OVX组体质量增长[（54．3±15．1）g]显著高于Sham组[（30．8±11．0）g]（t=5．16,P〈0．01）。（2）在药物干预期,OVX4-FLX组体质量减轻显著高于OVX4-FLX＋E2组（H=25．96,P〈0．001）。（3）E2、FLX、E24-FLX可显著增加大鼠在15minFST中游泳行为（F5-34=62．80,P〈0．001）,减少不动行为（F5.34=14．47,P〈0．001）。（4）OVX4-Oil组不动行为在15rainFST前中后三个5min内逐阶段显著增加（F2．18=30．90,P〈0．001）。结论在FST中,E2有类似FLX-样的抗抑郁样作用,E2可减弱去卵巢大鼠体质量波动的程度。     

替莫唑胺及甲泼尼龙对人胶质瘤细胞放射治疗敏感性的影响

目的探讨替莫唑胺（TMZ）和甲泼尼龙（MP）对人胶质瘤细胞系U251放射治疗敏感性的影响,以期为临床优化治疗方案提供依据。方法经体外传代培养的U251细胞根据治疗方案的不同,分为对照组、放射治疗（R）组、放射治疗＋替莫唑胺（R＋TMZ）组、放射治疗＋甲泼尼龙（R＋MP）组、放射治疗＋替莫唑胺＋甲泼尼龙（R＋TMZ＋MP）组,分别予以放射治疗（2Gy／24h）、替莫唑胺、甲泼尼龙及三者联合治疗。采用磺酰罗丹明B（SRB）比色法、流式细胞术和Western blotting法分析U251细胞增殖率和凋亡率,观察凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达变化。结果放射线照射联合甲泼尼龙治疗后,U251细胞存活率明显升高（均P=0．000）;但经体外培养24和48h后,三者联合治疗组（R＋TMZ＋MP组）U251细胞增殖率显著高于放射治疗联合替莫唑胺组（P=0．000）。除对照组外,不同抗肿瘤治疗组U251细胞凋亡率均呈现升高趋势（P=0．000）,但放射治疗联合甲泼尼龙组细胞凋亡率显著低于其他各组（均P=0．000）。经放射线照射联合替莫唑胺和三者联合治疗后,U251细胞Bax蛋白表达水平升高（P=0．000）,而放射线照射联合甲泼尼龙和三者联合治疗,Bcl-2蛋白表达水平升高;其中以放射治疗联合替莫唑胺组Bax／Bcl-2比值最高（P=0．000）,放射治疗联合甲泼尼龙组最低（P=0．000）。结论甲泼尼龙可以诱导人胶质瘤细胞产生放射抵抗,而替莫唑胺对甲泼尼龙诱导的放射抵抗具有增敏作用。提示：胶质母细胞瘤患者在应用甲泼尼龙减轻放射治疗不良反应过程中所诱导的放射治疗抵抗可通过同时应用替莫唑胺而抵消。