云克治疗糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠的实验研究

目的 探讨云克对地塞米松诱导的骨质疏松症大鼠的治疗作用.方法 12周龄的雌性Wistar大鼠30只,随机分为3组,对照组、模型组和治疗组,每组10只.模型组和治疗组给予5mg/kg地塞米松肌注,1次/周,连续注射12周,对照组肌注等剂量的生理盐水.DEXA骨密度仪检测大鼠股骨骨密度,各组均取2只处死,HE染色观察股骨结构的病理改变鉴定骨质疏松大鼠模型是否构建成功.骨质疏松模型构建成功后,治疗组大鼠尾静脉注射云克(0.05 μg/kg),对照组和模型组注射等剂量的生理盐水,1次/周,连续注射15周,治疗前后尾静脉采血,ELISA法检测血清骨碱性磷酸酶和酒石酸酸性磷酸酶水平的变化.检测各组大鼠治疗后的股骨骨密度,之后,处死各组大鼠,取股骨,免疫组化法检测大鼠股骨骨保护素的变化,HE染色观察骨结构的病理改变.结果 (1)模型组和治疗组大鼠经地塞米松处理12周后,股骨骨密度较对照组明显降低(P＜0.05);病理改变为骨小梁稀疏、数目明显减少甚至断裂,而对照组骨小梁结构较完整.(2)与模型组相比,治疗组大鼠血清骨特异碱性磷酸酶水平明显升高(P＜0.05),而抗酒石酸酸性磷酸酶水平有所下降,但无统计学差异(P＞0.05).(3)治疗组治疗后血清骨特异碱性磷酸酶水平明显升高(P＜0.05),而抗酒石酸酸性磷酸酶水平有所下降,但无统计学差异(P＞0.05).(4)与模型组和治疗前相比,治疗组大鼠股骨骨密度无明显改变(P＞0.05).(5)与模型组相比,治疗组大鼠股骨骨保护素表达明显增加.(6)云克治疗后,治疗组大鼠股骨有新生骨小梁的广泛形成,骨小梁结构破坏较模型组明显减轻.结论 云克对糖皮质激素性骨质疏松大鼠有治疗作用.     

音猬因子修饰的骨髓间充质干细胞治疗大鼠骨质疏松的实验研究

目的探讨转染音猬因子的骨髓间充值干细胞移植对卵巢切除骨质疏松大鼠的治疗作用。 方法选取40只雌性SD大鼠，分为假手术组、模型组、骨髓间充值干细胞（BMSCs）移植组和音猬因子修饰的骨髓间充值干细胞（Shh-BMSCs）移植组，每组10只动物。假手术组手术中仅摘除卵巢附近的脂肪组织，但不摘除卵巢。其余的3组均进行双侧的卵巢切除手术，建立骨质疏松模型，在骨质疏松造模后的2个月，BMSCs移植组和Shh-BMSCs移植组分别通过大鼠的尾静脉注射BMSCs与Shh-BMSCs（第四代，约2*10⁶个干细胞），模型组动物注射等量PBS液体。在干细胞移植2 w后，检测尾静脉中血清钙、磷、碱性磷酸酶水平，同时采用双能X射线骨密度仪测量大鼠的股骨、腰椎及全身骨密度，micro-CT扫描进行胫骨的形态计量学指标分析。 结果（1）与假手术组相比，模型组的大鼠骨小梁厚度、骨小梁数量和骨体积分数均明显减少，大鼠的骨密度、血清钙与碱性磷酸酶明显降低，而大鼠的血清磷水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），以上表明骨质疏松大鼠模型成功制备。（2）与模型组相比，BMSCs组的大鼠血清钙和和碱性磷酸酶明显升高，而血清磷水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组、BMSCs组相比，Shh-BMSCs组大鼠血清钙、碱性磷酸酶水平明显升高，而血清磷水平明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）同模型组的骨密度相比，BMSCs组大鼠的骨密度明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组、BMSCs组相比，Shh-BMSCs组大鼠的骨密度明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。（4）同模型组相比，BMSCs组的大鼠骨小梁厚度、骨小梁数量和骨体积分数均明显增加，差异有统计学意义（P<0.05），与模型组和BMSCs组相比，Shh-BMSCs组的大鼠骨小梁厚度、骨小梁数量和骨体积分数均明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论Shh-BMSCs细胞移植后能够治疗大鼠卵巢切除后的骨质疏松。     

骨宝液在去卵巢大鼠骨质疏松症中抑制骨转换作用的实验研究

目的：探讨骨宝液对去卵巢大鼠骨质疏松症中抑制骨转换作用。方法：60只大鼠去卵巢诱导骨质疏松症，随机分为正常对照组、模型组、尼尔雌醇组、骨宝液低、中、高剂量组。正常对照组、模型组以0．9％生理盐水每天10ml／kg，尼尔雌醇组以尼尔雌醇每2周1mg／kg，其他三组每天分别以骨宝液5、10、15ml／kg的剂量灌胃给药3个月后，以比色法测定其血清钙（s-Ca）、骨碱性磷酸酶（b-AKP）和血清抗酒石酸酸性磷酸酶（s-TRAP）的活性，竞争放射免疫法测定血清中骨钙素（s-BGP）的含量；双能x线骨密度仪（DEXA）测定股骨及腰椎的骨密度；三点弯曲试验法测定骨生物力学；扫描电镜进行骨小梁形态计量学分析。结果：骨宝液组与其他组比较，s-TRAP水平降低，腰椎骨密度增加，股骨抗弯抗拉能力改善，骨小梁形态改善，骨小梁平均宽度（MTT）与骨小梁面积百分比（TS％）显著增加。结论：骨宝液对去卵巢大鼠骨质疏松症具有防治作用，其机制可能与抑制骨转换有关。     

老鹳草素对地塞米松诱发大鼠骨质疏松症的影响

目的 观察老鹳草素对地塞米松诱发大鼠骨质疏松症的影响.方法 将6个月龄雌性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、5、10、20 mg/kg老鹳草素组和2 mg/kg阿仑膦酸钠组.大鼠肌肉注射地塞米松(1 mg/kg),老鹳草素连续灌胃90d,对股骨和腰椎进行骨密度及骨组织形态计量学检测.结果 对照组股骨和椎骨骨密度分别为(0.20±0.01)和(0.18±0.01) g/cm2,模型组分别为(0.15±0.01)和(0.10 ±0.01) g/cm2,差异有统计学意义(P＜0.05).与模型组比较,10、20 mg/kg老鹳草素能显著提高股骨和椎骨的骨密度.5 mg/kg老鹳草素可增加模型组大鼠股骨骨小梁表面积百分率、骨小梁间距和骨小梁节点数;10、20 mg/kg老鹳草素明显增加模型组大鼠股骨和椎骨骨小梁计数、骨小梁宽度和骨小梁表面积百分率,增多小梁节点数、减少骨小梁间隙距离和小梁游离末端数.结论老鹳草素具有抑制地塞米松引起大鼠骨质疏松症的作用,并呈剂量-效应关系.     

DKK1-siRNA真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究

目的 针对DKK1基因构建两段小干扰RNA（siRNA）真核表达载体,观察其对骨质疏松（OP）大鼠的治疗作用。方法 12周龄Wistar雌性大鼠随机分为5组,对照组、模型组、空载体组、DKK1-siRNA1组及DKK1-siRNA2组,每组10只。对照组肌注生理盐水,其他组肌注地塞米松造模,连续12w,鉴定骨质疏松模型是否构建成功。构建两段DKK1-siRNA 真核表达载体,尾静脉注射治疗组大鼠,对照组和模型组注射等体积PBS,空载体组注射等体积空载体。骨切片观察载体是否靶向到骨,RT-PCR检测股骨DKK1 mRNA的表达,免疫组化法检测股骨DKK1蛋白的表达水平。 ELISA检测血清中骨碱性磷酸酶（BALP）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的水平;测定股骨骨密度及病理结构变化。结果 （1）双酶切和基因测序鉴定结果表明siRNA真核表达载体构建成功;（2）模型组、空载体组及治疗组大鼠造模后,近端股骨骨密度较对照组明显降低（P<0.05）;病理改变为骨小梁数目明显减少、断裂,而对照组骨小梁结构较完整;（3）DKK1-siRNA质粒载体靶向到骨;（4）治疗组大鼠血DKK1-mRNA及股骨DKK1蛋白的表达明显下降;（5）与模型组和空载体组相比,治疗组血清中BALP与Col-Ⅰ水平明显升高, TRAP水平明显下降 (P<0.05);（6）治疗后各组大鼠近端股骨骨密度的差异无统计学意义(P>0.05);（7）治疗组大鼠股骨有新生骨小梁形成,骨小梁破坏减轻。结论 DKK1-siRNA促进骨形成,抑制骨吸收,减轻骨结构的破坏。     

龙胆苦苷通过MAPK信号通路对骨质疏松大鼠骨吸收的影响

目的 基于丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路探讨龙胆苦苷（GENT）对骨质疏松（OP）大鼠骨吸收的影响。方法 78只雌性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组（OP组）、雌二醇组（E2组，0.05 mg/kg）、龙胆苦苷低（GENT LD，30 mg/kg）、中（GENT MD，60 mg/kg）、高剂量组（GENT HD组，120 mg/kg），除Sham组外大鼠均采用双侧卵巢切除术构建OP大鼠模型。ELISA检测血清骨代谢指标（CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OCE2）和炎性指标（IL-6、TNF-α、IL-1β）含量；三点弯曲测试评估右股骨机械强度；Micro-CT扫描大鼠右侧股骨观察股骨远端骨微结构变化；HE染色观察骨组织形态学变化；TRAP染色分析骨表面的破骨细胞数量（N.Oc/BS）；Western Blot检测骨组织RANKL和MAPK通路相关蛋白（JNK、ERK1/2、p38 MAPK及其磷酸化蛋白）的表达。结果 与Sham组相比，OP组大鼠血清E2、骨代谢相关标志物、股骨最大负荷和断裂挠度、BMD、骨小梁微结构参数BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著降低（P＜0.05），炎症因子、Tb.Sp、N.Oc/BS、骨组织RANKL、p-JNK/JNK、p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38的表达明显升高（P＜0.05），骨皮质厚度和骨小梁数量明显减少，且骨小梁出现断裂，排列疏松；经GENT治疗后大鼠血清E2、骨代谢相关标志物、股骨最大负荷和断裂挠度、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th明显升高（P＜0.05），炎症因子、Tb.Sp、N.Oc/BS、骨组织RANKL、p-JNK/JNK、p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38的表达明显降低（P＜0.05），可见新生骨小梁，形态相对完整。结论 GENT可改善OP大鼠的骨微结构，对OP具有保护作用，其作用机制可能与抑制MAPK信号通路的激活，进而抑制破骨细胞的生成，减少骨吸收有关。     

大豆苷元磺酸钠对维甲酸诱导大鼠骨质疏松的保护作用

目的研究大豆苷元磺酸钠对维甲酸诱导大鼠骨质疏松的保护作用。方法以70mg／kg维甲酸诱导大鼠形成骨质疏松模型。自实验开始当天下午各组大鼠依次经口给予以下药物：阴性对照组（Control）、病理模型组（Model）0．5％CMC．Na溶液5ml／kg；骨疏康组（Gsk）4g／kg；大豆苷元磺酸钠高、中、低剂量组（H．SDS300mg／kg；M-SDS150mg／kg；L-SDS75mg／kg）。连续给药5周。结果大豆苷元磺酸钠连续给药5周后，高、中剂量组骨钙素（s-BGP）均与对照组水平相当，并且可明显增加股骨骨密度；高剂量组灰重系数和骨钙含量均较模型组显著增加。高、中、低3个剂量组骨小梁形态结构趋于完整，骨髓腔呈圆形或卵圆形且腔隙较小；骨小梁面积（TS％）和平均骨小梁宽度（MTT）明显增加；骨表面平整光滑。结论大豆苷元磺酸钠对维甲酸诱导的骨质疏松大鼠的骨小梁具有保护作用，能防治维甲酸诱导的大鼠骨质疏松症。     

辅酶Q10对去卵巢大鼠股骨显微结构及生物力学的影响

目的应用骨生物力学和micro-ct技术,探讨Co Q10对去卵巢大鼠的股骨显微结构及生物力学的影响。方法 48只3月龄SPF级SD雌性未孕大鼠,随机分为假手术组(Sham)、去卵巢模型组(OVX)、小麦胚芽油组(WGO)、WGO+辅酶Q10组(高、低剂量)、戊酸雌二醇组(EV),连续给药90d。实验结束后,取右侧股骨进行生物力学检测,然后进行Micro CT扫描及三维重建。结果与Sham组比较,OVX组大鼠股骨的微观参数:骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度和骨密度明显减少,骨小梁分离度和结构模型指数明显增高;而股骨的骨生物力学参数:最大载荷、断裂载荷及弹性载荷明显减少,刚度明显减少。与OVX组相比,EV组大鼠股骨的骨微观参数均得到了良好地修复,骨生物力学参数中最大载荷、断裂载荷、弹性载荷及刚度得到了明显修复。而小麦胚芽油+低剂量CoQ10组大鼠股骨的微观参数骨小梁数量、骨小梁分离度、结构模型指数及骨密度和骨体积分数则得到一定程度的修复。结论辅酶Q10(15 mg/kg)能够修复OVX大鼠股骨微观结构破坏,辅酶Q10(15 mg/kg)可以预防去卵巢手术导致大鼠股骨松质骨结构破坏和股骨生物力学性能的下降,其他剂量组对此无明显的预防作用。提示辅酶Q10的抗骨质疏松作用具有良好的研究前景。     

雄激素防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究

目的 运用骨生物力学、Micro CT分析及三维结构重建的方法,从"骨密度检测-形态性观察-功能学测试"角度出发,观察雄激素对去卵巢大鼠骨密度、骨微结构及骨力学性能的影响.方法 30只6月龄雌性SD大鼠随机分为去势组(OVX)、治疗组(T)和假手术组(Sham),每组10只.治疗组大鼠去势后用睾丸酮水溶液灌胃给药,3个月后取材.取大鼠L3椎体及右股骨行生物力学测试,取左股骨远端干骺部行Micro CT分析及三维结构重建.结果 T组大鼠腰椎和股骨远端骨密度值(BMD)升高,骨小梁体积(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)值升高,骨小梁间隙(Tb.Sp)值降低,而骨小梁数目(Tb.N)值无明显改变,腰椎各生物力学参数值升高,而股骨力学性能无明显提高,大鼠体重、子宫重量及股骨中点皮质骨厚度无明显的改变.结论 雄激素可部分改善OVX大鼠骨小梁微观结构,防止骨量丢失,提高松质骨的力学性能,而对皮质骨和子宫无明显影响.     

熟地对去卵巢大鼠骨代谢生化指标及骨密度的影响

目的 研究熟地水煎液对去卵巢大鼠骨代谢生化指标及骨密度的影响，探讨熟地对骨质疏松症大鼠的药理作用。方法 采用去卵巢大鼠模型，每天灌胃1g/kg、2g／kg及4g/kg3种剂量的熟地水煎液，3个月后检测大鼠血清雌二醇、骨钙素、碱性磷酸酶、钙、磷、尿脱氧吡啶啉、钙、磷等生化指标及股骨骨密度的变化，并与模型组、正常对照组、己烯雌酚组比较。结果 与假手术组比较，熟地3个剂量组、己烯雌酚组ALP和BGP均明显升高（P〈0．05），E2含量均低于假手术组（P〉0．05）。与模型组比较，各用药组ALP、BGP、尿DPD／Cr、Ca／Cr含量均低于模型组（P〈0．05）。各用药组大鼠股骨骨密度均较模型组有所升高（P〈0．05）。结论 熟地可抑制骨吸收，延缓去卵巢大鼠骨量丢失，对骨质疏松症有一定的防治作用。