肾茶提取物含药血清对大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响

目的 探讨肾茶两种不同化学提取物对大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖与TGF-β1分泌、TGF-β1 mRNA表达的影响.方法 对肾茶提取分离得到乙酸乙酯、正丁醇两种不同化学提取物,分别给大鼠灌胃后,采血制备含药血清.以肾茶提取物含药血清为干预因素,体外培养的肾小球系膜细胞（MCs）为研究对象,采用CCK-8、ELISA、RT-PCR技术,探讨其对脂多糖（LPS）诱导的系膜细胞增殖、TGF-β1分泌及TGF-β1 mRNA表达的影响.结果 不同剂量的肾茶正丁醇与乙酸乙酯提取物的含药血清均明显抑制LPS刺激的大鼠MCs增殖及TGF-β1分泌（P＜0.01或P＜0.05）;肾茶正丁醇提取物高、低剂量组与乙酸乙酯提取物高剂量组的含药血清可明显抑制LPS刺激的大鼠MCs TGF-β1 mRNA表达（P＜0.01或P＜0.05）.其中,肾茶正丁醇提取物抑制作用明显优于乙酸乙酯提取物,二者同剂量比较差异有统计学意义（P＜0.01）,且抑制作用呈一定的剂量相关性（P＜0.01）.结论 体外实验表明,肾茶二种提取物含药血清可抑制MCs的异常增生及TGF-β1的过度表达,其中正丁醇提取物作用优于乙酸乙酯提取物,为肾茶开发新制剂治疗肾小球疾病提供参考.     

地塞米松抑制肿瘤坏死因子α介导的肾小球系膜细胞

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对人肾小球系膜细胞(MC)促增殖效应及地塞米松(DXM)对其的抑制作用。方法 培养人肾MC，采用^3H—胸腺嘧啶掺入法(^3H—TdR掺入法)测定MC增殖：ELISA法测定细胞因子(IL1)及细胞外基质ECM(FN、LN)。结果 TNFa明显刺激MC^3H—TdR掺入，与对照组比较P＜0.01，同时，TNFa促进MC分泌IL1、和LN、FN，与对照组比较P＜0.01。DXM抑制TNFa刺激MC^3H—TdR掺入及分泌ILl、LN、FN，呈剂量依赖关系(P＜0.01)。结论 细胞因子TNFa能明显促进MC增殖及细胞外基质合成，而DXM具有抑制TNFa的作用，为临床上使用DXM治疗肾小球疾病提供了新的理论依据。     

肝复康滴丸对大鼠利胆作用的实验研究

目的:观察肝复康滴丸对大鼠的利胆作用,为临床应用提供理论依据。方法:利用胆管引流法测定肝复康滴丸对大鼠胆汁流量及胆固醇和胆红素分泌的影响。结果:肝复康滴丸各剂量组各个时间点均能增加胆汁流量,以中剂量组药后1h差异最为显著(P<0.01);各剂量组胆汁中胆红素及胆固醇含量均不同程度的降低,以中剂量组的差异最为显著(P<0.01)。结论:肝复康滴丸能增加胆汁流量,抑制胆固醇和胆红素的分泌,提示肝复康滴丸具有利胆作用。     

鸡冠花正丁醇萃取物改善大鼠功能失调性子宫出血的机制研究

目的:研究鸡冠花正丁醇萃取物对大鼠功能失调性子宫出血的改善作用,并探讨其作用机制。方法:将60只受孕SD大鼠随机分为空白组、模型组、宫血宁胶囊组(阳性对照,0.07 g/kg)和鸡冠花正丁醇萃取物高、中、低剂量组(4.32、2.16、1.08 g/kg),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均在妊娠第7天ig米非司酮溶液和米索前列醇溶液造成不完全流产,以复制功能失调性子宫出血模型。从妊娠第8天开始,给药组大鼠ig相应药物,空白组和模型组大鼠ig等体积生理盐水,每天早、晚各给药1次,连续7d。给药结束后,测定大鼠子宫出血量以及血清中血栓素(TXA_2)、前列环素(PGI_2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠子宫出血量显著增加(P<0.01),血清中TXA_2含量显著减少、PGI_2和TNF-α含量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的子宫出血量均显著减少、血清中TXA_2含量均显著增加(P<0.01);宫血宁胶囊组和鸡冠花正丁醇萃取物高剂量组大鼠血清中PGI_2、TNF-α含量,以及鸡冠花正丁醇萃取物中剂量组大鼠血清中TNF-α含量均显著减少(P<0.01)。结论:鸡冠花正丁醇萃取物对药物流产不全致大鼠功能失调性子宫出血有明显的改善作用,其作用机制可能与调节TXA_2/PGI_2动态平衡、抑制TNF-α的过度分泌有关。     

黄芪、水蛭含药血清对大鼠肾小球系膜细胞产生TGF-β1的影响

目的：观察黄芪、水蛭及其不同比例方剂含药血清,对体外培养大鼠系膜细胞（MC）产生的转化生长因子（TGF）-β1的影响.方法：将大鼠系膜细胞随机分为9组：阴性对照组、阳性对照组、空白组、黄芪高剂量组、低剂量组、水蛭高剂量组和低剂量组、水蛭低剂量黄芪高剂量组、水蛭高剂量黄芪低剂量组.每组设5个复孔,取培养上清液,采用ELISA法检测各组大鼠MC分泌TGF-β1的含量.结果：阳性对照组TGF-β1含量明显升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.中药各含药血清TGF-β1表达量均低于空白血清组（P＜0.01）,以水蛭高剂量黄芪低剂量组最低,其次是水蛭高剂量组,水蛭高剂量组低于水蛭低剂量组（P＜0,01）.结论：水蛭和以水蛭为主药的方剂在抑制体外培养的大鼠MC分泌TGF-β1作用方面强于黄芪和以黄芪为主药的方剂.     

罗格列酮对肾硬化大鼠模型整合素连接激酶表达的影响

目的观察罗格列酮对肾硬化大鼠模型整合素连接激酶(ILK)表达的影响。方法 24只大鼠随机分为三组,每组8只。模型组和治疗组行大鼠左肾全切除术,并采用多柔比星诱导局灶节段性肾小球硬化(FSGS)大鼠模型。治疗组于手术当日开始给予罗格列酮3 mg·kg-1·d-1灌胃,每日1次;假手术组和模型组给予等体积生理盐水,均持续12周。采用HE、PAS染色观察肾小球硬化程度,计算肾小球硬化指数;Western blot及免疫组化法检测肾组织中ILK及纤维连接蛋白(FN)蛋白表达情况;RT-PCR检测肾组织中ILK mRNA及FN mRNA的表达水平。结果给药12周后,模型组大鼠肾小球硬化指数、肾小管间质损伤Paller氏评分均较高于假手术组(P<0.05),肾小球明显硬化;治疗组上述指标低于模型组(P<0.05),FSGS减轻。与假手术组相比,模型组大鼠肾组织中ILK及FN的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05)。治疗组大鼠肾组织中ILK及FN的mRNA和蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05)。结论ILK可能参与肾小球硬化的发病,罗格列酮可能通过抑制肾组织ILK的表达来改善肾小球硬化。     

枳实及其主要活性成分促进脾虚模型大鼠胃肠运动的机制研究

目的:研究枳实及其主要活性成分促进脾虚模型大鼠胃肠运动的机制。方法:将170只大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(160只),造模组大鼠以苦寒泻下+饥饱失常法复制脾虚模型。造模后,将大鼠随机分为模型组,柚皮苷低、中、高剂量组(3.267、6.535、13.070 mg/mL),新橙皮苷低、中、高剂量组(3.865、7.730、15.460 mg/mL),辛弗林低、中、高剂量组(0.252、0.504、1.008 mg/mL),3个单体成分(即柚-新-辛)低、中、高剂量配伍组和枳实水煎液低、中、高剂量组(0.104、0.208、0.416 g/mL,以生药计),每天ig给药1次,10 mL/kg,连续7 d。末次给药后,检测大鼠血清胃泌素(GAS)和血浆乙酰胆碱(ACh)、胃动素(MTL)、P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清GAS水平和血浆ACh、MTL、SP水平降低(P<0.01),血浆VIP水平升高(P<0.05)。与模型组比较,除柚皮苷高剂量组和辛弗林各剂量组大鼠血清GAS水平外,其余各给药组均明显升高(P<0.05或P<0.01);新橙皮苷高剂量组、辛弗林高剂量组和枳实水煎液低剂量组大鼠血浆ACh水平显著升高(P<0.01);新橙皮苷中、高剂量组,辛弗林高剂量组,低、中剂量配伍组和枳实水煎液中、高剂量组大鼠血浆MTL水平显著升高(P<0.05);柚皮苷低、中剂量组和新橙皮苷各剂量组大鼠血浆SP水平显著升高(P<0.05或P<0.01);柚皮苷低剂量组,辛弗林高剂量组和枳实水煎液低、中剂量组大鼠血浆VIP水平显著降低(P<0.05)。结论:枳实可能通过促进GAS、ACh、MTL的分泌和抑制VIP的分泌来促进脾虚模型大鼠的胃肠运动;其与3个单体成分对胃肠激素的调节作用有差异。     

复方芪麻胶囊对SHR大鼠RAS系统ACE-AngⅡ-AT1轴与ACE2-Ang(1-7)-Mas轴动态平衡的调控作用研究

目的探索复方芪麻胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)肾素-血管紧张素系统(RAS)的动态平衡调节作用。方法将大鼠按血压值分为正常组(WKY组),模型组(SHR组),卡托普利组(Captopril组),复方芪麻胶囊高(QM-H)、中(QM-M)、低(QM-L)剂量组,每组10只,连续灌胃给药4周。给药前、给药2周和给药4周测定各组大鼠血压。末次给药后,各大鼠麻醉后取血,分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测大鼠血清中血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素(Ang)Ⅱ、血管紧张素1型受体(AT1)、ACE2、Ang(1-7)、Mas含量。结果在给药前,与WKY组相比,各组SHR高血压模型大鼠收缩压、舒张压均显著升高(P<0.01)。SHR组、Captopril组、QM-H、QM-M、QM-L组之间两两比较,收缩压、舒张压差异均无统计学意义(P>0.05);在给药2周后与4周后,与WKY组比较,SHR组大鼠收缩压、舒张压均明显升高(P<0.01);与SHR组大鼠比较,Captopril组、QMH、QM-M、QM-L组大鼠收缩压、舒张压均明显降低(P<0.01)。与WKY组比较,SHR组大鼠血清ACE、AngⅡ、AT1含量均显著上升(P<0.01);与SHR组大鼠比较,Captopril组、QM-H、QM-M、QM-L组ACE、AngⅡ、AT1含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与WKY组比较,SHR组大鼠血清ACE2、Ang (1-7)、Mas含量均显著性降低(P<0.01);与SHR组大鼠比较,Captopril组、QM-H、QM-M、QM-L组ACE2、Ang(1-7)、Mas含量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论复方芪麻胶囊可明显降低SHR大鼠的收缩压和舒张压,其作用可能与抑制ACE-AngⅡ-AT1轴,增强ACE2-Ang(1-7)-Mas轴有关。     

锁阳含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化及矿化的影响

目的:研究锁阳含药血清对体外培养小鼠成骨细胞的增殖、分化以及矿化的影响。方法:小鼠灌胃14天后摘眼球取血制备含药血清,分别将10%浓度的各组含药血清及对照组血清(生理盐水组血清)分别加入细胞培养液中培养成骨细胞。采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,钙钴法检测其碱性磷酸酶活性,0.2%茜素红染色法观察成骨细胞钙化结节情况。结果:同一时间点,与生理盐水血清组比较,锁阳含药血清各组均能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,其中,锁阳含药血清中剂量组与高剂量组在三个时间点均能够显著促进细胞增殖(p0.01);锁阳含药血清能够增强MC3T3-E1成骨细胞分泌碱性磷酸酶(ALP),且有一定的浓度依赖性;随着锁阳含药血清浓度的增加,钙化结节数量也呈现增加的趋势。结论:锁阳含药血清能够促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,且在一定浓度范围内,浓度越高,促进作用愈明显。     

栀子大黄汤抗酒精性肝损伤的体内外实验

目的评价栀子大黄汤(Zhi-Zi-Da-Huang decoction,ZZDHD)抗酒精性肝损伤的药效作用。方法建立体外酒精性大鼠肝细胞损伤模型,考察ZZDHD含药血清对损伤肝细胞的增殖(methylthiazoletrazolium,MTT)及谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)泄漏的影响。建立酒精性大鼠肝损伤体内模型,不同剂量给药后测定血清ALT,谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和甘油三酯(triglyceride,TG)及肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量与活性,并进行肝组织病理学检查。结果体外细胞试验中,体积分数为20%的含药血清能非常显著提高损伤肝细胞的增殖能力并降低细胞ALT泄漏(P<0.01),其活性最佳。大鼠体内,ZZDHD高、中剂量组均能不同程度地降低由酒精诱导的血清ALT、AST和TG水平的升高(P<0.01或P<0.05);均能非常显著性降低受损肝组织中的MDA含量(P<0.01),升高肝组织SOD活力和GSH含量(P<0.01),同时组织病理学也得出上述一致的结论。结论 ZZDHD对酒精性肝损伤具有明显的防治作用,其作用机制可能与减轻自由基和脂质过氧化物对肝细胞的损伤有关。     

重楼总皂苷溶血作用实验研究

目的:研究重楼总皂苷的溶血作用。方法:通过常规体外试管法(肉眼观察法)及改进的体外溶血性试验法(分光光度法)来观察重楼总皂苷的溶血作用。结果:重楼总皂苷浓度≤0.01mg·mL~(-1)时无溶血现象发生;而当其>0.01mg·mL~(-1)时则出现溶血,并且随着重楼总皂苷浓度的增加溶血率也增加,直至接近100%。肉眼观察法和分光光度法结果一致。结论:重楼总皂苷低浓度时无溶血作用,而大于一定浓度时则具有溶血作用,且溶血强度与皂苷浓度呈剂量依赖性。     

重楼皂苷类化合物体外抗生育功效研究

目的筛选并确证重楼皂苷类化合物的抗生育功效。方法以重楼分离纯化获得的偏诺皂苷（PHAC-A）和薯蓣皂苷（PHAC-B）为实验材料,运用体外孵育小鼠精子测定其活性,研究其对体外精子活性的影响。结果PHAC-A,PHAC-B体外均具抗生育活性,与阳性对照醋酸棉酚比较,能显著抑制精子活力和精子成活率,且PHAC-B抗生育效果优于PHAC-A,其抗生育活性存在剂量依存关系。结论PHAC-A,PHAC-B抑制精子活力和精子成活率的功效显著,为高活性抗生育物质,其中PHAC-B为重楼中具抗生育能力的主要活性物质。     

基于国家药品评价性抽验的全国重楼饮片质量情况分析与研究

目的：通过全国中药材饮片专项抽验工作,了解重楼饮片市场整体质量现状及存在的问题,完善重楼检验标准,为监管部门提供技术支持,保障公众用药安全有效。方法：从全国19个省级行政区抽取重楼饮片样品,按照《中国药典》2015年版一部重楼项下规定开展检验工作,出具检验报告,分析检验数据以评价重楼饮片市场情况。针对检验中发现的问题,采用实地调研等方法开展探索性研究。结果与结论：本次抽验的重楼样品共计55批次,部分批次样品存在薄层色谱鉴别不合格和含量不合格问题,经探索性研究发现部分批次存在混伪品问题以及疑似为被提取后的重楼饮片问题。现行重楼标准存在薄层鉴别与含量测定指标不合理等问题。     

HPLC法测定不同来源重楼药材中7种甾体皂苷的含量

目的分析不同来源重楼属植物的主要活性成分,比较7种甾体皂苷的含量,为重楼药材的鉴别和品质评价提供参考依据。方法采用HPLC法测定不同来源重楼属15批药材中重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅴ的含量。色谱条件为Inertsil ODS-3C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(50∶50);检测波长为203nm;流速为1.0mL·min~(-1);柱温为35℃;进样量为20.0μL。结果 15批样品中,重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ4种皂苷含量之和均在1.849~20.222mg·g~(-1)之间;样品中7种皂苷含量之和在2.351~37.366mg·g~(-1)之间。精密度、稳定性和重复性实验的RSD值均≤3.0%,7种皂苷的平均加样回收率均在95.92%~103.20%之间(RSD≤3.0%,n=5)。结论因产地或种类不同,重楼皂苷的含量存在一定差异。基于15批重楼样品的HPLC图谱,构建了重楼药材的HPLC指纹图谱,实验结果可用于重楼的真伪鉴别和质量评价。     

Drynariae Rhizoma promotes osteoblast differentiation and mineralization in MC3T3-E1 cells through regulation of bone morphogenetic protein-2, alkaline phosphatase, type I collagen and collagenase-1

In a previous study (Jeong et al., 2003, Inhibition of Drynariae Rhizoma extracts on bone resorption mediated by processing of cathepsin K in cultured mouse osteoclasts. International Immunopharmacology 3, 1685–1697), treatment of osteoclasts-containing long bone cells with Drynariae Rhizoma (DR) extract prevented the intracellular maturation of cathepsin K and thus, it was considered that DR is a pro-drug of a potent bone resorption inhibitor. To further clarify the role of DR in ossification, we investigated the effects of DR on the proliferation and differentiation of osteoblastic cell lines in vitro. In this study, the bone effect of DR is studied. We assessed the effects of DR on osteoblastic differentiation in nontransformed osteoblastic cells (MC3T3-E1) and rat bone marrow cells. DR enhanced alkaline phosphatase (ALP) activity and mineralization in a dose- and time-dependent fashion. This stimulatory effect of the DR was observed at relatively low doses (significant at 50–150 μg/ml and maximal at 150 μg/ml). Northern blot analysis showed that the DR (100 μg/ml) increased in bone morphogenetic protein-2 as well as ALP mRNA concentrations in MC3T3-E1 cells. DR (60 μg/ml) slightly increased in type I collagen mRNA abundance throughout the culture period, whereas it markedly inhibited the gene expression of collagenase-1 between days 15 and 20 of culture. These results indicate that DR has anabolic effects on bone through the promotion of osteoblastic differentiation, suggesting that it could be used for the treatment of common metabolic bone diseases such as osteoporosis.     

大黄酸对人肾小球系膜细胞功能的影响

目的探讨大黄酸防治糖尿病肾病的作用机制。方法用细胞培养、ELISA、明胶酶谱及免疫沉淀、Western blot等技术,研究了大黄酸对肾小球系膜细胞转化生长因子(TGFβ₁)、基质金属蛋白酶-2,-9(MMP-2和MMP-9)及p38活化丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性的作用。结果大黄酸可显著抑制肾小球系膜细胞的增殖,对抗高糖诱导肾小球系膜细胞TGFβ₁活性升高的作用;对高糖诱导肾小球系膜细胞MMP-2,MMP-9,pro-MMP-2及pro-MMP-9的活性增加无明显影响,但可明显对抗高糖引起的肾小球系膜细胞p38MAPK活性增加。结论大黄酸减少FN的分泌可能与其降低p38MAPK及TGFβ₁活性有关。     

Detection of saponins in extracts from the rhizomes of Paris species and prepared Chinese medicines by high performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry

A highly sensitive and specific method, based on high performance liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry (HPLC-ESI-MS), was developed for simultaneous detection of eleven steroidal saponins and one phytoecdysone in extracts from the rhizomes of thirteen PARIS species and four prepared Chinese medicines (PCMs). The HPLC experiments were performed by means of a reversed-phase C18 column (4.6 mm x 150 mm, 5 microm) and mobile phase system consisting of 0.1 % aqueous formic acid and acetonitrile under gradient elution conditions. The most intensive electrospray ionization signals were found in the negative ion spectra due to HCOO- adducts. The limits of detection (LODs) for the saponins were lower than 40 ng/mL in selected ion monitoring (SIM) mode. The identification of the saponins in the extracts of PARIS species and PCMs was confirmed using their retention times and mass spectral comparisons to standard compounds. The validated method was successfully applied for simultaneous detection of twelve standard compounds in the analytes so that it provided a new means for quality evaluation of Rhizoma Paridis and Chinese multiherb remedies that contain Rhizoma Paridis. The results showed that most species of PARIS contain steroidal saponins, which provided evidence for expanding the botanical origin of Rhizoma Paridis.     

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的研究醛固酮(aldosteroen,ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(spironolactone,SPI)对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法以不同浓度的ALD(10-11、10-9、10-7mol/L)和/或10-7mol/L SPI刺激系膜细胞48 h后,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中FN的浓度,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞FN mRNA的表达;以10-9mol/L浓度的ALD刺激系膜细胞不同时间(24、48、72 h)后,应用ELISA测定培养上清中FN的浓度,应用半定量RT-PCR方法检测细胞FN mRNA的表达。结果ELISA结果显示,ALD促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN,且具有浓度依赖和时间依赖性的特点,SPI能够拮抗ALD的作用。半定量RT-PCR方法结果显示,ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞FN mR-NA的表达,且具有浓度依赖和时间依赖性的特点,SPI能够拮抗ALD的作用。结论ALD从蛋白和基因水平促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN,且具有浓度依赖和时间依赖性的特点,SPI能够拮抗ALD的作用,从而可能有益于延缓肾小球硬化的进展。     

川芎嗪注射液对大鼠肾小球系膜细胞增生的影响

目的：探讨川芎嗪注射液(TMP)对大鼠肾小球系膜细胞增生的作用。方法： 在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)株中加入脂多糖(LPS)后，再分别加入不同浓度的TMP，设实验组：GMCs＋LPS＋TMP，对照组即GMCs＋LPS组及GMCs组。采用四甲基偶氮唑蓝液(MTT)掺入方法，于24，48 h观察3组中GMCs增生率。结果： 实验组于48 h时对GMCs增生的抑制最为显著，实验组GMCs增生率明显低于GMCs＋LPS组及GMCs组(P＜0.01)。结论：TMP能明显抑制大鼠GMCs增生。