HCMV（pp65）抗原血症-肝、肾移植术后巨细胞病毒感染监测的分析

目的通过5000次肝、肾移植术后病人外周血HCMV（pp65）抗原血症检测结果与用ELISA方法检测HCMV特异性IgM、IgG抗体的检测结果进行比较和观察，探讨各种检测方法在检测器官移植术后HCMV感染中的作用。方法应用间接免疫荧光方法，检测2002年1月至2004年11月在我院接受肝、肾移植手术后病人外周血白细胞内人巨细胞病毒（HCMV）的基质磷蛋白（pp65）共检测血标本5000次，阳性病人应用ELISA方法检测HCMV特异性IgM抗体。结果5000次HCMV（PP65）抗原血症检测中，阳性1053次，占21．06％；1053次HCMV（PP65）抗原血症阳性病人，ELISA方法检测HCMV特异性IgM抗体，103次出现阳性。1053次HCMV（PP65）抗原血症阳性病人中约85．23％出现HCMV感染的症状及HCMV病。结论HCMV（PP65）抗原血症检测与其它检测HCMV方法相比，可以早期、快速、准确的检测出肝、肾移植术后病人巨细胞病毒感染，为临床抗病毒治疗提供依据，使HCMV病的发生率明显降低。     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65的检测及其在肾移植受者CMV病诊断中的临床应用

目的 建立一种简便诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法 运用催化信号扩增法检测外周血白细胞中的人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65,并与抗HCMV-IgM检测法作比较.结果 检测100例肾移植受者中,HCMVpp65抗原阳性47例,IgM抗体检测阳性41例,pp65抗原阳性细胞数为(71±45)个,2×105个WBC,而有症状的CMV病29例,抗原阳性细胞指数为(83±46)个,2×105个WBC.对照组50名健康人,pp65抗原检测全为阴性.pp65的敏感性、特异性、阳性预测值与阴性预测值分别是100%、74.6%、61.7%和100%.结论 该法敏感、简便,可作为肾移植术后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

HCMV活动性感染与尿路上皮癌的相关性研究

目的分离和鉴定尿路上皮癌患者的肿瘤组织和抗凝血标本中人巨细胞病毒(HCMV),结合临床资料分析比较HCMV活动性感染与尿路上皮癌发生发展及其复发的相关性。方法采集33例经病理检测确诊为尿路上皮癌患者的组织和血标本,进行如下处理:分别采用细胞培养病毒分离法进行病毒分离;PCR法检测患者的抗凝血及组织DNA标本中HCMV UL55和UL83基因;IFA法检测抗凝血标本中HCMV pp65抗原;ELISA法检测HCMV IgG及IgM抗体;记录分析结果,确定尿路上皮癌患者HCMV活动性感染率。结果在33份抗凝血标本中,分离到1株临床分离株,该标本经盲传3代出现典型HCMV特征性细胞病变效应(CPE),经鉴定为HCMV。HCMV UL55和UL83基因、HCMV pp65抗原血症及HCMV IgM抗体检测均为阳性的有6份,因此可以判定在33例尿路上皮癌患者中,HCMV活动性感染者有6例,活动性感染率为18.2%(6/33)。结合患者的临床资料进一步分析发现,尿路上皮癌患者复发及病理分级均与HC-MV活动性感染相关,且HCMV活动性感染者其病理分级程度升高。结论结合临床资料分析发现,尿路上皮癌复发及病理分级程度升高均与HCMV活动性感染有关。     

几种CMV相关物检测对诊断肾移植患者CMV感染的评价

目的 比较血中pp65抗原、DNA和IgM抗体检测对肾移植患者巨细胞病毒（CMV）活动性感染的诊断价值,为临床上对CMV感染的诊断和治疗提供参考.方法 收集83位肾移植患者的血标本（共302份）,分离血浆和多型核白细胞,血浆用于CMV-DNA（定性PCR）和IgM抗体（ELISA）检测,白细胞用于pp65抗原血症检测（荧光免疫法）.结果 CMV-DNA阳性率为36.1%,CMV IgM抗体阳性率20.2%,CMV pp65抗原阳性率为38.5%.pp65抗原阳性细胞数与病人的临床症状密切相关.结论 pp65抗原阳性细胞数能反应CMV的数量,可监测早期活动性CMV感染及疗效观察,检测方法特异,灵敏,操作简单,适合临床实验室应用.     

人巨细胞病毒地方分离株的鉴定及其UL83序列分析

目的鉴定从合肥市某医院先天性脑瘫患儿尿标本中分离的4株人巨细胞病毒（HCMV）毒株并对其UL83基因序列进行分析，为HCMV感染的预防及pp65蛋白疫苗的研制提供参考依据。方法应用细胞培养法复苏病毒，间接免疫荧光法检测pp65蛋白表达，并用特异性引物对UL73基因进行PCR，扩增的产物经凝胶纯化后测序；序列结果运用DNAMAN软件和GenBank登录的3株代表性HCMV毒株进行核苷酸和氨基酸序列比对。结果HCMV AD169株与HCMV-1分离株的UL83基因核苷酸及编码氨基酸序列的同源性均为100％，与其余3株的同源性也达99．26％～99．69％；4株HCMV分离株与Merlin株、Towne株在相应基因片段核苷酸及氨基酸的同源性最低的分别为98．95％，99．06％。结论UL83序列分析结果表明，HCMV UL83编码pp65蛋白的优势抗原决定簇氨基酸序列无变化。     

人巨细胞病毒pp65抗原检测在肾移植后HCMV感染状况的研究

目的人巨细胞病毒pp65蛋白（HCMVpp65）抗原血症检测已被认为是预测活动性感染非常好的指标。但临床医生对移植患者此项检查的最佳时机掌握并不十分准确。本文拟探讨HCMVpp65抗原移植患者阳性率、移植术后HCMVpp65抗原检测的最佳时期。方法①回顾性分析100例次HCMVpp65抗原检测，计算阳性率。②对10例HCMVpp65阳性患者，计算初次阳性出现时期例数分布情况。结果①移植患者术后HCMVpp65抗原阳性率为10．0％；②HCMVpp65抗原术后检测出现阳性时期集中在术后第一至三个月，此后极少。结论①肾移植患者术后HCMVpp65抗原阳性率为10．0％。②术后第一至三个月患者易感HCMV，为HCMVpp65抗原高密度检测最佳时期，第四个月至1年可低密度监测。     

糖尿病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性IgM的酶联捕获技术,来分析糖尿病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM(μ链特异性)抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测727例糖尿病患者及230例健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行了比较。结果糖尿病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为81例(11.14%,酶标抗体法)和78例(10.73%,酶标抗原法),与健康组(0.87%)相比存在统计学差异(P<0.05)。酶标抗体法与酶标抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时不存在显著性差异(P>0.05),且不受RF因子的影响。HCMV pp65-IgM与HCMV pp65蛋白表达呈现良好的相关性。结论酶联捕获HCMV pp65特异性IgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

性病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性lgM的酶联捕获技术,并分析性病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM（μ链特异性）抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶（HRP）标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测688例性病患者及450名健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行比较。结果性病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为274例（39.8%,酶标抗体法）和262例（38.1%,酶标抗原法）,与正常对照组（0.89%）存在显著性差异（P〈0.05）。酶标抗体法与酶抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时无显著性差异（P〉0.05）,阳性符合率95.6%,且不受类风湿因子（RF）的影响。结论酶联捕获HCMVpp65特异性lgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

实时定量聚合酶链反应在肾移植后人巨细胞病毒活动性感染的临床应用研究

目的:建立血浆、外周血白细胞HCMV DNA实时定量聚合酶链反应检测方法,评价其监测肾移植后人巨细胞病毒活动性感染的临床应用价值。方法:用重组质粒PQHY-1制作标准曲线;分别用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法,对28例肾移植术后病人采血标本动态检测,并将结果进行比较。结果:实时定量PCR最低可检测出20拷贝/孔的HCMV DNA,且可重复性强(批内及批间误差均<5％),在102～107拷贝/孔的浓度范围时与Q值有很好的线性关系(r=-0.978)。与PP65抗原血症检测结果比较,血浆及外周血白细胞定时定量检测的灵敏度分别为88.5％,94.2％;特异度分别为97.8％,95.4％。HCMV活动性感染时血浆和外周血白细胞HCMV DNA平均含量分别为102.4拷ml和103.2拷贝/106PBL。血浆和外周血白细胞中HCMV DNA阳性检出时间较PP65抗原血症阳性检出时间平均要早1.6和3.8天。结论:实时定量聚合酶链反应检测方法是一种灵敏度高,特异度好的定量检测方法,可用于监测早期HCMV活动性感染。     

器官移植术后HCMV感染的实验诊断及其临床意义

目的　探讨对器官移植术后受者人类巨细胞病毒 (HCMV)感染的早期、快速诊断。方法　以 12 2例器官移植术后患者为研究对象 ,采集移植术后 2～ 12周内外周血 32 8份。利用抗HCMV单克隆抗体 ,建立了免疫组化Envision二步法。检测外周血白细胞中的HCMV抗原。并观察该法在早期诊断活动性HCMV感染中的价值。结果　 32 8份外周血标本中 ,HCMV抗原阳性 135份 (4 1 2 % )。阳性细胞数为 3 0～ 6 8 0个 / 5万白细胞 ,平均 (15 3± 6 8)个 / 5万白细胞。 5 8例患者出现HCMV活动性感染 (4 7 5 % ) ,其中 35例发展为HCMV病。HCMV病患者和无症状HCMV感染者的HCMV阳性细胞数平均分别为 (2 3 0± 13 6 )个 / 5万白细胞和 (15 2± 8 5 )个 / 5万白细胞 ,两者差异具有显著性 (P <0 0 5 )。结论　Envision二步法检测HCMV抗原具有简便 ,快速等优点 ,且能区分潜伏感染和活动性感染 ,其结果与患者的临床症状相关 ,可作为临床对HCMV感染的早期快速诊断 ,为预防及指导HCMV感染的抗病毒治疗提供依据。     

Early diagnosis and monitoring of active HCMV infection in children with syste miclupus erythematosus

Objective To investigate the prevalence and features of active human cytomegalovirus (HCMV ) infection in children with systemic lupus erythematosus (SLE) and evaluate the diagnostic value of the HCMV using antigenemia assay, serum polymerase chain re action (PCR) and serology test. Methods Twenty- one SLE children undergoing immunosuppressive therapy were enrolled in t his study. Immunofluorescence assay, PCR and serology tests were used to deter mine HCMV pp65 and p72 antigens in leukocytes, HCMV DNA in sera, and HCMV specif ic IgM and IgG antibodies, respectively. As a control group, twenty- one immuno competent children with skeletal malformation were involved in this study. Stat istical analysis was performed using Chi- square test or Fisher’s exact test (Sy stat, USA), P values less than 0.05 were considered significant. Results Active HCMV infection was diagnosed in 28.6% (6/21) of SLE patients, with none in the control group; the difference between the two groups was significant (P =0.027). Two out of 6 SLE patients developed active HCMV infection before im munosuppressive therapy and the remaining 4 patients developed SLE after immunos uppressive therapy. Among the 21 SLE children, HCMV pp65 antigenemia was detect ed in 5 patients, p72 antigenemia in 3 patients, serum HCMV DNA in 9 patients, s erum HCMV- specific IgM in 2 patients, and IgG in 19 patients. The sensitivity and specificity for diagnosis of active HCMV infection were 83.3% and 100%, res pectively for pp65 antigenemia; 50% and 100% for p72 antigenemia; 100% and 80% f or serum PCR; 33.3% and 100% for HCMV IgM serology; 50% and 100% for HCMV IgG s erology. Conclusions Compared with the control group, active HCMV infection is much more frequent in SLE children, and can occur before treatment with immunosuppressive agents, b ut most often occur after immunosuppressive therapy. In comparison with the other techniques used in this study, the pp65 antigenemia assay seems to be a b etter method for the early diagnosis and monitoring of active HCMV infection in children with SLE.     

献血者巨细胞病毒感染筛查的初步研究

目的：探讨检测人巨细胞病毒(HCMV)的低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原对健康献血巨细胞病毒感染情况的筛查。方法：对2003年2～7月收集的103份EDTA抗凝外周血标本，用免疫组化方法进行pp65抗原血症检测，同时以ELISA法检测其中的86份血清中的IgM和IgG抗体。结果：103份标本中共有10份pp65抗原阳性，阳性率为9．71％；ELISA法检测86份标本CMV—IgM抗体全部阴性，CMV—IgG抗体56例阳性，阳性率为62％(56／86)，10份pp65抗原阳性的标本中，CMV—IgG阳性9例。结论：pp65抗原是检测CMV感染的一种敏感、特异的方法，而检测CMV—IgM、CMV—IgG不能预测CMV的活动性感染，因此对需要输注全血、成分血的免疫力低下或各种移植病人，应进行CMVpp65抗原的检测。     

肾移植术后巨细胞病毒检测的临床意义

目的　探讨肾移植术后检测巨细胞病毒感染的意义。方法　利用酶联免疫吸附法 (Enzymelinkedimmunosor bentassay ,ELISA)以及聚合酶链反应 (Polymerasechainreaction ,PCR)检测肾移植术后受者血清中的抗 CMV抗体及CMV DNA。结果　检测了 72例肾移植术后的受者抗 CMV抗体及CMV DNA ,抗 CMV抗体及CMV DNA阳性率均明显高于术前(P <0 0 1) ,其中 2 5 %的CMV感染者发展为CMV病。移植术后CMV DNA阳性者发生急性排斥反应的几率明显高于CMV DNA阴性者。结论　检测肾移植受者血清中的抗 CMV抗体及CMV DNA可以协助诊断肾移植受者是否感染CMV以及引起的CMV病 ,对临床治疗肾移植术后CMV病有着重要的意义     

人巨细胞病毒UL137基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行全序列的测序，核实测序结果，拼接出UL137基因编码序列，进行相关分析。结果：经分析获得22株HCMV临床分离株UL137ORF核苷酸序列，核苷酸变异分布于整个编码区，但主要集中在5’端220—290bp处，均为核苷酸碱基替换，无插入及移码突变。在UL137预测编码蛋白氨基酸序列中，新增2个半胱氨酸位点，导致17株临床分离株在71-76位氨基酸出现了N相连豆蔻酰化位点（MYR）的新增，及第90～92位氨基酸硫化cAMP位点的相应缺失。结论：HCMVUL137基因在临床低传代分离株中高度保守，但存在一定的多态性。     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血、尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％。提示ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

聚合酶链反应检测患儿尿标本中的巨细胞病毒DNA

本文建立了聚合酶链反应(PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)方法,探讨了该方法的某些实验条件。用PCR检测24例临床患儿尿标本。证明PCR方法特异、敏感、简便而快速。同科不同属病毒如HSV、EBV等以及人源正常细胞均无假阳性结果:最小检出量可达0.1fg DNA,相当于6个基因拷贝;用水浴箱手控时间即可进行PCR循环,30次循环仅需97min30s;PCR和DNA杂交检测尿标本中HCMV阳性例数分别为20和14例。该结果证明HCMV感染儿童的广泛性和严重性,初步表明儿童肾病综合症与HCMV有关。     

Valganciclovir for pre-emptive therapy of cytomegalovirus viraemia after hematopoietic stem cell transplantation: a prospective multi-center trial

Background Despite its widespread use in the management of HIV-related cytomegalovirus （CMV） infection, there have been surprisingly few reports of the use of valganciclovir （VGC） in the post-allotransplant setting.So far, no multi-center, non-crossover trial data have been available with the use of this drug as the primary pre-emptive.The present study evaluated the efficacy and safety of VGC for preemptive therapy of CMV infection after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation （HSCT）.Methods From January to April 2007, VGC was adopted in eleven centers in mainland China for pre-emptive therapy of CMV infection in consecutive patients undergoing allogeneic HSCT.Allogeneic HSCT recipients were followed weekly via CMV pp65 antigenemia assay or real-time quantitative polymerase chain reaction （PCR） for detection of CMV-DNA.Patients with a positive assay were treated with VGC, 900 mg P.O.twice a day for 14 days followed by 900 mg P.O.once a day for 14 days after a negative result or the CMV-DNA load was lower.Results A total of 54 patients （15 siblings, 28 mismatched related donors, 11 unrelated donors） had a positive assay treated with oral VGC.The seroconversion rate was 89% （48/54） as confirmed by a negative assay; six patients failed oral VGC.No significant toxicity was encountered.No case of CMV disease was diagnosed in the responding patients with a median follow-up of 5.3 months after the drug administration.Conclusion Pre-emptive therapy of CMV viraemia with oral VGC is safe and effective in allogeneic HSCT.     

肾移植受者外周血循环中pp65阳性内皮细胞的新模式

目的：为了观察感染人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus HCMV）的1例女性肾移植外周血中膨大内皮细胞（Cytomegalic endothelial cells,CEC)的一种新模式。方法：本研究运用了HCMV pp65抗原分析法，实时PCR技术、流式细胞分析法等系列技术。结果：发现这一围绕并粘附了许多白细胞的蛋白样物质内，含有几个pp65阳性的CEC。这种蛋白质样物质的成分和功能目前还不清楚。该患者外周血中出现CEC表明其血管有损伤，而且该患者的CD4^ 及CD8^ 淋巴细胞的百分比都超出正常范围。其血浆、外周血白细胞及尿液中的HCMV-DNA都阳性，但该患者并没有明显的HCMV病症状。结论：HCMV感染和CEC形成之间的关系需进一步研究。