月季花水提物对外源性一氧化氮损伤的胰岛细胞的保护作用

目的观察月季花水提物对外源性一氧化氮损伤的胰岛细胞的保护作用。方法采用外源性一氧化氮(NO)作用于离体胰岛细胞5 h,给予不同浓度的月季花水提物,观察细胞存活率、超氧化物岐化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)、NO等指标变化情况。结果外源性一氧化氮作用于离体胰岛细胞后,胰岛细胞存活率下降,SOD活力下降,MDA、NO含量升高,胰岛素分泌功能降低,胞内DNA含量下降。给与不同质量浓度(1、0.1、0.01 g.L-1)的月季花水提物则可减少NO、MDA释放,提高SOD水平,显著提高细胞存活率,提高胰岛素分泌功能量,对由外源性NO导致的DNA含量降低有一定的抑制作用。结论月季花水提物能够提高胰岛细胞的抗氧化能力,对外源性NO造成的胰岛细胞损伤有很好的保护作用。     

L-丙氨酸对INS-1E细胞胰岛素分泌功能的影响

目的:探讨L-丙氨酸对胰岛B细胞株INS-1E细胞分泌胰岛素(INS)的刺激作用及其葡萄糖依赖性。方法:INS-1E细胞经传代培养2d后,在Krebs-Ringer缓冲液中于37°C培养箱预培养30min,再在含相同浓度葡萄糖、不同浓度L-丙氨酸(观察剂量依赖性)和不同浓度葡萄糖、相同浓度L-丙氨酸(观察葡萄糖依赖性)的改良Krebs-Ringer缓冲液培养60min,留取上清液进行胰岛素测定。结果:L-丙氨酸在0.1～20mmol/L范围促进了葡萄糖(16.7mmol/L)诱导的INS-1E细胞的胰岛素分泌,随剂量增大而增强;在1.1～25mmol/L葡萄糖范围内,随着葡萄糖浓度的增加,INS分泌量逐渐增加。在1.1～3.3mmol/L葡萄糖的情况下,10mmol/LL-丙氨酸未显示增加胰岛素分泌的作用;在6.7～25mmol/L葡萄糖范围内,10mmol/LL-丙氨酸显著促进了葡萄糖诱导的胰岛素分泌。结论:在高血糖状态下,随着L-丙氨酸浓度的增加,INS-1E细胞分泌胰岛素量逐渐增加。L-丙氨酸促进INS-1E细胞分泌胰岛素的作用依赖于一定水平的葡萄糖。     

L-赖氨酸对克隆的胰岛β细胞株INS-1E细胞的急性作用

目的:探讨L-赖氨酸刺激INS-1E细胞分泌胰岛素(INS)的作用。方法:INS-1E细胞经传代培养2d后,在Krebs-Ringer缓冲液中37℃培养箱预培养30min,再用含有不同浓度葡萄糖和不同浓度L-赖氨酸的改良Krebs-Ringer缓冲液培养60min,然后留取上清液进行胰岛素测定并用细胞蛋白含量校正胰岛素。结果:在1.1～6.7mmol/L葡萄糖范围内,随着葡萄糖浓度的增加,INS分泌量逐渐增加。L-赖氨酸在0.1～20mmol/L范围促进了葡萄糖刺激的INS-1E细胞的胰岛素分泌,随剂量增大而增强。结论:INS-1E细胞分泌胰岛素随葡萄糖浓度的增加而增加。L-赖氨酸能增加葡萄糖诱导的INS-1E细胞分泌胰岛素的作用。     

α-硫辛酸对高糖环境下大鼠INS-1细胞的保护作用

目的 观察α-硫辛酸对高糖环境下INS-1细胞的抗氧化作用及对胰岛素分泌的影响,探讨α-硫辛酸对胰岛β细胞的保护作用.方法 INS-1细胞分为3组:对照组(11.1 mmol/L葡萄糖处理)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖处理)和观察组(30 mmol/L葡萄糖+200 μmol/L α-硫辛酸处理).分组培养48 h后检测活性氧生成的情况,行葡萄糖刺激胰岛素分泌试验(GSIS)测定胰岛素含量,测定各组氧化应激相关指标,测定核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶l(NQO1) mRNA表达情况.结果 高糖组细胞存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶1(GPX-1)和过氧化氢酶(CAT)含量低于对照组(P＜0.05),活性氧和丙二醛含量高于对照组(P＜0.05).观察组细胞存活率、SOD、GPX-1和CAT含量高于高糖组(P＜0.05),活性氧和丙二醛含量低于高糖组(P＜0.05).高糖组基础胰岛素分泌和GSIS试验胰岛素分泌量以及SOD、GPX-1、CAT、HO-1和NQ01 mRNA表达低于对照组(P＜0.05).观察组基础胰岛素分泌和GSIS试验胰岛素分泌量以及SOD、GPX-1、CAT、Nrf2、HO-1和NQO1mRNA表达高于高糖组(P＜0.05).结论 α-硫辛酸显著降低胰岛β细胞在高糖环境下的氧化损伤,增强胰岛β细胞GSIS的功能,对胰岛β细胞具有保护作用.     

不同浓度的葡萄糖对INS-1细胞cAMP生成与胰岛素分泌的影响

目的了解葡萄糖对INS-1细胞cAMP生成与胰岛素分泌的影响。方法用不同浓度的葡萄糖（2．8、7．5、15mmol／L）刺激INS-1细胞,作用30min后用ELISA方法检测cAMP与胰岛素的变化情况。结果葡萄糖浓度的提高对INS-1细胞cAMP生成与胰岛素分泌有明显的刺激作用（P〈0．05）,且表现出一定的浓度相关性。结论葡萄糖浓度提高能诱导INS-1细胞cAMP生成及促进其胰岛素分泌功能。     

PGF_(2α)对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的影响

目的探讨PGF2α对葡萄糖刺激性胰岛素分泌和[Ca2+]i变化的影响。方法运用放免方法检测不同浓度的PGF2α在不同情况下对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化,并以F luo-3AM为探针,利用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的改变。结果在16.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,0.1、1、5μmol.L-1的PGF2α剂量依赖性的促进了NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌,其中5μmol.L-1时作用最强(P<0.01),而在10μmol.L-1时,PGF2α却抑制了葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05);预先加入0.5 mmol.L-1EGTA后,5μmol.L-1的PGF2α不能促进胰岛素分泌,同样在预先加入n ifed ip ine或EGTA+n ifed ip ine后,PGF2α也无促进胰岛素分泌(P>0.05)。在0、5.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,5μmol.L-1的PGF2α无促进胰岛素分泌作用(P>0.05)。另外,应用5μmol.L-1的PGF2α能够引起β细胞内钙升高(P<0.01),在无钙环境下,PGF2α只引起缓慢的幅度较小的细胞内钙升高,恢复细胞外钙浓度时,β细胞内钙升高(P<0.01)。结论在NIT-1β细胞,一定范围浓度的PGF2α能够促进高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌,可能与PGF2α增加细胞外钙内流有关。     

丹参酮ⅡA对波动性高糖体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤保护作用的机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对波动性高糖诱导人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）损伤后丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、Rho/Rho激酶Ⅰ（ROCKⅠ）mRNA含量影响的机制。方法将HUVEC分为6组,正常对照组的培养基中加入5.50 mmol·L^-1葡萄糖200μL,培养48h;损伤组的培养基中先后加入5.50,20.00 mmol·L^-1葡萄糖200μL,培养48h;丹参酮ⅡA低、中、高浓度组在损伤组的基础上,加入10.00,30.00,50.00μg·mL^-1丹参酮ⅡA 200μL,培养48 h;阳性对照组在损伤组的基础上,加入100.00 mg·L^-1维生素C 200μL,培养48 h。比较6组细胞的MDA、SOD、NO、NOS、ROCKⅠmRNA等指标。结果正常对照组、丹参酮ⅡA低、中、高浓度组及阳性对照组的SOD、NO、NOS含量均较损伤组增高,MDA及ROCKⅠmRNA含量均较损伤组降低,但除丹参酮ⅡA低浓度组外,其余差异均有统计学意义（P<0.05）,其中上述指标以丹参酮ⅡA高浓度组最为明显（P<0.05）。结论丹参酮ⅡA对波动性高糖体外诱导的HUVEC损伤有保护作用,可增强其SOD、NO、NOS活性、降低MDA及ROCKⅠmRNA表达,并呈现一定的浓度依赖,其作用机制可能与清除活性氧、降低脂质过氧化、提高内皮细胞抗氧化酶体系的活力,通过Rho/Rho激酶系统抑制NOS表达,进而影响NO分泌等有关。     

津力达联合通心络对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞损伤干预作用及机制研究

目的研究津力达联合通心络对高糖诱导胰岛微血管内皮细胞(MS-1)损伤的干预作用,并初步探讨其机制。方法通过MTS法检测细胞存活率筛选药物作用浓度;将细胞分为正常组(Normal)、模型组(Model)、津力达组(JLD)、通心络组(TXL)及津力达+通心络组(JLD+TXL),运用高糖(50 mmol·L-1)培养基建立损伤模型并给予药物干预,MTS法分别检测药物干预48 h、1周、2周后细胞存活率,测定给药48 h细胞上清中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,流式细胞仪检测细胞活性氧簇(ROS)水平。结果首先确定JLD 200mg·L-1、TXL 100 mg·L-1作为给药浓度。与模型组比较,给药组升高48 h、1周、2周细胞存活率及细胞上清中NO含量(P<0.05,P<0.01),JLD、JLD+TXL组细胞上清液ET-1含量降低(P<0.05,P<0.01),JLD组细胞上清液SOD含量升高(P<0.05),JLD+TXL组细胞上清液MDA含量降低(P<0.05);给药组细胞内ROS水平均降低(P<0.05,P<0.01)。结论津力达联合通心络能够改善高糖诱导MS-1细胞内皮功能损伤,并通过减轻氧化应激损伤发挥细胞保护作用。     

山豆根多次给药肝毒性机制探讨

目的 研究山豆根不同组分多次给药致小鼠肝脏毒性与氧化损伤的相关性.方法 连续7天给小鼠灌胃不同剂量的山豆根水提、醇提组分,分别于给药后第1、3、7天检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 山豆根水提、醇提组分可导致血中SOD、GSH-Px活性下降,GSH含量下降,NOS活性上升,MDA、NO含量增加.上述变化随剂量增加、给药时间的延长而逐渐加重.结论 连续多次给予山豆根水提组分、醇提组分导致小鼠肝毒性损伤的途径与过氧化损伤机制有关.     

白藜芦醇苷体外对过氧化氢导致小鼠肝细胞损伤的保护作用

目的　观察中药虎杖的活性成分白藜芦醇苷对过氧化氢 (H2 O2 )所致肝细胞损伤的影响。方法　用邻苯三酚自氧化法测过氧化物歧化酶 ,用硫代巴比妥酸 (TBA)法测丙二醛 (MDA)含量 ,用改良Hafeman方法测还原谷胱甘肽含量 ,用 5 ,5’ 二巯基 2 ,2’ 二硝基苯甲酸 (DTNB)法测谷胱甘肽过氧化物酶活性。谷丙转氨酶 (ALT)、一氧化氮 (NO)和一氧化氮合酶 (NOS)采用测试药盒测定。结果　白藜芦醇苷系列浓度 (0 0 5 ,0 1,0 5 ,1,2 ,4mmol·L-1)作用肝细胞后 ,能显著降低H2 O2 引起的NO和MDA水平升高 ,抑制NOS活性 ,升高SOD和GSH px活性 ,减少GSH消耗 ,明显减少了H2 O2 导致的肝细胞悬液中ALT浓度增高。结论　白藜芦醇苷在一定浓度范围内对H2 O2 所致的小鼠肝细胞氧化损伤具有保护作用。     

AMPK活化对INS-1细胞胰岛素释放的影响

目的研究AMPK活化对INS-1细胞胰岛素释放的作用及其可能机制。方法体外培养INS-1细胞株,观察不同浓度(0.2,0.5和1.0mmol·L-1)AICAR(AMPK激动剂)作用不同时相点(8,12和24h)对细胞内胰岛素含量及高糖刺激的胰岛素释放的影响;AICAR(0.5mmol·L-1)与Compound C(10μmol·L-1,AMPK阻断剂)单独或共同作用INS-1细胞8h,采用两种PCR(RT-PCR和实时定量PCR)方法检测PPARα基因转录水平的变化,免疫沉淀检测PPARα蛋白表达。结果与正常对照组比较,AICAR(0.2,0.5和1mmol·L-1)作用8,12和24h,均抑制INS-1细胞高糖刺激的胰岛素释放及细胞内胰岛素含量。同时,AICAR诱发的AMPK活化能增强PPARα mRNA和蛋白水平的表达。结论AICAR诱导的AMPK活化可能通过调节PPARα表达抑制INS-1细胞高糖刺激的胰岛素释放。     

二氢吡啶类钙拮抗剂对多柔比星肾毒性的影响

目的观察二氢吡啶类钙拮抗剂对多柔比星(Dox)肾毒性的影响。方法Dox单次6.5 m.gkg-1尾静脉注射诱导大鼠肾损伤,造模后次日大鼠分别ig硝苯地平15 m.gkg-1.d-1,尼群地平10 m.gkg-1.d-1,氨氯地平5 m.gkg-1.d-1,连续30 d,于给药后d 10,20和30收集各组大鼠24 h尿液测尿蛋白含量,于末次给药4 h后处死大鼠,测血清尿素氮和肌酐含量,测肾皮质还原型谷胱甘肽(GSH),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)含量及谷胱甘肽-S-转移酶(GST),过氧化物歧化酶(SOD),一氧化氮合酶(NOS)活性。结果硝苯地平组大鼠于给药d 10和d 20对Dox肾毒性的尿蛋白有增加作用,给药d 30时,对尿蛋白,血清尿素氮和肌酐均无明显影响,对肾组织GSH,MDA,NO含量及GST,SOD,NOS活性也无明显改变;尼群地平组大鼠于给药d 10,20和30时,对Dox肾毒性的尿蛋白及血清尿素氮和肌酐含量均有升高作用,并明显增加肾组织MDA,NO含量及NOS活性,显著降低GSH含量及GST,SOD活性;氨氯地平对Dox所致的尿蛋白,血清尿素氮和肌酐含量的升高具有降低作用,并明显降低肾组织MDA,NO含量及NOS活性,显著增加GSH含量及GST,SOD活性。结论硝苯地平对Dox肾毒性无明显影响,尼群地平则有加重作用,氨氯地平对Dox肾毒性具有保护作用。     

槲皮素对高同型半胱氨酸血症家兔血管内皮细胞的保护作用

目的　评估槲皮素对高同型半胱氨酸血症家兔血管内皮细胞的影响。方法　制造家兔高同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞模型 ,同时灌胃给予槲皮素 5 0、10 0和 2 0 0mg·kg-1,30d后采血进行循环内皮细胞计数 ,测定血清MDA、SOD、NO和血浆ET ,取胸主动脉作血管反应性测定 ,并进行组织学检查。结果　与损伤模型组相比 ,槲皮素给药组循环内皮细胞降低 ,MDA、ET水平降低 ,而NO和SOD水平升高 ,对ACh的内皮依赖性舒张反应趋近正常 ,对NTG的内皮非依赖性舒张反应无影响 ,组织学检查也证实槲皮素有效地对抗高同型半胱氨酸造成的血管内皮细胞损伤。结论　槲皮素对高同型半胱氨酸损伤家兔血管内皮细胞有保护作用。     

肉苁蓉多糖的巨噬细胞活化作用

目的观察肉苁蓉多糖(CDPS)对巨噬细胞的活化作用。方法采用中性红法测定吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。结果CDPS在6.25～50mg.L-1剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.8～100mg.L-1剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.56～7.2mg.L-1或3.6～10mg.L-1范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。结论CDPS可明显提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。肉苁蓉免疫增强作用可能与此有关。     

人参皂苷Rb_1与Rg_1对肾小管细胞缺氧复氧损伤模型的影响

目的:探讨人参皂苷的2种单体成分Rb1、Rg1在肾小管细胞缺氧复氧(HRO)损伤模型中的作用及机制。方法:将大鼠肾小管上皮细胞分为对照组、HRO组、Rb1+HRO组和Rg1+HRO组。除对照组外,其余各组给药同时缺氧复氧培养36h后分别检测肾小管细胞增殖活性、增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达情况、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:人参皂苷Rb1、Rg1可促进HRO性肾小管细胞增殖(P<0.01),增强细胞中PCNA阳性表达(P<0.05),减少肾小管细胞MDA生成及LDH释放,增强SOD活性。结论:人参皂苷Rb1和Rg1对HRO性肾小管细胞损伤模型具有保护作用。     

二苯乙烯苷对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对ox-LDL诱导的U937细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达的影响,探讨TSG抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法体外培养经PMA处理过的U937细胞,在给予ox-LDL刺激的同时给予不同浓度TSG干预,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞培养液中SOD活力,TBA法测定培养液中MDA含量,蛋白免疫印迹法分析观察各组细胞ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应法分析观察各组细胞ICAM-1和VCAM-1的基因表达。结果模型组细胞液总SOD活力较对照组明显降低,TSG高剂量及阳性对照组总SOD活力较模型组明显升高(P<0.05);模型组细胞液MDA水平较对照组明显升高,TSG高中剂量及阳性对照组较模型组明显升高(P<0.05)。蛋白免疫印迹分析显示,模型组ICAM-1、VCAM-1及VEGF的蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);TSG高剂量和辛伐他汀能明显降低ICAM-1、VCAM-1及VEGF表达(P<0.05)。逆转录聚合酶链反应分析显示,模型组细胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平较正常组明显升高(P<0.01);TSG高剂量和辛伐他汀较模型组能明显降低ICAM-1、VCAM-1mRNA水平(P<0.01)。结论TSG具有抗氧化、抑制单核巨噬细胞黏附分子分泌作用;其作用可能与其抗动脉粥样硬化有关。     

前列腺素E_1预处理对异丙肾上腺素性心肌损伤的保护作用

目的　探讨前列腺素E1(PGE1)预处理对急性心肌梗塞的早期和延迟保护作用。方法　ivPGE1(2 5mg·kg-1和15 0mg·kg-1)对大鼠进行预处理 ,分别于预处理后 2 0min或 2 4hip异内肾上腺素 (80mg·kg-1)造成急性心肌梗塞 ,于ip异丙肾上腺素后 2 4h取出心脏、匀浆 ,测定其丙二醛(MDA)含量 ,谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性 ,总超氧化物歧化酶 (T SOD)和锰 超氧化物歧化酶 (Mn SOD)活性。结果　心肌梗塞模型组心肌MDA含量明显上升 ,GSH Px活性降低 ,T SOD和Mn SOD活性增高。与模型组比较 ,两剂量PGE1预处理后 2 0min及 2 4h的各组均明显降低梗塞心肌的MDA含量 (P <0 0 1)和T SOD、Mn SOD活性 (均P<0 0 1) ,提高GSH Px活性 (P <0 0 1)。结论　前列腺素E1预处理具有预适应性早期和延迟心肌保护作用。     

低浓度亚硝酸钠预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨低剂量NaNO2预处理对乙醇损伤PC12细胞的保护作用。方法采用400 mmol.L-1乙醇处理2 h制作PC12细胞乙醇损伤模型。细胞增殖指标采用MTT、活细胞计数法;细胞凋亡检测采用流式细胞术和Hoechst 33258/PI活细胞染色法;比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量。Western blot检测相关蛋白表达。结果用0.14 mmol.L-1 NaNO2预处理细胞24 h,再用400 mmol.L-1乙醇作用2 h,与单纯乙醇处理组相比,细胞凋亡率明显下降;SOD、CAT酶活性和GSH-Px含量升高,MDA含量下降;Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量降低,Bcl-2和HIF-1α蛋白表达量升高;一氧化氮清除剂c-PTIO可以部分逆转NaNO2的这些作用。结论低剂量NaNO2预处理能够提高PC12细胞抗氧化水平,拮抗乙醇诱导的细胞凋亡,机制与亚硝酸盐还原为NO和HIF-1α的表达增加有关。