粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对球囊损伤内膜修复的影响

目的建立兔髂动脉球囊损伤模型,观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)对损伤内膜修复的影响。方法健康雄性新西兰大白兔24只随机分为GM CSF组和对照组。GM CSF组皮下注射GM CSF10μg·kg1·d1,对照组皮下注射同等量生理盐水。7d后球囊扩张损伤髂动脉。4周后提取损伤动脉标本,观察内皮修复、内膜增生情况并测定病理形态学参数。结果术后4周病理组织学见GM CSF组内膜增生程度明显轻于对照组,新生内膜中血管平滑肌细胞和纤维组织明显少于对照组,内皮较完整、光滑,管腔狭窄程度较轻。形态学参数见GM CSF组的管腔面积明显大于对照组(1.27mm2±0.31mm2vs0.92mm2±0.24mm2),新生内膜面积与内膜增生百分比明显小于对照组(0.85mm2±0.34mm2vs1.18mm2±0.38mm2;40%±7%vs55%±6%)。结论GM CSF能促进损伤内膜修复,减少内膜增生,降低再狭窄率。     

粒细胞集落刺激因子对内皮前体细胞的动员

目的：研究重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）在不同时相对内皮前体细胞（EPC）的动员作用。方法：将16只体重为2-2．5kg的雄性新西兰兔随机分为两组，即正常对照组和G-CSF组，每组8只。用药后1、2、3和4周测量外周血EPC含量。采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC），将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养瓶、板中，培养3d收集贴壁细胞，用流式细胞仪计数EPC，PE-CD34／FITC-CD133双阳性细胞为EPC；荧光显微镜鉴定FITC-UEA-1／Dil-acLDL双染色阳性细胞为EPC。用药第3周测血清-氧化氮（NO）、血脂。结果：用药1、2、3和4周两组外周血EPC曲线：正常对照组为一低水平基线；G-CSF组持续稳定于高水平，两组间差异有显著性意义（P〈0．01）。第3周检测血清NO及血脂，两组血脂均在正常范围内，NO亦无显著性差异。结论：G-CSF对EPC有显著而持续的动员作用，该作用与血清NO无关。     

G-CSF对动脉粥样硬化兔颈总动脉球囊损伤后内皮修复的影响

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的骨髓动员作用能否促进动脉粥样硬化性血管内膜损伤后的再内皮化过程,来预防损伤血管再狭窄.方法将35只新西兰雌性大白兔,随机分为正常饲养组（对照组）5只;高脂饲料喂养组30只在喂养10周后随机抽取20只行右颈总动脉囊扩张损伤,术后随机将其分为：G-CSF干预＋损伤组（n=10）,予静脉注射G-CSF50μg/d,连续7d,NS＋损伤组（n=10）,术后静脉注射生理盐水2mL/d,连续7d;第12周处死所有试验动物,取右颈总动脉、胸主动脉行HE染色观察血管粥样硬化病变评价模型制作情况,弹力纤维染色计算内膜（）I、中膜面积（M）比值I/M以评价内膜增生程度;伊文氏蓝染色并计算内皮再生面积（An）、内皮总面积（A）t比值An/At以评价再内皮化率;CD31免疫组化染色检测损伤局部CD31细胞表达的阳性率以评价G-CSF对EPCs动员效果以及EPCs对受损内皮的修复情况.结果 （1）高脂饲料喂养12周后可形成典型的动脉粥样硬化斑块.（2）G-CSF＋损伤组与NS＋损伤组相比I/M值降低,差异有统计学意义（P〈0.01）.（3）An/At明显升高,有统计学意义（P〈0.01）.（4）免疫组织化学染色显示颈动脉内皮CD31细胞表达阳性率G-CSF＋损伤组高于NS＋损伤组,有统计学意义（P〈0.01）.结论 G-CSF可以动员骨髓EPCs到外周血并迁移到血管内膜受损部位,促进再内皮化,抑制内膜增生,有效预防血管损伤后再狭窄的发生。     

普伐他汀和粒细胞集落刺激因子对心肌缺血小鼠内皮前体细胞动员效果的比较

目的 比较普伐他汀与粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌缺血小鼠内皮前体细胞的动员效果并初步探讨其动员机制.方法 96只雄性昆明小鼠,均分为四组(每组n=24),分别为空白对照组、盐水组、普伐他汀组及G-CSF组.空白对照组不做任何处理,其余三组采用腹腔注射异丙肾上腺素制作小鼠药物性心肌缺血模型后,分别注射生理盐水、普伐他汀和G-CSF5天.每组均于用药后第1、5、7、9天随机抽取6只小鼠,经球后静脉取血测定内皮前体细胞的数目以及血管内皮生长因子的浓度并对两者进行相关性分析.结果 与对照组相比,盐水组第1、5、7天内皮前体细胞的数目略有增加:与盐水组相比,普伐他汀组第5、7、9天内皮前体细胞水平有明显增高,而G-CSF组较普伐他汀组内皮前体细胞数目的 增加在第5、7、9天更为显著;外周血VEGF的浓度盐水组、普伐他汀组及G-CSF组较对照组在第5、7、9天均有增加,其浓度增加由大至小的顺序为G-CSF组>普伐他汀组>盐水组>对照组;其中G-CSF动员内皮前体细胞的作用与血管内皮生长因子的浓度成中度正相关而普伐他汀动员内皮前体细胞的作用与血管内皮生长因子的浓度无相关性.结论 心肌缺血能够诱导内皮前体细胞的动员增加血管内皮生长因子的释放,普伐他汀与G-CSF均能增强缺血后内皮前体细胞的动员并促进血管内皮生长因子的释放,G-CSF对内皮前体细胞的动员作用更强且动员机制与血管内皮生长因子的释放有关.

Abstract：

Objective To compare the effects of pravastatin and granulocyto-colony stimulating factor (G-CSF) in mobilizing endothelial progenitor cells (EPCs) in mice with myocardial ischemia, and explore the possible mechanism of EPC mobilization. Methods Ninety-six mice were randomly divided into 4 groups (n=24), namely the control group, saline group,pravastatin group and G-CSF group. In the latter 3 groups, myocardial ischemia was induced with isoprenine followed by intraperitoneal injections of normal saline, pravastatin and G-CSF for 5 consecutive days. On days 1, 5, 7, and 9 after establishment of myocardial ischemia, 6 mice from each group were randomly selected for measurement of the EPC count and serum concentrations of vascular endothelial growth factor (VEGF). Results Compared with the control group, EPC count increased slightly in the saline group on days 1,5, and 7. EPC count increased significantly in pravastatin group on days 5, 7 and 9 in comparison with that of the saline group, and the increment was more obvious in G-CSF group. In comparison with the control group, the concentrations of VEGF augmented on days 5, 7 and 9 in the order of saline group, pravastatin group and G-CSF group. The effect of G-CSF on EPC mobilization was positively correlated to VEGF concentrations. Conclusions Myocardial ischemia induces EPC mobilization and VEGF release. Both Pravastatin and G-CSF can enhance EPC mobilization from the bone marrow and VEGF release, but G-CSF produces a stronger effect on EPC mobilization in association of VEGF release.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠心肌梗死后血管再生及心功能的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子（pCSF）对大鼠心肌梗死后血管再生及心功能的影响。方法实验组：为G-CSF注射组,于结扎大鼠左前降支动脉前24h及术后6天给予G-CSF10μg／（kg·d）皮下注射;对照组：为生理盐水注射组,皮下注射同等剂量的生理盐水。体外分离培养大鼠EPCs,免疫荧光法检测其FITC—UEA-1及Dil—acLDL的表达。心梗后4周,心脏超声检查心功能,处死大鼠,留取心脏标本作HE病理染色,并对梗死区心肌组织进行毛细血管密度测定。另设假手术组10只为正常对照。结果培养获得EPCs,其表型为Dil—acLDLq-、FITc—UEA-1＋,实验组EPCs密度明显高于对照组。心梗后4周,实验组大鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率较对照组明显提高。实验组梗死心肌处血管密度较对照组明显增高。结论①用密度梯度离心法从大鼠外周血MNC中可成功地培养出EPCs,G-CSF可促进EPCs的动员。②GCSF能促进梗死后心肌血管新生,改善心功能。     

粒细胞集落刺激因子作用研究进展

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)主要用于各种原因引起的粒细胞减少症。近年的研究发现,G-CSF具有免疫调节、血管保护、促进血管发生、抗动脉粥样硬化等作用。本文主要综述了G-CSF在糖尿病及并发症领域应用研究进展,其作用机制涉及调节中性粒细胞的功能、内皮祖细胞的动员、影响树突状细胞和T细胞的功能等。     

粒细胞集落刺激因子促进大鼠脑出血后的细胞增殖

目的研究粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对脑出血神经保护作用的机制。方法胶原酶定位注射构建脑出血大鼠模型,然后给予G-CSF腹腔注射连续5天,造模2周后通过免疫组化检测出血灶周边组织PCNA阳性细胞与GFAP阳性细胞的表达情况。结果给予G-CSF的大鼠PCNA阳性细胞与GFAP阳性细胞计数均明显高于未给药组。结论G-CSF能够促进大鼠脑出血后细胞（尤其是星形胶质细胞）的增殖,该作用可能参与其对脑出血大鼠的神经保护作用。     

粒细胞集落刺激因子对高脂喂养兔动脉粥样硬化形成的影响及机制初探

目的：观察粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对动脉粥样硬化形成的影响，并对其机制进行初步探讨，为临床提供参考。方法将30只新西兰雄性健康大白兔随机分为对照组6只，高脂喂养组、普通及高脂喂养＋G-CSF组各8只，4组动物每周采血，监测总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）等各项血脂指标动态变化。取材后用苏丹Ⅲ染色观察脂肪斑块面积，苏木精-伊红（HE）染色观察内膜厚度等形态学变化。免疫组化观察基质金属蛋白酶（MMP）9及其抑制物（TIMP-2）的表达。并用Leica QwinV3图像分析系统计算阳性率等相关指标。扫描电镜观察内皮及脂肪细胞的组间差异。结果高脂喂养能使TC、LDL等血脂水平上升，6周后高峰，与对照相比，P＜0.05，但8周后就趋于稳定。加G-CSF使血脂高峰前移，使TC、LDL等提前2周就与对照组出现统计差异（P＜0.05），并有双峰样改变，但对TG同样无影响。普通喂养＋G-CSF能使血脂有所波动，但尚不足以达到显著差异。病理分析发现G-CSF能使斑块面积、内膜厚度、MMP/TIMP表达均增加，但后二者并未达到统计学差异（P＞0.05）。扫描电镜支持上述发现。结论 G-CSF对血脂存在一定影响，且以TC、LDL为主，对TG作用不大。因此它可使动脉粥样硬化恶化，具体表现为斑块面积的扩大，内膜厚度增加，机制可能与其对基质的影响有关，但尚需进步研究证实。     

粒细胞集落刺激因子对心肌梗死患者PCI术后心功能及内皮功能的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后心功能及内皮功能的影响。方法:收集2012年8月~2016年1月收治的急性心肌梗死患者76例,按照随机平行对照法分为观察组、对照组各38例。对照组接受PCI术治疗,观察组在PCI术后加入G-CSF治疗(5μg/kg,皮下注射,3次/d,持续5d)。治疗后2周,采用彩色多普勒超声仪检测心功能参数,采用放射免疫法检测血清心功能指标,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清内皮功能指标。结果:治疗前,两组血清心功能指标及内皮功能指标含量的差异无统计学意义。治疗后2周,观察组心输出量(CO)、每搏量(SV)水平显著高于对照组,左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)水平低于对照组;观察组血清中心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)含量低于对照组,内皮素-1(ET-1)含量低于对照组,一氧化氮(NO)含量高于对照组。结论:G-CSF可增强心肌梗死患者的PCI术后心功能,同时优化血管内皮功能。     

粒细胞集落刺激因子作用后骨髓象分析

目的总结粒细胞集落刺激因子（G—CSF）作用后骨髓象变化特征，以减少白血病误诊的发生。方法对42例多种原因导致的粒细胞缺乏症（粒缺）患者G-CSF使用前及使用5～7d进行骨髓象分析，观察其形态变化特征，并对粒系相对值进行统计比较。结果使用G—CSF5～7d后骨髓原始、早幼粒细胞比例明显增高，和使用前比较差异有显著统计学意义（P〈0．01），且形态和相应阶段正常形态变化较大，有其独特改变。结论G-CSF使用后原始、早幼粒细胞比例明显增高，部份病例甚至超过20％，易误诊为白血病；骨髓检验人员要熟悉并掌握G-CSF使用后骨髓象特征及变化规律，以减少白血病误诊的发生。     

球囊扩张术建立幼兔动脉狭窄模型的可行性研究

 目的 建立幼兔髂动脉狭窄模型。方法：新西兰大白兔70只,(60±15)d,随机分为手术组、假手术组、正常组,手术组采用球囊扩张损伤髂动脉内皮,观察其术后管腔面积,内、中膜面积变化情况,并计算其术后狭窄率。结果：与正常组相比,手术组术后4周狭窄率高达80.24%。术后内膜、中膜面积明显高于正常组（P＜0.001）。假手术组与正常组相比无显著统计学意义（P﹥0.05）。结论：球囊损伤可用于建立幼兔髂动脉狭窄模型,为进一步的临床研究提供实验基础。     

球囊损伤致兔股动脉血栓形成模型

目的 :观察兔股动脉缩窄与压力变化的关系 ,探讨用球囊损伤的方法建立兔股动脉血栓形成模型。方法 :新西兰兔 10只 ,用细尼龙线逐渐缩窄兔右股动脉至完全闭塞 ,记录缩窄程度与股动脉压力的变化。继之经右股动脉置入 2 .5mm×2 0 .0mm球囊剥脱血管内皮 ,抽出球囊后监测股动脉压力变化。球囊损伤前后取血检测血小板计数。对部分动物在血栓形成前后行股动脉造影。最后取受损节段血管作病理检查。结果 :①兔右侧股动脉缩窄 90 %时 ,其收缩压、脉压显著下降 ;进一步缩窄达 10 0 %时 ,脉压降为 0 ,同时舒张压、平均压也显著下降。②右侧股动脉收缩压、脉压在球囊损伤后 5min即显著下降 ;至损伤后 90min ,脉压降至 0 ,同时舒张压、平均压亦显著下降。③动脉造影及病理组织检查均证实球囊损伤后股动脉血栓形成 ,管腔完全闭塞。④球囊损伤后 2h血小板计数显著下降。结论 :球囊损伤可制成稳定、可靠的兔股动脉血栓形成模型 ,这在进行各种溶栓剂的药代动力学和药效动力学研究时具有实用价值。     

Transplantation of Human Umbilical Cord-Derived Endothelial Progenitor Cells Promote Reendothelialization of the Injured Carotid Artery after Balloon Injury in New Zealand White Rabbits

Background The aim of this study was to investigate the effect of transplantation of human umbilical cord blood endothelial progenitor cells on injured arteries.   

Methods Umbilical cord blood mononuclear cells were obtained from post-partum lying-in women, and EPCs were isolated, cultured, expanded and identified by immunofluorescence. The carotid arterial endothelium of New Zealand white rabbits was injured by dilatation with a 3F balloon; and the EPCs were injected into the lumen of the injured artery in the transplanted group (n=16), while an equal volume of PBS was injected in the control group after balloon injury (n=16). The animals were sacrificed after either 2 or 4 weeks, and the grafted cells were indentified by double immunofluorescence staining with human nuclear antigen (HNA) and CD31 antibodies. Arterial cross sections were analyzed by pathology, immunohistochemisty and morphometry to evaluate the reparative effects of EPCs. PCNA and TGF-β1 mRNA expression were detected by RT-PCR.

Results Fluorescence-labeled EPCs were found in the neointima; the neointimal area and the neointimal/medial area ratio were significantly lower in the transplanted than in the control group (P<0.05). VWF immunohistostaining showed more VWF-positive cells in the transplanted animals than the control ones (8.75±2.92 vs 4.50±1.77, P＜0.05). Compared with the control group, the transplanted group had lower expression of PCNA mRNA (0.67±0.11 vs 1.25±0.40, P＜0.01) and higher expression of TGF-β1 mRNA (1.10±0.21 vs 0.82±0.07, P＜0.05).

Conclusion EPCs derived from human umbilical cord blood were successfully transplanted into injured vessels. The transplanted EPCs inhibited neointimal hyperplasia and promoted vascular reendothelialization.

     

CD34抗体包被支架植入预防兔动脉支架内狭窄的研究

目的探讨CD34抗体包被支架植入预防兔动脉支架内狭窄的效果。方法经颈动脉人路建立兔髂动脉损伤模型，损伤后即刻于右侧植入普通支架，左侧植入抗体支架。45d取样6只，观察CD34抗体包被支架的效果、支架内最狭窄处管腔的百分率及CD34抗体包被支架内新生内膜面积的百分率。结果荧光显微镜下观察结果显示，抗体包被均匀密集。实验组支架内最狭窄处管腔的百分率为（16．13±3．93）％，明显低于对照组[（47．03土11．89）％]（P〈0．05）。实验组CD34抗体包被支架内新生内膜面积的百分率为（49．64土6．40）％，明显低于对照组[（66．83±6．00）％]（P〈0．05）。结论CD34抗体包被支架能够有效减轻受损动脉支架内狭窄的发生。     

姜黄素诱导的平滑肌细胞凋亡在球囊损伤后内膜增生中的作用

目的:观察姜黄素对家兔髂动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响。方法:新西兰大白兔30只,随机分为3组:对照(C1)组、阿托伐他汀(G2)组、姜黄素(G3)组,每组各10只。所有实验组在高脂饮食基础上均予灌胃给药,其中G3组予姜黄素100mg/(kg·d),G2组予阿托伐他汀2.5mg/(kg·d),G1组予生理盐水5ml/d。1周后制作髂动脉球囊损伤模型,5周后取目的血管,经苏木精-伊红、弹力纤维染色观察内膜增生情况,同时电镜观察细胞凋亡,并检测凋亡基因p53、Caspase3。结果:病理切片图像分析显示内膜增生程度由强到弱为:G1组>G2组>G3组。在G3组p53表达明显增高,其他两组无差异(P>0.05)。Caspase3表达以G3组最高。电镜观察G3组平滑肌细胞可呈早中期凋亡现象。结论:姜黄素具有诱导血管平滑肌细胞凋亡作用,在一定程度上抑制血管内膜增生。     

左旋精氨酸对家兔髂动脉球囊损伤后PCNA的表达的影响

目的　探讨动脉球囊损伤后 ,左旋精氨酸抑制内膜增生的机制。方法　 36只健康家兔随机分成球囊损伤组(A组 ,n =12 )、球囊损伤 +L -Arg组 (B组 ,n =12 )、假手术组 (S组 ,n =12 ) ;每组再随机分成术后 7天处死和术后 2 8天处死两个亚组 (n =6 )。A、B组行右髂动脉球囊损伤术。B组从术前 3天至处死时经静脉注射L -Arg 95 0mg·Kg-1·d-1。组织切片行PCNA免疫组化染色 ,行形态学观察及形态计量分析。结果　A、B、S组皆有PCNA表达 ,A7组较B7、S组PCNA阳性细胞数、阳性百分率、增殖指数显著增高 (P <0 .0 5 )。结论　应用L -Arg可抑制动脉球囊损伤后内膜的增生 ,其作用的机制可能与L -Arg能抑制动脉壁细胞PCNA表达有关。     

气囊导管法与尼龙丝襻法致大鼠颈总动脉内膜增厚模型对比研究

用气囊导管法和尼龙丝襻法分别制成大鼠颈总动脉内膜增厚模型。对比观察动脉壁各层的动脉硬化性改变，特别是中、内膜平滑肌增殖、游走方面的表现；观察到不同程度的动脉中膜平滑肌细胞损伤引起的动脉硬化性病变程度有显著差异。     

G—CSF对颈动脉狭窄模型兔内皮祖细胞的动员作用

目的观察粒细胞集落刺激因子（Granuloeyte Colony Stimulating Factor,G—CSF）对动脉狭窄模型兔外周血内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells．EPCs）数量的影响。方法以颈动脉狭窄模型兔为研究对象,随机分为两组,G—CSF注射组（n=14）和对照组（n=10）,两组动物分别予以25μg/kg·d的G—CSF和等量的生理盐水腹部皮下注射,连续注射7d后,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞。将其接种在人纤维连接蛋白包被培养板,培养7天后贴壁细胞进行化学分析。激光共聚焦显微镜鉴定Dil—acLDL和HTC—UEA-1双染色阳性细胞为正在分化的EPCs。用倒置荧光显微镜进行细胞计数。结果G—CSF组外周血内皮祖细胞比对照组明显增多,两组差异有统计学意义（t=4．815P〈0．001）。结论短期应用G—CSF对颈动脉狭窄模型兔外周血内皮祖细胞有动员作用。     

多聚乙酰亚胺介导CNP基因对兔髂动脉球囊成形术后内膜增生的影响

目的观察局部转染C型利钠肽基因（CNP）对血管内膜增生的影响,探讨CNP在防治球囊成形术后再狭窄中的作用.方法构建兔髂动脉粥样硬化模型,将多聚乙酰亚胺-pcDNA3.1/hCNP包被球囊转染髂动脉,分别用RT-PCR、免疫组化、Western blot等方法检测pcDNA3.1/hCNP在动脉壁中的表达,弹力纤维染色法检测球囊成形术后内膜增生等指标.结果 pcDNA3.1/hCNP在兔髂动脉中能高效表达,转染组血管内膜增生程度明显降低.结论 CNP基因转染能明显抑制血管内膜增生,在血管再狭窄防治中可能具有应用价值.