槲皮黄酮对脂多糖诱导BV-2小胶质细胞损伤的保护机制研究

目的：探讨槲皮黄酮对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小神经胶质细胞炎症反应的抑制作用及可能作用的机制。方法：体外培养BV-2细胞,采用LPS刺激细胞诱导炎症模型,将细胞分为正常对照组、炎症模型组和槲皮黄酮低（10 μg/ml）、中（20 μg/ml）、高（40 μg/ml）剂量药物组,CCK8实验检测槲皮黄酮对BV-2细胞增殖情况的影响,ELISA实验检测细胞上清中TNF-α和IL-6的表达量,免疫印迹实验检测iNOS、COX-2、Traf6、p65及p-p65蛋白的表达水平。结果：槲皮黄酮可显著促进BV-2细胞的增殖,并明显降低细胞的炎症反应。主要表现在槲皮黄酮可明显抑制TNF-α和IL-6的释放,还可显著抑制炎症相关蛋白iNOS及COX-2的表达,并且还可以抑制Traf6/p65信号通路的活化。结论：槲皮黄酮可明显抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制Traf6/p65信号通路的活化实现的。     

槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其作用机制。方法体外原代培养小鼠皮层神经元细胞,氧糖剥夺方法构建原代皮层神经元细胞的局部缺血/再灌注损伤,低(10μg/mL)、中(20μg/mL)、高(40μg/mL)剂量槲皮黄酮治疗24 h后,采用CCK-8试剂盒检测神经元细胞的相对存活率;免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白及Traf6/TAK1信号通路蛋白表达水平;Traf6质粒及空白质粒瞬时转染神经元细胞,使Traf6蛋白在细胞中发生过表达,然后利用槲皮黄酮处理细胞,观察凋亡蛋白及Traf6/TAK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果低、中、高剂量槲皮黄酮处理后细胞相对存活率显著增加(P<0.05),表现出浓度依赖性;促凋亡蛋白Bax、Traf6及p-TAK1表达显著降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05);瞬时转染了Traf6重组质粒的细胞中,Traf6蛋白发生过表达,经槲皮黄酮处理后,Bax、Traf6、p-TAK1蛋白水平显著降低,而Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05)。结论槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

基于转基因细胞模型研究通络醒脑泡腾片对Aβ代谢的影响

目的采用转基因细胞模型,考察通络醒脑泡腾片对Aβ生成和降解关键靶点的影响,探索其抗阿尔茨海默病的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞,不同浓度的含药血清的培养液(含通络醒脑泡腾片血清0%~40%)干预48 h,采用MTT法确定无毒浓度,LDH法检测细胞活性,ELISA法检测Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)分泌量;采用RT-PCR和Western blot检测APP基因和蛋白表达,Western blot法检测APP剪切片段sAPPα和sAPPβ蛋白表达;qRT-PCR、Western blot及荧光检测试剂盒分别测定BACE1基因、蛋白水平和酶活性;Western blot检测Aβ降解酶IDE和NEP蛋白表达;体外培养SH-SY5Y,通络醒脑泡腾片不同浓度的含药血清培养液孵育48 h,MTT法检测Aβ_(25-35)诱导后细胞存活率。结果通络醒脑泡腾片含药血清对SHSY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞均无明显毒性作用(P>0.05);通络醒脑泡腾片含药血清可明显抑制SH-SY5Y-APP细胞Aβ的分泌(P<0.05),对SH-SY5Y-C99细胞Aβ分泌量无影响;对SH-SY5Y-APP细胞APP基因及蛋白水平、sAPPα及Aβ降解酶NEP和IDE蛋白表达均无明显影响(P>0.05),但对sAPPβ蛋白有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系,对BACE1基因、蛋白水平、活性均有明显抑制作用(P<0.01)。此外,研究发现通络醒脑泡腾片含药血清对Aβ_(25-35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用(P<0.01)。结论通络醒脑泡腾片对β-分泌酶具有明显的抑制作用,并能对抗Aβ神经细胞毒性作用,提示抑制β-分泌酶和拮抗Aβ神经细胞毒性是通络醒脑泡腾片发挥抗阿尔茨海默病的主要作用机制。     

槲皮黄酮对酒精性肝损伤大鼠高同型半胱氨酸血症及氧化应激的作用

目的探讨槲皮黄酮对酒精性肝损伤大鼠高同型半胱氨酸血症(HHcy)及氧化应激的作用。方法将30只大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量槲皮黄酮治疗组、中剂量槲皮黄酮治疗组、高剂量槲皮黄酮治疗组,每组6只。用酒精+0.5 mL鱼油灌胃诱导酒精性肝损伤模型,造模3周后,治疗组大鼠分别给予4、2、1 g/kg槲皮黄酮灌胃,7周后麻醉处死大鼠,测定血浆总同型半胱氨酸(tHcy)浓度及血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb)、白/球蛋白比值(A/G)、肝匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)表达水平,并对肝脏病理组织进行检测。结果模型组大鼠tHcy、ALT、AST、MDA的表达水平高于正常对照组,而SOD、GSH含量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,槲皮黄酮治疗组大鼠tHcy、ALT、AST、MDA均低于模型组(P<0.05),而SOD、GSH含量高于模型组(P<0.05),并呈浓度依赖性。组织病理学检测显示,模型大鼠出现肝细胞脂肪变性、点状坏死,伴随炎性细胞浸润,槲皮黄酮治疗后,点状坏死和炎性细胞浸润消失。结论槲皮黄酮可改善酒精性肝损伤,其作用机制可能与降低高同型半胱氨酸水平及氧化应激有关。     

丙泊酚对BV-2小胶质细胞活化的影响

目的探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞活化的影响及其可能机制。方法体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,随机分为LPS 1μg/ml组(A组)、丙泊酚30μM组(B组)、LPS 1μg/ml+丙泊酚30μM组(C组)和空白对照组(D组)。采用RT-PCR检测各组细胞中IL-1β和TNF-αmRNA表达量,Western blot检测总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达水平。结果 A、C组IL-1β、TNF-α及p-GSK-3表达量均较D组明显增加(P<0.05或P<0.01)。与A组相比,C组IL-1β和TNF-αmRNA表达量降低,而p-GSK-3β蛋白表达量增加(P<0.05)。结论丙泊酚30μM能在体外减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放IL-1β和TNF-α的水平,此作用可能与抑制GSK-3β活性有关。     

槲皮素通过影响TRAF6/TAK1信号通路改善脂多糖诱导的BV-2细胞炎性损伤

目的研究槲皮素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2细胞炎性损伤的保护作用及其对TRAF6/TAK1信号通路的影响。方法采用脂多糖(LPS,1 mg/L)体外诱导BV-2细胞炎性损伤模型,将细胞分为正常对照组、LPS诱导组、LPS+低剂量(75μmol/L)槲皮素组、LPS+中剂量(150μmol/L)槲皮素组、LPS+高剂量(300μmol/L)槲皮素组; CCK8法检测BV-2细胞相对存活率,ELISA法检测炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平,Western blot法分析i NOS、COX-2、TRAF6、TAK1及p-TAK1蛋白表达。结果与LPS诱导组比较,不同浓度槲皮素干预的BV-2细胞相对存活率明显升高(P <0. 05),细胞上清炎性因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显降低(P <0. 05),细胞中炎性蛋白i NOS及COX-2表达水平显著降低(P <0. 05);细胞中TRAF6及p-TAK1蛋白表达显著降低(P <0. 05),并表现出剂量依赖性。结论槲皮素能显著抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症损伤,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制TRAF6/TAK1信号通路的活化。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

槲皮黄酮对高糖诱导的心肌H9c2细胞凋亡和氧化应激的抑制作用

摘要：目的:观察槲皮黄酮对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧（ROS）水平的影响。方法:体外培养H9c2细胞,并将其分为对照组、高糖组(25 mmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮低浓度组(25 mmol·L-1+50μmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮中浓度组(25mmol·L-1+100μmol·L-1)和高糖+槲皮黄酮高浓度组(25 mmol·L-1+200μmol·L-1)。CCK8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、Akt（丝氨酸/苏氨酸激酶）和p-Akt蛋白表达;采用PI3K抑制剂LY294002和槲皮黄酮共同处理H9c2细胞后,检测了细胞凋亡率及ROS水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞活力、PI3K和Akt磷酸化蛋白水平显著降低,细胞凋亡率和ROS水平显著增加（P<0.05）;槲皮黄酮可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力升高,细胞凋亡率和ROS水平降低,PI3K和Akt磷酸化蛋白水平明显上调（P<0.05）。LY294002能明显降低槲皮黄酮对H9c2细胞凋亡和ROS产生的抑制作用。结论:槲皮黄酮可通过调控PI3K/Akt信号通路改变高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。     

Effect of propofol on lipopolysaccharides-induced activation of BV-2 microglia cells

目的 探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞活化的影响及其可能机制.方法 体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,随机分为LPS 1μg/ml组(A组)、丙泊酚30μM组(B组)、LPS1 μg/ml+丙泊酚30μM组(C组)和空白对照组(D组).采用RT-PCR检测各组细胞中IL-1β和TNF-α mRNA表达量,Western blot检测总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β (p-GSK-3β)的蛋白表达水平.结果 A、C组IL-1β、TNF-α及p-GSK-3表达量均较D组明显增加(P＜0.05或P＜0.01).与A组相比,C组IL-1β和TNF-α mRNA表达量降低,而p-GSK-3β蛋白表达量增加(P＜0.05).结论 丙泊酚30 μM能在体外减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放IL-1β 和TNF-α的水平,此作用可能与抑制GSK-3β活性有关.     

羟基积雪草苷对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠学习记忆的影响及机制研究

目的探讨天胡荽羟基积雪草苷(madecassoside from hydrocotyle sibthorpioides,MHS)对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠学习记忆功能的影响及其作用机制研究。方法SPF级昆明♂小鼠75只,随机分为正常组、模型组、MHS低、中、高剂量治疗组。采用D-半乳糖皮下注射建立亚急性衰老模型,利用Morris水迷宫观察小鼠的学习记忆能力;Western blot法测定小鼠海马组织中Aβ1-42蛋白及突触可塑性相关蛋白的水平;RT-PCR法检测Aβ相关基因的表达。结果与模型组比较,MHS能明显降低Aβ1-42蛋白的含量(P<0.05);抑制APP、BACE1和Cat B,同时提高NEP和IDE的表达(P<0.05);增强突触可塑性相关蛋白PSD-95、pNMDAR1、p-Ca MKII、p-PKACβ、PKCγ、p-CREB和BDNF的表达(P<0.05)。结论 MHS能改善小鼠的学习记忆功能,其机制可能与抑制Aβ生成与沉积、增强突触可塑性相关蛋白表达有关。     

开心散对Aβ25-35诱导损伤SH-N-K神经细胞的保护作用及机制

目的观察开心散对神经毒性物质β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导损伤的SK-N-SH细胞的保护作用。方法用Aβ25-35处理人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),模拟阿尔茨海默病(AD)病人脑内神经元病理损伤,并以含开心散(KXS)药物血清拮抗其作用。以MTT法测定细胞存活率,酶反应法检测细胞内超氧化物歧化酶SOD水平变化,流式细胞技术检测细胞凋亡率。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淀粉样肽蛋白前体(APP)基因、Aβ降解酶NEP基因的表达情况,Westernblots法检测APP蛋白表达。结果试验显示暴露Aβ25-35后培养SK-N-SH细胞存活率明显下降,凋亡细胞比例增加。而含开心散药物血清处理能显著提高Aβ25-35损伤细胞的存活率,减少细胞凋亡率,同时提高细胞内SOD的活力(P<0.01)。RT-PCR结果显示开心散可降低Aβ代谢相关的APP基因的表达并提高NEP基因的表达,APP蛋白表达显著减少。结论AD病理相关的Aβ25-35能造成神经元细胞损伤死亡,开心散对毒性Aβ25-35诱导的神经细胞损伤具有一定保护作用,其作用机制可能与开心散能增加抗氧化酶SOD活力,同时下调内源性APP基因表达,上调NEP基因表达,减少内源Aβ产生,从而抑制细胞死亡有关。     

阿立哌唑对Aβ_(25-35)诱导的神经PC12细胞损伤的影响及机制

目的:研究阿立哌唑对Aβ淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的神经PC12细胞损伤的影响及其机制。方法:将PC12细胞随机分为正常对照组、模型组(20μmol/L Aβ_(25-35))和阿立哌唑低、中、高浓度组(5、10、20μmol/L阿立哌唑+20μmol/L Aβ_(25-35)),加入含相应药物的培养基培养48 h,每组6个复孔。MTT法检测细胞活力(光密度值),Hoechst染色法检测细胞凋亡情况,分光光度法检测细胞中天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9活性,Western blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白表达及蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞光密度值降低,凋亡率增加,Caspase-3、Caspase-9活性和Bax蛋白表达均增强,Bcl-2、PI3K蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,阿立哌唑低、中、高浓度组细胞光密度值增加,凋亡率减少,Caspase-3、Caspase-9活性减弱,Bcl-2、PI3K蛋白表达和Akt磷酸化水平均增加;阿立哌唑中、高浓度组细胞Bax蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。结论:阿立哌唑可明显抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡,其作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

甘草黄酮抑制脂多糖诱导的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达

目的探究甘草黄酮(Gla)对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞一氧化碳(NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达影响。方法将BV-2细胞分为对照组、LPS组和Gla处理组,并进行相应处理。采用NO试剂盒检测NO释放量;转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测i NOS m RNA表达量;免疫荧光染色显示i NOS蛋白在BV-2细胞表达情况。结果 LPS刺激可显著增加BV-2小胶质细胞NO释放量和i NOS mRNA生成量(P<0.01),造成大量i-NOS阳性细胞出现,细胞体积增大,突起变粗短。Gla处理则可显著降低BV-2细胞NO释放量和i NOS mRNA生成量(P<0.01),同时i NOS阳性细胞数明显减少,细胞体积缩小,突起变细长。结论 Gla可调节BV-2细胞i-NOS表达,抑制LPS诱导的小胶质细胞神经炎症。     

槲皮素对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的雌激素样保护作用及分子机制

目的以Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤,建立阿尔茨海默病体外模型,探讨槲皮素(quercetin,Que)的雌激素样保护作用及分子机制。方法 MTT法检测细胞活力;免疫荧光染色检测雌激素受体两种亚型ERα和ERβ的表达;Western blot检测ERα、ERβ,以及p-Akt、total-Akt、p-GSK-3β、total-GSK-3β蛋白表达量的变化。结果 MTT结果显示, 20μmol·L~(-1)的Aβ_(25-35)作用PC12细胞24 h后,能明显降低细胞的存活率(P<0.01);Que(40、60、80μmol·L~(-1))组与模型组相比,能明显增加细胞的存活率(P<0.05);免疫荧光染色和Western blot结果显示,与模型组相比,Que明显提高ERα、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达量(P<0.01),ERβ蛋白表达虽有增加,但差异无显著性(P>0.05),而各实验组total-Akt和total-GSK-3β蛋白表达量基本无变化。当雌激素受体受到ICI182,780抑制后,PC12细胞活力及p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论槲皮素对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其雌激素样神经保护作用机制是通过ERα介导激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路。     

槲皮苷通过Nrf2/HO-1通路抑制H_2O_2诱导人肝细胞L-02凋亡和损伤

目的探讨槲皮苷对H_2O_2处理的人肝细胞L-02增殖、氧化应激、凋亡及炎性因子表达的影响及其作用机制。方法将L-02细胞分为空白组、H_2O_2组、槲皮苷(25、50、100、200、400、800、1600、3200 μmol·L-~1)处理组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、核转录因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与空白组比较,H_2O_2诱导的L-02细胞存活率降低;与H_2O_2组比较,50～1600 μmol·L-~1槲皮苷细胞存活率升高;与空白组比较,H_2O_2诱导的L-02细胞凋亡率,Bax、Cleaved caspase-3、Nrf2、HO-1蛋白表达量,ROS、MDA、TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量、SOD活性显著减少(P<0.05)。与H_2O_2组比较,100、200、400 μmol·L-~1槲皮苷明显减少细胞凋亡,Nrf2、HO-1、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达量,ROS、MDA、TNF-α、IL-6水平,显著提高Bcl-2蛋白水平和SOD活性,均呈浓度依赖性(P<0.05)。结论槲皮苷提高H_2O_2处理的人肝细胞L-02存活率,并抑制其凋亡,机制可能与其抑制Nrf2/HO-1通路和降低氧化应激炎症反应有关。     

戊二酰亚胺类抗生素S-632A对D-半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的:观察戊二酰亚胺类抗生素S-632A对D-半乳糖老化小鼠模型(DGAM)海马神经元β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)及其相关蛋白表达的影响.方法:采用免疫组织化学染色和免疫印记方法,检测DGAM海马神经元Aβ、β-分泌酶(Beta-site APP cleaving enzyme,BACE)、内质网Aβ结合蛋白(Endoplasmicreticulum amyloid β peptide binding protein,ERAB)和早老蛋白1(Presenilin-1,PS-1)的表达水平,并观察应用戊二酰亚胺类抗生素S-632A对DGAM海马神经元的保护作用.结果:对照组小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白BACE,ERAB和PS-1表达量少,而DGAM小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加,与对照组比较差异具有高度显著性(P<0.01),S-632A组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近.结论:DGAM小鼠海马神经元存在着Aβ及其相关蛋白BACE,ERAB和PS-1表达的上调,S-632A可明显改善模型动物中上述蛋白的异常表达,对小鼠神经元具有营养和保护作用.     

姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡的抑制作用

目的探讨姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和凋亡的抑制作用。方法采用体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分为溶剂对照组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)+姜黄素1,5和10μmol·L~(-1)保护组及姜黄素10μmol·L~(-1)对照组;噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,酶活性法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以考察细胞损伤程度;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法测定细胞凋亡;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3的活性;Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶3表达。结果与溶剂对照组比,Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组细胞存活率显著降低(P<0.01)。与Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组比较,姜黄素5和10μmol·L~(-1)缓解了Aβ_(1-42)诱导的细胞存活率下降(P<0.05),降低了Aβ_(1-42)诱导的乳酸脱氢酶释放水平(P<0.01)和细胞早期及晚期凋亡率(P<0.01)。姜黄素抑制了Aβ_(1-42)诱导的细胞线粒体膜电位去极化作用(P<0.01);姜黄素1~10μmol·L~(-1)抑制了Aβ_(1-42)诱导的胱天蛋白酶9及胱天蛋白酶3级联激活作用,且呈浓度依赖性(r=0.990,P<0.01;r=0.996,P<0.01)。姜黄素10μmol·L~(-1)对照组以上指标与溶剂对照组无明显差异。结论姜黄素可能通过升高线粒体膜电位、降低胱天蛋白酶活性抑制Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡。     

根皮苷对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨根皮苷对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,随机分为空白对照组、模型组(400μmol·L~(-1) H_2O_2)、阳性对照(20μmol·L~(-1)N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度根皮苷(16、32、64μmol·L~(-1))预处理组。采用MTT法检测细胞活力,显微镜观察细胞形态,ELISA检测细胞活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果模型组细胞活力较空白对照组显著降低,ROS和MDA含量增加,SOD活力下降,Nrf2和HO-1蛋白表达下降(均P<0.05)。根皮苷低、中、高浓度(16、32、64μmol·L~(-1))组较模型组细胞存活率均显著提高,ROS和MDA含量降低,SOD活力升高,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(均P<0.05)。结论根皮苷能够抑制H_2O_2对PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞死亡并调控Nrf2信号通路有关。     

五味子乙素保护神经细胞作用及其可能机制

目的探讨五味子乙素对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导褐家鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞损伤的保护作用及可能机制。方法 20μmol.L-1Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,加入5,10,25μmol.L-1五味子乙素,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR法)检测PC12细胞β淀粉样前体蛋白(APP)基因及空泡分选蛋白35(VPS35)基因在mRNA水平的表达,免疫细胞化学法测定APP及VPS35在蛋白水平的表达。结果 MTT结果显示,5,10,25μmol.L-1五味子乙素组PC12细胞存活率较Aβ25-35组高(P<0.05);RT-PCR、免疫细胞化学染色结果显示,Aβ25-35组较正常对照组APP、VPS35 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);不同浓度五味子乙素组APP及VPS35 mRNA和蛋白表达较Aβ25-35组减少(P<0.05),VPS35与APP变化趋势一致。结论 5,10,25μmol.L-1五味子乙素可降低Aβ25-35对PC12细胞的损伤,该作用呈浓度依赖性,其机制可能与降低VPS35表达、减少sorLA含量、延长APP运输时间相关。     

姜黄素通过增强自噬抑制Aβ_(1-42)诱导的BV2小胶质细胞和原代小胶质细胞炎症反应

目的研究姜黄素对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ_(1-42))刺激所致小鼠小胶质细胞BV2细胞和原代小胶质细胞炎症的作用及机制。方法姜黄素0.1,1,5,10,15,25和40μmol·L~(-1)与BV2细胞培养24 h,MTT法和ATP法检测细胞存活。姜黄素5和10μmol·L~(-1)预处理BV2细胞和原代小胶质细胞2 h后,加入Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)共同作用24 h,使用实时荧光定量PCR法检测BV2细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平,同时检测原代小胶质细胞TNF-α和iNOS mRNA表达水平;BV2细胞加姜黄素5和10μmol·L~(-1)培养2 h后,加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养24 h,Western印迹法检测BV2细胞中iNOS、自噬相关蛋白5(Atg-5)和P62蛋白表达水平及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)与LC3-Ⅰ的比值;姜黄素5和10μmol·L~(-1)预处理BV2细胞和原代小胶质细胞24 h后,加入Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)共同作用4 h,Western印迹法检测BV2和原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)的吞噬;原代小胶质细胞加入姜黄素5和10μmol·L~(-1),24 h后加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养4 h,细胞免疫荧光染色法检测原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)的吞噬和离子钙接头蛋白分子1(Iba1)蛋白表达水平。稳定敲降Atg-5的BV2细胞加姜黄素5和10μmol·L~(-1)培养2 h后,加Aβ_(1-42)1 mg·L~(-1)培养24 h,Western印迹法检测稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平。结果 MTT和ATP结果显示,姜黄素≤25μmol·L~(-1)时对BV2细胞无明显细胞毒性。实时荧光定量PCR结果显示,与Aβ_(1-42)相比,姜黄素5和10μmol·L~(-1)组细胞内iNOS,IL-6和TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01),原代小胶质细胞内iNOS和TNF-αmRNA水平明显降低(P<0.01);Western印迹结果显示,与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素10μmol·L~(-1)组细胞内iNOS和P62蛋白表达显著减少(P<0.01),LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白比值和Atg-5蛋白表达增加(P<0.01);与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素10μmol·L~(-1)组BV2细胞和原代小胶质细胞对Aβ_(1-42)蛋白的吞噬明显增加(P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,与Aβ_(1-42)组相比,姜黄素5和10μmol·L~(-1)组平均每个细胞内Aβ_(1-42)荧光强度明显增加(P<0.01),Iba1的荧光强度降低(P<0.01);与Aβ_(1-42)相比,姜黄素10μmol·L~(-1)不影响稳定敲降Atg-5的BV2细胞中LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值及iNOS,Atg-5和P62蛋白水平。结论姜黄素通过增强Atg-5表达,促进小胶质细胞对Aβ_(1-42)蛋白的吞噬,抑制Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎症反应。