可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺( OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝( MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶( LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)％,LDH释放比率(100.00±37.51)％。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)％,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)％。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)％,(71.50±9.79)％和(87.48±5.29)％,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)％,(130.92±24.94)％和(121.63±32.68)％。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。     

槲皮黄酮对脂多糖诱导BV-2小胶质细胞损伤的保护机制研究

目的：探讨槲皮黄酮对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小神经胶质细胞炎症反应的抑制作用及可能作用的机制。方法：体外培养BV-2细胞,采用LPS刺激细胞诱导炎症模型,将细胞分为正常对照组、炎症模型组和槲皮黄酮低（10 μg/ml）、中（20 μg/ml）、高（40 μg/ml）剂量药物组,CCK8实验检测槲皮黄酮对BV-2细胞增殖情况的影响,ELISA实验检测细胞上清中TNF-α和IL-6的表达量,免疫印迹实验检测iNOS、COX-2、Traf6、p65及p-p65蛋白的表达水平。结果：槲皮黄酮可显著促进BV-2细胞的增殖,并明显降低细胞的炎症反应。主要表现在槲皮黄酮可明显抑制TNF-α和IL-6的释放,还可显著抑制炎症相关蛋白iNOS及COX-2的表达,并且还可以抑制Traf6/p65信号通路的活化。结论：槲皮黄酮可明显抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制Traf6/p65信号通路的活化实现的。     

栝楼桂枝汤对氧糖剥夺损伤皮层脑片的神经保护作用

目的 观察栝楼桂枝汤对氧糖剥夺损伤皮层脑片的神经保护作用.方法 将培养t4d的皮层脑片行氧糖剥夺损伤45min后,药物干预3d,采用碘化丙啶(PI)染色法检测皮层脑片损伤程度,微量酶标法检测脑片培养液上清中LDH的释放量.结果 与空白对照组比较,模型对照组PI荧光强度、LDH释放量明显升高,栝楼桂枝汤干预后,PI荧光强度、LDH释放量明显减少,呈剂量依赖性.结论 栝楼桂枝汤对皮层脑片氧糖剥夺后的神经损伤具有较好的保护作用.     

β-乳香酸对海马神经元细胞氧糖剥夺损伤的改善作用

目的:研究β-乳香酸对大鼠海马神经元细胞氧糖剥夺损伤的改善作用.方法:将大鼠海马神经元细胞分为正常对照组、模型组和β-乳香酸低、中、高浓度组(1、10、100μmol/L),除正常对照组外,其余各组细胞加入相应含药培养基,并进行氧糖剥夺培养以复制氧糖剥夺损伤模型.采用MTT法检测细胞的存活率,采用化学比色法检测细胞上清...     

槲皮黄酮对Aβ诱导小神经胶质细胞损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮黄酮对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导小神经胶质细胞(BV-2)损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养BV-2细胞,利用Aβ诱导BV-2细胞发生损伤;将低(10μg/m L)、中(20μg/m L)、高(40μg/m L)3种浓度槲皮黄酮对细胞进行处理,共24 h,采用CCK8实验对BV-2细胞的增殖情况进行评价,应用ELISA试剂盒对细胞培养基上清中炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平进行分析,采用免疫印迹技术分析β-分泌酶(BACE)、早老素(PS1)、呆蛋白(NCT)蛋白表达水平,并对脑啡肽酶(NEP)、胰岛素降解酶(IDE)表达水平进行检测。结果采用Aβ诱导可较好地构建BV-2细胞损伤模型,经过低、中、高3种剂量的槲皮黄酮处理后,BV-2细胞的相对存活率较模型组显著增加(P<0.05);药物处理组细胞培养基上清中IL-6、TNF-α表达水平低于模型组(P<0.05);Western blot结果显示,槲皮黄酮组BACE、PS1、NCT蛋白表达水平较模型组降低(P<0.05);槲皮黄酮可以促进Aβ消化酶NEP、IDE的表达。结论槲皮黄酮对Aβ诱导的BV-2细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制Aβ分泌酶表达和激活Aβ消化酶表达有关。     

GABA受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡的保护作用

目的:研究GABA受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导皮层神经元死亡的保护作用。方法:培养12d的皮层神经元更换为Earle's平衡盐溶液(Earle's balanced salts,EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入GABA A受体和B受体激动剂作用24h,用Hoechst33342/PI的染色方法检测其死亡情况。结果:GABA A受体激动剂(musci mol)和GABA B受体激动剂(baclofen)均分别能显著降低神经细胞死亡率49.9%和35.3%。结论:GA-BA A受体激动剂和B受体激动剂对氧-葡萄糖剥夺诱导的皮层神经元死亡均有显著的保护作用。     

脉络宁对原代大鼠海马神经元在氧糖剥夺/复氧中的保护作用

目的:观察脉络宁对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用及可能机制。方法:原代培养从新生24 h内SD乳鼠取材的海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、脉络宁低、中、高剂量组(5,10和20μg.mL-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中脑红蛋白(neuroglobin,NGB)及Bcl-2的表达,PCR检测其mRNA的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各剂量脉络宁组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度的升高而降低;NGB和Bcl-2蛋白表达不同程度地升高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高;NGB及Bcl-2蛋白的mRNA亦升高(P<0.01)。结论:脉络宁发挥神经保护作用可能的机制之一是抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,促进NGB和Bcl-2蛋白的表达。     

甘松新酮对缺糖缺氧损伤原代培养神经元的保护作用

观察甘松新酮对缺糖缺氧损伤原代培养神经元的保护作用。采用孕14天小鼠胚胎皮层制备原代培养神经元;MTT法确定甘松新酮对原代培养神经细胞的安全剂量,并观察其对缺糖缺氧神经元的保护作用;采用Western blotting法观察药物对缺糖缺氧损伤神经元以及正常培养神经元蛋白激酶A(PKA)和细胞外信号调节激酶(ERK)通路关键蛋白表达的影响。结果显示,甘松新酮(50和100μmol·L-1)能够增加缺糖缺氧损伤神经元的存活率(P<0.01,与OGD组比较);同时,能增加缺糖缺氧神经元PKA、小分子G蛋白Ras的相关蛋白1(Rap1)、丝裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEK1)及磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)的表达,且此作用呈剂量依赖趋势。对正常培养神经元研究结果显示,甘松新酮(50、100和200μmol·L-1)也能增加其PKA、Rap1、MEK1及p-ERK1/2的表达(P<0.01)。以上结果表明,甘松新酮对缺糖缺氧损伤的原代培养神经元有明确保护作用,该作用可能与药物激活PKA和ERK通路有关。     

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的:探讨不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法:建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组、缺氧缺糖损伤组、丹参酮20mg·L-1组和丹参酮200mg·L-1组。利用2,3,5三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价不同浓度丹参酮对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果:不同浓度丹参酮(20、200mg·L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低,减少LDH释放,减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bcl2蛋白表达和胞内钙离子浓度。不同浓度丹参酮(20、200mg·L-1)进一步上调bcl2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与丹参酮20mg·L-1相比,丹参酮200mg·L-1作用较强。结论:不同浓度丹参酮具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且丹参酮对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。     

黄芩苷对Neuro2A细胞氧糖剥夺的保护作用

目的观察黄芩苷对体外培养小鼠神经母细胞瘤Neuro2A细胞株氧糖剥夺所致损伤的保护作用。方法利用体外培养的Neuro2A细胞,通过去除培养液中的糖和氧气来模拟脑缺血缺氧,用不同浓度的黄芩苷作用于Neuro2A细胞,应用Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术检测细胞凋亡,应用四唑盐(MTT)法检测细胞的活性。结果黄芩苷在6.25,12.5,25μmol.L-1的浓度范围之内,可对缺血缺氧Neuro2A细胞起到保护作用,主要是减少细胞早期凋亡。结论在一定浓度范围之内黄芩苷可保护缺血缺氧Neuro2A细胞,提示对缺血性脑损伤有保护作用,值得进一步研究。     

抗血小板溶栓素对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠原代皮质神经细胞保护作用

目的 探讨抗血小板溶栓素(APT)对原培养大鼠皮质神经细胞缺糖缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 大鼠原代皮质神经细胞培养6 d后,经APT 80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、Toll样受体4(TLR4)阻断剂HTA12510μg/mL预处理24 h,皮质神经细胞缺糖缺氧3 h,恢复正常培养24 h,建立缺糖缺氧再灌注损伤模型。实验分为正常组,模型组,APT低、中、高组,HTA组。倒置显微镜下观察细胞形态,免疫组化染色鉴定神经元。MTT法检测细胞存活率。比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。G-LISA法检测细胞中Rho蛋白A(RhoA)活性,Western-bloting检测细胞中TLR4、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白表达水平。结果 细胞培养6 d后,免疫组化鉴定显示神经细胞纯度达90%以上;与模型组比较,APT低、中、高剂量能明显增加神经细胞存活率;中、高剂量能明显降低培养液中MDA含量和LDH活性,降低细胞中RhoA活性,抑制细胞中TLR4,ROCK1/2蛋白表达。结论 APT对大鼠原代皮质神经细胞缺糖缺氧再灌注损伤有较好的保护作用,其机制与抑制TLR4、RhoA、ROCK信号通路有关。     

不同浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨高浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组(Control)、缺氧缺糖损伤组(OGD)、芬太尼50μg.L-1组(F50)、芬太尼500μg.L-1组(F500)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价高浓度芬太尼对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低;减少LDH释放;减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bc l-2蛋白表达,增加胞内钙离子浓度。不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)进一步上调bc l-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与芬太尼500μg.L-1相比,芬太尼50μg.L-1作用较强。结论高浓度芬太尼具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且芬太尼对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。随着芬太尼的剂量增加,其保护作用减弱,但在临床应用的剂量范围内未见明显的毒性作用。     

Protective effects of costunolide on mouse brain slice injury induced by oxygen glucose deprivation/reoxygenation

OBJECTIVE To investigate the protective effects and mechanisms of costunolide against mousebrain slice injury induced by oxygen-glucose deprivation/reoxygenation(OGD/R). METHODS Mouse brain slice injury was induced by OGD/R in vitro, and the degree ofinjury was evaluated by measuring the release of lactate dehydrogenase(LDH) and 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) staining. Western blotting was used to analyze the expression of Bax, Bcl-2, Cyt-c, caspase-9, caspase-7 and caspase-3. RESULTS Compared with OGD/R, 1, 5, and 10 μmol·L~(-1) costunolide decreased the LDH levels, increased the TTC staining intensity, inhibited Bax, Cyt-c, caspase-9, caspase-7, caspase-3 expression levels, and enhanced Bcl-2 expression level. CONCLUSION Costunolide has latent neuroprotective activities by the regulation of apoptosis via the mitochondrial apoptosis pathway.     

白藜芦醇对原代培养大鼠脑皮质神经元氧糖缺失损伤的保护

目的 观察白藜芦醇(Res)对原代培养大鼠脑皮质神经元氧糖缺失损伤的保护作用.方法 将新生大鼠脑皮质神经元原代培养至第10天,以低糖结合物理性缺氧诱导缺氧缺糖(OGD)模型,并于造模 2 h后复氧复糖(RP),尼莫地平(Nim 1.0 μmol · L-1)为阳性对照,观察Res对OGD和OGD/RP的噻唑蓝(MTT)液比色吸光度和乳酸脱氢酶(LDH)释放百分率的影响,在光镜和电镜下观察神经元的形态变化.结果 Res的增加对神经元OGD 1、2、4 h和OGD 2 h/RP 3、12、24 hMTT液的吸光度有显著性差异,可减少其LDH的释放,减轻神经元形态的损伤.结论 Res对原代培养大鼠脑皮质神经元氧糖缺失损伤具有保护作用.     

白藜芦醇在缺糖缺氧/再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元的保护作用

目的 研究白藜芦醇在缺糖缺氧/再灌注损伤不同时间窗内对大鼠皮质神经元的保护作用及机制.方法 大鼠皮质神经元缺糖缺氧处理150 min,随即恢复正常培养24 h.实验分为正常组,模型组,白藜芦醇预处理组、造模时处理组、造模后处理组和全程处理组.倒置显微镜下观察细胞形态.化学比色法测定LDH活性和GSH含量.MTT法检测细胞活力.TUNEL检测细胞凋亡.免疫印迹法检测Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达.结果在白藜芦醇全程处理组中,各浓度白藜芦醇均可降低培养上清液LDH活性,升高细胞内GSH含量(P<0.05),其中以40 μmol·L-1白藜芦醇作用最佳.在缺糖缺氧再灌注损伤的不同时间内给予白藜芦醇,均较模型组增强神经元活力,减少神经元凋亡,上调Bcl-2蛋白、下调Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),其中全程处理组作用最佳,其次为预处理组.结论 白藜芦醇对缺糖缺氧/再灌注损伤的神经元有剂量依赖性保护作用,而且全程处理组作用最佳,预处理组次之.其保护作用机制可能至少部分是通过调节凋亡相关蛋白而实现.     

(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

用细胞培养方法,在原代培养的大鼠皮质神经细胞上,观察了(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸引起的神经元损伤的保护作用。以Fura-2/AM为Ca²⁺的荧光指示剂,用AR-CM-MIC阳离子测定系统观察(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱对谷氨酸诱发大鼠脑皮质神经细胞内Ca²⁺升高的影响。结果表明(-)-S·R-蝙蝠葛苏林碱能剂量依赖性地抑制谷氨酸的神经毒作用,对谷氨酸诱发的神经细胞内游离Ca²⁺升高有明显的抑制作用。提示蝙蝠葛苏林碱对缺血性脑损伤有保护作用。     

Protective effects of ginsenoside Rb3 on oxygen and glucose deprivation-induced ischemic injury in PC12 cells

Aim:

To investigate the protective effects of ginsenoside Rb₃, a triterpenoid saponin isolated from the leaves of Panax notoginseng, on ischemic and reperfusion injury model of PC12 cells and elucidate the related mechanisms.

Methods:

PC12 cells exposed to oxygen and glucose deprivation (OGD) and restoration (OGD-Rep) were used as an in vitro model of ischemia and reperfusion. 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and lactate dehydrogenase (LDH) leakage were used to evaluate the protective effects of ginsenoside Rb₃. Cellular apoptosis and mitochondrial membrane potential (MMP) were analyzed using flow cytometry. Intracellular calcium ion concentration ([Ca²⁺]_i) was detected using fluorophotometer system. Caspase-3, -8, and -9 activities were measured using assay kits with an ELISA reader. Western blotting assay was used to evaluate the release of cytochrome c and expression of caspase-3, Bcl-2 and Bax proteins.

Results:

It was shown that ginsenoside Rb₃ (0.1–10 μmol/L) significantly increased cell viability and inhibited LDH release in a dose-dependent manner on the ischemic model. In addition, ginsenoside Rb₃ also significantly inhibited ischemic injury-induced apoptosis, [Ca²⁺]_i elevation, and decrease of MMP. Meanwhile, pretreatment with ginsenoside Rb₃ significantly induced an increase of Bcl-2 protein expression and a decrease of cytosolic cytochrome c, cleaved-caspase 3 and Bax protein expression, the caspase-3, -8, and -9 activity were also inhibited.

Conclusion:

The results indicated that ginsenoside Rb₃ could markedly protected OGD-Rep induced ischemic injury and the mechanisms maybe related to its suppression of the intracellular Ca²⁺ elevation and inhibition of apoptosis and caspase activity. Ginsenoside Rb₃ could be a promising candidate in the development of a novel class of anti-ischemic agent.