五子衍宗丸对无精症小鼠的免疫促进作用基因表达谱分析

目的：采用基因芯片数据分析中药复方五子衍宗丸对无精子小鼠睾丸内生精细胞的免疫促进作用。方法：按白消安诱导方法制备无精子症小鼠动物模型;中药灌胃无精子症小鼠,连续给予五子衍宗丸2个生精周期（78d）。提取该组及对照组小鼠睾丸RNA,经过小鼠全基因组表达芯片杂交,分析五子衍宗丸对生精细胞的免疫功能的影响。结果：五子衍宗丸组小鼠与正常对照组小鼠比较,在检测的31722个基因中,基因表达具有2倍以上明显差异的上调基因355个（占1．12％）,下调基因487个（占1．54％）;五子衍宗丸组小鼠TNF—α、IL-3、MKK4／7、MKK3／6、Grb2和PLA2、P38等7个基因表达差异明显,而这些基因是Fc epsilon RI通路中的组成部分。结论：中药五子衍宗丸具有增强免疫力的作用,其补肾益精的功效可能与免疫增强作用有关。     

五子衍宗丸提高大鼠睾丸支持细胞抵抗热应激能力的基因表达谱分析

目的采用全基因组表达谱芯片数据分析五子衍宗丸提高大鼠睾丸支持细胞抵抗热应激能力的作用机制。方法将原代培养的睾丸支持细胞分为五子衍宗丸组、正常组和模型组,分别给予五子衍宗丸溶液和等体积的PBS,培养24 h后,五子衍宗丸组和模型组给予43℃水浴15 min,正常组给予37℃水浴15 min处理。分别提取3组细胞总RNA,通过基因芯片技术进行数据分析。结果在支持细胞全基因组表达谱中,五子衍宗丸组与模型组比较共有1 203个差异表达基因,其中下调基因有697个,上调基因506个;正常组与模型组比较共有473个差异表达基因,其中上调基因168个,下调基因305个;与模型组相比,五子衍宗丸组和正常组共同下调的基因中RGD1305298、Trpt1、Dll3、Abi3和Ppp1r12b共5个基因表达差异明显,共同上调的基因中Dusp7表达差异明显,这些差异表达基因涉及到细胞周期、细胞凋亡、细胞代谢、细胞黏附等分子功能及Notch信号通路、细胞骨架调节、MAPK信号通路和紧密连接等通路。结论五子衍宗丸可能是通过维持支持细胞间紧密连接,抑制支持细胞凋亡,促进支持细胞分化成熟来提高睾丸支持细胞热应激的能力。     

经程序化冷冻的小鼠休眠胚胎的基因表达谱差异分析

目的探讨小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后基因表达谱的变化及相关信号通路的改变趋势。方法采用Affymetrix基因芯片检测小鼠正常休眠胚胎和经程序化冷冻后的休眠胚胎的差异表达基因;采用GO分析和Pathway分析等生物信息学方法进一步了解相关信号通路的改变。结果经程序化冷冻后的小鼠休眠胚胎与正常休眠胚胎相比,存在228个差异表达基因,其中50个基因表达上调,178个基因表达下调。Pathway分析显示黏着斑通路、细胞外基质受体相互作用通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、细胞凋亡通路、细胞通讯通路、泛素介导的蛋白质水解通路、甘油磷脂代谢通路、小细胞肺癌通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路等基因差异表达变化趋势明显。结论小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后会导致一系列基因调控变化,并可能影响多条信号通路的协同变化。     

疏风宣肺解毒方对流感病毒性肺炎小鼠基因表达谱的影响

目的:采用基因表达谱芯片技术筛选疏风宣肺解毒方治疗流感病毒感染小鼠相关的差异表达基因,初步探讨方药治疗流感的作用机制。方法:流感病毒肺适应株FM1滴鼻感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎模型,方药灌胃治疗4 d,提取肺组织总RNA,与小鼠全基因表达谱芯片杂交后进行检测。对筛选得到的药物治疗过程中的差异表达基因进行生物信息学分析。结果:基因芯片结果显示,与模型组相比,给药组表达量发生变化的基因中上调的有2 659条,下调的有2 216条。结论:疏风宣肺解毒方作用涉及免疫学方面的分子功能为:胞内信号级联放大效应,浆膜、免疫应答、细胞增生的调节,免疫防御及细胞程序性死亡等;主要调节的代谢途径有:丝裂原活化蛋白激酶信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、肿瘤信号通路、toll样受体信号通路、信号转导及转录激活因子途径、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用及趋化因子信号通路等。     

补肾生精法治疗少弱精子症相关体内外实验研究进展

补肾生精法治疗少弱精子症在中医药领域中应用广泛。然而,阐述其作用机制和意义的相关综述较少。本文回顾了近年来关于少弱精子症的动物实验和细胞实验研究,为进一步探索补肾生精法治疗少弱精子症提供参考。动物实验造模以化学手段为主,如使用雷公藤多苷和腺嘌呤等药物进行灌胃。相关体内实验研究表明,五子衍宗丸、补肾生精经典名方和临床验方对少弱精子症都起到了显著的治疗作用。体外实验研究发现,补肾生精法能够使造模后的睾丸支持细胞、睾丸间质细胞、精原细胞得到明显改善。     

糖尿病性勃起功能障碍大鼠的基因表达谱芯片数据分析

目的研究糖尿病性勃起功能障碍大鼠基因表达谱芯片数据,应用生物信息学方法挖掘与糖尿病性勃起功能障碍相关的基因,初步探讨其功能及相应分子机制。方法应用GeneSifter在线分析软件对5个正常大鼠阴茎组织和5个糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎组织基因芯片数据进行分析。结果筛选得到661个差异表达基因,其中280个上调,381个下调。其中kruppel-like factor 5(klf5)基因上调表达4.01倍,ceruloplasmin(cp)基因上调表达5.14倍,collagen,type Ⅺ,alpha1基因下调表达5.84倍,collagen,type Ⅰ,alpha1下调表达5.77倍。661个差异表达基因的功能涉及糖蛋白生物合成、胶原纤维组建、血管发生过程、脂质代谢、细胞增殖等多种重要的生物学过程,以及脂肪酸代谢、神经变性机能紊乱、细胞外基质受体相互作用等信号通路。结论应用生物信息学方法分析糖尿病性勃起功能障碍大鼠基因表达谱发现上调的klf5、cp基因和下调的collagen基因在糖尿病性勃起功能障碍的发病机理中起重要作用,生物信息学方法可为糖尿病性勃起功能障碍发病机制的研究开辟新思路。     

白消安诱导小鼠无精子症模型

目的 采用白消安诱导建立小鼠无精子症模型。方法 采用腹腔内单次注射白消安(40mg／kg)，对白消安的毒性、模型的形态学变化，小鼠的生育能力以及免疫功能进行了观察。结果 白消安单次注射可造成半数的小鼠死亡，用药后4周，睾丸曲细精管呈唯支持细胞样表现，3个月有20％的曲细精管恢复生精，存活小鼠中半数小鼠的生育力正常，模型小鼠的免疫学功能正常。结论 该小鼠无精症模型用作生精干细胞移植的受体模型是可行的。     

膀胱癌表达谱的全基因组芯片检测及易感标志基因的筛选研究

目的 采用70mer全基因组寡核苷酸基因芯片研究膀胱癌基因表达谱,获得差异基因并筛选出膀胱癌特异的肿瘤易感标志基因.方法 取正常膀胱移行上皮、肌层浸润性(T2以上)膀胱癌组织各10例,抽提mRNA逆转录成cDNA后,再反转录成cRNA并标记后,与70 mer oligo全基因组基因芯片杂交,洗脱,扫描及数据分析,采用Cluster及Trecvicw等统计分析软件比较正常膀胱移行上皮与膀胱癌组织基因表达谱差异,获得差异基因及其表达差异水平.进一步采用Panther数据库检索差异基因在各信号通路中的存在情况,初步阐述浸润性膀胱癌发生的可能的分子机制,筇选出膀胱癌特异的肿瘤标志基因.结果 在19 568个探针的全基因组芯片上,发现膀胱癌基因表达谱共同差异表达基因152个,其中表达上调的基因70个(膀胱癌中上调10倍以上的29个),与肿瘤发生明确相关的基因23个;下调基因81个(膀胱癌中下调10倍以上的16个),与肿瘤发生明确相关的基因17个;通过Panther数据库检索,发现上调基因涉及32条信号通路,下调基因涉及38条信号通路,其中部分信号通路已被证实与肿瘤发生密切相关.结论 采用70met oligo全基因组基因芯片分析膀胱癌基因表达谱,获得的差异表达基因及膀胱癌标志基因,对膀胱癌发生机理阐明、早期诊断以及人群基因易感性预测的前瞻性研究具有重要意义.     

免疫因素对男性不育的影响

为研究免疫因素对男性不育的影响,用免疫组化方法对睾丸性无精子症的睾丸活检标本进行免疫病理观察;用明胶凝集试验测定少精子症和精子活动力低下者精浆中的抗精子抗体。结果表明：（１）无精子症睾丸标本６７例,其中ＩｇＧ、ＩｇＡ阳性２７例,ＩｇＭ阳性２４例,分别沉积于生精小管基底膜、生精细胞和间质血管壁;（２）少精子症和精子活动力低下的４０例精浆中抗精子抗体阳性者１１例。提示男性不育中有２种免疫作用机制：（１）免疫球蛋白沉积于生精小管壁基底膜,间质血管壁和生精细胞,直接影响睾丸的生精功能;（２）抗精子抗体直接作用于精子,影响精子的受精功能。     

长期使用地西泮对神经活性配体受体相互作用信号通路的影响

研究长期使用地西泮对小鼠神经活性配体受体相互作用信号通路的影响。通过长期且逐量递增的方式给小鼠连续灌胃地西泮60d,提取小鼠全脑总mRNA,进行小鼠全基因组芯片检测,运用生物信息学方法筛选出差异表达基因,并通过《京都基因与基因组百科全书》（KEGG）的基因功能通路数据库分析神经活性配体受体相互作用信号通路的变化。结果发现,与正常组比较,地西泮组的神经活性配体受体相互作用信号通路上的16个基因表达发生了显著性变化,其中表达上调的基因有9个,表达下调的有7个。实验结果表明,长期使用地西泮对神经活性配体受体相互作用信号通路具有显著的影响,可能和长期使用地西泮导致机体所产生的不良反应密切相关。     

五子衍宗丸对少弱精子症模型大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达影响

目的 通过检测大鼠睾丸组织Catsper1蛋白及其mRNA表达水平,探讨五子衍宗丸治疗少弱精子症的作用机制。方法 将体质量200～220 g的雄性SD大鼠随机分成正常组,模型组,生精胶囊组,五子衍宗丸低剂量、中剂量、高剂量组。采用连续灌服雷公藤多苷8周的方法复制少弱精子症模型,模型复制成功后连续给药4周。采用Western blot法测定Catsper1蛋白含量,采用荧光定量PCR法测定Catsper1 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测睾丸组织中cAMP含量。结果 生精胶囊和高剂量五子衍宗丸能明显提高模型大鼠睾丸组织中降低的cAMP含量以及升高睾丸组织中降低的Catsper1蛋白及其mRNA表达水平（P<0.05）。结论 促进Catsper1蛋白表达并参与cAMP-Ca2+正反馈可能是五子衍宗丸提高精子质量的机制之一。     

利用shRNA慢病毒高效敲降雄性小鼠睾丸基因

目的：建立快速、高效制备小鼠睾丸基因敲降的平台。方法：设计和构建靶向睾丸特异性表达基因Sox30转录本的 shRNA表达载体（pSliencer-GFP-shSox30）及其对照质粒（pSliencer-GFP-shScramble）,与慢病毒颗粒包装后通过网微注射转导至出生24 d小鼠睾丸生精小管管腔,利用免疫荧光等检测慢病毒敲降鼠体内靶向基因的效率及敲降Sox30后对生殖细胞发育的影响。结果：慢病毒处理敲降后,相比对照组小鼠,shSox30病毒敲降组小鼠睾丸组织中Sox30蛋白表达水平显著下调,生精管腔中圆形精子发育阻滞在2~3步,Ⅶ~Ⅷ期生精管腔中无长型精子。结论：shRNA慢病毒有效降低小鼠睾丸靶基因的表达水平,在制备睾丸特定基因敲降动物模型中具有巨大优势。     

60Co-γ照射后早期小鼠肝组织基因表达谱

目的：以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱，从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制。方法：采用小鼠基因表达谱芯片（4096个基因）对^60Co-γ照射后48h小鼠肝组织基因表达谱进行研究。RT-PCR验证基因芯片结果。结杲：与正常小鼠相比，辐射后小鼠肝组织有124条基因差异表达，78条下调，46条上调。其中57条基因的功能已知，这些差异表达的基因按功能可分为6类：DNA修复和应激蛋白，细胞骨架，离子通道和转运蛋白，信号转导，免疫蛋白，代谢调控，其中下调基因主要为细胞骨架基因，而上调基因主要为细胞周期调控蛋白和转录因子。RT-PCR结果表明，Hspa5、Rasa3、Nqol基因的表达和芯片结果一致。结论：辐射造成的肝损伤具有多靶点、多层次及多通路的特点。     

性腺轴内分泌功能检测在男性不育中的应用

目的：探讨性腺轴内分泌功能的检测在诊断男性不育中的应用。方法：对1128例男性不育患者，进行性腺轴内分泌功能的测定，染色体核型的检测，睾丸的组织学检查。结果：FSH，LH，T值与睾丸体积大小，精子数目多少，生精功能及染色体核型有密切关系。结论：FSH，LH值高于正常值上限2倍以上的小睾丸及无精子症患者，无法恢复生精功能，男性第二性征不明显或缺失，且睾丸容积小于3mL,FSH,LH值在上限2倍以上，T值在下限水平以下者，应考虑为Klinefelter综合征，亦无法恢复生精功能。     

睾丸活检在无精子症中的诊断价值

目的：探讨睾丸活检在无精子症中的诊断价值。方法：对83例无精子症患者进行睾丸活体组织检查并根据活检结果结合Johnsen评分法进行评分。结果：睾丸生精功能尚可的（8分以上）35例;有精原细胞的（3分以上）35例;生精功能较差的（2分以下）13例。结论：睾丸活检可直接评价睾丸的生精功能,以及生精障碍的程度,直接指导治疗方案,是男性无精子症患者不可缺少的一种检查方法。     

小鼠骨髓干细胞移植对生殖细胞生成的影响

目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓干细胞移植对不育模型小鼠生殖细胞的影响。方法:用白消安造小鼠无精子症模型,将绿色荧光转基因小鼠骨髓细胞处理后移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,在小鼠分组干预后用Western-Blot方法检测各组小鼠睾丸VASA基因表达水平。结果:模型鼠睾丸病理切片显示睾丸曲细精管内生殖细胞显著减少(P<0.05),Western-Blot结果显示VASA基因蛋白水平较正常鼠显著降低(P<0.05)移植成功组小鼠VASA基因蛋白表达水平较模型对照组高(P<0.05),但仍低于正常鼠水平。结论:1含骨髓干细胞的骨髓混合细胞移植到无精子症模型小鼠睾丸网内,可明显促进生殖细胞生成。2VASA基因表达水平可作为睾丸性不育动物模型评价指标。     

外层致密纤维在Akap4基因缺陷致小鼠精子尾部多种形态异常中的作用

目的：探讨外层致密纤维(outer dense fobres，ODF)在Akap4基因缺陷引起小鼠精子尾部多种形态异常中 的作用。方法：通过基因编辑技术构建Akap4基因缺陷小鼠模型。实验分为2组：成年Akap4基因缺陷雄鼠为实验组 (n=7)，成年野生型雄鼠为对照组(n=7)，比较2组小鼠的体重和睾丸重量；采用计算机辅助精液分析(computer aided sperm analysis，CASA)检测精子活动力，改良巴氏染色(modifi ed pap staining)检测精子形态学，扫描及透射电镜观察精 子超微结构，免疫荧光检测精子尾部蛋白表达及定位，睾丸切片HE及PAS染色检测睾丸生精功能，透射电镜观察曲 精细管超微结构。结果： Akap4基因缺陷小鼠精子总活动力为8.81%，明显低于野生型小鼠(P<0.01)，且无正常形态精 子，尾部缩短与尾部卷曲比例达91.18%，明显高于野生型小鼠(P<0.01)，睾丸重量、睾丸生精功能、精子数量2组比 较差异无统计学意义(P>0.01)； Akap4基因缺陷精子的纤维鞘纵柱缺失，横肋柱结构部分残留，主段的3和8号ODF排 列紊乱，与ODF2蛋白定位结果相符；睾丸中精子纤维鞘发育障碍，无正常纤维鞘结构形成，但未见异常膨大的精子 尾部。结论：Akap4基因缺陷使纤维鞘横肋发育不良，纵肋的缺失引起3和8号ODF分离，“9+2”微管结构紊乱，使 主段管腔异常膨大，导致小鼠精子尾部多种形态异常。     

子宫内膜样腺癌不同激素受体差异基因表达谱分析

目的：探讨子宫内膜样腺癌（内膜癌）雌、孕激素受体不同表达状态的基因表达谱的差异。方法：采用14785条人cDNA表达谱芯片,筛选雌、孕激素受体均阳性,雌、孕激素受体均阴性,雌激素受体阳性、孕激素受体阴性子宫内膜癌的特异性差异基因表达谱。结果：雌、孕激素受体阳性内膜癌差异表达基因571条,其中上调399条、下调172条;雌、孕激素受体阴性内膜癌差异表达基因645条,上调443条、下调202条;雌激素受体阳性、孕激素受体阴性内膜癌则为1125条,上调608条、下调517条。结论：不同激素受体状态有不同的基因表达谱特征,各型受体特异性表达基因可望成为高效的治疗靶点。     

五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠细胞色素C氧化酶7a2及细胞外信号调节激酶磷酸化水平表达的影响

目的观察五子衍宗丸对肾精亏虚证大鼠睾丸组织细胞色素C氧化酶7a2(Cox7a2)表达和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响。方法 SD雄性大鼠随机分为5组,即空白组,模型组,五子衍宗丸低、中、高剂量组,每组5只。空白组每天给予羧甲基纤维素钠灌胃,模型组和五子衍宗丸组每天给予雷公藤多甙(20 mg/kg)灌胃,五子衍宗丸组分别给予五子衍宗丸低、中、高剂量(0.5,1.0,2.0 g/kg)灌胃30 d,第31天取材。采用荧光定量PCR检测Cox7a2表达,Western Blot法检测ERK磷酸化水平表达,Johnsen’s评分评价睾丸组织病理学变化。结果雷公藤多甙可诱导Cox7a2 mRNA表达增加及ERK磷酸化,同时睾丸生精功能下降,Johnsen’s评分降低。与模型组相比,五子衍宗丸高剂量组ERK磷酸化水平下降,五子衍宗丸中、高剂量组Cox7a2 mRNA水平明显下调,并且五子衍宗丸中、高剂量组睾丸组织Johnsen’s评分显著上调,睾丸生精功能改善。结论五子衍宗丸可通过ERK信号传导途径调节线粒体能量代谢,从而改善生精功能。