胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞疫苗诱导特异性抗肿瘤的免疫反应

目的 研究人胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞(DC)诱导的特异性抗肿瘤免疫反应,为DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据.方法 从外周血中分离单核细胞(PBMC)并培养成DC,从细胞形态和表面标志进行鉴定.通过RT-PCR扩增胰腺癌MiaPaCa-2细胞的MUC1 mRNA后用电穿孔法将其转染DC.采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测培养不同时间点DC的MUC1的表达.用四甲基偶氮唑蓝法检测DC存活率.采用51Cr标准细胞毒实验观察转染MUC1 mRNA的DC诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应;应用ELASA法检测CTL的IFN-γ释放量.结果 培养获得的细胞呈现典型的DC形态特征和表面标志(CD40+、HLA-DR+、CD83+、CD86+).MUC1 mRNA转染DC48 h后,细胞MUC1 mRNA表达水平最高,为38.43(36.89 ～48.06),蛋白表达亦最强.转染后DC的存活率稳定在80％左右.转染MUC1 mRNA的DC可有效诱导HLA-A2 +/MUC+特异性CTL免疫反应;胰腺癌Capan-2细胞与转染MUC1的DC刺激MUC1特异性CTL的24 h IFN-γ释放量分别为(28.44±4.96)和(16.31 ±2.54) U/ml,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 人胰腺癌MUC1 mRNA体外转染DC后可诱导CTL产生特异性抗肿瘤免疫反应.     

胰腺癌Capan-2细胞总RNA转染树突细胞诱导特异性抗肿瘤免疫反应的体外研究

目的 观察人胰腺癌Capan-2细胞总RNA转染的树突细胞（DCs）所诱导的抗肿瘤免疫反应.方法 从6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DCs.使用电穿孔法将Capan-2细胞总RNA及MUC4 mRNA分别转染DCs.应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后DCs的存活率.采用蛋白质印迹法检测DCs中MUC4 mRNA的表达.使用IFN-γ酶联免疫法检测DCs诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTLs）的活化反应.采用51Cr标准细胞毒实验检测DCs诱导的抗原特异性CTLs对体外胰腺癌细胞的杀伤效应.结果 Capan-2细胞总RNA转染的DCs（DC-Capan-2-total RNA）的存活率呈时间依赖性下降,转染后96 h的存活率降低至60.8％,而转染MUC4 mRNA的DCs（DC-MUC4 mRNA）的存活率稳定在80.0％左右,两转染组DCs的差异具有统计学意义（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA的MUC4蛋白表达量亦显著低于DC-MUC4 mRNA（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA诱导的CTLs 24 h IFN-γ释放量为（89.34±3.85） U/ml,DC-MUC4 mRNA为（21.77±2.14） U/ml,两转染组的差异有统计学意义（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA诱导的特异性CTLs能够有效识别和杀伤HLA-A2 ＋/MUC4＋的Capan-2细胞及HLA-A2 ＋/MUC4-的PANC1细胞,而不能有效识别和杀伤HLA-A2-/MUC4-的MiaPaCa-2细胞和HLA-A2-/MUC4＋的AsPC-1细胞.结论 胰腺癌细胞总RNA转染的DCs较单个胰腺癌相关抗原转染的DCs能诱导出更加显著的CTLs抗肿瘤免疫反应,但受到MHC Ⅰ类抗原递呈的限制.     

胰腺癌Capan-2细胞与树突状细胞融合诱导特异性抗癌免疫应答的体外研究

目的观察人胰腺癌Capan-2细胞与树突状细胞(DC)融合后诱导的特异性抗肿瘤免疫反应。方法收集2013年4月-2015年3月于沈阳军区总医院消化科就诊的人类白细胞抗原(HLA)-A2~+胰腺癌患者6例,从患者外周血单个核细胞中分离并培养DC。所获DC分为3组:(1)使用聚乙二醇-二甲基亚砜诱导法,将DC与Capan-2细胞融合以负载肿瘤抗原;(2)DC与Capan-2细胞共培养;(3)单独DC培养。通过流式细胞术检测PE-MUC4/FITC-CD86抗体双标细胞评估融合率;应用四甲基偶氮唑盐法检测各组DC的存活率变化。使用干扰素(IFN)γ酶联免疫法检测DC诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)活化反应。采用51Cr标准细胞毒实验检测DC诱导的抗原特异性CTL对体外胰腺癌细胞的杀伤作用。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果DC与Capan-2融合细胞同时表达DC表型(CD86)和MUC4分子,CD86与MUC4双阳性表达率为(38.30±7.30)%,明显高于共培养组(7.21±1.06)%;融合细胞组DC存活率呈时间依赖性下降,转染后96 h的存活率降低至62.81%,而与Capan-2细胞共培养组DC存活率稳定在80%以上,两组间差异有统计学意义(P0.05)。DC-Capan-2融合细胞诱导的CTL 24 h IFNγ释放量为(85.34±2.97)U/ml,DC、Capan-2共培养组DC诱导的IFNγ释放量为(19.07±4.25)U/ml,两转染组的差异有统计学意义(P0.05)。DC-Capan-2融合细胞诱导的特异性CTL能够有效识别和杀伤HLA-A2~+/MUC4~+的Capan-2细胞及HLAA2~+/MUC4-的PANC-1细胞,但不能有效识别和杀伤HLA-A2-/MUC4-的Mia Pa Ca-2细胞和HLA-A2-/MUC4~+的As PC-1细胞。结论胰腺癌细胞与DC融合后可诱导出显著的CTL抗肿瘤免疫反应,此过程受主要组织相容性复合体Ⅰ类抗原呈递的限制。     

胰腺癌细胞总RNA转染树突细胞诱导特异性CTL能力的体外研究

目的观察人胰腺癌Mia Pa Ca-2细胞总RNA电转染树突细胞(Dendritic Cell,DC)体外激发抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)的能力。方法自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DC。使用电穿孔法将Mia Pa Ca-2细胞总RNA体外转录和PCR扩增的MUC1m RNA转染DC,以未负载抗原的DC为对照。采用实时定量PCR技术检测各组DC中MUC1表达。四甲基偶氮唑盐(MTT)检测转染各组DC存活率变化;混合细胞培养法评价各组DC体外刺激自体T淋巴细胞增殖能力;ELISA法检测各组DC体外激发抗原特异性CTL细胞因子释放量。结果 Mia Pa Ca-2总RNA与MUC1 m RNA分别转染后48 h DC中目标抗原的相对表达量分别为37.24±3.17和34.53±2.02,两者比较无显著差异(P0.05)。电转染后96 h Mia Pa Ca-2总RNA转染组DC存活率降至60.81%,低于MUC1 m RNA单转染时DC的存活率(80%左右)(P0.05)。转染Mia Pa Ca-2总RNA DC刺激自体T细胞增殖指数为8 432±611.25,显著高于MUC1单独转染组3 664±305.17(P0.05);且转染Mia Pa Ca-2总RNA DC激发特异性CTL分泌IL-2、IL-10、Granzyme B、IFN-γ水平亦显著高于MUC1 m RNA单独转染组(P0.05)。结论胰腺癌肿瘤细胞总RNA转染的DC较单一胰腺癌相关抗原负载DC有更强的体外抗原特异性CTL激发能力。     

胰腺癌相关抗原MUC1与survivin mRNA联合转染树突细胞激发特异性细胞毒T淋巴细胞能力的体外研究

目的 研究人胰腺癌MUC1与survivin mRNA联合转染树突细胞（DC）体外激发特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的能力,为构建负载多抗原表位DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据.方法 自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养并鉴定DC.常规培养人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2,采用RT-PCR方法扩增MUC1和survivin mRNA.应用电穿孔法将两种mRNA单独或联合转染DC,分别命名为DC-MUC1、DC-survivin、DC-MUC1＋ survivin.采用实时定量PCR法检测DC的MUC1、survivin mRNA表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测DC存活率;使用混合细胞培养法检测转染DC体外刺激自体T淋巴细胞的增殖能力;应用ELISA法检测转染DC体外激发抗原特异性CTL释放Th1型细胞因子IL-2、IL-10、granzyme B、IFN-γ的水平.结果 成功获得成熟的DC,成熟DC的表面标志物CD40、HLA-DR、CD83和CD86的阳性表达率分别为34.31％、50.21％、89.17％和73.62％.DC-MUC1的MUC1 mRNA表达量为36.24±5.17;DC-survivin的survivin mRNA表达量为34.53±4.02;DC-MUC1＋survivin的MUC1、survivin mRNA表达量分别为31.79±4.26和14.67±2.96,显著低于单转染的DC（P值均＜0.05）.DC-MUC1＋ survivin的存活率呈现时间依赖性下降,96 h时的存活率显著低于单转染DC（50.21％比80％左右,P值均＜0.05）.当作为刺激细胞的DC和作为效应细胞的T淋巴细胞比例为1∶10、1∶20时,DC-MUC1＋ survivin刺激自体T细胞的增殖指数显著高于单转染DC,差异有统计学意义（P值均＜0.05）;而比例为1∶40、1∶80时的增殖指数差异无统计学意义.当DC∶T为1∶10孵育14 d时,DC-MUC1、DC-survivin、DC-MUC1＋survivin的IL-2水平分别为（892.73±32.90）、（713.62±56.37）、（1884.37±95.21） pg/ml;granzyme B水平分别为（501.62±12.30）、（203.84±12.55）、（1193.15±86.04） pg/ml;IFN-γ水平分别为（981.50±47.82）、（696.05±41.66）、（2237.94±189.55） pg/ml.DC-MUC1＋ survivin显著高于单转染的DC,差异有统计学?     

胰腺癌细胞总RNA转染树突细胞与胰腺癌-树突融合细胞激发特异性细胞毒T淋巴细胞能力的比较研究

目的比较人胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA电转染树突细胞(Dendritic Cell,DC)与DCMiaPaCa-2融合细胞体外激发抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T Lymphocyte,CTL)能力的差异。方法自6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DC。使用电穿孔法将MiaPaCa-2细胞总RNA转染DC,使用细胞融合方法将胰腺癌MiaPaCa-2细胞抗原负载DC,以未负载抗原的DC为对照。使用流式细胞术(FCM)检测PE-MUC/FITC-CD86抗体双标细胞评估融合效率;四甲基偶氮唑盐(MTT)检测转染各组DC存活率;混合细胞培养法评价各组DC体外刺激自体T淋巴细胞增殖能力;ELISA法检测各组DC体外激发抗原特异性CTL因子释放量。结果采用PEG-DMSO诱导的DC与MiaPaCa-2的融合细胞同时表达DC表型和MUC1分子,CD86与MUC1双阳性表达率为(42.3±7.30)%;融合细胞组DC存活率呈时间依赖性下降,转染后96h的存活率降低至62.81%,而MiaPaCa-2总RNA转染组DC细胞存活率稳定在85%左右,两组间差异有统计学意义(P0.05);转染MiaPaCa-2总RNA DC刺激自体T细胞增殖指数(DC:T=1:10)为8432±611.25,显著高于DC-MiaPaCa-2融合细胞(DC:T=1:10)5672±107.51(P0.05);且MiaPaCa-2总RNA转染DC激发特异性CTL分泌IL-12p70、IL-10和IFN-γ细胞水平亦显著异于DC-MiaPaCa-2融合细胞(P0.05)。结论胰腺癌细胞总RNA转染DC较胰腺癌-树突融合细胞有更强的体外抗原特异性CTL激发能力。     

重组IL-12逆转录病毒转染树突细胞体外对鼻咽癌细胞的杀伤作用

目的体外实验评估重组白细胞介素(IL)-12逆转录病毒转染树突细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法构建重组IL-12重组逆转录病毒,体外转染树突细胞(DC),经培养后收集上清液,检测IL-12、干扰素-γ(IFN)的分泌水平。以鼻咽癌细胞CNE-2为靶细胞,进行细胞毒T淋巴细胞(CTL)细胞毒活性测定。结果成功构建含有m IL-12的重组逆转录病毒;IL-12基因修饰DC可以显著诱导的大量IL-12和IFN-γ分泌,与未转染DC组比较,差异有显著意义(P0.01);DC-IL-12诱导的CTL及其上清液对鼻咽癌细胞CNE-2均有显著杀伤作用,与未转染DC组相比较差别有显著(P0.01)。结论 IL-12基因修饰树突细胞可显著诱导大量IFN-γ分泌并增强其诱导特异性CTL对肿瘤的杀伤效能。     

两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗对Lovo细胞的体外杀伤作用

目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原（CEA）基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。体外培养CTL并检测其活性;MTT法检测两组CTL对kovo细胞的杀伤作用。结果两种方式致敏DC均可诱导激活CTL并分泌INF-γ,而重组痘苗病毒转染Dc组CTL诱导率高于细胞裂解物组;重组痘苗病毒转染组诱导的CTL对Lovo细胞的特异性杀伤活性显著高于细胞裂解物组。结论两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗均能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性,而使用重组痘苗病毒转染CEA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,为DC疫苗用于结肠癌的免疫治疗奠定基础。     

胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA体外转染树突细胞的方法探讨

目的 探讨将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA转染树突细胞(DCs)最优化的方法.方法 以rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合诱导外周血单核细胞以获得DCs,观察DCs的形态变化,流式细胞术检测DCs表面标志CD40、HLA-DR、CD83和CD86表达,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DCs刺激异体T细胞增殖的能力.采用脂质体转染、电穿孔及被动转染三种方法将MiaPaCa-2总RNA转染DCs,应用实时定量PCR法检测MUC1 mRNA表达,MTT法测定DCs存活率.结果 所获细胞具有典型的成熟DCs形态特征,CD40、HLA-DR、CD83和CD86阳性表达率分别为34.3%、50.2%、89.2%和73.6%,对同种异体T淋巴细胞具有极强的刺激增殖作用.电穿孔法DCs转染48 h后,DCs的MUC1 mRNA表达量为45.39±9.33,明显高于脂质体法的31.68±7.25和被动转染法的18.53±3.26;DCs存活率为(80.36±2.43)%,较被动转染法的(91.48±5.42)%略低,但高于脂质体法的(67.44±2.51)%,且基本稳定在80%左右.结论 采用电穿孔法将胰腺癌MiaPaCa-2细胞总RNA体外转染DCs的效率较高,且较安全.     

Human dendritic cells transfected with amplified MUC1 mRNA stimulate cytotoxic T lymphocyte responses against pancreatic cancer in vitro

Background and Aim: Mucin (MUC) 1 is an epithelial cell glycoprotein that is aberrantly overexpressed in many adenocarcinomas, including pancreatic cancer (PC), providing an ideal tumor‐associated antigen and target for immunotherapy. In this study, we investigated whether the cytotoxic T lymphocytes (CTLs) induced by dendritic cells (DCs) transfected with amplified MUC1 mRNA could respond against PC in vitro. Methods: Amplified mRNA encoding MUC1 were transfected into DCs using electroporation with an optimized setting and the MUC1 expression were evaluated by quantitative real‐time polymerase chain reaction and Western blot. The MUC1 specific CTL responses were measured using the standard chromium 51 (51Cr)‐release assays and the interferon‐γ release assay. Results: Dendritic cells could be transfected with amplified MUC1 mRNA efficiently. The transfected DCs were remarkably effective in stimulating MUC1‐specific CTL responses in vitro. The function of MUC1 specific CTLs, induced by MUC1 mRNA‐transfected DCs, was restricted by major histocompatibility complex (MHC) class I antigen presentation. Conclusion: The CTL responses stimulated by DCs transfected with MUC1 mRNA could only recognize and lyse HLA‐A2+/MUC1+ PC and other target cells under restriction by MHC class I‐specific antigen presentation, providing a preclinical rationale for using MUC1 as a target structure for immunotherapeutic strategies against PC.     

慢性乙型肝炎患者PB MC中H BV特异性IL-21表达及其对CD8^＋T淋巴细胞功能的影响

目的：探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）中 HBV特异性IL-21的表达及其对CD8＋T淋巴细胞功能的调节作用。方法以 HBVc18-27（10μg/mL）多肽刺激46例不同临床类型慢性乙型肝炎患者PBMC。ELISA检测上清液IL-21水平。在 HBVc18-27（10μg/mL）多肽和IL-21（50 U/mL）或IL-2（100 ng/mL）培养条件下,应用 MHC-肽五聚体结合流式细胞术检测PBMC中 HBV特异性CTL细胞频数变化;免疫磁珠分离纯化免疫耐受期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC中CD8＋T淋巴细胞,以 HBcAg（10μg/mL）预刺激CD8-PBMC 5 h后,采用Transwell 小室共培养技术,在阻断IL-21通路条件下,应用实时PCR检测CD8^＋T淋巴细胞IFN-γmRNA的表达。结果 HBV特异性IL-21在免疫控制期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者P B MC中表达水平显著高于免疫耐受期患者,而在免疫控制期和免疫激活期两组之间无显著差异。与 PBS 对照组相比,IL-21组 HBV 特异性 CTL 细胞频数明显增高,差异有统计学意义（P＜0．01）,而与IL-2组相比差异无统计学意义。以IL-21抗体阻断IL-21通路后,CD8^＋T 淋巴细胞IFN-γmRNA 表达水平显著下降,差异有统计学意义。结论免疫控制期和免疫激活期慢性乙型肝炎患者PBMC 均可生成一定水平的 HBV 特异性IL-21,并能增强外周CD8＋T淋巴细胞的增殖和IFN-γ表达水平。     

结核分枝杆菌Rv0440 CTL表位肽的免疫原性研究

目的 体外鉴定结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）Rv0440蛋白序列中表位肽362 370 aa和369-377 aa的HLA A＊0201限制性CD8＋ CTL表位的免疫原性,为基于表位的结核疫苗研究提供实验依据.方法 根据T2细胞HLA-A＊ 0201分子与多肽结合力分析实验结果,选取结核分枝杆菌Rv0440蛋白质氨基酸序列中对HLA-A＊ 0201分子高亲合力的Rv0440 1（362-370 aa,KLQERLAKL）和Rv0440-2（369 377 aa,KLAGGVAVI）作为候选表位肽.用候选表位肽刺激PPD（＋＋＋）健康志愿者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）检测细胞分泌IFN γ的水平.用候选表位肽诱导特异性CTL细胞,检测特异性CTL细胞对负载表位肽的T2细胞的杀伤活性,观察Rv0440-1和Rv0440 2的HLA-A＊ 0201限制性CD8＋ CTL表位的免疫原性.结果 ELISPOT实验结果显示,表位肽Rv0440-1能够明显诱导HLA-A＊ 0201（＋）、PPD（＋＋＋）健康志愿者PBMC分泌IFN γ（P＜0.05）;且表位肽Rv0440-1负载DC诱导的CTL在效靶比为10：1时对负载相应表位肽的T2细胞的特异性杀伤活性高于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,表位肽Rv0440 2没有诱导能力.结论 表位肽Rv0440-1（362-370 aa,KLQERLAKL）具有良好的免疫原性,是有效的结核分枝杆菌的HLA-A＊0201限制性CTL表位.     

Induction of myeloma-specific cytotoxic T cells using dendritic cells transfected with tumor-derived RNA

Current immunotherapeutic trials for patients with multiple myeloma (MM) focus on the idiotype (Id) as a tumor-specific antigen for active immunization. To bypass the need for the identification of shared MM-associated antigens and the characterization of possible immunogenic T-cell epitopes in a human leukocyte antigen (HLA) type-restricted manner, we focused on myeloma RNA transfection of dendritic cells (DCs). Total RNA encodes the whole antigen content of tumor cells, therefore allowing the transfected DCs to process and present the most relevant peptides and to induce a possible polyclonal cytotoxic T lymphocyte (CTL) response against different immunogenic antigens. We transfected monocyte-derived DCs with total RNA from the myeloma cell lines LP-1 and U266 by electroporation and investigated the potential of these DCs to induce myeloma-specific CTLs. We show that RNA-transfected DCs induce CTLs that lyse the LP-1 and U266 myeloma cells in an antigen-specific and major histocompatibility complex (MHC) class I-restricted manner, as demonstrated by cold-target inhibition and antibody-blocking studies. Interestingly, LP-1-specific CTLs showed no specificity for the idiotype. Consistent with studies demonstrating mucin 1 (MUC1) as a myeloma-associated antigen, we found MUC1 specificity of the CTLs induced with U266-derived RNA. As corresponding epitopes, we tested the described peptides M1.1 and M1.2 and found a striking fine specificity for M1.2, assuming a possible immunodominance of this peptide. This is the first report on the induction of myeloma-specific CTLs by RNA transfection of DCs.     

浆细胞样树突状细胞、干扰素α、调节性T细胞在Graves病中免疫致病机制的研究

目的:探讨浆细胞样树突状细胞(pDC)、干扰素α(IFN-α)及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)在Graves病(GD)中的免疫致病机制。方法:收集GD患者及正常对照者的外周血及甲状腺组织,利用实时PCR、免疫组化、流式细胞仪、细胞分选及纯化等技术对组织或体外实验中的细胞数目、mRNA水平或蛋白水平进行分析比较。结果:GD患者中外周血血清IFN-α水平升高,分泌IFN-α的pDC亚群细胞数目增加;IFN-α还可以诱导甲状腺细胞表达IFN-α诱导基因(IFIGs)、人类白细胞抗原(HLA)-DR基因和促甲状腺激素受体(TSHR)基因的mRNA;GD患者外周血中Treg细胞比例降低;DC使Treg细胞更易凋亡。结论:GD的发病与pDC比例增多、IFN-α水平升高以及Treg细胞比例下降等多种免疫调节因素相关。     

不同阶段 HBV 相关 ACLF 患者外周血 DC 及T 淋巴细胞免疫功能特点研究

目的：比较不同阶段的 HBV 相关慢加急性（亚急性）肝衰竭（HBV-ACLF）患者外周血树突状细胞（DC）、T淋巴细胞（TC）相关细胞免疫功能,阐述 DC-TC 轴在 HBV-ACLF 发病过程中可能的细胞免疫学机制。方法HBV-ACLF患者30例,分为早期组15例与中晚期组15例,另设健康对照组8例,以外周血来源的 PBMC 体外分离诱导培养 DC 与TC,应用流式细胞计数检测 DC 细胞表型 HLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD1α的表达率,及 TC 表面分子 CD3＋、CD4＋ T、CD8＋ T 淋巴细胞百分比,并检测 DC 上清液中 IFN-α、IL-4的分泌水平,比较不同阶段 HBV-ACLF 患者免疫细胞及炎性因子表达的差异。结果与健康人比较,HBV-CLF 患者 DC 表型 HLA-DR、CD1α、CD83、CD80、CD86表达率显著下降（t 值分别为5．3356、13．269、10．8742、13．3685和23．021,均 P ＜0．01）,DC 分泌因子 IFN-α显著升高（t 值为16．4569,P ＜0．01）;TC 表面分子 CD3＋、CD4＋ T、CD4＋／CD8＋细胞比值显著下降（t 值分别为7．4441、12．5557、11．0771,均 P ＜0．01）, CD8＋ T 细胞百分比显著上升（t＝4．4359,P ＜0．01）;HBV-ACLF 患者中晚期组 DC 表型 CD83、CD86表达率显著低于早期组（P 值分别为：0．0000,0．0057）,DC 分泌因子 IFN-α表达在早期组显著增多（P ＝0．0000）,IL-4表达在中晚期组显著增多（P ＝0．0000）,TC 表面分子中晚期组 CD4＋ T 细胞百分比、CD4＋／ CD8＋细 胞 比 值 显 著 下 降 （P 值分别为：0．0268、0．0002）,CD8＋ T 细胞百分比显著上升（P ＝0．0001）。结论不同阶段 HBV-ACLF 患者的 DC、TC 功能状态均表现为细胞免疫功能低下,中晚期患者的细胞免疫功能更为低下;HBV-ACLF 全病程存在促／抑炎性细胞因子功能紊乱,早期患者存在炎症因子过度释放,中晚期患者存在抗炎症细胞因子表达增强。