人胰岛细胞移植中胰岛细胞活性研究

目的:器官联合切取中的不同胰腺获取方法是否对于胰岛细胞的活性有影响。方法:实验于2001-08/2004-08在南方医科大学珠江医院器官移植中心和南方医科大学解剖教研室完成,12例自愿捐赠器官供者,采用高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过腹主动脉进行原位灌注后,进行胰腺、肾脏联合切取,肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取。取后采用胶原酶P消化胰腺,分离并纯化胰岛细胞,进行胰岛细胞活性染色,然后对比不同切除方法对于胰岛细胞活性率的影响。结果:胰腺、肾脏联合切取,肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取,如顺利、无污染、在冷却血时间5h以内,胰岛细胞活性率都在80%,经原位灌注后各方法之间无明显差别。结论:经腹主动脉进行原位灌注后,各种方法切取都符合无污染,冷却时间5h以内,不会影响胰岛细胞的活性。     

胰岛细胞移植过程中影响细胞活性的相关因素

目的：探讨胰岛细胞移植过程中胰腺的切取方法、冷缺血时间、组织相容性对于胰岛细胞活性的影响。 方法：实验于2001-09／2005-01在南方医科大学附属珠江医院完成。高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经主动脉原位灌注后，探讨肝、肾、胰腺联合及分别切取情况；测定不同的冷缺血时间条件下胰岛细胞活性的变化；体外培养胰岛细胞和血液供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系。 结果：④对于胰腺、肾脏联合切取，肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取顺利，在冷缺血时间5h以内胰岛细胞活性率都在80％，各方法之间无明显差别。②胰腺与肾脏经高渗枸橼酸盐嘌呤溶液原位灌注满意，胰岛细胞的活性与冷缺血时间呈负相关，冷保存指数和胰岛细胞活性呈正相关。③人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中，胰岛将诱发一个迅速血小板激活和消耗，中性粒细胞和单核细胞也被消耗，加入肝素后这种反应明显减轻。 结论：腹主动脉进行原位灌注后，用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性；经高渗枸橼酸盐嘌呤溶液保存的胰腺的冷缺血时间不易超过5．0～6，0h；胰岛细胞移植入血后，都将引发血细胞的类似炎症反应；HIA配型有助于提高移植后胰岛细胞的存活。     

胰岛细胞移植过程中影响细胞活性的相关因素

目的:探讨胰岛细胞移植过程中胰腺的切取方法、冷缺血时间、组织相容性对于胰岛细胞活性的影响。方法:实验于2001-09/2005-01在南方医科大学附属珠江医院完成。高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经主动脉原位灌注后,探讨肝、肾、胰腺联合及分别切取情况;测定不同的冷缺血时间条件下胰岛细胞活性的变化;体外培养胰岛细胞和血液供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系。结果:①对于胰腺、肾脏联合切取,肝脏、胰腺、肾脏联合切取及各器官的单独切取顺利,在冷缺血时间5h以内胰岛细胞活性率都在80%,各方法之间无明显差别。②胰腺与肾脏经高渗枸橼酸盐嘌呤溶液原位灌注满意,胰岛细胞的活性与冷缺血时间呈负相关,冷保存指数和胰岛细胞活性呈正相关。③人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中,胰岛将诱发一个迅速血小板激活和消耗,中性粒细胞和单核细胞也被消耗,加入肝素后这种反应明显减轻。结论:腹主动脉进行原位灌注后,用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性;经高渗枸橼酸盐嘌呤溶液保存的胰腺的冷缺血时间不易超过5.0～6.0h;胰岛细胞移植入血后,都将引发血细胞的类似炎症反应;HLA配型有助于提高移植后胰岛细胞的存活。     

异种胰岛细胞移植进展

近年来随着胰岛细胞移植技术在欧美地区的逐渐成熟和临床应用的发展[1,2],胰岛移植有望成为治疗糖尿病的根本方案,但困扰胰岛移植的两个主要问题仍然存在：胰岛细胞来源不足与移植后的免疫排斥反应。现就当前异种胰岛细胞移植的研究进展简要综述如下：     

中国已自主研究掌握成人胰岛细胞移植新技术

新华社福州11月13日消息，中国已自主研究掌握成人胰岛细胞移植新技术。     

胰岛细胞移植过程中细胞受损的提示

背景:胰岛移植后可能发生有害的组织不相容性反应,影响细胞的存活及功能.目的:探讨胰岛细胞移植中早期胰岛细胞的损害程度及原因.方法:采用脑死亡自愿捐赠器官供者的胰腺,采用胶原酶P进行消化分离胰岛细胞,测定不同冷缺血时间下胰岛细胞损害程度.将胰岛细胞与血液进行分组培养,HLA匹配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素:错配组:受者全血+胰岛细胞,受者全血+胰岛细胞+肝素;对照组:受者伞血+RPMI1640.观察移植早期可能出现的胰岛细胞损害.结果与结论:胰腺切取顺利,在冷缺血5 h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,超过8 h活性胰岛细胞数量只有19%甚至更低.人胰岛暴露于未经抗凝的人血液中,胰岛将诱发一个迅速血细胞消耗.血小板、中性粒细胞和单核细胞计数显示,无论HLA错配还是匹配与对照组相比较血细胞都发牛明显的消耗:加入肝素后HLA错配组及HLA匹配组血细胞消耗反应明显减轻;HLA匹配组胰岛细胞体外培养24 h活性胰岛细胞数量高丁HLA错配组(P<0.05),说明良好组织相容性有利于胰岛细胞存活.结果提示冷缺血时间对胰岛细胞活性的影响很大,在冷缺血时间小于5 h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞移植的胰腺获取;移植到血液的胰岛细胞会有普遍性的炎症性损害及HLA相关性损害.     

胰腺或胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病临床研究进展

据大量的实验与临床表明,胰腺或胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病是一种较为先进的治疗方法,移植成活的胰腺或胰岛组织,并具有内分泌功能者,不但可以改善或纠正新陈代谢紊乱,又可防止糖尿病并发症的发生与发展。因此,胰腺或胰岛移植治疗糖     

大鼠胰岛细胞的分离提纯及移植效果观察

背景:胰岛细胞移植已成为治疗1型和部分2型糖尿病的有效途径,但供体不足的问题限制了其发展。目的:改进胰岛细胞的分离和纯化方法,并观察其移植效果。设计:实验方法改进。单位:中国医科大学实验动物部和细胞生物研究室。材料:实验于2006-01/10在中国医科大学实验动物部和细胞生物研究室完成。供体为普通级封闭群Wistar大鼠,雌雄不限,体质量250～300g;受体为普通级封闭群SD大鼠,雄性,(Frompage2388)体质量180～220g,两种大鼠均购自中国医科大学实验动物部(许可证号:SYXK(LIAO)2003-0013)。方法:①胰岛细胞的分离纯化及胰岛功能评估:取未禁食的Wistar大鼠,麻醉后处死。于胆总管起始处剪一小口,将连着装有胶原酶的注射器的1mm直径的腰麻管顺行插入,将冷的胶原酶溶液(1.5g/L)注入胰管内,使胰腺充分膨胀。切取胰腺,将装有胰腺的离心管水浴消化,水浴期间间断加入1mol/L的NaOH使消化液的pH值保持在7.8±1.0,经Ficoll密度梯度离心法纯化胰岛。应用双硫腙法评估胰岛的纯度,应用丫啶橙/碘丙啶法评估胰岛的存活率,存活率=活细胞总数/(活细胞总数 死细胞总数)×100%。通过胰岛素释放实验检测胰岛活性:胰岛素释放指数=第3小时(高糖环境)的胰岛素含量/第2小时(低糖环境)的胰岛素含量。②胰岛移植效果的观察:受体SD大鼠腹腔内注射链脲霉素,非禁食状态下2次血糖>16.7mmol/L确定为糖尿病大鼠。将糖尿病大鼠按随机数字表法分为两组,即胰岛移植组和糖尿病组,每组8只。胰岛移植组于肾被膜下注射约1000个胰岛,糖尿病组注射相应体积的1640培养液,再随机取8只血糖浓度≤5.5mmol/L的SD大鼠作为正常对照组。术后每天检测大鼠血糖,以非禁食血糖小于11.1mmol/L者视为胰岛移植存活。胰岛移植组大鼠血糖正常3d后对胰岛移植组、糖尿病组和正常对照组大鼠分别进行静脉糖耐量试验,测定0,15,30,60,90及120min血糖。主要观察指标:胰岛的纯度、存活率及活性。结果:纳入受体SD大鼠24只,全部进入结果分析,无脱失。①平均每只大鼠胰腺可获得(1150±141)个胰岛,纯度>95%,存活率>98%,胰岛形态完好。②体外胰岛素释放实验低、高糖组的胰岛素释放量为(70.5±6.9)mIU/L,(321.4±11.6)mIU/L,胰岛素释放指数为4.60±0.52,提示所提取的胰岛β细胞有良好的功能。③胰岛移植组大鼠胰岛移植当天血糖既开始下降,3d后血糖下降至正常,维持正常血糖水平(6±2)d;而糖尿病组大鼠血糖均在16.7mmol/L以上。胰岛移植组静脉葡萄糖耐量试验曲线与正常对照组相似。结论:经原位灌注法分离、Ficoll密度梯度离心纯化的胰岛制备技术可以获得高纯度和活力良好的大鼠胰岛细胞。     

胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的护理

总结3例胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的护理体会。护理重点为术前做好心理卫生宣教,重视移植受体的适应证和禁忌证的评估和供体的胰岛细胞的处理,同时加强术前准备;术后严密观察生命体征变化,预防并发症发生,做好血糖监测。3例患者手术顺利,术后血糖稳定,无移植并发症以及低血糖发生。临床观察1年,2例完全脱离胰岛素治疗,1例胰岛素用量较前减少60%以上。     

胎鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植保护胰岛

背景：胰腺干细胞可在体外维持胰岛的结构,减少胰岛细胞坏死及凋亡,延长胰岛的体外存活时间,保护胰岛的活性。 目的：探索胎鼠胰腺干细胞与胰岛共移植体内保护移植胰岛,提高胰岛移植疗效的可行性。 方法：将成年大鼠35只随机等分为联合移植组、单独胰岛移植组、单纯胰腺干细胞移植组、模型组及对照组,前4组均腹腔注射链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液建立糖尿病模型。联合移植组、单独胰岛移植组、单纯胰腺干细胞大鼠分别在左侧肾包膜下移植分离纯化孕16 d SD大鼠胎鼠胰腺干细胞和/或成年SD大鼠胰岛。 结果与结论：联合移植组大鼠移植后5 d内血糖可降至正常,血浆胰岛素达到正常水平,胰岛存活时间（18.2±2.4） d;单独移植组大鼠血糖可于移植后1周内降至正常,胰岛存活时间（14.4±2.1） d;两组胰岛存活时间比较差异有显著性意义（P 〈0.05）。而其他组糖尿病大鼠血糖均未能降至正常范围。说明胎鼠胰腺干细胞与胰岛共移植可延长胰岛体内存活时间,保护胰岛功能,提高移植疗效。     

胰岛移植过程中胰岛培养的研究现状

目的:总结胰岛移植过程中胰岛培养的研究现状,为利用胰岛培养准备更多更好的胰岛提供理论依据和技术支持。资料来源:以计算机检索Medline和Pubmed数据库1994-01/2007-01与胰岛培养相关的文章,检索词为“isle,tculture”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索CNKI中国全文数据库1994-01/2007-01与胰岛培养相关的文章,检索词为“胰岛,培养”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①与胰岛培养相关的文章。②1994年以后发表的文章。排除标准:Meta分析类文章。资料提炼:共检索到1384篇与胰岛培养相关的文章,入选33篇。对所检索文章的相关信息加以综合概括,其中关于胰岛培养中基础培养基、培养添加物、培养温度、密度等方面的文章18篇,关于胰岛培养新尝试的文章12篇。资料综合:将胰岛培养后再行移植有一定优势,包括降低免疫原性和为术前准备赢得时间等。目前对于挑选合适培养基及其添加物,调整合适培养温度、培养密度以及保护胰岛的活性等都有了比较深入细致的研究;同时很多学者开始尝试一些新的方法延长胰岛培养时间,改善胰岛功能,包括加入细胞外基质、与其他细胞共培养、选用微重力系统培养以及利用胶囊包裹培养等均显示良好的效果。结论:虽然胰岛培养可能会影响胰岛的活性和功能,但随着对胰岛生理和病理生理特性研究的深入,新的技术方法可将这些影响降到最低。胰岛培养给临床实践带来的便利是其最大的优势,加强胰岛培养的研究与应用有着重要的意义。     

冷缺血时间及血液相容性与移植胰岛细胞活性的关系

背景:在胰岛移植过程中,胰岛细胞的数量和胰岛细胞的活性是非常重要的。胰岛细胞移植中冷缺血时间和组织相容性是关系胰岛细胞移植能否成功的关键问题。目的:观察冷缺血时间及血液相容性不同对于胰岛细胞数量和活性的影响。设计:观察性实验。单位:广西中医学院附属瑞康医院。材料:采用脑死亡自愿捐赠者的器官(已知血型和HLA配型),在其他器官切取后或同时进行胰腺的获取;血型相同、HLA配型相符的血液;HLA配型高致敏(错配3个以上位点)或群体反应性抗体>50%或淋巴毒阳性受者的血液;分离纯化后的胰岛细胞悬浊液,经过70μm的筛网滤过后,保留直径大于70μm的胰岛细胞,配置成浓度1.20×105L-1左右活性胰岛细胞悬浊液。方法:高渗枸橼酸盐嘌呤溶液经过腹主动脉原位灌注后,参照文献进行肝、肾、胰腺联合及分别切取。用于切取的时间:胰腺肾脏的联合切取、肝脏胰腺肾脏的联合切取方法平均需时15min,肝脏、胰腺、肾脏的单独切取平均需时20min,用于胰岛分离的胰腺12份,冷缺血时间2.5～8h。冷却血时间在5h以内的9份,温缺血时间0～3min,消化的时间15±2.4min。采用胶原霉P进行消化分离胰岛细胞,双硫腙、丫腚橙染色测定不同的冷缺血时间条件下活性胰岛细胞活性,分析体外胰岛细胞和血液与供受者的组织相容性和胰岛细胞存活的关系。主要观察指标:胰岛细胞活性率和血小板、中性粒细胞和单核细胞计数。结果:肝、肾、胰腺联合切取及各器官的单独切取顺利,在冷却血5h以内胰岛细胞活性率都在80%以上,用于胰岛细胞移植的胰腺和其他器官的切取不会影响胰岛细胞的活性;人类胰岛暴露于未经抗凝的人类血中,胰岛将诱发一个迅速的血细胞消耗;进行血小板、中性粒细胞和单核细胞计数,HLA错配组和HLA匹配组与对照组比较血细胞都发生明显的消耗;加入肝素后血细胞计数与对照组比较差异明显(P<0.05),反应明显减轻。HLA匹配组和HLA错配组胰岛细胞体外培养24h活性胰岛细胞数量较,差异明显(P<0.05)。结论:在冷缺血时间<5h的情况下获取的胰腺可以用于临床胰岛细胞的移植;血液相容性好能够明显提高胰岛细胞移植的成功率。     

胰岛移植部位的研究现状

胰岛移植部位可分为原位胰岛移植和异位胰岛移植两大类。原位胰岛移植指从移植胰岛所分泌释放的胰岛素,通过肝门静脉系统入肝代谢,没有改变原来的胰岛素代谢途径,包括肝脏的门静脉系统、大网膜等部位的胰岛移植。异位胰岛移植所分泌的胰岛素改变了其原有的代谢途径。理想的胰岛移植部位一般具备以下特点：移植的成功率高同时移植物远期存活率高、手术操作简单创伤小、并发症少,同时风险小,便于重复检测等特点。该文就对胰岛移植部位的研究现状作一综述,以为后续相关研究提供借鉴。     

胰岛细胞移植治疗糖尿病技术逐步走向成熟

来自英国阿伯丁大学医学利一学院的凯文&#183;多切蒂教授近日在上海召开的“中国-苏格兰糖尿痫研究合作论坛”上介绍，糖尿病主要分Ⅰ型和Ⅱ型两大类，其中Ⅰ型糖尿病为胰岛素依赖型，适合胰岛细胞移植。     

从胰岛细胞移植到胰腺干细胞移植，治愈糖尿病还有多远？

背景：胰岛细胞移植和胰腺干细胞移植是近年来糖尿病治疗的研究热点,也是治愈糖尿病最有希望的途径。目的：探讨胰岛细胞移植和胰腺干细胞移植治疗糖尿病的可行性、优势、面临的问题及解决的办法。方法：收集胰岛细胞移植和胰腺干细胞移植治疗糖尿病的相关实验和临床研究,进行实验数据分析两种细胞移植途径治疗糖尿病的影响因素,从细胞分子生物学水平认识胰岛细胞移植和胰腺干细胞移植治疗糖尿病的优势和缺点。结果与结论：胰岛细胞移植治疗糖尿病受供体不足的制约,胰腺干细胞移植解决了胰岛细胞供体短缺的有效途径,但胰腺干细胞移植的研究还停留在动物实验阶段,需要进行广泛的临床研究。首先要明确胰腺干细胞的特异性标志物,其次要掌握将相关干细胞诱导分化为胰腺干细胞的方法和技术。     

胰岛移植:寻找新的β细胞来源

<正>胰岛移植被认为是1型糖尿病最有前景的治疗方法之一。若以生活质量改善及血糖控制为目标,胰岛移植的效果令人满意;但若以脱离外源胰岛素或预防并发症为目标,则前者差强人意,后者效果不明[1]。为此,美国糖尿病协会仍将胰岛移植定为实验阶段,距离临床应用尚有距离[2]。胰岛移植及面临的问题胰岛移植最早可以追溯至1972年的大鼠实验[3],此后逐渐开展,但成功率很低。一项对1990年至1999     

胰岛细胞移植治疗糖尿病技术逐步走向成熟

来自英国阿伯丁大学医学科院的凯文&#183;多切蒂教授近日在上海召开的“中国-苏格兰糖尿病研究合作论坛”上介绍,糖尿病主要分Ⅰ型和Ⅱ型曲大灯,其中Ⅰ型糖尿病为胰岛索依赖型,适合胰岛细胞移植。     

胰岛细胞移植的新进展

胰岛素虽然很大程度改善了糖尿病患者的糖代谢紊乱及延迟了相关并发症的发生，但存在低血糖、胰岛素抵抗以及需反复注射的缺点。胰岛细胞移植简单、安全、有效，免除了胰腺移植术后血管并发症等的发生，是治疗糖尿病最有前景的治疗方法。本文就近几年胰岛细胞移植的免疫耐爱诱导、免疫抑制药物的应用、移植物微循环的建立等最新进展作一综述。     

影响胰岛移植治疗糖尿病远期效果的因素

胰岛移植是治疗胰岛素依赖型糖尿病的一种有效方法，目前在国际上有取代胰腺移植的趋势。人的胰岛移植虽然已在临床成功地开展，但胰岛移植的长期疗效还不能令人满意。导致胰岛功能丧失的原因至今仍不完全清楚。因此，深入研究影响移植胰岛存活的因素，对于提高胰岛移植的长期疗效具有非常重要的意义。胰岛移植糖尿病患者的选择、组织配型，胰腺器官的采集、保存和运输，胰岛细胞的分离和纯化，胰岛移植的实施，胰岛移植期间患者的血糖控制和免疫抑制药的应用，胰岛移植后的功能评估等等，每个技术环节完成的质量，都是影响到胰岛移植的因素。     

胰岛移植：寻找新的β细胞来源

胰岛移植被认为是一型糖尿病最有前景的治疗之一。Edmonton移植方案的出现为长期脱离外源胰岛素治疗提供了可能。胰岛移植目前面临的主要问题之一是移植细胞来源的短缺。本文总结了近年来关于可能用于移植的胰岛细胞来源的研究结果。一型糖尿病是一种针对胰岛β细胞的自身免疫性疾病,使用异体来源的β细胞恰恰可以避免自身免疫反应对新移植细胞的损伤,为胰岛细胞来源提供了无限可能。