变色液体培养基快速培养分支杆菌的临床应用

快速分离临床标本中分支杆菌一直是结核病学科领域中迫切需要解决的课题。结核分支杆菌分裂周期长,生长速度慢,在改良罗氏培养基上一般需要2～8周才能看到可分辨的菌落,难于满足临床需要,我们应用变色液体培养基对临床痰标本进行培养可快速检出生长的分支杆菌,现报告如下。     

MPB64抗原检测快速诊断结核分枝杆菌的临床价值

目的比较痰涂片抗酸染色、改良酸性罗氏培养、MPB64的免疫胶体金法用于检测结核分枝杆菌特异性的分泌蛋白质MPB64,评价MPB64的免疫胶体金法在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法选取438例确诊肺结核患者痰液,进行痰涂片抗酸染色、7H9液体培养基和改良酸性罗氏培养基培养、基于MPB64的免疫胶体金法检测,对结果进行比较分析。并选取痰涂片确认为阳性的标本33例,用米氏7H9液体培养和基于MPB64的免疫胶体金法进行检出时间对比。结果痰涂片阳性率为14.8%,罗氏培养阳性率为20.7%,7H9液体培养阳性率24.8%,MPB64的免疫胶体金法阳性率为25.1%。基于MPB64的免疫胶体金法在培养的第15天检出32例阳性;而单纯的7H9液体培养加抗酸染色检测法在第15天只检出11例阳性。结论7H9液体培养配合基于MPB64的免疫胶体金法可以作为一种较为敏感和特异的检测结核分枝杆菌感染的方法,并可以有效的区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。     

BACTEC 960培养液抗酸涂片细菌形态观察在分支杆菌菌型鉴定中的意义

目的:观察分支杆菌在BACTEC960培养仪中的生长特点和涂片细菌抗酸形态,提供初步快速鉴定分支杆菌的实验室方法,从而提高分支杆菌的鉴定水平.方法:收集我院住院病人痰,脑脊液,胸水,尿液标本共计1544份,经前处理后分别接种MGIT培养基及对硝基基甲酸PNB培养基,置BACTEC960快速培养仪和37C培养箱,待培养仪出现阳性示警后,取出MGIT培养管,吸取培养物直接涂片,作抗酸染色和革兰氏染色形态学检查.结果:MGIT培养管内培养物清淅,有片状或团状沉淀物,涂片分支杆菌为长链状排列,PNB不生长.     

防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核的诊断价值

目的研究防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)技术对痰菌阴性肺结核患者的诊断价值。方法对96例痰菌阴性肺结核患者进行经支气管镜防污染支气管肺泡灌洗,防污染支气管肺泡灌洗液经过前处理,离心沉渣行涂片荧光染色镜检抗酸杆菌、改良罗氏法分离培养及BACTEC MGIT960快速结核菌培养。结果防污染支气管肺泡灌洗液离心沉渣镜检抗酸杆菌阳性20例(20.8%),改良罗氏培养基分离培养阳性30例(31.3%),BACTEC MGIT960快速培养技术培养阳性59例(61.5%),最终获病原学确诊62例,确诊率为64.6%。结论防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核患者具有重要的诊断价值,对灌洗液进行多种检查可提高检出的阳性率。     

用分支杆菌生长指征管从临床标本分离分支杆菌与用BACTEC 460结核菌系统和罗氏培养基的对比评价

背景:使用新型简便和快速的诊断方法对当今结核病控制是十分必要的。目的:分支杆菌生长指征管(MGIT~(TM))在分支杆菌的分离和检出时间上与BACTEC 460结核菌系统和罗氏培养基的评价与对比。设计:对276名病人各种不同部位的377份标本进行分支杆菌的检验。标本应用4％氢氧化钠乙酰半胱氨酸法进行前处理后,接种在MGIT~(TM)培养基、BACETC和和罗氏培养基进行对比研究。萋尼氏染色作为参考。结果:MGIT~(TM)法具有95.4％的敏感性,100％的特异性,100％的阳性预计值和89.3％的阴性预计值。MGIT~(TM)与罗氏培养基和BACTEC的临床符合率分别为0.87和0.96,MGIT~(TM)结核菌检出时间是11日(7-31日),鸟型分支杆菌和其他分支杆菌检出时间分别为3日和8日。结论:分支杆菌生长指征管从临床标本中检出分杆菌看来是快速、简便和高度精确的。     

溶血离心培养法检测肺结核患者外周血分支杆菌及其L型

目的　建立一种自血液中分离分支杆菌及其L型的新方法。方法　肺结核患者的外周血直接或溶血离心后取沉淀种入 92 3TB和 92 3TBL液体培养基培养 ,培养物用免疫酶染色 (ABC法 )鉴定。结果　 6 5份标本分支杆菌和分支杆菌L型血培养的阳性率、总检出率分别为 15 %、2 6 %、32 % ;溶血离心培养法的阳性率明显高于直接培养法 (P <0 0 5 ) ;相应痰培养中 ,抗酸杆菌和抗酸菌L型的阳性率、总检出率分别为 38%、2 0 %和 5 2 % ,高于肺结核患者外周血培养的阳性率 (P <0 0 5 ) ;但血、痰配对检测总阳性率可达 6 5 %。结论　肺结核患者外周血存在分支杆菌及其L型 ,并以L型为主 ;溶血离心液体培养结合免疫酶染色可常规用于检测血液中分支杆菌及其L型 ;结合痰标本检测 ,可提高肺结核患者细菌学检查的阳性率     

结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果分析

目的 :通过分析结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果,探讨提高其阳性检出率的方法。方法 :采集267例临床诊断为结核性胸膜炎患者的胸腔积液,离心后弃上清,用氢氧化钠(Na OH)消化处理,磷酸盐缓冲液(PBS)中和离心,取沉淀涂片抗酸染色镜检,接种MGIT960系统培养管和罗氏培养基,分析培养和涂片镜检结果 ,采用χ~2检验比较抗酸杆菌涂片与分枝杆菌培养阳性率的差异,BACTEC MGIT 960系统与罗氏培养阳性率的差异。结果:267例结核性胸膜炎患者胸腔积液经消化处理后,抗酸杆菌涂片阳性者81例,阳性率为30.6%,涂片1~8条/300个视野至1+以下者占涂片阳性的97.5%。罗氏培养233例,培养阳性39例,阳性率为16.7%,培养1+以下者为97.4%。MGIT960系统培养221例,培养阳性72例,阳性率为32.6%。消化后涂片法阳性率高于罗氏培养法(χ~2=7.92,P0.05)。结论:结核性胸膜炎患者胸腔积液中抗酸杆菌菌量少。胸腔积液经消化集菌可显著提高抗酸杆菌涂片阳性率。相比罗氏培养,MGIT 960系统能显著提高分枝杆菌培养的阳性率。     

分枝杆菌双相罗氏培养基在结核病诊断中的应用研究

目的 评价分枝杆菌双相罗氏培养基在结核病诊断中的价值,探讨其在我国基层实验室应用的可行性。方法采取多中心试验方法,在我国3个省的3个地市级结核病诊疗机构连续纳入2014年10月至2015年10月期间的初诊肺结核可疑症状者2320例,其中15例因分枝杆菌改良罗氏培养基(简称“罗氏培养基”)和分枝杆菌双相罗氏培养基(简称“双相培养基”)中的1种或2种培养污染或结果缺失,对两种培养基培养结果进行比较时不计入分析。每例患者留取3份痰标本(即时痰、夜间痰、晨痰)进行萋-尼染色法涂片镜检(简称“涂片”),并选取2份性状好的痰标本同时进行罗氏培养基培养、双相培养基培养。使用SPSS 24.0软件,采用配对χ²检验比较两种培养基的阳性检出率,以P<0.05为差异有统计学意义;分别以罗氏培养基培养结果、临床诊断为标准对双相培养基的检测效能进行评价;采用Wilcoxon秩和检验对罗氏培养基与双相培养基检出时间的差异进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果罗氏培养基和双相培养基两种培养方法阳性检出率分别为19.65%(453/2305)和22.00%(507/2305),差异有统计学意义(χ²=22.091,P=0.000);以罗氏培养基培养结果为标准,双相培养基的敏感度为91.39%(414/453),特异度为94.98%(1759/1852),一致率为94.27%(2173/2305);以临床诊断为标准,罗氏培养基和双相培养基的ROC曲线下面积分别为0.694(95%CI:0.672~0.715)、 0.707(95%CI:0.685~0.728);罗氏培养基报阳时间中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为28(21,34)d,双相培养基报阳时间M(Q₁,Q₃)为18(14,24)d,差异有统计学意义(Z=15.114,P=0.000)。结论双相培养基较罗氏培养基具有更高的阳性检出率,诊断价值较高,报阳时间明显缩短,是一种可以作为结核病临床诊断的参考方法,在我国基层实验室有一定推广应用价值。     

Bactec960等三种分支杆菌分离培养方法的临床应用评价

目的:评价一种新型快速自动化检测分支杆菌系统.方法:应用分支杆菌标准菌株及62例临床标本同时接种Bactec960MGIT培养基、Bactec4607H12B培养基和酸罗氏培养基,观察其培养结果、阳性出现的时间以及污染情况.     

应用免疫磁珠分离-改良罗氏培养技术检测痰结核分枝杆菌的研究

目的通过免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)富集痰液中的结核分枝杆菌,提高痰液培养的阳性率,以期用于结核病的快速诊断。方法制备兔抗结核杆菌IgG抗体,并将其结合于免疫磁珠表面。采集71例确诊结核病患者的痰液标本,通过免疫磁珠分离技术捕获、富集吸附结核分枝杆菌后用改良罗氏培养基培养,并与传统改良罗氏(L-J)培养法和痰涂片抗酸染色法作比较。结果 71例结核病患者痰涂片抗酸染色检查阳性26例,阳性率36.6%;传统改良L-J培养阳性34例,阳性率47.9%;免疫磁珠分离技术捕获、富集结核分枝杆菌后进行改良L-J培养阳性48例,阳性率67.6%。三者阳性率差异有统计学意义(P<0.05),改良L-J培养和痰涂片检查阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用免疫磁珠分离技术捕获、富集痰液中的结核分枝杆菌后进行培养,可显著提高痰培养的阳性率,该方法可用于结核病的快速诊断。     

痰分支杆菌快速培养和药敏试验的评价

2002年本院住院和门诊肺结核病人(按2003年结核病诊断标准确诊为肺结核)痰140份，同时采用改良罗氏培养基分离培养加以对照。痰标本经NALC—NaOH消化振荡离心法前处理后，无菌条件将待测液接种于快速培养瓶和改良罗氏培养基内，同时将标本涂片：萋-纳二氏染色，镜检。     

防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核的诊断价值

目的　研究防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)技术对痰菌阴性肺结核患者的诊断价值。方法 对96例痰菌阴性肺结核患者进行经支气管镜防污染支气管肺泡灌洗,防污染支气管肺泡灌洗液经过前处理,离心沉渣行涂片荧光染色镜检抗酸杆菌、改良罗氏法分离培养及BACTEC MGIT960快速结核菌培养。结果 防污染支气管肺泡灌洗液离心沉渣镜检抗酸杆菌阳性20例(20.8%),改良罗氏培养基分离培养阳性30例(31.3%),BACTEC MGIT960快速培养技术培养阳性59例(61.5%),最终获病原学确诊62例,确诊率为64.6%。结论 防污染支气管肺泡灌洗对痰菌阴性肺结核患者具有重要的诊断价值,对灌洗液进行多种检查可提高检出的阳性率。     

结核分支杆菌植物激素培养基的研究

本文报道了一种促进结核分支杆菌快速生长的植物激素培养基并与改良罗氏培养基比较结果:试验菌H_(37)R_a在此培养基上,菌落初生长时间为3.3天(10~(-2)mg接种量)和9.3天(10~(-5)mg接种量),改良罗氏培养基分别为7.6天和13.6天。H_(37)R_a菌在上述两种培养基上的增代时间分别为13.1小时和16.1小时。经临床618例结核病病人痰培养比较,激素培养基出现阳性结果时间平均为10.6天,改良罗氏培养基平均为22.6天,两种培养基有极显著差异。     

应用Tween80鸡蛋固体培养基分离培养分支杆菌观察

目前,我国做分支杆菌分离大多以改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基为主。据报道在鸡蛋固体培养基中,加入适量的Tween80作为碳源,可使抗酸菌均匀生长。我们以Tween80鸡蛋固体培养基、改良罗氏培养基和丙酮酸钠培养基(以下分别简称为T80基、改罗基和丙基)对806例肺结核病人痰标本作比较观察。现将结果报告如下。一、材料和方法 1.标本来源留取晨起第一口深咳痰。 2.T80基的配制基础液成分:KH_2PO_41.2g,Mg-     

夹层杯离心涂片集菌法快速检测抗酸杆菌临床应用的初步观察

目的研究夹层杯离心涂片集菌法快速检测抗酸杆菌的实用价值。方法夹层杯离心涂片集菌法和直接涂片法对结核门诊病人痰标本的阳性检出率进行比较;并对住院确诊肺结核病人的痰标本与罗氏培养法比较。结果结防门诊病人痰240份,直接涂片法阳性率25.8％,夹层杯涂片离心集菌法痰涂片阳性率40.8％,2者比较差异有统计学意义。以罗氏培养法为标准,夹层杯涂片离心集菌法的敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值及准确性分别为： 90.9％、93.8％、97.6％、78.9％和91.7％。结论夹层杯离心涂片集菌法是一种更利于标准化、简便化的抗酸杆菌检查方法,检出率优于直接涂片法,并与罗氏培养法相比有较满意的符合率。大大有利于检验工作人员的生物安全防护,提高检验水平。     

GeneXpert MTB/RIF试验与4种结核分枝杆菌检测方法的比较

目的:比较GeneXpert MTB/RIF试验(Xpert试验)与4种结核分枝杆菌检测方法,探讨Xpert试验在肺结核快速诊断中的应用价值。方法:收集2015-08—2016-02武汉市肺科医院各病区送检的同一患者的3份痰标本共计536例,同时进行荧光抗酸染色涂片、结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测(TB-DNA PCR)、Xpert试验、罗氏固体培养及MGIT960液体培养检测,比较5种方法在诊断结核病中的敏感度与特异度。结果:荧光抗酸染色涂片、TB-DNA PCR、Xpert试验、罗氏固体培养及MGIT960液体培养检测结核分枝杆菌的敏感度分别为42.97%、57.57%、62.43%、54.59%和62.43%;特异度分别为95.27%、99.21%、98.42%、88.97%及88.19%。在涂片阳性肺结核中,Xpert检出率为99.37%(158/159),MGIT960培养检出率为98.11%(156/159);在涂片阴性肺结核中,Xpert检出率为34.60%(73/211),MGIT960培养检出率为35.55%(75/211)。在220例Xpert检测与培养均阳性的标本中,两者均耐药为32例,均敏感为179例,Xpert利福平耐药而比例法敏感为8例,Xpert利福平敏感而比例法耐药为1例。2种方法检测利福平耐药具有高的一致性(Kappa值0.85)。结论:Xpert试验在肺结核诊断中具有与金标准液体培养一致的敏感性,同时快速筛查利福平耐药结核,对控制耐药结核的传播具有重要的临床价值,值得在临床推广应用。     

ZnSO4浮聚抗酸菌的实验观察

可疑结核病人标本涂片检查抗酸杆菌 ,仍是确诊结核病最为快速、简便和可靠的检查手段 ,其缺点检出率较低。本文取可疑结核病人痰、胸水和支气管肺泡灌洗液 (BAL )三样标本进行直接涂片、离心沉淀和 Zn SO4浮聚法实验比较 ,结果如下 :1　材料和方法1.1　标本来源　取我院门诊、住院可疑结核病人痰标本 16 0例 (份 ) ,胸水 12 5例 ,BAL 6 9例。1.2　方法　 1标本直接涂片法 ,取合格标本直接厚涂片 ,染色镜检抗酸杆菌。2离心沉淀法　取华氏管一支加痰标本 1～ 2 ml加 4% Na OH溶液 2倍于痰标本 ,经彻底消化后 40 0 0转 /分 ,2 0分钟离心。…     

化疗期间结核杆菌的致病性

一般认为,肺结核患者化疗2周后即不再有严重的传染性.此时,即使患者痰涂片和培养仍为阳性,也认为无传染性,提示抗结核化疗使结核杆菌的致病性发生了改变.作者用豚鼠模型旨在验证这一理论.自21例直接痰涂片阳性的肺结核患者中获取29份痰标本,并按标准制备后备用.所有患者均接受了利福平、异烟肼和乙胺丁醇3药治疗.取痰标本时的治疗时间分别为0、4、8、12周及20周以上.直接痰涂片阳性结果分别为-、±、+,++、+++5个等级.每份制备的痰标本,1/2接种于Lowenstein-Jensen 培养基,培养结果分别为0(没有生长)、     

TaqMan-PCR技术诊断结核病的临床应用研究

目的　探讨TaqMan-聚合酶链反应 (TaqMan-PCR)技术在结核病快速诊断中的临床价值。方法 对 155例活动性肺结核患者的痰和外周血、130例结核性胸膜炎患者的胸腔积液和外周血以及 61例结核性脑膜炎患者的脑脊液和外周血应用TaqMan -PCR检测结核分支杆菌DNA ,痰、胸腔积液和脑脊液进行抗酸染色涂片检查 ,另外 ,痰标本还进行了BACTEC和改良罗氏培养；同期以52例肺癌患者的痰和外周血、50例恶性胸腔积液患者的胸腔积液以及 33例健康人的外周血作为对照进行TaqMan-PCR检测。 结果 155例活动性肺结核患者的痰和外周血、130例结核性胸膜炎患者的胸腔积液和外周血以及 61例结核性脑膜炎患者的脑脊液和外周血TaqMan-PCR的阳性率分别为 49.0%和 51.6%、45.4%和 38.5%以及 50.8%和 42.6% ,痰、胸腔积液和脑脊液TaqMan-PCR的阳性率显著高于抗酸染色涂片以及BACTEC和罗氏培养 (P＜0.05)。TaqMan-PCR检测痰、胸腔积液和外周血的特异性分别为 96.2%、98%和 96.5%。结论 TaqMan-PCR具有较高的敏感性和特异性 ,对结核病的快速诊断具有一定的价值。     

荧光定量聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌的临床应用

我们采用荧光定量聚合酶链反应 (ＦＱ ＰＣＲ)技术检测了115例结核患者高度疑有结核分支杆菌的标本和 3 0例非结核病的患者标本 ,并与培养法、抗酸染色法和ＰＣＲ 电泳法进行了比较 ,现报告如下。对象与方法　对象 :115例临床诊断为结核病的患者为四川省人民医院门诊和住院患者 ,符合结核病诊断标准。 3 0例非结核患者为对照组 ,其中肺炎 2 5例 ,慢性支气管炎 5例。标本包括痰、胸腹液、晨尿和精液。方法 :标本经处理后 ,进行碱性复红染色 ;罗氏培养基培养 ;ＰＣＲ电泳 ,每份用该法检测 2次。ＦＱ ＰＣＲ :仪器为美国ＡＢＩ公司生产的 770 0…