新生大鼠耳蜗增殖细胞的培养鉴定及超微结构观察

目的 研究新生大鼠耳蜗内是否存在增殖细胞,以及该增殖细胞能分化为何种细胞.方法 分离新生SD大鼠耳蜗细胞并进行培养,加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-demoxyuridine,BrdU)检测细胞的增殖状态,通过免疫荧光鉴定细胞球及分化细胞的性质.分离48个耳蜗Corti器,采用数字表格法随机分成4组进行细胞培养:对照组、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)组、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)组和EGF+bFGF组,每组12个,定量计数单个耳蜗培养细胞球的数量,结果进行方差分析.采用透射和扫描电镜观察细胞球的超微结构.结果 耳蜗Corti器细胞培养可见细胞球形成,90.1%球内细胞BrdU表达阳性,且大部分细胞巢蛋白表达阳性.分化细胞表达毛细胞标志物肌球蛋白7A、espin及鬼笔环肽阳性,神经元标志物神经丝蛋白(neurofilament M,NF-M)表达阳性,并且可见肌球蛋白7A和BrdU,espin和BrdU,以及NF-M和BedU双标阳性的分化细胞.对照组平均((-x)±s,以下同)每个耳蜗Corti器的增殖细胞数量为(45.3±23.0)个,EGF组(86.2±34.1)个,bFGF组(96.5±33.6)个,EGF+bFGF组(131.2±47.0)个.除EGF组和bFGF组之间P＞0.05外,其余各组之间P值均＜0.05,差异具有统计学意义.扫描和透射电镜下细胞球内细胞呈圆球形,大小均匀一致,表面具有众多微绒毛.胞质内有丰富的内质网、微管、微丝和线粒体等细胞骨架结构和细胞器,相邻细胞之间可见紧密连接、桥粒与缝隙连接.结论 大鼠耳蜗内存在增殖细胞,可分化为具有纤毛样结构的毛细胞及神经元.EGF和bFGF均可诱导增殖细胞分裂增殖.该增殖细胞的超微结构显示其具有早期幼稚细胞发育的特征.     

MicroRNA-21对儿童中耳胆脂瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

目的 探讨MicroRNA-21(miR-21)及其靶基因第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白在儿童中耳胆脂瘤细胞增殖和凋亡中的调控作用.方法 选取2013年8月至2015年3月儿童中耳胆脂瘤患者手术标本23例,提取并培养其中耳胆脂瘤角质细胞,分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组以介导miR-21抑制体的慢病毒载体转染中耳胆脂瘤角质细胞,阴性对照组转染空慢病毒载体,空白对照组不进行处理,利用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞中miR-21和PTEN基因、PDCD4蛋白的表达,利用EdU和TUNEL法检测各组细胞的增殖和凋亡情况.结果 实验组胆脂瘤角质细胞中miR-21表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),PTEN基因和PDCD4蛋白的表达明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),EdU阳性细胞显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),TUNEL阳性细胞显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 MiR-21可负性调控其靶基因PTEN和PDCD4的表达,miR-21抑制体可有效抑制儿童胆脂瘤角质细胞的增殖活性,促进细胞的凋亡.     

小干扰RNA靶向沉默磷酸酶张力蛋白同源物基因在角质细胞中的表达及其对中耳胆脂瘤增殖的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)沉默第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在角质形成细胞中的表达来研究PTEN对胆脂瘤增殖能力的影响,及与其相关的细胞外信号调节激酶5(extrace...     

鼓膜角质瘤(附3例报告)

鼓膜角质瘤(Karatoma)少见,发病多较隐蔽,常不易早期诊断。本文报告了3例鼓膜角质瘤病人,并对该病进行了讨论。病因:(1)可为全厚或断层皮片外植法修补鼓膜穿孔的并发症。(2)长期鼓膜插管可诱发本病,插管时鼓膜上皮层随之被植入,上皮层内棘细胞在鼓膜纤维层与粘膜层间增殖形成。     

角质细胞生长因子对喉癌细胞株Hep-2及细胞外调节信号激酶活性及表达的影响

目的：观察角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）对喉癌细胞株Hep-2增殖及细胞外调节信号激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）活性和表达的影响。方法：培养喉癌细胞株Hep-2,MTT比色法及流式细胞仪测定不同浓度KGF对细胞增殖的影响;免疫沉淀法纯化蛋白并用ERK1／2试剂盒测定ERK活性;Western—blot测定p-ERK表达。结果：KGF能显著促进细胞增殖,增强ERK活性及p-ERK表达。结论：KGF可以促使喉癌细胞株Hep-2增殖,其机制与增强ERK活性及p-ERK表达有关。     

鼓膜的蜕皮和硬痂

中耳炎的脓性渗出物和粘着的角质细胞在鼓膜外侧面形成硬痂,自发脱落时,称为蜕皮。多见于儿童。星金黄色或淡褐色,厚薄不一,干燥易碎。本文研究收集到的蜕皮取自25例患者的外耳道,其中24例为慢性浆液性中耳炎,经组织学方法处理后,其切片内可见多层角质细胞及散在的变性白细胞。透射电镜下观察,角质细胞呈网状,有的肿胀呈薄片状。细胞     

Caveolin-1对喉鳞状细胞癌抑制作用的体内外研究

目的探讨caveolin-1对喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞生长的影响。方法通过脂质体法转染喉鳞癌细胞株Hep-2细胞，筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆，并用实时定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定；用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的体外增殖能力；免疫印迹法检测细胞中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、磷酸化EGFR、细胞外信号调节激酶1、2（extracellular signal-regulated kinase，Erk1、2）、磷酸化Erk1、2，caveolin-1蛋白的表达；免疫共沉淀法检测caveolin-1和EGFR的结合情况；转染后的细胞接种至裸鼠皮下，观察肿瘤的生长情况，裸鼠移植瘤中caveolin-1、磷酸化EGFR、磷酸化Erk1、2的蛋白表达用免疫组织化学法检测。结果成功筛选到稳定高表达caveolin-1的克隆；与对照组相比，转染后的细胞体外增殖能力明显减弱；细胞接种到裸鼠皮下，未转染组和转染空载组中裸鼠均形成肿瘤（100％，4／4），稳定转染caveolin-1的Hep-2-CAV1-2组中裸鼠未形成实体肿瘤（0％，0／4），Hep-2-CAVl-3组中4只裸鼠中只有3只形成肿瘤（75％，3／4），但肿瘤生长缓慢，最终生成肿瘤的重量与未转染组相比明显减小（t=3．05，P〈0．05）；免疫共沉淀显示caveolin-1与EGFR在Hep-2细胞中是结合的；免疫印迹法和免疫组织化学法发现转染caveolin-1后细胞中EGFR和Erk1、2的磷酸化水平降低。结论caveolin-1能够抑制喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2的生长，抑制EGFR-MAPK信号通路可能与其抑癌作用相关。     

头颈鳞癌表皮生长因子受体靶向治疗抵抗机制的研究进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是位于细胞表面的一种膜受体,属于ErbB酪氨酸激酶家族成员,也被称为Her1或ErbB1。EGFR及其配体在肿瘤恶性行为中发挥重要角色,涉及增殖、分化、抗凋亡、血管新生和转移等多个方面。在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)患者中,超过90%存在EGFR的表达。作为独立的预后因素,EGFR高表达与放射敏感性降低及复发风险增加相关,其结果是降低HNSCC患者的总体生存     

酪氨酸蛋白激酶在胆脂瘤形成中的作用

目的探讨表皮生长因子受体(epidermicgrowthfactorreceptor,EGFR)和磷酸化酪氨酸在后天性中耳胆脂瘤的表达情况,分析酪氨酸蛋白激酶途径在胆脂瘤上皮增殖演变过程中的作用。方法应用免疫组化SP染色方法和计算机图像分析系统,连续观察10例具有典型鼓膜松弛部穿孔的后天性中耳胆脂瘤患者的不同部位(胆脂瘤上皮、鼓膜穿孔部位邻近皮肤、耳道深部正常皮肤)中EGFR和磷酸化酪氨酸的表达情况。结果EGFR和磷酸化酪氨酸在耳道深部正常皮肤、鼓膜穿孔部位邻近皮肤和胆脂瘤上皮中呈一致性连续阶梯状上升,它们在胆脂瘤上皮各层细胞均存在阳性表达,以基底层和棘层为著;穿孔部位邻近皮肤则在基底层和棘层细胞阳性表达;耳道深部正常皮肤仅基底层阳性表达。两者之间存在正相关,总相关系数为0.989(P<0.01)。结论酪氨酸蛋白激酶途径在胆脂瘤上皮增殖演变过程中起重要作用。     

表皮生长因子受体在鼻咽癌中的表达及意义

目的探讨表皮生长因子受体与细胞增殖、转化的关系。方法采用免疫组化ABC法检测24例正常鼻咽黏膜上皮及60例鼻咽癌组织表皮生长因子受体的表达情况。结果表皮生长因子受体在鼻咽癌组织中呈异质性表达,其阳性率明显高于正常黏膜组织(P<0.05),且表达情况与颈淋巴结转移及预后存在相关性。结论表皮生长因子受体在鼻咽癌组织中的表达水平可作为评估鼻咽癌细胞增殖状态、颈淋巴结转移情况及病人预后的一项参考指标。     

双血卟啉醚对头颈鳞状细胞癌的体外光敏作用

作者就双血卟啉醚(dihematoporphyrinether DHE)对头颈鳞癌细胞株(由扁桃体瞵癌细胞建株)的直接细胞毒性和光敏作用作了体外试验研究,并以培养的正常成纤维细胞、正常角质细胞(来自新生儿包皮组织)及恶性     

鸡内耳感觉上皮细胞的自然增殖状态

为研究出生后鸟纲动物内耳感觉上皮细胞是否存在持续的细胞增殖，采用８天龄正常鸡１０只（２只做阴性对照），按１００ｍｇ／ｋｇ剂量腹腔注射ＤＮＡ合成的前体物质５－溴脱氧尿核苷（５－ｂｒｏｍｏｄ－ｅｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ），６小时后处死动物，取颞骨制备石蜡切片，结合免疫细胞化学技术，对鸡基底乳头和前庭器官中的细胞增殖活动进行观察。结果发现，鸡基底乳头切片中未见阳性标记细胞，而椭圆囊斑、球囊斑及壶腹嵴感觉上皮中存在着数量较少的标记支持细胞和标记毛细胞。结论：出生后的鸟纲动物前庭器官存在着较低水平的持续增殖。提示：出生后鸟纲动物前庭器官可能保持着潜在的对抗病理损伤的修复能力。     

细胞生长因子治疗鼓膜穿孔的进展

基础研究证实急性鼓膜穿孔诱导产生表皮生长因子(EFG)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子—AA(PDGF—AA)和转化生长因子—α(TGF—α)。它们的表达在炎症期达高蜂，然后下降，提示这些生长因子参与鼓膜穿孔愈合过程。已报道在鼓膜上有EGF受体(EGFR)、bFGF受体(bFGFR)、PDGF受体(PDGF—Rα)和角质形成细胞生长因子受体(KGFR)的表达。这些受体的识别预示在伤口愈合过程中鼓膜上的靶细胞能被相应的外源性生长因子刺激。一些动物实验研究显示EGF、bFGF和PDGF—AA促进或加强急性和慢性鼓膜穿孔愈合而没有明显副作用。两篇临床试验将EGF、bFGF局部应用于鼓膜穿孔得到不同的结果。关于生长因子的作用机理、应用时间、生长因子单独或联合应用的选择、给药方式、剂量、安全性，还需要做进一步的动物实验和临床研究。     

胆脂瘤的化生性与先天性起因

作者们从采集的101个伴多年上鼓室胆脂瘤的听骨和/或肉芽组织的活检标本中,详查与胆脂瘤包膜无联系的部位有无类似角质物质和腺体结构,借以探讨中耳鳞状上皮化生是否有时可导致表皮样囊肿,即中耳胆脂瘤或所谓原发性胆脂瘤。结果表明:101个胆脂瘤标本中,19个从组织学方面显示上皮下感染的结缔组织或多或少有被特殊细胞围绕的角质纤维聚集,较大者似表皮样囊肿,所有病变组织均含粘液腺,此种纤维作     

上皮细胞增殖和凋亡在中耳胆脂瘤发病学的意义(附33例报告)

目的 :通过探讨胆脂瘤上皮 (CE)、胆脂瘤患者外耳道上皮 (CAMS)和正常健康者外耳道上皮(NAMS)的增殖和凋亡及 p5 3基因与上皮细胞增生和凋亡的关系 ,阐明增殖和凋亡异常在胆脂瘤发病中的作用。方法 :采用免疫组织化学和原位末端标记技术检测细胞增殖标记物 PCNA、Ki- 6 7和 p5 3蛋白在 33例 CE、2 5例CAMS和 10例 NAMS细胞的表达及细胞凋亡。结果 :在上述标本中均有 PCNA表达及凋亡细胞存在 ,但不同类型上皮阳性细胞数量、染色强度及分布不同。 CE存在过度增殖和凋亡 ,CAMS亦存在过度增殖。 p5 3表达与PCNA呈正相关 ,与细胞凋亡呈负相关。结论 :CE具有过度增殖和凋亡的特性 ,增殖与凋亡的紊乱与胆脂瘤形成密切相关。     

莪术醇对人鼻咽癌细胞CNE2增殖、凋亡及周期的影响

目的 探讨莪术醇( curcumoI)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡及周期的影响,为其临床治疗鼻咽癌提供理论依据.方法 不同浓度莪术醇作用于人鼻咽癌CNE2细胞后,用MTT法和流式细胞仪检测不同时间点鼻咽癌细胞CNE2的增殖、凋亡及周期分布.结果 莪术醇在体外明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖...     

小鸡基底乳头毛细胞再生中增殖细胞的免疫组织化学染色…

利用增殖细胞核抗原免疫组织化学染色，显示庆大霉素损伤后小鸡基底乳头毛细胞再生中的增殖细胞。结果：庆大毒素组出现散在ＰＣＮＡ阳性的增殖细胞核；正常对照组和阴性对照均为阴性。提示ＰＣＮＡ ＳＡＢＣ法染色是显示增殖细胞的理想方法之一。     

用单克隆抗体对人类头颈部肿瘤增殖力的评价

人类肿瘤的恶性生长与其细胞的增殖有关,关系到治疗和预后的好坏。已往有许多评价人类肿瘤细胞动力学的资料,如自体放射线摄影术和细胞光测技术等方法。新近Gerds等利用单克隆抗体Ki-67和增殖细胞中的核抗原产生反应而与静止细胞不出现反应的现象来观察细胞的增殖状态。作者选择头颈部肿瘤中分化程度不同的7例鳞状细胞癌作研究。标本取自手术切下的部分肿瘤新鲜材料。单克隆抗体Ki-67免疫组织化学标记法是按照1985年Mason的碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶的免疫碱性磷酸酶技术进行     

中耳胆脂瘤分子生物学研究的新进展

中耳胆脂瘤的特征表现为中耳腔内堆积大量的、增殖的、角化的鳞状上皮和邻近骨质的破坏及对听力的影响 ,其侵袭性 ( invasive)、破坏性( aggressive)、迁移性 ( migratory)、非正常调控下的增殖性 ( unrestrained hyperproliferation)、分化变异性 ( altered differenation)、复发性 ( recidivistic)等一直受到耳鼻咽喉科医生的重视 ,本文就最近研究的热点综述如下。1 　 胆脂瘤上皮细胞的增殖与凋亡胆脂瘤具有很强的增殖能力 ,增殖细胞核抗原( PCNA)主要见于细胞合成周期的 S期 ,于各种增殖细胞的胞核有表达 ,可用于衡量细胞的增殖能力。…