肝细胞、肝窦内皮细胞分离培养及肝细胞支架的制备

目的：探究大鼠肝细胞、肝窦内皮细胞的分离培养方法及肝去细胞支架的制备方法。方法：用胶原酶IV消化肝脏组织后经洗涤、过滤、离心等步骤分离出大鼠肝细胞,然后置于培养基内进行纯化、培养后行细胞免疫组织化学检测;通过Percoll密度梯度离心法分离出肝窦内皮细胞置于培养基内纯化、培养后行免疫荧光检测;肝组织经循环灌注去细胞处理制备成大鼠肝细胞去细胞支架后经扫描电镜证实。结果：分离出的大鼠肝细胞在显微镜下呈光亮圆形,饱满,胞核清晰。肝细胞细胞角蛋白18免疫组织化学染色后见胞浆内存在棕黄色颗粒。肝窦内皮细胞呈梭形,细胞核位于中央。内皮素-1免疫荧光染色后细胞表面呈红色信号。制备成的大鼠肝脏去细胞支架在扫描电镜下显示细胞外基质保留,无细胞核及细胞质成分。结论：成功分离出了肝细胞和肝窦内皮细胞并成功制备了肝去细胞支架。     

人肝细胞,窦状间隙内皮细胞的分离,培养

从创伤意外死亡的病人中获取肝组织，应用离体胶原酶Ⅳ灌注和消化的方法获得肝组织细胞悬液。根据差速离心将肝细胞和其它细胞进行分离，并根据枯否氏细胞和内皮细胞贴附时间的不同，分离出肝窦间隙内皮细胞，其存活率可达９０％以上。肝细胞纯度可达９５％。肝窦间隙内皮细胞经一周培养纯度可达９０％以上。同时描述了人肝组织中肝细胞和肝窦间隙内皮细胞原代培养过程的形态特征，并对肝窦间隙内皮细胞进行了鉴定。     

人体肝癌和癌周宿主肝甲胎蛋白免疫酶标记定位及其形态学观察(摘要)

近年我们用间接免疫酶标抗体技术,对22例外科手术切除的人体原发性肝细胞癌标本进行了有关甲胎蛋白(AFP)的组织内定位及其在光学显微镜的形态学观察研究。其结果: 一、AFP主要存在于部分肝癌细胞和癌周宿主肝细胞原浆中。阳性颗粒在细胞浆内的分布可分四型,多数弥漫分布,少数局限分布,或呈胞膜型和核周型。含AFP的肝癌细胞或宿主肝细胞在组织中多呈散在随机分布,但密度不一,个体差异较大。一般以癌组织的周边及靠血窦的癌细胞染色较强,酶标阳性颗粒也较粗大、清楚。癌周宿主肝组织亦以小叶外周或肝内静脉分支周围的细胞较为突出。     

CCl_4诱发大鼠肝硬化中纤维联接蛋白演变的免疫电镜观察

应用免疫电镜对四氯化碳诱发大鼠肝硬化中纤维联接蛋白的演变进行了定位研究,发现在正常肝组织内纤维联接蛋白主要位于血窦内皮细胞表面、肝细胞血窦缘的微绒毛表面和Disse间隙内。在肝硬化发生的早、中期纤维联接蛋白在Disse间隙内增加显著,电镜下可见位于Disse间隙内的过渡细胞;在后期部分肝窦毛细血管化形成,纤维联接蛋白在Disse间隙内沉积减少。结果表明,纤维联接蛋白在Disse间隙内沉积可能影响贮脂细胞产生胶原,并介导胶原在该部位沉积增多,致肝窦毛细血管化,这是肝功减低的主要原因之一。     

家兔肝性脑病肝组织的超微结构观察

将复方氧化铵溶液灌入兔十二指肠内，建立肝性脑病的动物模型，并分别观察肝叶大部切除和肝叶未切除丙种情况下的肝细胞超微结构改变，以输液前自身的正常肝组织作为对照．在透射电镜下观察发现：肝性脑病时，肝超微结构改变以线粒体最为明显，部分肝细胞核发生固缩、核周间隙扩大，滑面内质网扩张、肝细胞微绒毛减少或消失、溶酶体增多和细胞间的紧密连结减少。提示肝细胞发生变性，且越近肝血窦，变性程度越重，但肝叶切除与肝叶未切除者肝细胞变性程度无明显区别。     

Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达

目的:观察Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达,以了解其在肝脏发育过程中的作用。方法:用E8d～E20d及P1d的SD大鼠,石蜡切片,免疫组化染色,光镜下观察Cx26和Cx43在大鼠发育E1d～P1d过程中的表达。结果:①Cx26在E15d开始表达,此时只有少数体积大、核大的肝细胞呈Cx26阳性反应,阳性反应产物见于肝细胞浆及细胞核。②E16d开始出现少量Cx26呈弱阳性的造血细胞,E17d和E18d反应阳性强度增加,至E20d时反应消失。③E14d开始出现Cx43呈弱阳性的肝实质细胞,E15d～P1d多数肝细胞浆呈Cx43强阳性,P1d少数肝细胞核呈Cx43阳性反应。④E18d～P1d肝内可见呈Cx43阳性的造血细胞。结论:①Cx26与肝细胞的生长分化关系不大,而与肝细胞的技能分化密切相关;Cx43与肝的结构发育和成熟分化相关;Cx26和Cx43均可能与肝内造血细胞与肝实质细胞之间的信息传递有关。②胚胎肝组织中Cx26和Cx43呈不同表达状态,推测可能是由于胚胎肝细胞间、间质细胞间、肝细胞和间质细胞间以及胚胎肝细胞与造血细胞间装配的缝隙连接通讯通道结构有所不同所致。     

Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达

目的：观察Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达，以了解其在肝脏发育过程中的作用。方法：用E8d-E20d及P1d的SD大鼠，石蜡切片，免疫组化染色，光镜下观察Cx26和Cx43在大鼠发育E1d～P1d过程中的表达。结果：①Cx26在E15d开始表达，此时只有少数体积大、核大的肝细胞呈Cx26阳性反应，阳性反应产物见于肝细胞浆及细胞核。②E16d开始出现少量Cx26呈弱阳性的造血细胞，E17d和E18d反应阳性强度增加。至E20d时反应消失。③E14d开始出现Cx43呈弱阳性的肝实质细胞，E15d～P1d多数肝细胞浆呈Cx43强阳性，P1d少数肝细胞核呈Cx43阳性反应。④E18d～P1d肝内可见呈Cx43阳性的造血细胞。结论：①Cx26与肝细胞的生长分化关系不大。而与肝细胞的技能分化密切相关；Cx43与肝的结构发育和成熟分化相关；Cx26和Cx43均可能与肝内造血细胞与肝实质细胞之间的信息传递有关。②胚胎肝组织中Cx26和Cx43呈不同表达状态，推测可能是由于胚胎肝细胞间、间质细胞间、肝细胞和间质细胞间以及胚胎肝细胞与造血细胞间装配的缝隙连接通讯通道结构有所不同所致。     

核磁共振成像在肝小静脉闭塞病诊断中的临床价值研究

肝小静脉闭塞病英文名称为hepatic veno-occlusive disease,可简称为HVOD,指肝窦、肝小叶第三带肝细胞、小叶下静脉损伤、肝小叶中央静脉,造成管腔闭塞或狭窄而出现肝内窦后性门静脉高压症,也称阻塞肝窦综合征。此疾病较为少见,存在较高死亡率,近几年来,发病率有逐步上升的状况,临床诊断肝小静脉闭塞病的一项金标准则为病理诊断。随着近年来,医学界各项治疗技术不断发展,疾病诊断技术也有明显改进,核磁共振成像技术也在临床中逐步取得较大应用。此研究采用综述的方式进行叙述,其目的在于叙述肝小静脉闭塞病诊断疾病采用核磁共振进行诊断的临床价值。     

日本血吸虫感染致肝纤维化家兔肝脏微循环病变观察

目的 研究日本血吸虫感染致肝纤维化家兔的肝脏微循环病变。方法 对30只日本血吸虫感染致肝纤维化家兔和10只正常家兔取肝组织行光镜和电镜观察肝脏微循环病变。结果 HE染色示汇管区可见虫卵沉积，虫卵周围炎性细胞浸润。Mallory三色染色见肝内门静脉、肝动脉管壁纤维结缔组织增多，中膜平滑肌增殖肥大。透射电镜下见肝窦内皮受损严重，细胞大多崩解、破裂，窦内可见炎性细胞浸润，毛细胆管扩张，肝细胞肝窦面的微绒毛减少或断裂，肝窦呈毛细血管化。结论 肝脏微循环障碍是形成血吸虫肝纤维化门脉高压的发病基础之一。     

丙型肝炎病毒C33抗原在肝组织中的表达

目的：观察ＨＣＶＣ３３抗原在慢性丙型肝炎患者肝组织中的分布。方法：４例慢性丙型肝炎患者肝组织用免疫组化法作ＨＶＣＣ３３标记。结果：ＨＣＶ３３抗原不仅分布于肝细胞核，胞浆及肝细胞膜中，而且分布肝窦内皮细胞及肝内脉巴细胞的胞浆及胞膜上。结论：ＨＣＶ抗原存在于上述肝细胞内，是慢性丙型肝炎的重要标志。     

成人急性白血病体外化疗药物细胞毒试验及其临床意义

对９６例成人急性白血病作体外细胞毒试验，发现急淋和急非淋白血病细胞对柔红霉素，长春新碱，氨甲喋呤，高三尖杉酯碱，阿糖胞苷及ＶＰ１６－２１３敏感性无统计学差异；临床常用化疗方案细胞杀伤率积分与骨髓原始细胞下降数和完全缓解率呈正相关，≥９分患者率明显高于〈９分者。     

ULTRASTRUCTURAL AND CYTOCHEMICAL CHARACTERISTICS OF MEGAKARYOBLASTIC LEUKEMIC CELLS

The transmission electron microscopy, scanning electron microscopy and ultrastructural cytochemistry were utilized to study the megakaryoblastic cells pore four patients suffering from megakaryoblastic leukemia. The results show that the megakaryoblastic leukemic cells have their unique ultrastructural appearance, surface architecture and cytochemical activity. The megakaryoblastic leukemic cells are positive for platelet peroxidase cytochemical reaction which is localized in the perinuclear space and endoplasmic reticulum. but not in the Golgi apparatus and cytoplasmic granules. They have rather smooth surface and display some blebs or tuberculi, which are different from those in other types of leukemic cells as seen under the scanning electron microscope. The megakaryoblastic leukemic cells also show some special appearance under transmission electron microscope, such as, their cytoplasm contains numerous small mitochondria which are mostly concentrated in one pole of the cell. These ultrastructural and cytochemical characteristics of the megakaryoblastic leukemic cells revealed by the combined techniques are very useful in diagnosis of the megakaryoblastic leukemia.     

EFFECTS OF INFLAMMATORY CELLS IN COLD AND WARM ISCHEMIA-REPERFUSION INJURY OF THE GRAFTED LIVER

Objective To investigate whether the impairment of grafted livers after transplantation was induced by the same inflammatory cells both in cold and warm ischemia. Methods Male SD rats were divided into two groups at random,24 donor livers in each group were stored in Ringer's solution at 4℃ for 120min or 240min of transplantation for blood sample and tissue specimen collection. Results Along with the prolongation of cold and warm ischemia time,the serum ALT,AST and LDH level increased gradually after transplantation.Under light microscopy,some hepatocytes presented necrosis after 3h and 6h of transplantation in cold ischemia,and neutrophilic infiltration in sinusoids were evident.Also,a large number of hepatocytes were necrotic 3h or 6h after transplantation in warm ischemia from NHBDs,and lymphocytic infiltration was evident in the sinusoids.The findings in electron microscopy was as the same as those of light microscopy,and the cells which infiltrated the sinusoids in warm ischemia were identified as T lymphocytes. Conclusion The impairment of grafted livers after transplantation appeared to be induced by two different kinds of inflammatory cells in cold and warm ischemia,that is,neutrophils mediated the cold ischemia-reperfusion,and T lymphocytes mediated the warm ischemia-reperfusion from NHBDs,but these findings are to be comfirmed in further investigations.     

Direct contact with bone marrow stromal cells promotes the invasions of SHI-1 leukemia cells

Background Interactions of tumor cells with the microenvironment were deemed to promote the tumor invasion and metastasis.CXC chemokine receptor 4 (CXCR4) and extracellular matrix metalloproteinase ind...     

新生儿肝脏的组织学观察

本文收集新生儿肝脏12例,用Bouin氏液固定,HE染色。镜下见肝小叶结构明显,相邻肝小叶分界不清,肝板在切面上呈团块状或条索状,与肝血窦交错排列,肝细胞呈多边形,胞质中有细小的嗜酸性颗粒,有3例围成团块状的肝细胞着色深浅不等。肝小叶内有散在的造血灶,门管周围有1～2层门管周围界板细胞。     

三种单抗偶联PAP-S制备的免疫毒素对人白血病T淋巴细胞的细胞毒性作用

混合应用3种抗人T细胞单克隆抗体与美洲商陆抗病毒蛋白(PAP-S)制备免疫毒素进行体外实验。这些免疫毒素均对人类T淋巴细胞具特异性杀灭作用。在浓度为10~(-9)mol/L时,3种免疫毒素混合可杀灭94.5％的自血病T细胞系CEM细胞而不致严重影响骨髓造血细胞功能。这些免疫毒素有可能用于白血病细胞的体外杀灭及白血病异体骨髓移植时T细胞的清除,以避免移植物抗宿主反应的发生。     

白血病细胞r-谷氨酰基转肽酶的实验研究

本文对可移植性L615小鼠白血病细胞r-谷氨酰基转肽酶进行了分析.该酶在白血病细胞的分布与正常淋巴细胞显著不同.正常淋巴细胞以高酶活性的细胞为主,酶颗粒在膜上均匀分布;而白血病细胞则以低酶活性或阴性的细胞居多,酶颗粒分布不均,常呈块状出现.酶比活性测定表明,白血癌细胞酶比活性显著低于正常淋巴细胞,是白血病细胞不成熟性的结果。r-谷氨酰基转肽酶可作为鉴别正常和恶性淋巴细胞一个有用的表面标志.     

IL-6及其与其他细胞因子联合应用对白血病细胞体外增殖的影响

目的 观察ＩＬ－６对急性白血病原代细胞体外生长的作用。方法 应用ＭＴＴ、ＣＦＵ－Ｌ及间接免疫荧光法以ＩＬ－６及其与其他细胞因子联合应用对１８例急性白血病鹗２骨髓细胞的作用进行观察。结果 ＩＬ－６体外单独应用对急性白血病原代细胞无明显促增殖及话导分化作用,但与Ｇ－ＣＳＦ联合应用则常可抑制原代白血病增殖。结论 ＩＬ－６与Ｇ－ＣＳＦ联合用于化疗、放疗后的骨髓抑制可能更为安全 。     

L615小鼠中枢神经系统白血病非神经区病变的病理学研究

<正> 在中枢神经系统,有一些部位解剖学上称为非神经区(或特殊区),包括延髓最后区(Area Postrema),穹窿下器官(Subfornicate organ)、丘脑下部灰结节(Tuber cinereum)、脉络丛(Choroid plexus)、脑垂体(Pituitary)和松果体(Pineal body)等。中枢神经系统发生白血病时,这些部位常出现白血病细胞浸润。多年来关于非神经区病变方面的研究资料很少,尤其是对病变发生的机制以及与其他部位病变的关系等,尚无统一意见。     

雄黄对白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达影响的研究

目的:检测雄黄诱导白血病细胞凋亡的能力,并探讨其分子机制。方法:应用形态学观察检测细胞凋亡,应用检测流式细胞仪白血病细胞bcl-2和Fas蛋白的表达。结果:雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,白血病细胞有bcl-2强表达,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性的下降。白血病细胞有较弱的Fas蛋白表达,随着雄黄与白血病细胞作用时间的延长,未见Fas蛋白表达有明显改变。结论:雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达从而导致白血病细胞发生凋亡是其治疗白血病的重要分子机制。