血必净注射液联合地塞米松防治大鼠百草枯中毒慢性肺损伤的作用研究

目的 探讨血必净注射液联合地塞米松防治大鼠百草枯中毒慢性肺损伤的作用及可能机制.方法 30只雄性Wistar大鼠被随机均分为6组,每组5只.腹腔注射质量分数为20%的百草枯80 mg/kg制备大鼠中毒模型;正常对照组予生理盐水.染毒后2 h,治疗组分别向腹腔注射小剂量血必净注射液(1.25 g/kg)、大剂量血必净注射液(2.50 g/kg)、地塞米松(25 mg/kg)及大剂量血必净注射液联合地塞米松(联合治疗),正常对照组和模型组给予等量生理盐水,均每日1次,连用4 d.观察各组大鼠染毒后反应;于28 d处死各组大鼠取相应标本,检测肺系数、肺匀浆中羟脯氮酸(HYP)、血清转化生长因子-β1(TGF-β1),同时行肺组织病理学观察.结果 各治疗组血清TGF-β1、肺HYP均较模型组显著降低,以联合治疗组最为明显,血必净大剂量组和地塞米松组其次,血必净小剂量组仅TGF-β1好于模型组,差异有统计学意义(P均<0.05).比较各组肺系数,联合治疗组最佳,其他治疗组间差异无统计学意义.肺组织病理学观察显示,治疗组肺纤维化及实变程度较模型组轻,其中联合治疗组最轻.结论 血必净注射液联合地塞米松治疗百草枯中毒,通过抑制TGF-β1水平,减少纤维母细胞迁移、活化,抑制胶原蛋白产生,保护肺组织结构,可以更有效地抑制肺纤维化、肺实变.     

血必净注射液对急性肺损伤大鼠氧自由基变化的影响

目的:探讨血必净注射液对急性肺损伤大鼠氧自由基变化的影响.方法:SD大鼠72只随机分为正常对照组、内毒素组(LPS组)和内毒素联合血必净组(LPS+XBJ组),后两组又分别分为给药后1、2、4、12 h 4个亚组,每个亚组8只.采用静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型.LPS+XBJ组予静脉注射LPS后同时腹腔注射血必净(10 mL/kg),LPS组腹腔注射等量生理盐水(10 mL/kg),正常对照组给予等量生理盐水.观察各组肺组织病理学变化,检测各组肺湿干质量比(W/D)、血清丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活力等的变化.结果:血必净注射液干预可显著降低急性肺损伤大鼠升高的W/D(P<0.05)和血清肺MDA浓度(P<0.01或P<0.05).显著升高急性肺损伤大鼠降低的SOD浓度(P<0.01或P<0.05),减轻肺组织形态学损伤.结论:血必净注射液可抑制氧自由基产生.对LPS所致急性肺损伤大鼠具有肺保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对百草枯中毒导致肺纤维化的影响

目的 观察外源性骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大鼠急性PQ中毒导致的肺纤维化是否产生治疗作用及其可能的机制.方法 取54只SD雄性大鼠,随机(随机数字法)分成3组:A组为空白对照组,B组为PQ+ PBS组,C组为PQ+BMSCs组.其中B组、C组均以120mg/kg的PQ溶液予以一次性灌胃染毒,染毒后6hC组大鼠予以尾静脉注入BMSCs 1×106个/mL,而B组大鼠则予以注入相应剂量的PBS.观察各组大鼠的一般情况,于染毒后7d、14 d、28 d处死未死亡的大鼠,取左下肺组织,行HE和Masson染色观察各组肺组织的病理改变情况,根据Szapiel肺泡炎和肺纤维化的分级法进行肺纤维化评分,并行免疫组织化学检测肺组织中TGF-β1及HGF的表达情况;取右下肺,检测HYP对比各组肺组织中的HYP含量的变化情况.结果 肺组织病理改变:染毒7d后可见B组肺泡炎性改变明显,肺泡腔内可见大量渗出液;C组的肺泡炎性渗出相对B组为轻.14 d可见B组肺泡间质水肿及渗出减轻,但肺间质胶原纤维增多;C组间质纤维化沉积程度相对B组较轻.28 d时B组肺间隔增厚普遍可见胶原纤维沉积,肺泡扩张明显,肺泡间隔断裂,肺泡结构紊乱;C组间隔中的胶原纤维化较B组轻,肺泡基本结构仍可见.HYP含量:B组大鼠肺组织HYP含量随着染毒时间的延长呈进行性增加,28 d时达最高峰,各时间点与A组比较均增高(P＜0.01);C组HYP的含量随时间的延长呈进行性增加,28 d达到最高峰,各时间点均较B组减少(P＜0.01).肺组织TGF-β1及HGF的表达:B组大鼠肺组织TGF-β1表达含量增多且分布范围较A组广,TGF-β1的表达在7d为最高峰,此后逐渐减少,但各时间点均高于A组(P＜0.05);C组大鼠肺组织各时间点TGF-β1表达含量均较B组少(P＜0.05).B组肺组织HGF的表达随着时间点延长逐渐增多,但各时间点比较差异无统计学意义(P＞0.05);B组与A组比较略有增多,但差异无统计学意义(P＞0.05);C组肺组织HGF表达含量随着时间的延长逐渐增多,各时间点比较差异有统计学意义(P＜0.05),各时间点与A组及B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 外源性BMSCs移植对PQ诱导的肺纤维化程度有一定的抑制作用,可能与其上调HGF表达、下调TGF-β1的表达有关.     

血必净对大鼠急性肺损伤的干预效应研究

目的 探讨血必净对油酸诱导急性肺损伤(ALI)后肺纤维化的影响.方法 健康SPF级Wistar大鼠45只,随机分为三组(n=15):A组为正常对照组;B、C两组大鼠均用油酸复制ALI模型,B组为模型对照组,C组在模型基础上加用血必净为干预组.三组均于造模后12 h抽尾动脉血行血气分析,确定模型成功后,A、B组经尾静脉注射生理盐水,C组经尾静脉给予血必净注射液,连续给药7 d,各组于给药后第1、7、14天分别处死5只大鼠,麻醉后取肺组织及心脏血,行肺组织病理学检查并检测血清Ⅲ前胶原(PCⅢ)及肺组织羟脯氨酸(HYP)浓度.结果 与A组比较,B、C组动脉血氧分压(PaO2)显著下降(P＜0.05),肺湿/干(W/D)比值显著升高(P＜0.05),但A、B两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与A组比较,B、C组各时点血清PCⅢ和肺组织HYP浓度显著增加(P＜0.05),C组较B组各时点血清PCⅢ和肺组织HYP浓度显著降低(P＜0.05),组织病理学改变有所减轻.结论 血必净可能通过抑制ALI后肺纤维化对ALI大鼠肺损害有保护作用.     

血必净注射液对急性肺损伤兔炎性介质及内皮功能影响的实验研究

目的:探讨血必净注射液对急性肺损伤(ALI)兔炎性介质的影响及其内皮功能的保护作用.方法:采用随机分组对照试验方法.取24只新西兰兔随机分为3组,每组8只.空白对照组予静脉注射生理盐水2mL/kg,ALI组予静脉注射内毒素0.5 mg/kg,血必净治疗组在静脉注射内毒素0.5 mg/kg后给予静脉注射血必净5 mL/kg.分别测定3组0 h、8 h时点的血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,并在光镜下观察实验兔的组织形态改变和测定肺组织W/D比值.结果:8 h后ALI组肺脏体积增大.光镜下见肺组织内大量白细胞浸润,肺间质水肿明显,肺泡腔及间质可见血性渗出液.ALI组肺组织W/D比值、血清TNF-α、IL-6明显升高.血必净治疗组肺组织W/D比值、血清TNF-α、IL-6亦有升高,但明显低于ALI组(P<0.001).与ALI组比较,血必净治疗组肺间质、肺泡水肿及肺出血情况明显减轻.结论:血必净注射液具有拮抗炎性介质和保护内皮功能的作用.     

血必净注射液减轻脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的作用及机制

目的 研究血必净注射液调控自噬对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及机制.方法 将80只BALB/c雄性小鼠随机分为对照组、模型组、血必净组、血必净+3-甲基腺苷(3-methyladenosine,3-MA)组,每组各20只.对照组进行假手术,后3组采用盲肠穿孔术建立脓毒症ALI模型,血必净组给予10 mL/kg血必净注射液腹腔注射,血必净+3-MA组给予10 mL/kg血必净注射液及10 mg/kg自噬抑制剂3-MA腹腔注射.观察4组小鼠造模后72h的累积生存率并检测肺组织病理改变、肺湿重/干重比、炎症因子[肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18]含量、自噬小体数目、自噬基因[微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein light chain3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1]的蛋白表达水平.结果 对照组72 h累积生存率为100％,肺湿重/干重比为3.89±0.85,TNF-α、IL-1β、IL-18含量分别为(0.83±0.14) ng/mg、 (0.74±0.15) ng/mg、 (84.51±13.25) pg/mg,自噬小体数目为(0.41±0.09)个/视野,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1分别为0.20±0.04、0.17±0.03.模型组小鼠肺组织出现典型的ALI病理改变,72 h累积生存率(50％)低于对照组(P＜0.0S),肺湿重/干重比(6.77±0.94),TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(3.15±0.76)ng/mg、(2.88±0.62) ng/mg、 (274.62±45.58) pg/mg],自噬小体数目[(3.14±0.55)个/视野],以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.69±0.09、0.35±0.06)均高于对照组(P＜0.05).血必净组小鼠肺组织ALI病理改变减轻,72 h累积生存率(75％)高于模型组(P＜0.05),自噬小体数目[(5.77±0.75)个/视野]及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.98±0.13、0.62±0.08)高于模型组(P＜0.05),肺湿重/干重比(4.23±0.76)及TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(1.52±0.32) ng/mg、 (1.29±0.30) ng/mg、 (121.36±26.51) pg/mg]低于模型组(P＜0.05).血必净+3-MA组小鼠肺组织ALI病理改变加重,72 h累积生存率(55％)低于血必净组(P＜0.05),自噬小体数目[(0.78±0.16)个/视野]及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.37±0.05、0.32±0.05)低于血必净组(P＜0.05),肺湿重/干重比(6.31±0.91)及TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(2.88±0.56) ng/mg、 (2.41±0.58) ng/mg、 (252.35±37.65) pg/mg]高于血必净组(P＜0.05).结论 血必净注射液能够减轻脓毒症诱导的小鼠ALI,激活自噬是与之相关的分子机制.     

小剂量氢化可的松与血必净对急性肺损伤大鼠作用比较

目的观察小剂量氢化可的松与血必净注射液对大肠埃希菌导致的大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法大肠埃希菌[O111B4,(4.4~5.6)×1012CFU/L]3 ml/kg气管注射制作大鼠肺内源性ALI模型,设氢化可的松干预组[HC组,腹腔注射氢化可的松5 mg/(kg·d),共2天]、血必净干预组[X组,腹腔注射血必净注射液5 ml/(kg·d),共2 d]、模型对照组[C组,腹腔注射生理盐水5 ml/(kg·d),共2天]、正常对照组[N组,气管注射3 ml/(kg·d)生理盐水,腹腔注射生理盐水5 ml/(kg·d),共2天]。各组分别于末次给药后12 h放血处死动物,留血清测TNF-α、IL-8水平。取左肺计算肺指数。结果 (1)HC组、X组、C组病死率无统计学意义(χ~2=0.194,P=1.000);(2)TNF-α水平:HC组及X组[分别为(80.31±11.87)ng/L,(89.42±22.76)ng/L]均明显低于C组[(125.68±27.91)ng/L](P<0.05),HC组与X组差别无统计学意义(P>0.05);(3)IL-8水平:HC组与X组[分别为(175.01±40.29)ng/L,(214.38±56.03)ng/L]均明显低于C组[(266.48±56.09)ng/L](P<0.05),HC组与X组差别无统计学意义(P>0.05);(4)肺指数:HC组与X组[分别为(0.318±0.058)%,(0.352±0.046)%]均明显低于C组[(0.412±0.055)%](P<0.05),HC组与X组差别无统计学意义(P>0.05)。结论小剂量氢化可的松及血必净治疗大肠杆菌导致的大鼠ALI均能明显降低血清促炎因子的水平,减轻肺水肿,两者作用相似。     

宣肺通腑化瘀法对肺间质纤维化小鼠羟脯氨酸和转化生长因子-β1含量的影响

目的 探讨宣肺通腑化瘀法防治肺间质纤维化(PF)的作用及其机制.方法 将28只ICR小鼠随机分为对照组、模型组、宣肺通腑化瘀法(中药)组、泼尼松组4组,每组7只.经鼻滴入博莱霉素建立小鼠PF模型.中药组和泼尼松组于制模8 h内开始分别灌胃中药组方15.86 g/kg或泼尼松1.3 mg/kg,每日1次,连用28 d;对照组及模型组给予等量生理盐水.于制模28 d取小鼠肺组织观察病理学改变及纤维化程度;用酶联免疫吸附法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;用样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量.结果 模型组小鼠肺泡炎症及纤维化程度均明显重于对照组;肺组织中HYP含量及BALF中TGF-β1含量均较对照组显著升高(P均<0.01).中药组和泼尼松组炎症及纤维化程度明显改善,HYP及TGF-β1含量均明显低于模型组(P均<0.01),且中药组TGF-β1降低程度更为显著(P<0.05).结论 宣肺通腑化瘀法能明显减轻博来霉素致小鼠PF程度,降低肺组织中HYP含量;其机制可能是通过抑制TGF-β1蛋白表达,减少胶原蛋白产生,使PF病变减轻.     

血必净注射液对大鼠黄磷吸入急性中毒致急性肺损伤的治疗作用

目的 观察大鼠急性黄磷及其化合物吸入中毒致急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的肺组织病理学改变,探讨血必净注射液的治疗作用.方法 将85只健康SD大鼠随机分为正常对照组(5只,质量分数为5%的葡萄糖注射液5 ml/kg)、模型组(20只,5%葡萄糖注射液5 ml/kg)、血必净治疗组(A组,20只,血必净注射液5 ml/kg)、氟美松高剂量治疗组(B组,20只,氟美松注射液5 mg/kg)、血必净 氟美松低剂量治疗组(C组,20只,血必净注射液5 ml/kg 氟美松注射液1 mg/kg).建立大鼠急性黄磷及其化合物吸人中毒致ALI/ARDS模型,分别于制模后即刻及制模后8 h腹腔内注射给药,制模后6、12、24和48 h处死各组大鼠,取肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值,观察肺组织病理学变化.结果 模型组大鼠肺组织结构严重破坏,出现明显肺水肿、出血、变性、坏死,且有大量的炎性细胞浸润;肺W/D比值较正常对照组明显增大(P均<0.05).各治疗组肺组织病理损害程度均较模型组减轻,肺W/D比值明显减小(P均<0.05),减小程度B组C组A组.结论 黄磷及其化合物吸人中毒致大鼠肺组织病理出现ALI/ARDS样改变,血必净注射液、氟美松对大鼠急性黄磷及其化合物吸人中毒致ALI/ARDS具有治疗作用,二者合用可减少氟美松用量.     

血必净注射液对百草枯刺激的大鼠肺微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨血必净注射液对百草枯(PQ)刺激的大鼠肺微血管内皮细胞(rPMVECs)损伤的保护作用及其可能的机制.方法 将rPMVECs原代培养后,分为空白对照组、PQ组(加入PQ溶液)和血必净组(加入PQ溶液30 min后再加入三种浓度的血必净,分别为10、20、50 mg/mL).用分光光度比色法测定细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA法检测细胞培养上清液中血管假性血友病因子(vWF)和内皮素(ET)含量,观察各组不同时间点(3、12、24、48 h) SOD活性和MDA、vWF、ET含量.结果 PQ组四项检测指标在各时间点上与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).不同浓度的血必净在各时间点上均有不同程度减慢SOD活力下降和降低MDA、vWF、ET浓度的作用,并呈剂量依赖关系,以高剂量的血必净作用最为明显;与PQ组比较,高剂量血必净组在各时间点上差异均有统计学意义(P＜0.01或0.05).同时,三种浓度血必净组的SOD活力和MDA、vWF、ET浓度随时间的延长而变化,与PQ组比较,其变化速度相对较慢.结论 血必净注射液通过提高SOD活力和降低MDA、vWF、ET含量而对PQ刺激rPMVECs的损伤起到保护作用.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠百草枯中毒急性肺损伤的作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)防治大鼠百草枯(PQ)中毒急性肺损伤的作用及可能机制.方法 80只SPF级Wistar大鼠随机(随机数字法)分为4组,每组20只:肺损伤组、MSCs治疗组、MSCs对照组和正常对照组.腹腔注射质量分数为20%的百草枯18 mg/kg制备大鼠中毒模型,正常对照给予磷酸缓冲液(PBS).取第4代MSCs,加入携带增强型绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体Ad5-EGFP,转染成功后,在染毒后4 h经尾静脉注射入大鼠体内,分别在给予MSCs后1 d,3 d,7 d,28 d时随机处死每组大鼠各5只,行肺组织病理切片,荧光倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞的迁移,于28 d处死各组大鼠取相应标本,检测肺系数、肺匀浆中羟脯氨酸(HYP)的含量、血清转化生长因子-β1(TGF-β1),同时行肺组织病理学观察.结果 肺组织病理学观察显示,MSCs治疗组肺纤维化及实变程度较肺损伤组轻,血清转化生长因子-β1(TGF-β1)和肺系数、肺匀浆中经脯氨酸(HYP)的含量均好于损伤组,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 MSCs注入百草枯中毒大鼠体内,通过抑制TGF-β1水平,减少纤维母细胞迁移、活化,抑制胶原蛋白产生,进而保护肺组织结构,可以更有效地抑制肺纤维化、肺实变.

Abstract：

Objective To explore the possible mechanism and protective effect of mesenchymal stem cell (MSC) on rats with paraquat-induced acute lung injury. Method The solution of 20% paraquat (PQ) in dose of 18 mg/kg was injected intra-peritoneally into rats to induce poisoning,and phosphate buffered solution (PBS) was given to rats instead of PQ in rats of control group. Eighty specific pathogen free (SPF) Wistar rats were randomly divided into four group: PQ plus PBS group (n = 20), PQ plus MSCs group (n = 20), MSCs plus PBS group (n=20), normal group (n = 20). The forth generation of MSCs were transfected with Ad5-EGFP virus vector, and then the MSCs-EGFP was delivered to rats through the tail vein of rats 4h after PQ. Five rats of each group were sacrificed 1 d, 3 d, 7 d and 28 days after MSCs administration, and lung tissues of rats were taken to make sections for histological observation of the migration of MSCs under fluorescence inverted microscope. The lung tissues of rats sacrificed on the 28 th day after PQ poisoning were taken for detecting pulmonary coefficient and the content of hydroxyproline (HYP) in the lung tissue homogenate, and at the same time, the levels of serum transforming growth factor-β1(TGF-β1) were assayed. Results The pathological changes of lung tissue showed that the pulmonary fibrosis and consolidation in the MSCs treatment group were milder than those in PQ poisoning model group. In the MSCs treatment group, the levels of serum TGF-β1 and lung tissue HYP, and pulmonary coefficient were lower than those of PQ poisoning model group (P＜0.05). Conclusions The use of MSCs for treatment of paraquat intoxication can protect pulmonary structure by decrease in TGF-B1 and inhibiting the fibroblast migration, suppressing the production of collagenous protein.     

纳米SiO_2对大鼠肺氧化损伤的研究

目的探讨纳米SiO2对大鼠肺氧化损伤作用机制。方法将24只体质量200 g左右的雄性大鼠随机分成3组(对照组、微米SiO2组和纳米SiO2组),每组8只。用一次性气管注入法,分别给予1 mL的50 mg/mL石英粉尘(微米SiO2)混悬液、1 mL的50 mg/mL纳米SiO2混悬液、1 mL生理盐水。30 d后进行肺泡灌洗,测定2种粉尘染尘后大鼠肺泡灌洗液(BALF)中的巨噬细胞凋亡率、总蛋白含量、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量、羟脯氨酸(HYP)含量;观察肺脏病理形态学改变;采用免疫组织化学法检测肺组织中转化生长因子β-1(TGF-β1)和白介素-4(IL-4)蛋白的表达。结果微米SiO2组和纳米SiO2组巨噬细胞凋亡率高于对照组;纳米SiO2组凋亡率高于微米SiO2组,差异有统计学意义。微米SiO2组及纳米SiO2组较对照组MDA、HYP和总蛋白含量均增加,T-AOC下降。免疫组化结果显示:微米SiO2组TGF-β1及IL-4表达明显高于纳米SiO2组和对照组。结论纳米SiO2能够对肺组织造成一定的氧化损伤,但其氧化损伤并不是肺纤维化的主要因素。     

百草枯中毒大鼠急性肺损伤机制及姜黄素的干预研究

目的探讨急性百草枯中毒大鼠肺组织氧化应激及脂质过氧化损伤机制及姜黄素的干预作用。 方法将120只成年雄性SD大鼠按不同造模方法用随机数字表法分成对照组、百草枯中毒组、姜黄素干预组,每组大鼠40只。百草枯中毒组腹腔注射百草枯15 mg/kg,姜黄素干预组腹腔注射姜黄素200 mg/kg,15 min后腹腔注射百草枯15 mg/kg,对照组腹腔注射等容量的生理盐水。百草枯中毒组及姜黄素干预组于染毒后（对照组于腹腔注射后）3 h、6 h、24 h、3 d、7 d分别随机抽取8只大鼠取材。荧光实时定量PCR法测定各组大鼠肺组织中的转化生长因子（TGF）-β₁ mRNA的表达量,硫代巴比妥酸比色法、分光光度计比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定肺组织匀浆中丙二醛、髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）活性,光镜下观察各组肺组织病理变化。 结果染毒后6 h、24 h、3 d、7 d,与对照组相比,百草枯中毒组和姜黄素干预组肺组织TGF-β₁ mRNA的表达量明显升高（F = 136.928、32.282、52.008、30.940,P均< 0.05）,丙二醛（F = 132.896、64.988、30.622、30.192）、MPO（F = 34.738、202.578、122.019、119.626）含量升高（P均< 0.05）,而SOD活力降低（F = 34.738、202.578、122.019、119.626,P均< 0.05）;与百草枯中毒组相比,姜黄素干预组各时间点肺组织TGF-β₁ mRNA表达量、丙二醛及MPO含量均降低（P均< 0.05）,肺组织SOD活力均升高（P均< 0.05）。 结论氧化应激及细胞膜脂质过氧化过程的启动可能是百草枯中毒急性肺损伤的机制之一,姜黄素可能通过阻止该过程减轻肺损伤的程度。     

乌司他丁对百草枯中毒大鼠肺损伤的影响

目的观察乌司他丁对百草枯中毒大鼠肺损伤及纤维化的影响,探讨乌司他丁对百草枯中毒大鼠肺的保护机制。方法 SD雄性大鼠90只,体重(180±20)g,随机分为3组:空白对照组(Con组)、百草枯中毒模型组(Mod组)、乌司他丁治疗组(UTI组),每组又再分为5个不同时间点(1 d、3 d、7 d、14 d、21 d,每组6只)。Con组腹腔内注入生理盐水1 ml,其余各组腹腔内注入百草枯溶液18 mg/kg(用生理盐水稀释至1 ml)。0.5 h后,Con组和Mod组:生理盐水1 ml;UTI组:乌司他丁10万U/kg(生理盐水稀释至1 ml),每24 h重复给药一次,直至实验中止。分别于第1天、第3天、第7天、第14天、第21天处死大鼠,采集肺组织,HE染色观察肺组织病理形态学变化,Masson染色观察肺纤维化变化;测定血浆中SOD活性和MDA、HYP含量。结果 HE染色和Masson染色显示:对照组各时间点肺组织呈正常形态结构;Mod组第7天以肺组织炎症为主,第21天出现较明显的肺间质纤维化;UTI组肺组织炎症和肺间质纤维化较Mod组显著减轻。与Con组比较,百草枯染毒各组大鼠血浆SOD活性均显著降低(P<0.05);UTI组血浆SOD活性显著高于Mod组(P<0.05);与Con组比较,百草枯染毒各组血浆MDA和HYP含量均显著升高(P<0.05);UTI组血浆MDA和HYP含量较Mod组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能通过减轻炎性细胞与氧自由基对肺的损伤作用而发挥对肺的保护作用。     

转化生长因子β1/Smads通路在百草枯中毒所致上皮-间充质转变和肺纤维化中的作用研究

目的本研究通过观察百草枯诱导大鼠肺纤维化中转化生长因子β1（TGF-β1）/Smads信号通路的上皮-间充质转变（EMT）现象及相关蛋白的表达。 方法将60只雄性大鼠分为对照组及百草枯组,每组各30只。百草枯组腹腔注射80 mg/kg百草枯建立中毒模型,对照组注射3 mL等渗NaCl溶液。分别在建模后1、3、7、14、21、28 d分批处死大鼠,比较两组大鼠肺组织湿干比重及羟脯氨酸水平,取左肺下叶予苏木素-伊红（HE）染色及Masson染色。评估肺组织病理学和肺纤维化程度,采用Western-blotting检测百草枯中毒后1、3、7、14、21、28 d肺组织中EMT相关指标和TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白的表达。 结果两组各时间点肺湿干比重及羟脯氨酸水平的比较,差异有统计学意义（F=9.772、22.541,P均< 0.001）,且百草枯组湿干比重的比值在3、7、14、21、28 d均显著高于对照组（P均<0.05）,而羟脯氨酸表达水平仅在14、21、28 d明显高于对照组（P均<0.05）。病理结果显示百草枯组大鼠中毒后1~7 d,炎症细胞浸润,肺泡间质增厚水肿,中毒后21 d和28 d可见肺泡壁明显增厚及胶原纤维明显增生,而对照组大鼠肺组织无明显改变。对照组与百草枯组各时间点TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、p-Smad4、Smad7、p-Smad7、E-cad、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Vimentin和成纤维细胞特异性蛋白1（FSP-1）表达水平的比较,差异均有统计学意义（F=10.685、7.381、7.878、10.743、14.575、17.791、33.200、14.453、10.849、25.415、26.263,P均< 0.001）,且百草枯组TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4、p-Smad4、α-SMA、Vimentin及FSP-1表达水平逐渐升高,中毒后21 d达高峰（P均<0.05）。而Smad7、p-Smad7及E-cad表达水平逐渐降低,Smad7、p-Smad7水平在中毒后7 d达到谷底;E-cad表达水平在中毒后21 d达到谷底（P均<0.05）。 结论TGF-β1/Smads信号通路可能通过调节EMT过程影响百草枯诱导的肺纤维化发生。     

筋骨草总黄酮治疗系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织NF-κB变化的实验研究

目的：探讨筋骨草总黄酮（TFA）治疗系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）大鼠后核转录因子-κB（NF-κB）及下游转化生长因子-β1（TGF-β1）的变化。方法采用改良慢性血清病MsPGN大鼠模型,于造模第5周末检测尿蛋白,将尿蛋白阳性者随机分为模型组、雷公藤多甙（TWP）组、不同剂量TFA组。于造模第6周开始给药,6周后,测定各组大鼠的24 h尿蛋白定量、血生化和肾组织病理变化,MaxVisionTM即用型快速免疫组化一步法检测大鼠肾组织中NF-κB p65的表达,双抗体夹心法检测血清中TGF-β1的变化。结果 TFA可显著降低尿蛋白,明显减小系膜区面积占毛细血管丛面积的百分比（P＜0.05或P＜0.01）;高、中剂量的TFA治疗效果与TWP相近（P＞0.05）。模型对照组大鼠肾组织NF-κB p65、血清TGF-β1的表达明显高于正常对照组[NF-κB p65：28.93±4.45 vs.4.51±0.96,P＜0.01;TGF-β1：（247.63±51.55）pg/ml vs.（127.52±27.84）pg/ml,P＜0.01];干预性治疗后,TFA高、中剂量组、TWP组大鼠血清中NF-κB p65、TGF-β1的表达[NF-κB p65：10.35±2.81,15.21±4.71,11.70±3.97,P＜0.01;TGF-β1：（181.96±52.93） pg/ml,（204.33±38.30）pg/ml,（188.07±42.92）pg/ml,P＜0.05]较模型对照组明显降低。结论 TFA降低NF-κB并进而降低TGF-β1可能是治疗MsPGN大鼠的作用机制之一。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠肺纤维化模型中TGF—β1表达影响的研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N—acetylcysteine,NAc）对博莱霉素（bleomycin,BLM）诱导的大鼠肺纤维化模型的肺组织转化生长因子岛（TGF-β1）的蛋白和基因表达的影响及其意义。方法取健康、雌性Wistar大鼠30只,随机分为BLM组（B组）,NAC治疗组（N组）及正常对照组（C组）,每组10只。B组及N组通过气管内注入BLM法制备肺纤维化模型。C组在同样条件下向气管内注射等量的生理盐水,N组于BLM处理前一周及此后每日经强饲法口服NAC（3mmol·kg·day^-1）。三组动物分别于气管灌注后第7天、第14天随机处死5只,取大鼠的肺组织进行病理检测、免疫组化测定肺组织中TGF-β1的蛋白表达;通过RT-PCR检测肺组织TGV-β1 mRNA的表达变化。结果病理学观察发现B组大鼠肺纤维化程度最重,N组的肺泡炎和肺纤维化程度均比B组减轻（P〈0．05）,C组无明显肺泡炎和肺纤维化。B组与C组比较各时间点肺组织的TGF-β1的蛋白含量均增高（P〈0．05）,mRNA的表达升高,相比有显著性差异（P〈0．05）;N组与B组相比较,NAC能够显著降低大鼠的TGF-β1的蛋白水平,其mRNA的表达下降,相比有显著性差异（P〈0．05）。结论NAC可以使肺泡炎及纤维化病变减轻,能降低肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1的蛋白水平,下凋TGF-β1 mRNA的表达,对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化具有显著的抑制作用。     

内皮祖细胞移植对百草枯中毒所致急性肺损伤MAPK通路蛋白表达的影响

目的观察百草枯(PQ)中毒导致的急性肺损伤后内皮祖细胞(EPCs)移植治疗对大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白表达的影响。方法36只SD雄性大鼠按随机数字表法平均分成三组:正常对照组、PQ损伤组和EPCs治疗组,每组12只。EPCs移植后24 h处死大鼠并收集大鼠肺组织和血清。分别采用比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,血气分析仪检测大鼠动脉血氧分压(PaO₂),肺组织切片后通过HE染色对肺损伤程度进行评估,Western blot方法测定肺组织中MAPK信号通路蛋白表达。结果与对照组比较,PQ损伤组大鼠血清IL-1β(μg/L:25.16±1.71 vs.34.94±1.68)和TNF-α(μg/L:51.17±2.33 vs.78.46±5.16)含量明显增加(P<0.05),PQ损伤组大鼠肺组织中MDA(nmol/m L:3.08±0.19 vs.6.89±0.44)含量明显增加(P<0.05),但是SOD(U/m L:249.11±4.71 vs.191.15±3.21)活性降低,且PaO₂(mm Hg:92.19±3.31 vs.40.18±5.54)下降(P<0.05);与PQ损伤组比较,EPCs治疗组大鼠SOD(U/m L:191.15±3.21 vs.216.64±2.39)活性升高(P<0.05),MDA(nmol/m L:6.89±0.44 vs.5.13±0.40)、IL-1β(μg/L:34.94±1.68 vs.26.11±1.43)和TNF-α(μg/L:78.46±5.16 vs.60.18±4.31)含量降低(P<0.05),PaO₂(mm Hg:40.18±5.54 vs.56.81±5.16)升高(P<0.05)。MAPK通路蛋白的磷酸化水平在对照组中仅有少量表达,而给予百草枯后表达量显著升高(P<0.05),使用EPCs治疗后各蛋白表达量又显著降低(P<0.05)。结论百草枯中毒可激活包含p38MAPK、C-JUN氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)在内的MAPK通路。EPCs可以改善PQ中毒大鼠症状,减少肺部损伤,改善供氧,其机制可能与抑制MAPK通路各蛋白磷酸化有关。     

血必净对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织高迁移率族蛋白1表达的影响

目的观察脂多糖诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠HMGB1的表达及应用血必净的干预效果,并探讨作用机制。方法 45只W istar大鼠随机分为三组:(1)健康对照(Control)组(15只)、(2)脂多糖(LPS)组(15只)、(3)血必净干预(XBJ)组(15只)。LPS组和XB J组采用股静脉注射LPS(5mg/kg)建立大鼠ALI模型。造模前半小时开始给药,XBJ组给予血必净4 m l/kg,静脉注射;Control组和LPS组则给予等容积0.9%氯化钠注射液。在造模后6 h、12 h、24 h各随机处死大鼠5只,分别作为I、II、Ⅲ亚组,光镜下观察肺脏组织形态学变化,免疫组织化学法(IHC)检测肺组织中HMGB1蛋白表达。结果造模后LPS组随着实验时间的延长,肺组织HMGB1蛋白呈逐渐增加趋势,至24 h达到高峰。与LPS组相比,血必净组各时间点肺组织HMGB1蛋白表达明显降低(P<0.05)。光镜显示LPS组肺组织病理形态学改变明显,而血必净组则明显减轻。结论血必净可明显抑制脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺组织增强的HMGB1表达,减轻脂多糖诱导的大鼠肺损伤程度。