荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病称为乙型肝炎.我国是乙型肝炎高发国家,人群累计感染率〉10%[1].HBV血清标志物检测是常用的方法之一,而酶联免疫吸附试验（ELISA）只能提供阴、阳性判断结果,不能提供病毒的具体载量.而对HBV-DNA进行定量检测能直接了解HBV在体内的复制情况及传染性程度,并能对治疗效果、耐药性及是否复发进行动态监测.笔者对538份血清标本的HBV-DNA检测结果与其HBV血清标志物检测结果进行了对比分析,现报道如下.     

荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者免疫学检测与HBV-DNA的关系,为合理治疗乙肝患者提供准确的依据。方法采用荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒进行研究。结果在HBV-DNA阳性的血清标本中,HBcAb阳性率为94.0%;在HBV-DNA阴性但HBsAg阳性标本中,HBcAb阳性率为94.7%。结论定量PCR可真实反映HBV感染、复制及病程变化,对乙型肝炎的诊断及治疗均有一定的临床意义。     

探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值

目的:探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值。方法:选择2021年4月至2023年4月我院收治的120例疑似慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分别采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法(ELISA)对所有患者HBV-DNA含量进行检测。以试纸法检测结果为标准,比较实时荧光定量PCR、ELISA检测结果的一致性;比较实时荧光定量PCR、ELISA对慢性乙型肝炎的诊断效能;比较不同HBV感染状态下HBV-DNA含量的差异。结果:120例疑似慢性乙型肝炎患者经试纸法检查确诊为慢性乙型肝炎107例。Kappa检验分析结果显示,实时荧光定量PCR检查结果与试纸法检查结果具有高度的一致性(Kappa值=0.897,P<0.05)。实时荧光定量PCR对慢性乙型肝炎的诊断灵敏度、特异性与准确率均高于ELISA(P<0.05)。大三阳HBV-DNA含量均高于小三阳与急慢性感染期(P<0.05);小三阳HBV-DNA含量与急慢性感染期比较无明显差异(P>0.05)。结论:实时荧光定量PCR在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值较高,不但能完成疾病的准确诊断,还能通过对...     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎血清DNA的临床观察

目的:探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒DNA定量与乙型肝炎标志物关系.方法:采用荧光探针杂交技术为基础的实时荧光定量PCR检测259例乙型肝炎患者血清中DNA含量,与HBV标志物作对比分析.结果:血清HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率为98.6%,HBeAb组阳性率为61.5%;HBeAg组阳性率含量明显高于HBeAb阳性组.结论:实时荧光定量PCR检测具有较高的灵敏度和特异性,定量准确、结果可靠,为临床了解病毒复制情况,制定治疗方案及疗效观察提供了确切依据.     

荧光定量PCR法检测鼻咽癌血浆游离EBV DNA的临床意义

目的通过检测血浆中游离EBV DNA水平,探讨其在鼻咽癌诊断、鉴别诊断、临床分期中的临床意义,方法采用荧光定量PCR方法定量检测111例初治鼻咽癌患者和107例放疗后持续缓解患者血浆游离EBC DNA水平．结果初治组及临床缓解组血浆中游离EBV DNA检出率分别为74．8％（83／111）和4．6％（5／107）．初治组检出率显著高于临床缓解组．在统计学上有显著性差异;初治组中晚期（Ⅲ＋Ⅳ期）血浆游离EBV DNA拷贝数显著高于早期（Ⅰ＋Ⅱ期）;N晚期（N2＋N3）拷贝数显著高于早期（N0＋N1）;T晚期（T3＋T4）拷贝数显著高于早期（T1＋T2）;统计学上均有显著性差异。结论荧光定量PCR方法检测血浆中游离EBV DNA是一种敏感可靠的方法,血浆游离EBV DNA定量检测对鼻咽癌诊断、鉴别诊断、分期、治疗后监测有重要的临床意义．有望成为鼻咽癌肿瘤学标记物。     

荧光定量PCR和ELISA检测乙肝患者HBV标志物结果的比较

目的 检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的含量,了解其与免疫学指标的关系。方法 采用荧光定量PCR技术和ELISA方法.分别检测1242例乙型肝炎患者血清中HBV DNA含量和免疫学指标。结果 发现HBV DNA在各种模式的HBV标志物特阳性血清中均可检出。HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性组患者血清中存在高水平HBVDNA;HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性组患者血清中存在低水平HBV;HBsAg、抗HBc阳性组患者血清中存在低水平HBV。另发现28例抗HBs阳性组阳性率10．7％。结论 荧光定量PCR技术在乙肝诊断、治疗过程监测及药效评价方面有应用价值。     

DNA提取后24h对荧光定量PCR检测HBV—DNA的影响

目的目前国内较多的医院采用荧光定量的方法对血清中的HBV-DNA进行定量检测。而在HBV-DNA检测过程中因多种因素的影响,需要HBV-DNA提取后存放一定时间再进行检测。该文旨在评价标本DNA提取后存放24h对荧光定量PCR检测HBV-DNA的影响。方法收集我院首诊和慢性肝炎血清标本15例。将此15例标本各取部分血清进行DNA提取后4℃保存24h为实验组;此15例标本剩余血清4℃保存于次日实验当天进行DNA提取为对照组,采用实时荧光定量PCR技术两组同时上机进行HBV-DNA的检测。结果对实验组与对照组检测结果进行配对t检验,DNA当天提取组结果为（4.07±1.68）1U/ml,DNA提取后存放24h组结果为（4.13±1.75）1U/ml。t=0.692,P=0.263。两组定量检测HBVDNA结果无显著性差别。结论标本DNA提取后存放24h对荧光定量PCR检测HBV-DNA的定量结果无影响,提示可定期成批检测HBV-DNA,更科学有效地使用实验室的人力、物力资源和更有利于为患者服务。     

实时荧光定量PCR法检测乙型肝炎患者血清HBVDNA含量512例分析

目的探讨实时荧光定量PCR检测不同血清标志物模式的乙型肝炎患者的血清HBVDNA含量的特点。方法应用ELISA对512例病人血清中乙型肝炎血清标志物进行检测,同时用实时荧光定量PCR检测标本中HBVDNA的含量,分别统计每组的HBVDNA阳性例数及其阳性率,用u检验进行统计学处理。结果HBsAg（＋）／HBeAg（＋）／抗HBc㈩组168例,HBVDNA阳性161例,占95．8％;HBsAg（＋）／抗HBe（＋）／抗HBc（＋）组163例,HBVDNA阳性51例,占31．3％;HBsAg（＋）／抗HBc（＋）组181例,HBVDNA阳性94例占51．9％;三组之间互相比较差异均有显著性（P〈0．001）。结论HBsAg（＋）／HBeAg（＋）／抗HBc（＋）组中HBV复制最活跃,实时荧光定量PCR检测HBVDNA比血清标志更能反映乙型肝炎病毒存在与复制情况。     

慢性乙型肝炎血清HBV DNA定量检测及其临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎（CHB）病人血清HBV DNA含量与HBeAg及肝损害程度的关系。方法 应用定量PCR法和ELISA法检测116例CHB病人血清HBV DNA含量与HBVM。结果 血清HBeAg阳性组HBV DNA含量显著高于HBeAg阴性组（P＜0．05）;CHB轻、中、重度血清HBV DNA含量逐渐降低（P＜0．05）。结论 基因水平证实HBeAg是HBV复制指标;随着肝损害程度加重,血清HBV DNA含量逐渐下降;定量检测HBV DNA对判断肝损害程度、指导抗病毒治疗有重要意义。     

实时荧光PCR检测在乙型肝炎病毒DNA检测方面的临床意义

目的对采用血清学标志物检测确定为乙型肝炎的患者进行实时荧光PCR检测,探讨实时荧光PCR检测的临床应用价值。方法对乐昌市人民医院自2007年7月到2009年12月门诊及体检中心进行血清学标志物检测(HBV-M)诊断为阳性的乙型肝炎患者336例,采取实时荧光PCR检测,对其结果进行分析。结果大部分乙型肝炎患者定量PCR检测HBV-DNA的结果与HBV血清学标志物检测结果一致。大三阳、小三阳患者血清中PCR结果拷贝数均较高,而HBsAb(+)或HBsAg(-)的标本PCR有个别阳性结果 ,但其拷贝数很低。结论实时荧光PCR检测HBV-DNA在判断体内HBV是否在复制,复制程度以及HBV血清学标志阴性肝炎患者的诊断方面,较优于血清学标志物检测,值得临床推广。     

血清HBV DNA定量检测的意义

目的　通过与血清乙肝标志物 (HBV- M)的比较 ,探讨血清乙肝病毒 (HBV) DNA定量检测的临床意义。方法　采用荧光定量 PCR法和 EL ISA法分别检测 84例乙肝患者和 2 3例 HBs Ag (- )者的血清 HBV DNA含量和HBV- M。结果　 HBe Ag (+)乙肝患者组 (32例 )、 HBe Ag (- )乙肝患者组 (5 2例 )和 HBs Ag (- )对照组 (2 3例 )的 HBV DNA阳性率分别为 10 0 %、 5 5 .8%、 13.0 % ,存在显著性差异 (X2 =4 3.3,P<0 .0 1) ;HBe Ag(+)乙肝患者组的 HBV DNA拷贝数为 10 6 .89± 1 .2 8/ m l,显著高于 HBe Ag (- )乙肝患者组和 HBs Ag (- )对照组 (P<0 .0 1)。结论　检测血清 HBV DNA含量弥补了 HBV- M只能定性、敏感性不足的缺点 ,从 HBV复制水平更准确反映乙肝患者HBV感染状态和传染性强弱 ,对判断乙肝患者病情意义重大 ;此外 ,HBs Ag(- )并不能排除 HBV感染 ,建议应对献血员开展 HBV DNA检测     

HBV DNA血清含量与乙型肝炎标志物检测结果的关系

乙型肝炎病毒HBVDNA含量是判断病毒复制活跃和具有传染性的直接和可靠的依据，能直接代表患者病毒血症的水平，而ELISA法检测的是乙肝病毒基因表达产物及患者的免疫反应产物，只能间接地提供标本HBV感染的依据。因此，HBVDNA为乙型肝炎病毒（HBV）感染、复制及有无传染性的最为直接和可靠的依据。近年发展起来的荧光定量PCR技术（FQ—PCR）由于采用荧光技术的闭管检测，不仅可以僻饰常规PCR扩增产物易污染而导致的假阳件．     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA及其与血清标志物的关系探讨

目的　用荧光定量聚合酶链反应 (fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ- PCR)方法定量检测血清中乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus,HBV)的数量及探讨其与 HBV标志物 (HBV M)表现模式的关系 ,以指导临床。方法　共 2 4 4份临床血清标本 ,HBV DNA定量采用荧光定量 PCR分析系统 ,HBV M采用 EL ISA法。结果　经 FQ- PCR检测 ,99例 HBs Ag(+) / HBe Ag(+) / HBc Ab(+)的标本 ,其血清标本 HBV DNA亦全部阳性 ,平均 HBV DNA拷贝数为 1.82× 10 7copies/ ml;96例 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本 ,其 HBV DNA检出率为 6 6 .7% (6 4例 ) ,平均拷贝数为 1.82× 10 4 copies/ m l;11例 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本其 HBV DNA检出率为 6 3.6 % (7例 ) ,平均拷贝数为 7.94× 10 4 copies/ ml。结论　血清 HBV DNA水平与 HBV M表现模式有关 ,HBs Ag (+) / HBe Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 HBV DHA值显著高于 HBs Ag (+) / HBe Ab (+) / HBc Ab (+)的标本和 HBs Ag (+) / HBc Ab (+)的标本 ,提示 HBs Ag与 HBe Ag的存在影响 HBV DNA水平。 FQ- PCR能实现准确定量 ,可以检测 HBV的真实感染和复制情况 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义     

聚合酶链反应定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

乙型肝炎病毒(HBV)感染时,外周血中HBV-DNA是病毒复制最直接和可靠的标志。自1995年以来,我们用定量聚合酶链反应(PCR)法检测HBV-DNA含量共170例,现对其临床意义进行分析评价。     

荧光定量PCR法检测母乳巨细胞病毒感染的研究

目的了解母乳人巨细胞病毒(HCMV)感染状况。方法应用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测390份母乳中HCMV-DNA含量,其中236份母乳配对与患儿血液中HCMV-DNA含量作一定分析。结果可疑或确诊HCMV感染患儿母亲母乳HCMV-DNA阳性率达71.28%,HCMV-DNA阳性母乳喂养的婴儿,其血或尿HCMV-DNA阳性率明显高于HCMV-DNA阴性母乳喂养的婴儿。结论HCMV感染母乳是婴儿获得性感染的主要途径。     

荧光定量PCR法检测母乳巨细胞病毒感染的研究

目的了解母乳人巨细胞病毒(HCMV)感染状况.方法应用荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测390份母乳中HCMV-DNA含量,其中236份母乳配对与患儿血液中HCMV-DNA含量作一定分析.结果可疑或确诊HCMV感染患儿母亲母乳HCMV-DNA阳性率达71.28%,HCMV-DNA阳性母乳喂养的婴儿,其血或尿HCMV-DNA阳性率明显高于HCMV-DNA阴性母乳喂养的婴儿.结论HCMV感染母乳是婴儿获得性感染的主要途径.     

数字PCR和荧光定量PCR技术在EB病毒核酸定量检测中的应用比较

目的 以微滴式数字PCR技术（ddPCR）为标准,考察实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测EBV DNA的临床检测性能,并评估ddPCR技术临床有效性和实用性。方法 收集229例疑似EBV感染相关疾病患者血浆标本,采用ddPCR和qPCR两种方法测定同一份血浆标本的EBV DNA载量。结果 疑似EBV感染人群中,采用ddPCR方法检测的阳性率为50.22%,采用qPCR方法检测的阳性率为20.96%,阳性率差异有统计学意义（P <0.05）,其中两种方法结果不一致的样本98.51%(66/67)经一代测序证实为特异的EBV DNA信号。以ddPCR为标准,qPCR检测EBV DNA的灵敏度为41.74%,当qPCR的阈值从1 000 IU/ml提升到11 IU/ml时,灵敏度可提高到87.83%。结论 采用ddPCR检测EBV DNA灵敏度更高,有利于临床EBV病毒感染的早期诊断。     

定量检测乙型肝炎病毒标志物与HBV DNA定量间的关系及临床意义

目的　探讨定量检测乙型肝炎病毒血清标志物(HBVM)与(HBV DNA)定量之间的关系及临床意义。方法　采用实时荧光定量PCR仪检测HBV DNA,采用时间分辨荧光免疫分析仪检测HBVM。结果　375例乙肝患者在HBV DNA含量分组中,随HBV DNA含量增高,HBs Ag、HBe Ag含量也增高,后两者与前者有良好的一致性,存在一定的相关性(r=0 .5 332 ,r=0 .380 9)。抗HBs,抗HBe及抗HBc与HBV DNA之间,无明显规律。HBs Ag含量:慢性轻度肝炎分别与急性肝炎、慢性重度、亚重肝、慢性重型肝炎,肝硬化比较差异有非常显著性(P<0 .0 1,0 .0 5或0 .0 0 1) ,HBe Ag含量:慢性轻度肝炎分别与急性肝炎、慢性中度、慢性重度、亚重肝、慢性重肝,肝硬化比较差异非常显著(P<0 .0 1或0 .0 0 1) ,HBs Ag含量及HBe Ag含量在其他临床分型中比较部分有统计学意义。HBV DNA阳性率及HBV DNA定量在部分临床分型中比较有统计学意义。结论　时间分辨荧光免疫(DEL FIA)是一敏感、特异方法,定量检测HBs Ag、HBe Ag能反映HBV DNA载量及复制情况;部分情况表明肝脏病变越重,其HBs Ag及HBe Ag血清含量越低,HBV DNA阳性率及HBV DNA载量与乙肝临床分型之间关系无确定性结论     

荧光定量PCR检测柯萨奇病毒的结果分析

病毒性心肌炎(VMC)的发病,以肠道病毒所致者最为多见。由于病毒学研究工作的进展,确诊患病者有增多的趋势,尤其是柯萨奇B组病毒(CBV)感染者。2年来,我们应用FQ -PCR检测VMC患者血清CBV -RNA ,发现与临床VMC相关,现报道如下。1资料与方法1 1资料:VMC组63例,选自门诊和住院病例,男27例,女36例,年龄19～51岁。临床诊断符合1987年全国心肌炎心肌病专题会议标准的1、2条及第5条。对照组(同期非心肌炎患者)53例,男39例,女14例,年龄18～67岁。1 2试剂:分析纯氯仿、异丙醇:上海化学试剂公司:FQ -PCR试剂盒:由中山大学生物技术研究所提…     

实时荧光定量PCR法检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量

目的 建立可定量检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量的实时荧光定量PCR方法。方法 采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒（磁珠法）提取毕赤酵母菌DNA,利用毕赤酵母残留DNA检测试剂盒（PCR-荧光探针法）进行扩增反应,绘制标准曲线,建立毕赤酵母菌DNA残留量的Real-time PCR检测方法,并验证其准确性和精密性。结果 毕赤酵母菌DNA质量浓度在0.03~300 pg·μL^-1内线性良好（r>0.99）,定量限为0.03 pg·μL^-1;应用该法对3批门冬氨酸鸟氨酸原料药进行测定,毕赤酵母菌DNA残留量均远低于每剂10 ng。结论 该方法可用于门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量的定量测定。