海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

体外培养皮质及海马神经元损伤后血小板活化因子的表达

 目的 研究体外培养皮质及海马神经元损伤后血小板活化因子受体(platelet activating factor receptor, PAFR)的表达及其与环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和谷氨酸受体2(glutamate receptor 2,GluR2)在损伤时序性变化上的相关性.方法 采用新生SD大鼠皮质和海马培养的神经元复制改良Scott神经细胞液压冲击损伤模型,采用完全随机分组设计,于损伤后4 h、8 h、12 h、24 h和48 h用免疫细胞化学染色SP法检测PAFR、COX-2和GluR2的表达情况.结果 损伤后,皮质和海马中PAFR与 GluR2表达均在4 h下降,12 h达最低,48 h时仍低于正常;COX-2表达在4 h增加,8 h达最高值,48 h时仍高于正常;损伤后各组PAFR、COX-2和GluR2阳性细胞面积与对照组相比差别均有统计学意义(P=0.0001).结论 体外培养皮质及海马神经元损伤后PAFR、COX-2和GluR2三者表达的时序性变化特点基本一致,关系密切,故推断它们共同参与脑损伤病理生理过程.     

TBI大鼠海马糖皮质激素受体表达变化对认知功能的影响

目的 研究创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后大鼠海马区糖皮质激素受体(ghcocorticoid receptor,GR)表达的变化对认知功能的影响.方法 建立大鼠脑损伤模型,应用免疫组化、Western blot和Morris水迷宫检测伤后大鼠海马区GR表达与学习记忆功能的关系.结果伤后4～10 d大鼠海马区GR持续低表达;Morris水迷宫检测伤后大鼠出现认知功能障碍.结论 TBI大鼠海马区GR表达变化与认知功能的障碍改变具有相关性.

Abstract：

Objective To explore the effect of glucocorticoid receptor(GR)expression in rat hippocampus on cognitive function after traumatic brain injury(TBI). Methods The TBI model wag established in rats.Then,immunohistochemistry and Western blot were used to detect the GR expression and evaluate its relation with cognitire dysfunction by Morris water maze. Results Expression of hippocampal GR was down-regulated 4-10 days after TBI.Morris water maze test showed significant impairment of the cognitive function in rats. Conclusion There is correlation between expression change of hippocampal GR and cognitive dysfunction.     

脑损伤后大鼠神经功能及海马神经元的变化

目的：观察并探讨Feeney法创伤性脑损伤中大鼠神经功能及海马神经元的变化，以选择一种合理的大鼠脑损伤模型致伤方案，方法：用20g重棒分别从10，30，40g重棒从25cm的高度打击SD大鼠一侧脑皮层致伤，观察伤后大鼠神经功能及海马神经元的变化。结果：200g.cm所致的损伤伤后无明显的神经功能障碍和海马结构的改变。600g.cm可造成一定程度的神经功能障碍及伤侧海马神经元变性坏死；1000g.cm可引起伤后严重的神经功能缺损，伤侧海马结构被完全毁损，结论：Feeney法创伤性脑损伤模型中600g.cm打击方案是较为合理且又能致创伤性脑损伤后大鼠神经功能及海马神经元改变的脑损伤方案。     

大鼠大脑损伤后皮质NMDA受体活性变化与脑水肿的关系

目的脑损伤后释放的谷氨酸通过其受体，主要是Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体而发挥神经元兴奋毒作用；通过对脑损伤后不同时期伤侧大脑皮质ＮＭＤＡ受体活性和含水量的测定，探讨它们之间的关系。方法以自由落体致伤方法制作脑损伤模型，采用放射性配基结合分析法对伤后不同时间的大鼠伤侧大脑皮质ＮＭＤＡ受体进行测定，用干湿法测脑皮质含水量。结果伤后３０分钟脑皮质含水量开始增加，伤后６小时达高峰，伤后１６８小时恢复正常；ＮＭＤＡ受体的最大结合量（Ｂｍａｘ）于伤后１５分钟开始升高，伤后３０分钟达高峰，之后逐渐降低，于伤后６小时达最低值，以后逐步升高，伤后７２小时基本恢复正常。结论实验结果提示ＮＭＤＡ受体过度激活是脑损伤后早期继发性脑水肿的重要启动因素之一。     

清醒小鼠严重颅脑闭合性撞击伤后大脑皮质和肝脏糖皮质激素受体蛋白表达变化的差异

目的 研究小鼠闭合性严重颅脑外伤后大脑皮质糖皮质激素受体(glucocorticoid receptors,GR)蛋白水平的变化与外周肝脏GR蛋白水平的变化、血清皮质醇、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)变化的关系.方法 利用BIM-Ⅲ型小型多功能动物撞击机对小鼠清醒致伤,于致伤后30 min、2 h、8 h、24h、48 h、72 h采用Western blot免疫印迹法检测大脑皮质和肝脏GR的蛋白水平的变化,ELISA法检测各组外周血清中ACTH含量,放免法检测皮质醇含量.结果 致伤后2 h大脑皮质和肝脏GR均出现蛋白水平表达降低,8 h后呈现恢复趋势,肝脏GR至72 h仍未完全正常;而大脑皮质GR从致伤后24 h再次呈现持续的表达降低.外周血中ACTH、皮质醇较对照组有明显升高,均具有的两个峰值特征,但是两者的高峰期并不完全吻合.结论 严重颅脑外伤后中枢和外周组织均存在糖皮质激素抵抗,两者的变化具有时相差异性.

Abstract：

Objective To study the relationship of expression of central cortex glucocorticoid receptor (GR) at protein level with GR expression in the liver at protein level and with changes of serum cortisol and adrenocorticotropic hormone (ACTH) following severe closed traumatic brain injury (TBI) in mice. Methods Severe TBI was established in awake mice by using a BIM-Ⅲ biomechanical machine. At 0.5, 2, 8, 24, 48 and 72 hours after TBI, the total cytosolic GR in the cortex and liver were detected with Western blotting. Levels of serum ACTH and cortisol were measured by ELISA technique and radio-immunological assay (RIA) respectively. Results The expression of GR both in the cortex and liver were obviously down-regulated at protein levels at 2-72 hours after TBI and increased slowly eight hours after injury. The GR in the liver showed no recovery at 72 hours after injury and that in the cortex was decreased continually at 24 hours after injury. Serum ACTH and cortisol levels were increased markedly compared with control group, when there were two different peaks in the observation curve.Conclusion There is glucocorticoid resistance both in the central and peripheral tissues after severe closed TBI in the awake mice, which changes in a time-dependent manner.     

培养大鼠脑皮层神经元损伤后c-fos蛋白表达

目的观察培养的大鼠皮层神经元损伤后ｃ－ｆｏｓ蛋白表达，探讨其在继发性脑损伤中的作用。方法混合培养１０～１２天ＳＤ胎鼠的皮层神经元分别用谷氨酸和机械划痕损伤。采用ＳＰ法进行免疫组化双重标记反应。结果谷氨酸作用后２小时，ｃ－ｆｏｓ蛋白开始表达，４小时后在核中明显浓聚。创伤后２小时仅在创道边缘直接损伤部位有ｃ－ｆｏｓ蛋白表达，远离创道未直接损伤区的神经元在创伤后４小时才出现；少数神经元突起远端有明显ｃ－ｆｏｓ蛋白颗粒；损伤后６小时神经元突起开始崩解，但ｃ－ｆｏｓ蛋白颗粒仍未消失。结论谷氨酸损伤可引起培养的神经元ｃ－ｆｏｓ蛋白的大量表达，损伤后培养皮层神经元和胶质细胞可以释放出神经毒性物质，培养神经元损伤后ｃ－ｆｏｓ蛋白过度表达可能与凋亡有关     

促红细胞生成素及其受体在大鼠创伤性颅脑损伤模型中的表达及意义

目的 研究创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠损伤周围脑组织促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)及其受体(erythropoietin receptor,EPOR)的表达.方法 78只SD大鼠按随机数字表法分为对照组(6只)、假手术组(36只)、液压冲击脑创伤模型组(36只).根据处死时间,分为6,24 h和3,5,7,14 d6个时相点,每个时相点假手术组和脑损伤组各处死6只大鼠,取损伤周围脑组织.利用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测EPO、EPOR的mRNA表达和蛋白表达.结果 EPO在伤后24 h内即升高,到第3天达到高峰,并可维持2 d左右,至伤后第7天开始下降,于伤后14 d基本恢复至伤前水平;而EPOR于伤后24 h到达高峰,至伤后14 d表达量仍可维持较高的水平.结论 TBI后24 h内源性EPO及其受体的表达即开始增加,但二者的表达具有不一致性,且EPO相对受体表达具有短暂性.

Abstract：

Objective To study the expressions of erythmpoietin(EPO)and its receptors(EPOR)in the injured brain tissue ofthe rats with traumatic brain injury(TBI).Methods A total of78 SD rats were randomly divided into three groups including control group(six rats),sham group(36rats) and fluid percussion injury group(36 rats).The rats were sacrificed at 6,24 hours,3,5,7 and 14days after TBI in the sham group and the fluid percussion injury group(six rats at each time point).Then,the injured brain tissues were removed for observation of the mRNA and protein expressions of EPO and EPOR by meaDiB of real-time PCR and Western blot. Results The expression of EPO was increased at 24 hours and reached the peak at day 3 after TBI.The hish expression level of EPO could maintain for two days or so.began to decrease at day 7 and recovered to normal at day 14 after Till.While the expression of EPOR reached the peak at 24 hours after TBI and maintained hish level at day14. Conclusions The expressions of EPO and EPOR show increase within 24 hours after TBI.In fact,the expressions of both factors are not in consistency,with more transient expression of EPO.     

PTEN、VEGF、Bcl-2在大肠癌中的表达及相关性研究

目的研究PTEN、VEGF、Bcl-2在大肠癌中的表达、相互关系及它们在大肠癌发生、发展和转移过程中的作用。方法应用免疫组化SP法检测58例大肠癌中PTEN、VEGF、Bcl-2的表达,分析PTEN与VEGF、Bcl-2的相关性及与大肠癌生物学行为的关系。结果大肠癌组织中,PTEN表达率为46．6％（27／58）显著低于正常大肠组织（P〈0．01）．VEGF、Bcl-2表达率分别为84．5％（49／58）、63．8％（37／58）,显著高于正常大肠组织（P〈0．01）,PTEN表达与淋巴结转移显著相关（P〈0．05）．与患者年龄、性别、肿块大小、分化程度及浸润深度无统计学意义。大肠癌组织中PTEN的表达与VEGF表达之间呈负相关（P〈0．05）。结论PTEN与VEGF、Bcl-2在大肠癌的发生、发展中起着不同的作用,PTEN表达的缺失可能引起VEGF的表达率增加,促进肿瘤血管生成,从而促进大肠癌的转移,联合检测VEGF、PTEN可作为判断大肠癌预后的生物学指标。     

左旋甲羟戊酸对辛伐他汀调控心肌细胞PTEN表达的影响

目的：观察左旋甲羟戊酸（L-MVA）对辛伐他汀调控大鼠心肌细胞第十号染色体缺失的张力蛋白同源区（PTEN）表达的影响。方法：应用图像分析及[3H]-亮氨酸掺入法测定细胞表面积及蛋白合成速率,RT-PCR检测心钠素（ANP）mRNA表达,RT-PCR和Western blot法检测PTEN的mRNA和蛋白表达水平。结果：辛伐他汀＋L-MVA组心肌细胞表面积、[3H]-亮氨酸掺入率、ANP mRNA水平均明显高于辛伐他汀组（P〈0.01）,而PTEN的mRNA及蛋白表达水平则明显降低（P〈0.01）。结论：L-MVA能够降低PTEN的表达水平,逆转辛伐他汀对心肌细胞肥大的抑制作用。     

口腔鳞癌抑癌基因PTEN蛋白的表达

 目的研究抑癌基因Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten(PTEN)在口腔鳞癌组织中的表达情况及其临床病理学意义,探讨PTEN与口腔鳞癌发生发展的关系及作用机制,为利用基因治疗口腔鳞癌提供理论和实验依据.方法应用免疫组织化学S-P法检测34例口腔鳞癌组织中PTEN蛋白的表达,另有10例正常口腔黏膜组织作为对照组.结果正常口腔黏膜组织中PTEN蛋白全部表达,阳性率为100%;口腔鳞癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率67.6%,显著低于正常口腔黏膜组织;PTEN在高、中、低分化口腔鳞癌组的阳性表达率分别为83.3%、78.6%和25%,差异有统计学意义(P＜0.05);PTEN在口腔鳞癌组织中的蛋白表达与患者的年龄、性别无显著相关性(P＞0.05).结论 PTEN基因在口腔鳞癌的发生发展过程起一定作用;PTEN蛋白的表达与患者的年龄、性别无明显相关性,而与组织分化程度显著相关.     

兔缺血心肌组织PTEN及VEGF的表达和血管生成关系的研究

目的 研究家兔急性心肌梗死(AMI)后梗死边缘区心肌组织10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)及血管内皮生成因子(VEGF)的表达与血管生成的关系.方法 20只日本大耳白兔,随机分为AMI组(n=15)和假手术(SH)组(n=5),AMI组又分为术后AMI 1、2、4周组,每组5只.AMI组结扎左冠状动脉回旋支建立AMI模型,SH组回旋支仅穿线不结扎血管.Ⅷ因子免疫组化测定梗死边缘区毛细血管密度,免疫组化及QRT-PCR检测梗死边缘区心肌VEGF的表达,Western blotting及QRT-PCR检测梗死边缘区心肌PTEN的表达.结果 AMI组梗死边缘区心肌组织VEGF的表达较SH组明显减少(P<0.01),PTEN的表达明显高于SH组(P<0.01).AMI 4周时梗死边缘区心肌组织的毛细血管密度(45.4±10.0/mm2)与SH组(103.2±13.3/mm2)比较明显减少(P<0.01).PTEN蛋白及mRNA表达与VEGF表达之间均呈负相关(r=-0.990,P<0.05;r=-0.994,P<0.01).结论 AMI后心肌组织中PTEN的表达增加抑制了VEGF水平,从而使梗死边缘区心肌组织的血管生成减少;抑制PTEN的表达可能改善缺血心肌的血液灌注.     

丙泊酚对大鼠的空间学习记忆和海马NMDA受体NR2A亚基表达的影响

目的观察丙泊酚单次麻醉对成年大鼠空间学习记忆能力的影响以及海马NMDA受体NR2A亚基的变化。方法 30只SD大鼠随机分成丙泊酚组(n=15)和对照组(n=15)。给予丙泊酚50mg/kg腹腔注射作为诱导剂量,待翻正反应消失后在腹腔追加50mg/kg丙泊酚加深麻醉。对照组不予任何处理。待翻正反应恢复12h后应用Morris水迷宫评价丙泊酚对于大鼠空间学习记忆的影响。同时通过免疫荧光技术检测海马NMDA受体NR2A亚基的表达变化。结果丙泊酚组平均学习潜伏期较对照组显著缩短(P<0.05),靶象限活动时间百分比明显延长(P<0.05),丙泊酚组NMDA受体NR2A亚基的表达增加。结论丙泊酚单次麻醉后成年大鼠的空间学习记忆能力提高,这种学习记忆能力的提高可能和NMDA受体NR2A亚基的表达上调相关。     

下调PTEN基因对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用研究

目的 探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用.方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组(转染脂质体)、pshGFP组(转染pshGFP质粒)、pshRNApten治疗组(转染pshRNApten质粒),每组20只,各组分别于再灌注后3d(6只)、7d(7只)、14d(7只)三个时间点进行观察.正常对照组与pshGFP组分别注射脂质体与pshGFP质粒,pshRNApten治疗组于海马局部注射pshRNApten质粒.注射2d后,采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型.利用RT-PCR和免疫组化法检测海马神经元PTEN基因的表达;采用HE和Nissl染色检测神经元损伤情况;采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 pshRNApten治疗组海马神经元PTEN基因的mRNA和蛋白表达量均较正常对照组明显下降(P<0.05).pshRNApten治疗组海马神经元损伤和变性程度均明显轻于pshGFP组大鼠,海马TUNEL染色阳性细胞数也明显少于pshGFP组大鼠(P<0.05).结论 下调PTEN能有效缓解由缺血再灌注所致的神经元损伤.     

骨肉瘤p53、PTEN的表达与其3年存活之间的相关研究

目的　研究骨肉瘤p5 3、PTEN表达与其 3年存活之间的关系。方法　运用免疫组化方法检测 5 3例骨肉瘤病理标本p5 3、PTEN蛋白表达情况 ,并与术后 3年随访结果对照分析。结果　运用 χ2 检验进行统计学分析发现 ,p5 3阴性表达时 ,PTEN表达的 2种形式与随访结果有显著性差异 (χ2 =3 5 .95 ,Ρ <0 .0 0 5 ) ,p5 3阳性表达时 ,PTEN表达的 2种形式与随访结果无统计学差异 (χ2 =0 .175 ,Ρ =0 .997)。p5 3及PTEN的表达与随访结果的两因素logistic回归分析 ,只有PTEN表达进入回归模型 ,p5 3没有进入模型 ,PTEN表达与随访结果呈正相关关系。结论　p5 3、PTEN骨肉瘤中的表达与其对预后判定的作用上PTEN较p5 3作用更大     

肝细胞性肝癌多层螺旋CT表现与PTEN表达间关系的研究

目的 探讨肝细胞性肝癌（HCC）多层螺旋CT（MSCT）表现特征与其PTEN蛋白表达间关系。资料与方法 70例HCC进行MSCT双期扫描,术后标本进行HE染色及PTEN免疫组织化学染色。对照分析MSCT表现与病理和PTEN表达。结果 PTEN蛋白表达率为65．7％。包膜完整组与不完整组中PTEN表达率分别为82．1％、54．8％（P〈0．05）;有癌栓与无癌栓组PTEN表达率分别为56．3％、86．4％（P〈0．05）。结论 PTEN蛋白表达缺失主要发生于包膜不完整及有静脉癌栓的HCC,根据HCC的MSCT表现可以间接推测PTEN蛋白表达。