聚合酶链反应结合斑点杂交技术检测伤寒沙门氏菌的临床应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性的ＤＮＡ片断，再用地高辛标记探针与之杂交检测，并用非伤寒沙门氏菌作对照，结果仅伤寒沙门氏菌阳性。实验表明，当标本中伤寒沙门氏菌含量达１０ｃｆｕ／ｍｌ时，即可检出。在伤寒发病早期，当机体抗体水平尚处于低水平时，应用ＰＣＲ斑点杂交检测伤寒沙门氏菌可提高伤寒的诊断率；在伤寒病程后期，应用ＰＣＲ斑点杂交检测治疗后带菌状态具有重要价值。     

巢式聚合酶链反应检测伤寒沙门氏菌H及Vi抗原基因的应用研究

应用巢式聚合酶链反应技术，通过两种引物（共四对）分别对伤寒沙门氏菌鞭毛Ｈ和Ｖｉ抗原基因扩增，并用非伤寒沙门氏菌作对照。实验表明，两种基因的扩增产物均是特异的，Ｈ抗原基因引物仅对伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因扩增，Ｖｉ抗原基因引物对伤寒沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原基因扩增，余均为阴性。扩增Ｖｉ抗原基因比扩增Ｈ抗原基因敏感，当反应体系中达０．５个菌细胞时，Ｖｉ抗原基因就可检出，而鞭毛抗原基因则需５个菌细胞。检测９２例伤寒患者血液标本，血培养阳性２８例（３０．４３％），巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因阳性３３例（３５．８６％），Ｈ抗原基因阳性３１例（３３．７０％）。伤寒发病早期，当机体伤寒特异性抗体尚处于低水平时，应用巢式ＰＣＲ检测Ｖｉ抗原基因，可提高伤寒的诊断率，使该病得到早期治疗     

鼠疫耶尔森氏菌F1抗原在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及其保护力

目的：对鼠疫耶尔森氏菌Ｆ１抗原在鼠伤寒沙门氏菌中的表达及其保护力进行研究。方法：ＰＣＲ、化学转化及电穿孔法。结果：采用ＰＣＲ方法，特异地扩增了鼠疫菌Ｆ１抗原ｃａｆ操纵子的５Ｋｂ基因片段。将ＰＣＲ产物与质粒载体连接后，经化学方法转化大肠杆菌ＬＥ３９２，获得ｃａｆ基因克隆子，所得克隆子能较好地表达Ｆ１抗原基因。应用电穿孔法将克隆子的重组质粒转入发鼠伤寒沙门氏菌Ｇ３０内获得转化子，其Ｆ１抗原表达水平与大     

应用PCR技术快速检测伤寒沙门氏菌

目的 研究伤寒沙门氏菌的快速检测方法.方法 采用PCR技术通过两对引物扩增伤寒沙门氏菌鞭毛抗原基因Ⅵ区一段特异性DNA片段及inv A和inv E DNA版段,并用其它致病菌作为对照.结果 仅伤寒沙门氏菌各出现一条特异性扩增带,与已知阳性对照相符,确定为阳性.结论 该PCR方法可用于伤寒沙门氏菌的快速检验,具有抗干扰性强、灵敏性高的特点.     

聚合酶链反应鉴定伤寒沙门氏菌

聚合酶链反应鉴定伤寒沙门氏菌北京市卫生防疫站（１０００１３）王劲，张凤琴，任保国我们引入先进的分子生物学技术，以自行设计的寡核苷酸序列作引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对伤寒菌进行鉴定，其结果特异、快速、简便。现报告如下。材料和方法：（１）菌株来...     

四种方法检测伤寒的实验观察

四种方法检测伤寒的实验观察郴州市第二人民医院（４２３０００）郭燕临床上沿用血培养及肥大反应（ＷＲ）检测伤寒沙门氏菌及其抗体。鉴于伤寒的临床表现渐趋不典型，需提高检测的敏感性和特异性，其中酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）测ＳＴ—Ａｇ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）测ＳＴ...     

我国伤寒沙门氏菌的分子流行病学特征Ⅱ．部分伤寒沙门氏菌的16SrRNA基因多态性

利用ＰＣＲ扩增标记的Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ－１６ＳｒＲＮＡ基因为探针，分析我国不同时间和地区分离的１１９株伤寒沙门氏菌和１株鼠伤寒沙门氏菌染色体经ＰｓｔⅠ消化后的１６ＳｒＲＮＡ基因限制性图谱。结果发现，各菌株的杂交片段范围为７．０～２６．５ｋｂ，每个菌株有５～１０条杂交带不等。通过对每个菌株的杂交结果进行数值分类，１１９株伤寒沙门氏菌可分为３８个ＲＴｓ，其中新疆伊犁１９９１年流行菌株和大连１９９０年爆发菌株大部分（１３／２０）为同一ＲＴ；从国内各高发省份分离的一些流行株也有相同的ＲＴ；而一些地区的散发菌株具有独特的ＲＴ；鼠伤寒沙门氏菌的ＲＴ则更为特别。对３９个ＲＴｓ，进行聚类分析发现：国内的一些流行菌株，爆发菌株在遗传距离０．５５处聚成一大类；而散发菌株，非流行菌株则在０．７０处聚成另一类。此外，从健康带菌者分离的菌株２５１所具有的ＲＴ单成一类。鼠伤寒沙门氏菌的距离更远。     

山东蒙阴县恙虫病立克次体的PCR检测和分型研究

本文报告采用恙虫病立克次体表面蛋白５６ＫＤａ基因编码区构建的群、型特异引物，ＰＣＲ检测１４份恙虫病患者血提取的ＤＮＡ模板，扩增后均见有３１７～３３２ｂｐ片段的扩增带。与血清学检测比较，ＰＣＲ具有敏感、早期诊断的意义。群引物扩增的阳性产物再经ＰＣＲ分型，结果证明山东蒙阴地区存在Ｋａｗａｓａｋｉ型Ｒｔ。     

用聚合酶链反应检测伤寒患者血液中的伤寒沙门氏菌

作者报告了用扩增伤寒患者血液中伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因检测伤寒沙门氏菌DNA的聚合酶链反应(PCR)。用三种试验进行PCR。首先,扩增从沙门氏菌和其它细菌分离的DNA,以试验PCR产物的特异性;其次,扩增从伤寒沙门氏菌ATCC19430分离的连续稀释DNA,确定PCR的最低可测水平,第三,用从12例     

影响PCR技术检测HBV DNA结果的因素分析

ＰＣＲ技术 (聚合酶链反应 )检测ＨＢＶ　ＤＮＡ ,具有简便、快速、特异性强、灵敏度高等优点 ,自问世以来就得到临床的广泛重视。本文就其结果的影响因素进行分析如下。1　假阳性结果1.1　ＰＣＲ实验室设计未达到要求所致　由于ＰＣＲ是一种特异强、灵敏性高的体外基因扩增技术 ,只要有靶ＤＮＡ片段污染 ,就会造成假阳性 ,这是开展ＰＣＲ技术的一大困难 ,且不易克服。笔者认为应有四间ＰＣＲ实验室 :一间配制试剂、一间处理标本、一间扩增 ,一间检测扩增产物。这样就避免室间污染 ,增加结果的可信度。1.2　人为因素所致　操作人员素质低 ,…     

基于ＴａｑＭａｎ探针三重荧光ＰＣＲ 检测沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌

摘要：目的　建立基于ＴａｑＭａｎ探针三重荧光ＰＣＲ 检测沙门菌（狊犪犾犿狅狀犲犾犾犪,Ｓａ）、肠炎沙门菌（ＳＥ）和鼠伤寒沙门菌（ＳＴ） 的方法。方法　根据沙门菌犪犮犲犃基因、肠炎沙门菌特异序列（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＦ３７０７０７．１）、鼠伤寒沙门菌的ＳＴＭ４５９９ 序列（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＥＲＶ０１００００２３．１）,分别设计引物和ＴａｑＭａｎ探针,在探针的５′端分别标记ＦＡＭ、ＶＩＣ、ｃｙ５,建立基于ＴａｑＭａｎ探针三重实时荧光ＰＣＲ 检测沙门菌的方法。结果　２９ 种不同血清型沙门菌均扩增出犪犮犲犃基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出１５株肠炎沙门菌和１１株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和１７株非沙门菌扩增结果阴性。犪犮犲犃、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光ＰＣＲ 扩增效率分别为８９％、８７％、９０％,最低检测浓度分别达到２８０ｃｆｕ／ｍｌ、２６０ｃｆｕ／ｍｌ、３００ｃｆｕ／ｍｌ。结论　本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。     

PCR反应条件的优化

聚合酶链式反应（ＰＣＲ）已被广泛应用于生物医学的各个领域。虽然ＰＣＲ技术具有很强的特异性和敏感性,但是由于反应条件不合适,仍然有假阴性和假阳性现象发生。我们经过大量研究,总结出一种通用的ＰＣＲ反应条件。表１是ＰＥ公司推荐的标准ＰＣＲ反应体系和扩增条件...     

半套式反转录PCR检测水中肠道病毒

我们建立了一种半套式反转录ＰＣＲ检测水中肠道病毒的核酸，即采用一对半（三条）引物进行两次ＰＣＲ扩增，其敏感性可检测只含１个ｐｆｕ病毒的水样。本方法特异性强、敏感性高，可避免由于环境污染造成的假阳性结果；成本相对较低。     

应用PCR－ECL技术检测食品中的沙门氏菌

应用ＰＣＲ－ＥＣＬ技术检测食品中的沙门氏菌卢强，陈贵连，林万明沙门氏菌在食品公共卫生上有重要的意义，需要对其进行快速、敏感、特异的检测。由于聚合酶链反应（ＰＣＲ）有很高的特异性和敏感性，并且能在较短时间内对大量标本同时进行检测，所以是一种较理想的检测...     

恙螨体内肾综合征出血热病毒基因的套式PCR检测

目的：检测恙螨体内微量肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）基因。方法：选择ＨＦＲＳＶ膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成两对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及点印迹杂交证实具有特异性。结果：ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离恙螨５０只组，经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只、１０只和５只组，游离螨１０只和５只组均未见明显扩增带。进一步用ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未检测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，最低检出为５只螨组。并用核酸分子杂交技术进一步证实了上述结果。结论：ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，从分子生物学角度为恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了直接证据。     

淋球菌隐蔽性质粒CppB基因的克隆研究

利用ｐＧＥＭ－Ｔ载体对ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ扩增产物进行直接克隆，除常规方法中的限制性内切酶可以节省外，发现该方法不仅过程简便，操作易行，而且可以用ＰＣＲ方法筛选重组子，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物３′末端的确出现了一个不与模板互补的“Ａ”末端，它可以与ＰＧＥＭ－Ｔ载体Ｔ结合。ＰＣＲ方法筛选重组，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物克隆片段的基因序列与文献报道相一致，这为获得淋球菌隐蔽性质粒ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ诊断标准阳性模板，了解ＣｐｐＢ基因功能奠定了基础。     

聚合酶链式反应在矽肺结核诊断中的应用

聚合酶链式反应在矽肺结核诊断中的应用姜平，刘宝仁，程绍基，马玙聚合酶链式反应（ＰＣＲ）能使微量的靶ＤＮＡ扩增至数百万倍，从而极大地提高了检测灵敏度。本文对３０例痰菌阳性矽肺结核，３７例痰菌阴性矽肺结核，３０例矽肺，共９７例用涂片、培养及ＰＣＲ３种不同...     

聚合酶链反应技术快速检测志贺氏菌属和侵袭性大肠杆菌

本文采用一对新合成的扩增４９８６ＰｉｐａＨ基因片段的引物及将菌样直接加入含裂解液的ＰＣＲ反应体系的方法，通过ＰＣＲ检测了２５株不同种志贺氏菌和１４株侵袭性大肠杆菌，并对带菌粪便样品直接进行了检测。结果表明阳性符合率达１００％，敏感达到几个菌。这种方法快速、简便、特异性高，在菌痢病原体诊断中具有较高的应用价值。     

改进一步单管RT—PCR检测水中肠道病毒

为克服常规反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测肠道病毒的缺点和不足，在实验基础上建立了一步单管ＲＴ－ＰＣＲ检测水中的脊灰病毒，采用热裂解法提取样品中脊灰病毒的总ＲＮＡ，反转录（ｃＤＮＡ）与ＰＣＲ反应在ＰＣＲ仪上一步进行，操作方法简单，中间可能污染的环节少，最大限度地减少了由环境造成的可能污染。设计合成的引物Ｅ１－Ｅ２取自多种肠病毒保守的５′非编码区核酸序列，可用于多种肠道病毒的扩增；Ｐ１－Ｐ２为脊灰病毒３个血清型的共用引物，只扩增脊灰病毒，具有较强的特异性。改进后的ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性与常规ＲＴ－ＰＣＲ比有所提高，可检测到细胞培养悬液或水中１０个ＰＦＵ的脊灰病毒。     

多基因PCR检测产毒性大肠杆菌和志贺氏菌的研究

为了提高普通的单基因ＰＣＲ检测致病性肠道杆菌的时效，采用ＥＴＥＣ４４８１３（ＬＴ）、ＥＴＥＣ１９４４９（ＳＴ）和福氏２ａＴ３２（ｉｐａＨ）３个标准株为模板，建立了检测产毒性大肠杆菌（ＬＴ，ＳＴ）和志贺氏菌的三基因ＰＣＲ方法。并分别用相应单基因ＰＣＲ方法标记的探针斑点杂交标准株ＥＴＥＣ４４８１５（ＬＴ）、工程株ＰＳＬＭ００４（ＳＴ）和标准株４８０２５１１（ｉｐａＨ）。杂交的结果都是阳性，证实了这个多基因ＰＣＲ扩增是特异的。并用此三基因ＰＣＲ反应系统检测１１３株ＥＴＥＣ和志贺氏菌，结果是ＬＴ２５株、ＳＴ１６株、ＬＴ和ＳＴ共３０株及ｉｐａＨ４２株。在几种病原体可能共存的样本中，用一次ＰＣＲ就能解决病原体的检测和鉴别问题，比单基因ＰＣＲ更快速、经济。