CTHRC1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察胶原三股螺旋重复蛋白(CTHRC)1对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中CTHRC1的表达情况。采用电穿孔转染法,将pc DNA3.1-CTHRC1和CTHRC1 si RNA转染HT29细胞中,通过克隆形成实验检测CTHRC1对HT29细胞增殖的影响;通过伤口愈合实验和Boyden小室检测CTHRC1对HT29细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和免疫组织化学检测显示,CTHRC1在结直肠癌组织中的表达显著高于正常对照组织。增殖、迁移和侵袭实验结果显示,对照组、转染CTHRC1和转染CTHRC1 si RNA的结直肠癌HT29细胞克隆形成数分别为(147.34±15.86)、(234.17±27.86)和(66.03±8.95);伤口宽度百分比分别为(1.00±0.00)、(0.37±0.12)和(1.48±0.35);发生侵袭的细胞数分别为(201.24±33.54)、(415.36±45.63)和(96.13±15.46);转染CTHRC1可显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;而转染si-CTHRC1可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 CTHRC1可明显增加HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力,这可能是CTHRC1参与结直肠癌发生发展的机制。     

miR-199对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系（HCoEpiC细胞）、结直肠癌细胞系（LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞）,用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达。将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组（miR-199mimics+TFR1组）,分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内;另取部分未转染细胞作为空白对照组。实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达,MTT实验检测细胞增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测TFR1蛋白表达,生物学软件TargetScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因。结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系（P均<0.05）,且SW620细胞中miR-199相对表达量最低,故选SW620细胞为实验...     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

吴茱萸碱对肝癌HepG2细胞侵袭和迁徙的影响

目的:研究吴茱萸碱对人肝癌细胞Hep G2细胞外调节蛋白激酶(extracellular-regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)表达的影响.方法:Transwell小室检测吴茱萸碱对Hep G2细胞侵袭及迁徙的影响.集落形成实验检测吴茱萸碱对Hep G2细胞集落形成能力的影响.Western blot检测Hep G2细胞ERK1/2、phospho-ERK1/2(P-ERK1/2)蛋白.结果:吴茱萸碱5、25、50μmol/L作用后,H e p G 2细胞侵袭细胞数分别为3 2.3个±1.3个、22.3个±2.5个、10.6个±3.7个,对照组为97.6个±6.3个,差异有统计学意义(P<0.05);迁徙细胞数为57.7个±3.2个、26.8个±1.6个、15.4个±3.9个,对照组为106.3个±3.2个,差异有统计学意义(P<0.05).5、25、50μmol/L吴茱萸碱作用Hep G2细胞集落形成数分别为147.0个±12.1个、94.3个±4.0个、0个,对照组为231.3个±15.4个,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot分析5、25、50μmol/L吴茱萸碱处理Hep G2细胞24 h及30μmol/L吴茱萸碱处理Hep G2细胞24、48 h后,ERK1/2蛋白的表达无明显变化,但其活化形式P-ERK1/2蛋白的表达量减少.结论:吴茱萸碱可显著抑制人肝癌Hep G2细胞侵袭和迁徙及克隆增殖能力,其机制可能与吴茱萸碱抑制ERK1/2蛋白活化有关.     

结直肠癌血管形成、侵袭和转移的研究进展

结直肠癌是一种常见恶性肿瘤, 在结直肠癌发生、发展过程中, 其机制在不断地改变. 肿瘤分子生物学的改变在许多临床肿瘤中已被证实是一个判断转移, 预测预后的新指标. 血管形成作为肿瘤生长中的一个重要因素, 参与并影响着肿瘤的特征性生物学行为, 即侵袭和转移. 而侵袭和转移的细胞又可诱发新一轮的血管形成, 如此反复, 形成一条递增链式反应. 本文主要描述与结肠癌的血管形成, 侵袭和转移相关的特征性分子, 并集中说明其与临床的相关性.     

干扰ECT2基因表达对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨转染小干扰RNA(siRNA)干扰上皮细胞转化序列2(ECT2)基因的表达对人结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法采用脂质体Lipofectamine 2000转染试剂将ECT2特异性siRNA或非特异性siRNA转染至SW620细胞,分别记为si-ECT2组和si-NC组,将未行转染的SW620细胞记为Control组。采用实时荧光定量PCR法(real-time qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测各组SW620细胞中ECT2的mRNA和蛋白表达水平,采用Transwell侵袭实验检测各组SW620细胞的侵袭能力,采用划痕愈合实验检测各组SW620细胞的迁移能力,采用Western blotting法检测各组SW620细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达水平。结果与si-NC组相比,si-ECT2组SW620细胞中ECT2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,穿膜细胞数量明显减少,划痕愈合率明显降低,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组的上述各项指标与si-NC组之间的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论干扰ECT2基因的表达能够抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关。     

柚皮素对结直肠癌细胞侵袭能力及细胞中MMP-2、MMP-9表达的影响

目的探讨柚皮素对结直肠癌细胞侵袭能力及细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响。方法以人结直肠癌细胞SW620为研究对象,分别用0、10、20、40、60、80、120μg/ml的柚皮素作用于SW620细胞,培养48 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖能力并计算半数抑制浓度。0、50μg/ml的柚皮素作用于SW620细胞48 h后,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western印迹检测细胞中MMP-2、MMP-9、发状分裂相关增强子1(Hes1)、Notch神经同源蛋白1前体(Notch1)表达水平。结果 10、20、40、60、80、120μg/ml的柚皮素作用后的细胞存活率均明显低于0μg/ml柚皮素作用组(P<0.01)。计算半数抑制浓度为(51.76±1.48)μg/ml。50μg/ml柚皮素作用后的侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、MMP-9、Hes1、Notch1水平均明显低于0μg/ml柚皮素作用组(P<0.01)。结论柚皮素能够抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭能力,作用机制可能与Notch1信号通路有关。     

HIF-1对乏氧人肺腺癌 A549细胞侵袭、迁徙能力的影响及其机制

目的：探索低氧诱导因子-1(HIF-1)对乏氧人肺腺癌 A549细胞侵袭及迁徙能力的影响及可能机制。方法采用氯化钴建立人肺腺癌 A549细胞体外化学乏氧模型。给予 HIF-1α特异性抑制剂YC-1抑制 A549细胞 HIF-1α的表达;通过 Western blot、免疫细胞化学、real time-PCR 检测 HIF-1α、S100A4蛋白及 mRNA 的表达;Transwell 小室模型检测 A549细胞 侵 袭 及 迁 徙 能 力。结果乏氧组A549细胞 HIF-1α、S100A4表达较常氧组增加,侵袭及迁徙能力较常氧组增强。YC-1干扰 HIF-1α表达后,YC-1组 A549细胞侵袭及迁徙能力减弱,S100A4蛋白及 mRNA 表达均降低。结论 HIF-1可能通过上调 S100A4的表达促进乏氧人肺腺癌 A549细胞侵袭及迁徙的能力。     

姜黄素抑制HSC-T6细胞迁徙和侵袭的机制

目的 探讨姜黄素抑制肝星状细胞株HSC-T6迁徙和侵袭的分子机制.方法 培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,并以刀豆蛋白A(ConA)激活,以不同剂量姜黄素处理后,用Western blot检测HSC-T6基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平;明胶酶谱法检测其活性.同时检测HSC-T6活化前后的迁徙和侵袭情况.数据采用单因素方差分析. 结果静息状态下HSC-T6仅表达少量MMP-2,ConA激活后MMP-2表达水平显著增加;25、50、100μtmol/L姜黄素处理后,MMP-2表达水平分别减少了21.8%5±5.1%、65.5%±9.2%和87.9%±11.5%,P值均<0.05.明胶酶谱实验显示静息状态下HSC-T6表达少量MMP-2且几乎没有活性,ConA激活后MMP-2表达水平和活性显著升高;不同剂量姜黄素处理后,其表达水平和活性也呈剂量依赖性降低,p值均<0.01.静息状态下HSC-T6很少发生迁徙和侵袭,ConA激活后HSC-T6的迁徙力和侵袭力显著增强;25、50、100μmol/L姜黄素处理后,HSC-T6迁徙数分别减少了27.5%±5.8%、54.4%±7.6%和67.1%±9.3%(p值均<0.01),HSC-T6侵袭细胞数也呈剂量依赖性减少(p值均<0.05).结论 姜黄素可能通过下调MMP-2的表达水平及其活性来抑制HSC-T6的迁徙和侵袭,进而抑制肝纤维化.     

顺铂对人结直肠癌细胞HCT-116中TOB1表达的影响

目的探讨顺铂对人结直肠癌细胞株HCT-116中TOB1的表达水平和细胞内分布的影响。方法采用RT-PCR和Western印迹法实验检测不同剂量顺铂处理后HCT-116细胞中TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化;采用同样的方法检测顺铂处理后不同时间TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化;同时采用免疫荧光实验检测顺铂对TOB1在细胞内分布的影响。结果 HCT-116细胞在不同剂量顺铂处理24 h后,TOB1 mRNA及蛋白的表达水平均明显增加,并存在一定的剂量依赖性;不同处理时间检测发现TOB1 mRNA及蛋白的表达水平在顺铂处理后2 h即明显升高,24 h后仍保持较高的表达水平;免疫荧光实验发现HCT-116细胞中TOB1主要分布在细胞质,而顺铂处理2 h后HCT-116细胞中TOB1即向细胞核内转位。结论顺铂诱导人类结直肠癌细胞株HCT-116中TOB1 mRNA及蛋白的表达增加,同时诱导TOB1向细胞核内转位,提示TOB1作为临床结直肠癌化疗靶基因的可能,对临床用药以及疗效的判断具有一定的指导作用。     

结直肠癌细胞中TAZ调控MUC13和GXYLT1表达及其对结直肠癌患者的临床预后价值

[目的]探索TAZ,MUC13/GXYLT1在结直肠癌组织的表达相关性及其对结直肠癌患者的临床预后价值.[方法]从GSE数据库(GSE39904)下载结直肠癌SW480细胞干扰TAZ表达后mRNA表达芯片的数据,用热图显示差异表达基因结果.从TCGA数据库下载结直肠癌患者基因mRNA表达量及相关临床信息,用Spearm...     

c-myc和hPTTG1在结直肠癌表达的研究进展

c-myc具有促进细胞增殖和凋亡的双重功能,在细胞周期、细胞增殖及肿瘤发生中发挥重要的作用.作为一个癌基因,hPTTG1具有转化功能,参与细胞周期的调控,调节c-myc基因的表达,可能与c-myc协同参与肿瘤的发生、发展及侵袭进程.     

腹腔镜结直肠癌根治术治疗结直肠癌患者的疗效观察及对胃肠功能的影响研究

目的探讨腹腔镜结直肠癌根治术治疗结直肠癌患者的临床疗效以及对胃肠功能的影响。方法选取62例结直肠癌患者为研究对象,采取数字表法随机分为腹腔镜直肠癌根治术组及开腹结直肠癌根治术组各31例。结果腹腔镜组手术时间与开腹手术时间比较差异无显著性;出血量(84.77±12.06)mL、住院时间(10.20±1.40)d、并发症发生率(22.58%)、肠鸣音恢复时间(2.76±0.05)d、排气时间(2.51±1.03)d、进食时间(53.20±20.04)h等均明显低于开腹组(P<0.05)。结论腹腔镜结直肠癌根治术治疗结直肠癌,术中出血量少、手术时间短、住院时间短、并发症低,且对胃肠功能造成的影响小。     

PRL-3基因对结直肠癌细胞增殖能力的影响

目的:探讨PRL-3的过表达或敲低对结直肠癌细胞增殖能力的影响.方法:利用MTT法、平板克隆形成实验检测PRL-3对细胞体外增殖的影响;应用流式细胞术检测PRL-3对细胞周期的影响.结果:应用MTT法,检测PRL-3对SW480/EGFP、SW480-EGFP-PRL-3、SW480/EGFP/Mock及SW480-PRL-3-KD1细胞体外增殖能力的影响,经析因方差分析,4组差异具有显著性(F=23.463,P=0.000);不同时间点对细胞体外增殖的影响差异具有显著性(F=71.515,P=0.000);各组细胞与各时间组两因素交互效应显著(F=2.128,P=0.008);除第1天外,其他各时间点细胞组间的细胞增殖差异具有显著性.经LSD法多重比较,结果表明,与SW480/EGFP/Mock和SW480/EGFP细胞相比,SW480-EGFP-PRL-3细胞的增殖速度加快,而SW480-PRL-3-KD1细胞的增殖速度减慢.平板克隆形成实验显示SW480-EGFP-PRL-3细胞克隆形成能力明显增强,而SW480-PRL-3-KD1细胞克隆形成能力显著下降,差异具有显著的统计学意义(F=44.411,P=0.000).结论:PRL-3基因可促进结直肠癌细胞的增殖.     

miR-148a靶向Wnt1通路对结直肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的观察微小RNA-148a(mi R-148a)对结直肠癌(CRC)细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其作用机制与Wnt1信号通路的关系。方法取人正常结直肠黏膜细胞FHC及人CRC细胞HCT116、SW620,采用q RT-PCR法检测Wnt1 m RNA、mi R-148a表达。取HCT116细胞,分为Control组、mi R-148a mimic组、mi R-148a NC组。转染后48 h,用Transwell法检测HCT116细胞侵袭、迁移情况;通过荧光实时定量PCR(q RT-PCR)法检测各组细胞mi R-148a、Wnt1 m RNA表达; Western blotting法检测各组细胞Wnt1蛋白及通路蛋白相关蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、侵袭和迁移相关蛋白N-钙黏蛋白(N-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达;采用双荧光素酶报告实验验证mi R-148a与Wnt1的靶向关系。结果与FHC细胞相比,HCT116、SW620细胞中Wnt1 m RNA表达升高,mi R-148a表达降低(P均<0.05); HCT116与SW620细胞相...     

糖尿病对胃癌和结直肠癌患者预后的影响

胃癌(GC)和结直肠癌(CRC)在我国有着较高的发病率与死亡率。在临床上GC合并糖尿病越来越常见,使得GC患者手术操作的难度增加,增加手术时间和创伤,术后并发症及死亡的发生率增加〔1〕。2型糖尿病(T2DM)其发病机制主要是胰岛素抵抗和胰岛素作用不足,是CRC常见的伴发病,增加结直肠癌的危险性〔2〕。本文旨在探讨糖尿病对GC和CRC患者预后的影响及其可能机制。1资料与方法1.1一般资料2005年1月至2011年1月我院收治的GC和CRC合并糖尿病患者44例,其中男28例,女16例,年龄     

NOB1基因在老年结直肠癌患者的表达及临床价值

目的探讨NOB1基因在老年结直肠癌(CRC)患者中的表达及临床价值。方法选择老年CRC患者60例,均行手术治疗,取CRC病灶组织及癌旁正常组织,采用免疫组织化学SP法检测两种组织中NOB1基因情况,分析NOB1基因在老年CRC患者中的表达及临床价值。结果老年CRC组织中NOB1弥漫在细胞质中,且清晰可见阳性细胞,呈淡黄色;而癌旁组织中,NOB1多位于细胞核中。老年CRC患者NOB1阳性表达显著高于正常组织(P<0.05)。老年CRC组织中NOB1表达与年龄、性别、组织分化程度、浸润深度不相关(P>0.05);与组织类型和淋巴结转移关系密切(P<0.05)。结论老年CRC患者中NOB1基因水平表达提高,可能参与肿瘤的发生、发展,有望成为结直肠癌新的靶点。     

七氟醚通过上调miR-34a抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭的机制研究

目的研究七氟醚对人结直肠癌HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制.方法以细胞计数法(CCK-8)检测七氟醚对HCT116细胞增殖能力的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-34a表达水平, Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫吸附法(Western blot)检测细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平.结果通过CCK-8实验筛选出七氟醚的作用浓度为4%.以4%七氟醚处理HCT116细胞4h后miR-34a表达水平升高了79%.转染miR-34a inhibitor后,细胞中miR-34a的表达水平下降了81%.七氟醚干预后迁移细胞数由(97.75±16.10)降低到(36.60±8.58),侵袭细胞数由(64.22±6.25)降低到(26.48±3.10),MMP-2蛋白表达水平由(0.68±0.11)下调到(0.24±0.04), MMP-9蛋白表达水平由(0.48±0.07)下调到(0.13±0.02);而抑制miR-34a的表达后,迁移细胞数由(40.15±9.02)提高到(88.65±12.74),侵袭细胞数由(26.12±3.02)提高到(59.24±4.68),MMP-2蛋白表达水平由(0.22±0.03)上调到(0.61±0.09),M M P-9蛋白表达水平由(0.14±0.03)上调到(0.43±0.06).结论七氟醚通过上调miR-34a的表达抑制人结直肠癌HCT116细胞的迁移和侵袭,可能与下调MMP-2和MMP-9蛋白表达有关.     

lncRNA MVIH在结直肠癌细胞中表达及干扰其表达对SW620细胞功能的影响

目的 探讨肝癌微血管浸润相关的lncRNA (lncRNA MVIH)在结直肠癌细胞中的表达及干扰其表达对SW620细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响。方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测lncRNA MVIH在人正常结直肠上皮细胞株FHC和人结直肠癌细胞株SW480、HT29、LOVO、SW620中的表达。将体外培养的SW620细胞分为对照组、阴性组和干扰组,采用CCK-8法、平板克隆实验和Transwell小室法分别检测细胞增殖、克隆形成及细胞侵袭、迁移能力,Western印迹检测细胞中上皮间质转化相关的蛋白E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和N-cadherin的表达。结果 与FHC细胞相比,SW480、HT29、LOVO和SW620细胞中lncRNA MVIH表达水平显著升高(P<0.05),且SW620细胞最高。与对照组相比,干扰组细胞中lncRNA MVIH和Vimentin、N-cadherin蛋白的表达水平均显著降低,E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,且细胞增殖能力显著减弱,克隆细胞数、侵袭细胞数、迁移细...