顺铂对人结直肠癌细胞HCT-116中TOB1表达的影响

目的探讨顺铂对人结直肠癌细胞株HCT-116中TOB1的表达水平和细胞内分布的影响。方法采用RT-PCR和Western印迹法实验检测不同剂量顺铂处理后HCT-116细胞中TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化;采用同样的方法检测顺铂处理后不同时间TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化;同时采用免疫荧光实验检测顺铂对TOB1在细胞内分布的影响。结果 HCT-116细胞在不同剂量顺铂处理24 h后,TOB1 mRNA及蛋白的表达水平均明显增加,并存在一定的剂量依赖性;不同处理时间检测发现TOB1 mRNA及蛋白的表达水平在顺铂处理后2 h即明显升高,24 h后仍保持较高的表达水平;免疫荧光实验发现HCT-116细胞中TOB1主要分布在细胞质,而顺铂处理2 h后HCT-116细胞中TOB1即向细胞核内转位。结论顺铂诱导人类结直肠癌细胞株HCT-116中TOB1 mRNA及蛋白的表达增加,同时诱导TOB1向细胞核内转位,提示TOB1作为临床结直肠癌化疗靶基因的可能,对临床用药以及疗效的判断具有一定的指导作用。     

补体C7在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞株增殖的影响

目的检测补体C7在结直肠癌组织中的蛋白表达,探讨补体C7对人结肠癌细胞株HCT-116、LoVo增殖的影响及其可能的机制。方法利用免疫组织化学方法分别检测50例结直肠癌患者癌组织及癌旁组织中补体C7蛋白分布与表达水平;将过表达C7质粒和C7-siRNA分别转染人结肠癌细胞株HCT-116和LoVo细胞,通过CCK-8检测C7对这两种细胞增殖的影响;通过Western blotting检测HCT-116在PI3K抑制剂LY294002处理后C7的变化。结果结直肠癌组织中补体C7蛋白表达水平明显高于癌旁组织。与空载质粒组和NC-siRNA组相比,C7过表达组细胞增殖能力明显增强,C7-siRNA组细胞增殖能力明显减弱; LY294002处理结肠癌细胞后C7蛋白表达量明显降低。结论补体C7在结直肠癌组织中明显高表达,抑制结肠癌LoVo细胞中C7基因可降低癌细胞增殖,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

miRNA-31在结直肠癌细胞中的表达及其作用机制的研究

目的探讨miRNA-31在结肠癌细胞生长及转移过程中的作用,为结直肠癌发生、转移机理提供实验依据。方法采用miRNA检测芯片分析10例结直肠癌患者癌组织和癌旁正常组织的miRNA表达谱;RT-PCR检测结直肠癌细胞系与正常结肠细胞miRNA的差异表达;用RT-PCR和免疫印迹等方法进行miRNA-31生物学功能验证;观察结直肠癌细胞系中miRNA-31及其调控靶基因对细胞增殖、周期和侵袭能力的调控作用。结果与癌旁对照组织相比,miRNA-31在结直肠癌组织中高效表达,并与另外39例患者结直肠癌组织标本检测一致,同时miRNA-31的表达水平与结直肠癌患者肿瘤组织的转移性和TNM分期有关。miRNA-31可促进结直肠癌细胞系HCT-116细胞的增殖和侵袭。结论 miRNA-31可作为结直肠癌发生发展的潜在分子标志物,为结直肠癌的临床检测提供新的检测靶点。     

罗格列酮对HCT-15细胞相关蛋白表达的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（ROS）对人结直肠癌HCT-15细胞相关蛋白表达的影响。方法培养HCT-15细胞，分别加入25、50、100μmaol／L的ROS进行干预，检测干预前后细胞中基质金属蛋白酶7（MMP-7）、组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）蛋白的阳性表达率。结果MMP-7、TIMP-1在人结直肠癌细胞HCT-15中呈阳性表达，用药后可显著降低两种蛋白的表达，且呈明显的浓度依赖性。结论ROS可通过降低MMP-7、TIMP-1在人结直肠癌细胞HCT-15中的表达而发挥抗肿瘤作用。     

TETs在结直肠癌中的表达及TET2抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭

目的探讨10-11-易位-甲基胞嘧啶双加氧酶(TETs)在结直肠癌中的表达及TET2对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法利用GEPIA和UALCAN数据库分析TETs在结直肠癌组织中的表达差异;通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blotting和免疫组织化学方法检测TETs在结直肠癌组织和细胞中的表达;分别用CCK-8和侵袭实验检测TETs对结直肠细胞癌增殖和侵袭的影响。结果 TET2在结直肠癌组织和细胞系中低表达(P0.05),TET1和TET3表达无差异;用质粒过表达TET2后,结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力被显著抑制。结论 TET2在结直肠癌中显著低表达,且抑制结直肠癌细胞的增殖和侵袭,有望为结直肠癌的诊治提供新的靶点。     

LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-202-5p影响结直肠癌细胞生物学行为的实验研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)可通过调控miRNA的表达来参与肿瘤发生、发展过程,但lncRNA在结直肠癌发展和转移中的分子机制尚未阐明。目的:探讨lncRNA SOX21-AS1通过调控微小RNA-202-5p(miR-202-5p)的表达影响结直肠癌细胞生物学过程的分子机制。方法:以SOX21-AS1小分子干扰RNA(si-SOX21-AS1)、miR-202-5p模拟物及其抑制剂转染结直肠癌HCT116、SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株SOX21-AS1、miR-202-5p mRNA表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,双萤光素酶报告实验检测SOX21-AS1与miR-202-5p的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、MMP-2、cleaved caspase-3蛋白表达。结果:结直肠癌细胞中SOX21-AS1 mRNA表达显著高于人正常结肠黏膜上皮细胞(P 0. 05),miR-202-5p mRNA表达显著降低(P 0. 05)。沉默SOX21-AS1或上调miR-202-5p表达可显著抑制HCT116、SW480细胞增殖、迁移和侵袭,细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),并可抑制cyclin D1、MMP-2蛋白表达(P 0. 05),促进cleaved caspase-3蛋白表达(P 0. 05)。SOX21-AS1可靶向结合miR-202-5p,并可负向调控miR-202-5p的表达和活性;抑制miR-202-5p表达可逆转沉默SOX21-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:沉默SOX21-AS1表达可通过上调miR-202-5p的表达从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。     

高表达微小RNA22对结肠癌细胞HCT-116增殖的影响

目的探讨高表达微小RNA(mir)-22对结肠癌细胞系(HCT-116)增殖的影响及mir-22水平与结肠癌细胞增殖能力的相关性。方法合成mir-22基因序列,构建SD13-hsa-mir-22质粒,质粒提取后完成对大肠癌细胞系HCT-116细胞的转染,确认转染效率后进行Realtime PCR检测,确定高表达模型建立成功。将HCT-116细胞分为高表达mir-22组、空载体转染(NC)组及未经处理的HCT-116组。通过四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测细胞生长,将测定结果进行统计学分析。结果 MTT实验转染高表达mir-22的HCT116细胞和转染空载体的细胞及未转染的阴性对照组细胞相比,生长速度明显减慢。而转染空载体组及阴性对照组细胞生长速度无明显差距。结论 Mir22抑制结肠癌细胞系HCT-116的增殖。     

健脾通络方对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及机制研究

目的 探究健脾通络方对结直肠癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法 构建敲减MALAT1基因的HCT116细胞模型。采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。采用蛋白质印迹法检测经健脾通络方干预后的MALAT1正常/敲减表达的HCT116细胞中Wnt3a、β-catenin蛋白水平。采用实时荧光定量PCR法检测MALAT1的表达水平。构建裸鼠肺转移模型,采用小动物活体成像技术监测肿瘤转移情况,并检测转移灶中Wnt3a、β-catenin和MALAT1的表达水平。结果 经健脾通络方干预后,HCT116细胞中MALAT1、Wnt3a和β-catenin的表达水平均降低,HCT116细胞迁移能力下降。在裸鼠肺转移模型中,经健脾通络方干预后裸鼠的转移灶减少,转移灶中Wnt3a、β-catenin和MALAT1的表达水平均降低。结论 健脾通络方通过下调HCT116细胞中MALAT1的表达,使Wnt/β-catenin信号通路中Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平降低,从而抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

下调KDM1A基因对结直肠癌细胞增殖、侵袭及AKT信号通路的影响

目的探讨赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(KDM1A)对结直肠癌细胞增殖侵袭及AKT信号通路的影响。方法采用LipofectamineTM2000转染试剂将si-KDM1A转染至结直肠癌HCT15细胞中,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,RT-PCR检测细胞中KDM1A mRNA的表达,Western blotting检测KDM1A蛋白和AKT信号通路相关蛋白p21、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT的表达。结果转染si-KDM1A后,HCT15细胞中KDM1A mRNA、KDM1A、Cyclin D1、MMP-2和p-AKT蛋白表达均显著降低,而p21蛋白表达显著升高;细胞的增殖能力和侵袭能力明显减弱;细胞在G1期所占比例明显增加,而在S期和G2期明显减少。结论下调KDM1A基因可抑制结直肠癌HCT15细胞的增殖、侵袭能力,其分子机制可能与抑制AKT信号通路的活化有关。     

干预膜联蛋白A4表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的探讨干预膜联蛋白(ANX) A4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、黏附、剥脱和侵袭的影响及机制。方法采用RT-PCR和Western印迹检测结直肠癌HCT116细胞和正常结肠上皮NCM460细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达情况。将HCT116细胞分为Control组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和ANXA4组(转染si RNA-ANXA4),脂质体lipofectamineTM2000转染HCT116细胞,RT-PCR检测各组细胞中ANXA4 m RNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCT116细胞增殖能力,黏附实验、剥脱实验和侵袭实验分别检测HCT116细胞的黏附能力、剥脱能力和侵袭能力,Western印迹检测ANXA4、埃兹蛋白(Ezrin)、骨桥蛋白(OPN)和细胞表面黏附分子(CD44v6)蛋白的表达。结果 HCT116细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达水平均显著低于NCM460细胞;与Control组相比,干扰ANXA4表达后,HCT116细胞的增殖能力受到抑制,同时黏附能力、剥脱能力和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P0. 05); ANXA4组细胞中ANXA4 m RNA表达水平及ANXA4、Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达水平较Control组均显著减弱,差异有统计学意义(P0. 05);而NC组与Control组各指标差异无统计学意义(P0. 05)。结论干预ANXA4表达能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、黏附、剥脱和侵袭能力,其分子机制可能与下调Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达有关。     

体外同期放疗 化疗抵抗结直肠癌细胞模型的建立及其mRNA表达谱的变化探讨

目的构建体外同期放疗、化疗抵抗结直肠癌细胞模型,探讨其mRNA表达谱的变化。方法模拟临床高剂量疗法获到HCT116同期放疗、化疗后残癌细胞株(HCT116 colorectal cancer radiation resistance cell,HCT116 CRR),应用mRNA芯片比较模型细胞与其野生型细胞的mRNA表达谱的变化情况,初步筛选与结直肠癌同期放疗、化疗抵抗相关的mRNA。结果成功构建HCT116 CRR细胞株,与野生型HCT116细胞相比,mRNA芯片共检测出变化差异在2倍以上的mRNA共3832条(13.88%)。其中,2倍以上上调的共1847条;2倍以上下调的共1985条;10倍以上上调的共35条;10倍以上下调的共50条。结论与其野生型HCT116细胞相比,HCT116 CRR细胞株的mRNA表达谱发生显著变化,差异性表达的mRNA可能参与了结直肠癌放疗、化疗抵抗产生的分子调节过程。     

下调BAP31基因表达抑制结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号

目的探讨下调B细胞受体相关蛋白(BAP)31基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及Wnt/β-catenin信号的影响。方法以正常结肠上皮细胞NCM460为对照细胞,Western印迹检测结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的蛋白表达。设计合成BAP31的特异性siRNA及阴性对照siRNA,分别命名为si-BAP31组和NC组,参照LipofectamineTM 2000说明转染HCT116细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测BAP31、β-catenin、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK)8检测细胞活力;Transwell小室检测穿膜细胞数。结果结直肠癌DLD-1,HT29,SW620和HCT116细胞中BAP31的表达均显著高于在NCM460细胞表达(P0.05)。转染si-BAP31的HCT116细胞BAP31表达明显受到抑制,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。与NC组比较,si-BAP31组在24、48和72 h的细胞活力显著降低,在48 h的细胞侵袭能力及β-catenin、PCNA和MMP-2的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论下调BAP31基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖侵袭能力,机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码(lnc)RNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)1在胃癌中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和侵袭过程的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG1在胃癌细胞SGC7901、BGC823和正常胃上皮细胞NGEC中的表达水平及采用SUHG1的小干扰RNA(si-SNHG1)干扰后SNHG1的表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞增殖的影响,Transwell小室检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞侵袭能力的影响。Western印迹法检测沉默SNHG1前后增殖标志物Ki67和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在SGC7901、BGC823中的表达变化。结果 SNHG1在胃癌细胞株中的表达显著高于正常胃上皮细胞株(P0.05);沉默SNHG1能显著抑制Ki67、MMP-2、MMP-9的表达。结论 lncRNA SNHG1在胃癌细胞中高表达,沉默SNHG1对胃癌细胞的增殖、侵袭起抑制作用,SNHG1可能成为治疗胃癌的一个有效靶点。     

miRNA-1236通过靶向FOXO3a调控结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究

目的探讨miRNA-1236对结直肠癌细胞增殖的作用及其相关机制。 方法通过实时定量PCR检测转染miR-1236后miRNA-1236的表达,使用CCK-8以及克隆形成方法检测转染miRNA-1236后HCT116细胞的活性,ki67方法检测转染miRNA-1236后HCT116细胞增殖能力的变化,生物信息方法筛选miR-1236的潜在靶基因FOXO3a。Luciferase报告检测miRNA-1236与FOXO3a的结合位点,通过实时定量PCR方法检测转染miRNA-1236后FOXO3a基因的变化;通过免疫组化的方法检测结直肠癌患者组织中FOXO3a的表达,通过western blot检测低表达miRNA-1236后HCT116细胞中FOXO3a、PCNA以及Bax蛋白的变化。通过TCGA数据库检测FOXO3a基因在结直肠癌患者癌-癌旁,不同肿瘤阶段与不同性别中的表达。 结果本研究发现高表达miRNA-1236后HCT116细胞活性相对于阴性对照组明显增加,而低表达miRNA-1236后活性降低。低表达miRNA-1236后HCT116细胞增殖能力相对于阴性对照组明显降低。生物信息学预测miR-1236与FOXO3a有潜在的结合位点。采用Western blot以及逆转录实时定量PCR验证,过表达miRNA-1236后FOXO3a表达相对于阴性对照组明显降低,而低表达miRNA-1236后,FOXO3a表达明显升高,同时luciferase结果显示,FOXO3a是miRNA-1236的靶基因。并且,FOXO3a在结直肠癌症组织中明显降低。 结论miR-1236通过靶向FOXO3a的表达调节结直肠癌细胞HCT116增殖,同时为miR-1236成为诊断、预防以及治疗结直肠癌的生物学标记物提供理论基础。     

FMNL2、Src、Talin在大肠癌细胞中的表达及其与调控的关系

目的:探讨上调或下调FMNL2表达与大肠癌细胞侵袭能力,以及该基因与Src、Talin表达的相关性.方法:将FMNL2-CT过表达重组慢病毒颗粒转染SW480和HT29大肠癌细胞,构建FMNL2干扰质粒沉默SW620大肠癌细胞,通过侵袭实验观察FMNL2表达量与细胞侵袭能力关系;Westernblot检测转染前后细胞Talin、Src表达情况,及PP1处理前后Talin、Src、FMNL2三种蛋白表达变化;荧光免疫共定位检测FMNL2、Src、Talin大肠癌细胞内定位.结果:高表达FMNL2的癌细胞侵袭能力较低表达者显著提高(51.20±8.00vs38.00±4.00,P<0.05).随着大肠癌细胞内FMNL2蛋白表达量的升高或降低,Src蛋白也上升或降低(F=15.659,P<0.05),Talin则反之(SW480F=540.595,HT29F=163.816,SW620F=125.507,P<0.01).PP1处理阻断Src通路后,FMNL2、Src蛋白含量均无明显变化,而Talin蛋白表达量随之减低.免疫共定位检测FMNL2与Src或Talin在胞浆和胞膜上存在共定位关系.结论:FMNL2可以显著促进结直肠癌细胞的侵袭能力,FMNL2处于上游参与调控Src、Talin表达,并可能通过Src间接影响Talin的表达进而参与对黏附斑转换的调控.     

MACC1在结直肠癌迁移及化疗耐药中的实验研究

目的探讨MACC1在结直肠癌迁移及化疗耐药中的作用。 方法采用SiRNA干扰技术沉默MACC1表达,利用Transwell迁移实验研究MACC1在结直肠癌迁移中的作用,应用MTT法研究MACC1在结直肠癌化疗耐药中的作用。Western Blot检测相关通路蛋白表达变化。 结果SW480细胞系MACC1表达极低,而SW620细胞系中MACC1蛋白呈高表达状态。SiRNA技术可显著抑制MACC1的表达水平。MACC1干扰后,SW620细胞发生迁移的数目显著减少(P<0.05)且对5-Fu处理表现更为敏感(P<0.05)。下调MACC1表达后提示p-ERK及p-Met蛋白表达水平随之显著减少。 结论MACC1在结直肠癌转移及耐药过程中发挥重要作用,并有可能成为潜在治疗靶点。     

AZGP1在老年结直肠癌患者中的预后价值及其下调后对结直肠癌细胞的影响

目的探讨锌-α2-糖蛋白1(AZGP1)在老年结直肠癌组织中的表达和临床意义,及其对结直肠癌细胞恶性增殖能力的影响和可能的机制。方法选取行手术切除的结直肠癌存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位5 cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各70例,应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织及癌旁组织中AZGP1蛋白的表达,分析蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征间的关系,并进行生存分析。然后通过慢病毒感染的方式成功敲低HCT116、SW480细胞系中AZGP1的表达水平,采用MTT实验检测AZGP1敲低后细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测AZGP1敲低后细胞的克隆形成能力;采用流式细胞技术检测敲低AZGP1后细胞周期的改变;Western blotting检测细胞G_1/S期调控分子cyclin D1、促凋亡分子active-caspase-3及PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)表达情况。结果 AZGP1蛋白在结直肠癌组织中的表达较癌旁正常组织明显上调,蛋白表达与结直肠癌患者临床分期、肿瘤浸润程度、肿瘤大小、肝脏转移显著相关,而与患者性别、淋巴结转移、肿瘤分化程度无关。生存分析结果提示AZGP1高表达组的患者生存率明显低于低表达组。RT-PCR实验显示:感染慢病毒后HCT116、SW480细胞中AZGP1表达水平显著下降。MTT实验显示:敲低AZGP1可降低结直肠癌细胞的增殖能力,差异有统计学意义。细胞克隆实验显示:敲低AZGP1可降低结直肠癌细胞的克隆形成能力。流式细胞术检测结果显示:敲低AZGP1后G_1期细胞数增加,S期细胞数减少,差异有统计学意义。Western blotting实验显示:敲低AZGP1可降低cyclin D1表达,增加active-caspase-3表达;同时发现,敲低AZGP1后,PI3K和p-AKT蛋白表达下降。结论 AZGP1蛋白在结直肠癌组织中高表达,并可能与结直肠癌的转移及不良预后相关。敲低AZGP1可阻断结直肠癌细胞G_1/S期,抑制结直肠癌细胞的恶性增殖,促进凋亡;并且PI3K/AKT信号通路可能参与其中。     

SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。     

CTHRC1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察胶原三股螺旋重复蛋白(CTHRC)1对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中CTHRC1的表达情况。采用电穿孔转染法,将pc DNA3.1-CTHRC1和CTHRC1 si RNA转染HT29细胞中,通过克隆形成实验检测CTHRC1对HT29细胞增殖的影响;通过伤口愈合实验和Boyden小室检测CTHRC1对HT29细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和免疫组织化学检测显示,CTHRC1在结直肠癌组织中的表达显著高于正常对照组织。增殖、迁移和侵袭实验结果显示,对照组、转染CTHRC1和转染CTHRC1 si RNA的结直肠癌HT29细胞克隆形成数分别为(147.34±15.86)、(234.17±27.86)和(66.03±8.95);伤口宽度百分比分别为(1.00±0.00)、(0.37±0.12)和(1.48±0.35);发生侵袭的细胞数分别为(201.24±33.54)、(415.36±45.63)和(96.13±15.46);转染CTHRC1可显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;而转染si-CTHRC1可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 CTHRC1可明显增加HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力,这可能是CTHRC1参与结直肠癌发生发展的机制。     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。