检测干燥血液标本中病毒特异性IgM以改进对乙型脑炎的监测

本文对IgM抗体俘获型ELISA(MACELISA)和血凝抑制(HI)试验测定干燥滤纸条上血液洗脱液中乙型脑炎特异性IgM的结果作了比较。研究对象为1983年由泰国省级医院诊断为急性乙型脑炎的病人243例,收集其急性期和恢复期双份血样,用滤纸条浸透,室温干燥后待检。HI试验前,将滤纸条洗脱至0.6ml含12.5%酸洗白陶土的硼酸盐缓冲液(pH9.0)中,按Clarke等改良的微量滴定板法作HI.阳性标准为(1)恢复期血清滴度较急性期     

对血清样本和干燥于滤纸上的微量全血中的抗麻疹病毒、风疹病毒及腮腺炎病毒IgG检测的比较

麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒（MMR）感染是儿童期和孕期的严重疾病。目前,许多市售的血清学试验可测定抗这些病毒的特异性抗体,但需通过静脉穿刺获得血清样本。本文作者采用指端穿刺采微量全血并干燥于滤纸上的方法进行抗-MMR的检测,同时与静脉采血检测的结果进行比较。 作者从228名志愿者中采集静脉血和指端血。对静脉血分离血清,10μl指端血干燥在Whatman滤纸（直径为5mm）上。用酶免     

全血DNA滤纸片中HIV1前病毒基因的PCR检测

建立套式引物聚合酶链式反应检测全血ＤＮＡ滤纸片中的ＨＩＶ１前病毒基因ｐｏ１ＤＮＡ片段。分别采集１２例ＨＩＶ１感染者的外周血约５０μｌ，经与ＥＤＴＡ－蛋白酶ｋ孵育后滴在无菌滤纸片上，３７℃下干燥，将滤纸片密封于塑料袋中，在４℃及室温下保存１周～６０周后，分别将滤纸片置０．５ｍｌ试管中直接进行ＨＩＶ１ｐｏ１基因的外侧引物ＰＣＲ检测，然后进行内侧引物的ＰＣＲ检测。结果表明，全血ＤＮＡ滤纸片在室温下保存２８周，在４℃下保存３４周仍可检出ＨＩＶ１目的基因。根据ＰＣＲ产物的琼脂糖凝胶电泳溴化乙啶染色带形并参比实验设立的标准对照可直接判断结果。该方法具有快速、特异、敏感的特点，敏感性可以达到检出１０个靶ＤＮＡ分子，可作为抗体确证试验的补充方法用于ＨＩＶ１感染的诊断     

用斑点免疫结合试验同时检测麻疹、腮腺炎和风疹病毒的特异性IgG抗体

作者以间接酶免疫试验(EIA)为对照,用斑点免疫结合试验(DIA)检测了麻疹、流行性腮腺炎和风疹病毒的IgG抗体。待测样品为:(1)随意抽取常规诊断实验室样品库中210份血清标本;(2)感染的急性期和恢复期成对血清样品,其中9份为麻疹、7份为风疹、4份为腮腺炎患者血清标本,(3)静     

相同试剂不同酶标仪初次筛查人类免疫缺陷病毒抗体的方法比较

用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对同种试剂不同酶标仪进行人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体筛查试验方法的比较,结果显示吸光度(A)值完全相同24%,相近76%,现报告如下。1标本来源和方法1.1标本:全血、血清、血浆、唾液、尿液以及滤纸干血斑(DBS)样品可用于HIV抗体检测。选用2010年4月8日我院门诊及住院患者92例术前、输血前标本的血清进行HIV抗体的初筛。     

用酶联免疫吸附法(ELISA)测定麻疹病毒特异的IgG抗体

本文报导一种用固相ELISA测定麻疹病毒IgG抗体的方法,并与血凝抑制(HI)及补体结合(CF)两种试验方法进行比较。作者采集了63份健康成人、11份儿童(包括7个未接种麻疹疫苗及4个无麻疹病史的儿童)和36份麻疹患者血清标本。抗原是粗制品,制备方法如下:将Edmonston株病毒接种于VERO细胞,培养3～5天后,用无钙、镁离子的PBS洗二次,并稀释成1∶20,置-70℃反复冻融,再经超声处理60秒,4℃离心5分钟(1,400g)后的上清液,再用PBS稀释到蛋白浓度为0.3mg/ml。未感染病毒的细胞悬液经同法处理作为对照。用U型孔聚苯乙烯微量滴定板进行ELISA测定,其步骤如下:每孔加0.025ml(75μg)麻疹抗原或对照抗原,室温过夜,干燥(并可贮于-70℃备用)。用含0.05％吐温20的PBS     

用于血清制品标准化的细胞贴壁试验

本文报道一种能常规用于血清和血清制品质量控制的细胞贴壁试验。试验用BIIK-21细胞系,当细胞进入缓慢流动有切力的液体中时,需高度依赖血清因子才能贴壁。试验方法是:用DMEM 3倍系列稀释血清样品,加2ml稀释的血清到16×125mm硼硅酸盐玻璃培养管中,每管接种0.1m1 2.5×10~5BHK-21细胞,放在37℃CO_2孵箱内,旋转培养4小时,弃去营养液,用无Ca~(++)、Mg~(++)的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤,并用胰酶-乙二胺四乙酸(EDTA)分散细胞,加等量的含10%小牛血清的DMEM液灭活胰     

用荧光极化免疫法测定纸片血斑中的庆大霉素

本文报道用干燥的带血斑纸片,测定庆大霉素类的简便方法。庆大霉素广泛用于治疗革兰氏阴性细菌的感染,要获得最佳的疗效、避免毒副作用和防止治疗的失败,监测药物的血清水平是很重要的。作者提出的方法是:滴加100微升含庆大霉素的血液于滤纸片上,在50℃气流下干燥或在室温下凉干。置血斑纸片于超滤管里,加500微升0.5mol/LNa_2HPO_4溶液,在35℃保温60分钟,将滤纸的洗脱液离心,移入Abott TDX药筒,再进行荧光极化免疫测定。用这个方法能最有效地从血斑里回收庆大霉素。在滤纸血斑里,庆大霉素在室温下可稳     

滤纸干血片检测人体弓形虫抗体的间接红细胞凝集试验(IHA)法操作细则

滤纸干血片用于检测弓形虫抗体是一种经济简便的方法,特别适用于基层大面积人群的抗体水平调查,值得推广。其主要优点是:1.采血方便。耳垂等部位的末梢取血,受检者容易接受。2.容易保存。滤纸血干燥、避光即可较长期保存。3.检测操作简单,不需特殊设备。4.结果明确,易于判断。与血清检测阳性符合率为100%。5.诊断抗原、稀释液,阴、阳性对照血清等有现成试剂盒供应。现结合实际工作体会和参考有关资料,小结成“操作细则”供参考。滤纸条的制作将新华滤纸截成条形,长5.0～6.0cm,宽1.2～1.5cm。以20条装订成一本,投入0.1%叠氮钠(NaN)液中浸透后凉干,保存干燥瓶(盒)内备用。     

用胃酶、尿素及福马林三种方法灭活乙型肝炎病毒

作者把含乙型肝炎病毒(HBV)adr或ayw亚型的人血清稀释至10~3～10~5CID_(50)后,分别用胃酶、尿素及福马林处理,以观察不同方法灭活病毒的效果。胃酶处理:含有HBV adr亚型的血清稀释至10~5CID_(50)/ml,用1N HCl调pH至2.1±0.05,加入胃酶使最终浓度为1μg/ml,37℃搅拌18小时,再用1N NaOH调pH至7.0±0.2。取1ml静脉注射于1只黑猩猩体内。尿素处理:上述HBV材料,加尿素使最终浓度为8M,37℃搅拌4小时,5℃透析67小时,用1只黑猩猩试验,静脉注射1ml。福马林处理:血清稀释至含10~3、10~4及     

环孢素A浓度标本的检测及保存探讨

目的为了方便门诊和住院的肝肾移植患者随时采血,考察FPIA测定全血CsA浓度时样品的保存时间及不同稀释剂对测定结果的影响。方法取临床肝肾移植术后患者的全血标本当日测定和前处理完后置冰箱冷藏3d和7d后再次测定,考察其稳定性;采用不同溶剂稀释后测定与未稀释对比,考察稀释溶剂的影响。结果当日处理完标本后取出上清液置于EP管内封口后放置3或7d测定与当天测定结果无统计学差异;用空白全血稀释后的样品测定结果与未稀释样品相比无统计学差异,但0.9%氯化钠溶液稀释则与未稀释有统计学差异。结论处理完的标本在密封条件下至少可稳定保存7d以上或更长;高浓度标本应该用空白全血稀释,而不能用0.9%氯化钠溶液稀释。     

样品处理对肺移植术后患者全血中环孢素A浓度测定的影响

目的:考察荧光偏振免疫(FPIA)法测定肺移植术后患者全血中环孢素A(CsA)浓度时样品的保存温度、时间和不同稀释方法对测定结果的影响。方法:将肺移植术后患者的全血标本分别置室温((22±2)℃)和冰箱(2～8℃)保存1周或2周,考察其稳定性;采用不同溶剂(灭菌注射用水、空白全血)稀释后与不经稀释的标本进行测定、对比,考察稀释条件。结果:室温或冷藏下的标本测定结果均与保存前无统计学差异(P>0.05),但冷藏者变异小;2种方法稀释后测定结果与未稀释者无统计学差异(P>0.05),用空白全血稀释的结果最接近不稀释的值。结论:全血标本在室温下至少可稳定保存2周,冷藏仍是最佳保存方法;空白全血稀释标本最好。     

葡萄球菌血浆凝固酶试验方法的研究

目的 探讨不同抗凝剂抗凝的人血浆及其不同浓度、不同冷藏时间对葡萄球菌血浆凝固酶试验的影响。方法 用3种不同抗凝剂(EDTA-K2、肝素钠、枸橼酸钠)抗凝的人血浆及不同稀释度、4℃冷藏不同时间的人血浆对135株G葡萄球菌进行血浆凝固酶试验，比较其试验结果。结果 3种不同抗凝人血浆凝固酶实验结果一致，1：2稀释度的人血浆试验结果最佳，血浆冷藏4周之内不影响实验结果。结论 3种不同抗凝人血浆都可用于血浆凝固酶试验，血浆1：2稀释后的实验结果最佳，冷藏4周之内对实验结果无影响。     

微生物荚膜染色方法的改良

1.在无油脂的载物片上,放1滴不稀释的动物(马、兔、羊)或人血清。将一滴有荚膜微生物的一昼夜肉汤培养物加至血清滴中,仔细混合,用第二个载物片的边作成薄片,如同制作血片一样。固体培养物作荚膜染色时,首先需在生理盐水溶液中制备微生物悬液,然后按上法作成薄片。2.空气干燥的涂片以甲醇固定5分钟。3.用以水稀释1:10的龙胆紫石炭酸液染色1分钟。4.用水洗涤制片(短时间),空气干燥,显微镜下用油浸镜检查。细菌细胞体染成紫色,荚膜染成淡紫色。     

荧光偏振免疫法测定环孢素A的影响因素

目的：考察FPIA测定全血环孢素A浓度时样品的保存条件和保存时间，以及不同抗凝剂和稀释剂对测定结果的影响。方法：取临床肝移植术后患者的全血标本分别置室温和冰箱冷藏3d或1周，再次测定标本，考察其稳定性；采用不同抗凝剂保存后，测定标本，考察抗凝剂的影响；采用不同溶剂稀释后测定标本与不经稀释对比，考察稀释溶剂的影响。结果：室温或冷藏条件的标本测定结果均与保存前无统计学差异，但冷藏保存变异较小；肝素-锂与EDTA-K2保存标本，两组间无统计学差异；用空白全血稀释后的样品测定结果与未稀释者无统计学差异，但缓冲剂稀释则与未稀释者有显著性差异。结论：全血标本在室温或冷藏条件下至少可稳定保存1周，但冷藏保存优于室温保存；标本可以保存在含有肝素-锂或EDTA-K2的取血管中；高浓度标本应该用空白全血稀释，而不能用缓冲液稀释。     

荧光偏振免疫法测定环孢素A血样的保存与稀释条件

目的：考察FPIA测定全血环孢素A浓度时样品的保存条件和保存时间，以及不同稀释方法对测定结果的影响。方法：取临床肾移植术后患者的全血标本分别置室温和冰箱冷藏1周或2周，重复测定标本，考察其稳定性；采用不同溶剂稀释后测定标本与不经稀释测定对比，考察稀释溶剂。结果：室温下或冷藏的标本测定结果均与保存前无统计学差异。但冷藏者变异较小；用空白全血稀释后的样品测定结果与未稀释者无统计学差异，但其他两种稀释方法则与未稀释者有统计学差异。结论：全血标本在室温下至少可稳定保存2周，但冷藏仍是最佳保存方法；高浓度标本应该用空白全血稀释，而不能用注射用水和缓冲液稀释。     

滤纸干血斑点法测定苯妥英血药浓度

本文用滤纸干血斑点法测定苯妥英血药浓度是将病人全血直接滴加在定量滤纸上，晾干，制成干血斑点（ＤＢＳ，以便邮寄或递送）。测定时将干血斑点剪下，洗脱，用ＦＰＩＡ法测定。方法学测得回收率为１０３±３％，日内、日间差ＲＳＤ均＜６％。测定１５例病人苯妥英ＤＢＳ浓度，并与全血、血清浓度对照，结果ＤＢＳ与全血浓度无显著性差异（Ｐ＞０．０５），与血清浓度比值为０．６０±０．０６，相关性为ｒ＝０．９７７５。本法简便、快速、准确，样品稳定性好，易于保存，特别适用于偏远地区和当地无条件测苯妥英血药浓度的患者。     

牛对牛瘟疫苗的抗体应答

作者将牛瘟病毒RBOK_(90)株接种于原代羔羊肾细胞生产疫苗。该组织培养牛瘟病毒疫苗(效价为10~6TCID_(50))作1/100稀释后,接种杂交小母牛群,每头皮下接种1ml。血清样品采自5头接种疫苗牛,于接种后2～12周采集,每次间隔1周。所有试验血清样品在56℃灭活30分钟,而后贮藏于-20℃待检。牛瘟高免血清用兔制备,牛抗IgG_1、抗IgG_2、抗IgA和抗IgM血清由英国Miles实验室供给。用免疫电泳测定免疫球蛋白亚类之间无交叉反应。纯化的牛瘟高免血清IgG按Avrameas两步法与过氧化物酶结合。然后统一使用聚乙     

检测抗-HIV1的固相红细胞粘附免疫试验:一种简单、快速和准确的筛检供体的方法

本文报道了第二代检测人类免疫缺陷症病毒抗体(抗-HIV)的方法,即将与红细胞交联的抗人IgG作为与待检标本起反应的抗体指示剂,用以筛检器官和血液供体。以裂解病毒或病毒蛋白质吸附微量凝集板,以适量蛋白溶于50μl pH9.5的碳酸盐缓冲液中,全HIV-1为每孔0.14μg,肽为每孔5μg,吸附后将微量凝集板置1280g离心5分钟,于37℃培育2小时,再于4℃过夜,用含0.05%吐温20的生理盐水洗涤4次,干燥后,保存于4℃备用。血清以含5%奶粉的磷酸盐缓冲液(PBS)作1∶100稀释,将50μl稀释血清加至包被孔内,置室温作用5～10分钟,以含0.05%吐温20的0.9%盐水洗涤3次后加入1滴与红细胞交联的抗-人IgG,于180g离心3分钟并     

用ELISA检测新西兰人群血清中破伤风抗毒素

本文报道用ELISA与敏感的生物素-链霉亲和素系统相结合的方法检测人血清中破伤风抗毒素。受检血清取自新西兰不同地区557名1～65岁的正常人血清,每个年龄组的受检人数与1976年新西兰人口普查的人群年龄分布比例相一致。血清标本收集日期为1978年11月至1980年3月,试验前贮于-20℃。实验方法:用1∶800稀释的破伤风类毒素(2000Lf/ml)包盖塑料板小孔,4℃过夜后洗涤,甩干。4℃至少可保存4周。试验时加1∶800稀释的受检血清,温育洗涤后加1: