广东地区GBV-C/HGV5'NCR区序列变异的研究

目的 了解广东地区ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ５＇ＮＣＲ区的序列变异情况。方法 以ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ的５＇ＮＣＲ区安全同源的序列设计合成引物用于套式ＲＴ－ＰＣＲ。从广东地区的１０例ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染者血中扩增了１０个充列,分别克隆对ｐＵＣ１９、ｐＴ－Ａｄｖ载体。以３５Ｓ标记的双脱氧链末端终止法对这１０个序列分别进行正反两个方向的序列测定。结果 １０株充列相互间同源性最大为１００％,最小为８４．４％。与Ｇ     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

目的;研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞,将转染上清再次感染ｓｆ细胞,以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法分析,检测重组蛋白。结果：序     

SEQUENCE ANALYSIS OF THE NS5 REGION OF GBV-C／HGV AND DETECTION OF THE VIRUS BY REVERSE TRANSCRIPTASE PCR

GBV-C/HGV is a newly identified virus associated with human hepatitis.In this study,the nucleotide sequences of the partial NS5 gene of GBV-C/HGV derived from sera of 8 Chinese patients were determined.The nucleotide homology among the 8 isolates were 92% on average.On the basis of sequence analysis,two sets of oligonucleotide primers derived from highly conserved region of GBV-C/HGV NS5 gene were designed to establish both sensitive and specific nested PCR for detection of GBV-C/HGV RNA.253 Chinese patients were examined for the virus RNA.GBV-C/HGV RNA positive rates in patients infected with HBV,HCV and patients with chronic non-B,non-C hepatitis were 18.4%,19.8% and 8.9% respectively.This result suggested that HBV,HCV and GBV-C/HGV shared the same transmission risk factors.8 patients with GBV-C/HGV and HCV coinfection were retrospectively observed for the response to interferon.Coinfection with GBV/HGV did not negatively influence the responsiveness of HCV,and GBV-C/HGV was sensitive to interferon to a certain degree.     

109例静脉毒瘾者HGV,HBV,HCV的感染状况

我国１９９６年初开始对ＨＧＶ（庚型肝炎病毒）的感染进行研究以来，已证实我国存在ＨＧＶ感染，且已有较多资料显示ＨＧＶ主要经输血及注射传播，而ＨＢＶ（乙型肝炎病毒）、ＨＣＶ（丙型肝炎病毒）其传播途径也相似，为此我们对１０９例静脉毒瘾者进行抗－ＨＧＶ、ＨＢＶＭ、抗－ＨＣＶ的检测，现报道如下。１　材料与方法１１　标本来源　１０９例静脉毒瘾者均为我市戒毒所提供，其中男８８例，女２１例，平均年龄为（２６４±５２）岁，其中６９例有性乱史（女性２１例均有性乱史），５５例有共用静脉毒具史，平均吸毒时间为（２…     

462例病毒性肝炎患才抗—HGV检测

近年来 ,有关庚型病毒性肝炎的研究日渐深入。为了解台州地区ＨＧＶ感染情况 ,对 4 6 2例病毒性肝炎患者进行抗 -ＨＧＶ检测。现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　病例来源　 4 6 2例均系我院住院治疗的病毒性肝炎患者 ,其中急性病毒性肝炎 5 6例 ,慢性病毒性肝炎 312例 ,肝炎肝硬化 6 4例 ,重型病毒性肝炎 30例。诊断根据第 5次全国传染病寄生虫病学术会议制定的诊断标准〔1〕。1.2　检测方法　采用酶联免疫法检测抗 ＨＡＶ、乙肝三系、抗 ＨＣＶ、抗 ＨＤＶ、抗 ＨＥＶ和抗 ＨＧＶ。前 4项的试剂由上海科华生物技术有限公司提供 ,后 …     

HGV与HBV,HCA重叠感染病例的研究

目的 探讨庚肝病毒（ＨＧＶ）与ＨＢＶ，ＨＣＶ重叠感染状况。方法 采用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）技术检测了２２例乙肝病毒感染者及４８例丙肝病毒感染者血清ＨＧＶ ＲＮＡ。结果 ＨＧＶ与ＨＢＶ、ＨＣＶ重叠感染率分别为３１．８％（３１．８％（７／２２）、３１．３％（１５／４８），重叠感染病例与单纯ＨＢＶ，ＨＣＶ感染者在ＡＬＴ、ＳＢＩＬ水平及疾病的临床分型上无统计学差异。结论 ＨＧＶ与ＨＢＶ、     

Fas系统在病毒性肝细胞损伤中的作用

细胞凋亡是急慢性肝炎的细胞死亡类型之一,Fas系统在其中起非常重要的作用,病毒感染肝细胞后,肝浸润淋巴细胞通过表达FasL引起肝细胞凋亡,是病毒性肝细胞损伤的机制之一,本文对这方面的进展作一综述.     

粤东地区庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的检测和序列分析

采用半巢式多聚酶链反应（Senu-nestPCR）方法从21例急性和慢性肝炎患者血清中检测HGV／GBV－CRNA，结果5例阳性。PCR扩增阳性产物经直接序列测定，结果证明是来自HGV／GBV－CRNANS5A区的核苷酸序列。结果显示：粤东地区存在着庚型肝炎病毒（HGV／GBV－C）的感染。该病毒与急慢性肝炎密切相关，可与丙型及乙型肝炎病毒混合感染，可能是非A－E型急性和慢性肝炎的病因之一。序列分析表明HGV／GBV－CRNANS5A区具有较高的保守性。     

HGV单独及重叠HBV、HCV感染64例临床分析

目的：了解庚型肝炎病毒（HGV）单独及重叠乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）感染的临床特征，探讨其致病性。方法：用套式聚合酶链反应（PCR）检测患者血清中HGV RNA，用ELISA和（或）PCR法对其他肝炎病毒标志物进行血清学检测。结果：从临床分型来看，HGV单独感染者以急性肝炎（AH）多见，占47．1％；重叠HBV感染者以肝硬化（LC）多见，占51．3％；重叠HCV感染者以慢性肝炎（CH）多见，占75％。各组间比较均有显著性差异（P＜0．05）。从肝功能恢复情况来看，各组间均无显著性差异（P＞0．05）。结论：HGV单独感染多表现为AH，重叠HBV、HCV感染时对病情影响不明显，提示HGV有一定致病性。     

HDV/HBV体外感染原代培养人胎肝细胞的实验研究

目的：建立ＨＤＶ／ＨＢＶ感染人胎肝细胞体外培养系统。方法：利用ＨＤＶ／ＨＢＶ阳性血清同时感染体外２的人胎肝细胞;应用ＥＬＩＳＡ、免疫组化法、原位杂交法和斑点法检测上清液和细胞中ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＤＶｃＤＮＡ。结果：上清液和细胞中ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＤＶｃＤＮＡ在感染后第２天至第１６天均可测出,其中上清液中ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ以感染后第４天至第１２天达高峰,结论     

庚型肝炎病毒感染与肝损伤的相关性

目的 探讨ＨＧＶ感染与肝损伤的关系。方法 检测４４２例各类肝病患者的甲￣戊和庚型肝炎病毒血清学标志,其中１５４例为ＨＧＶ和ＨＢＶ感染者,对单独ＨＧＶ感染、ＨＧＶ和ＨＢＶ重叠感主单独 者的临床资料进行对比分析。结果 ２１单独ＨＧＶ感染者中有９例（４２．８６％）肝功能轻度异常。单独ＨＧＶ感染与ＨＧＶ和ＨＢＶ重叠感染比较,肝功能异常程度无显著性差异;而重叠感民单独ＨＢＶ感染比较,肝功能异常率和重型肝炎发     

慢性HBV和HCV合并感染患者肝损害的血清学改变

目的了解乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染的患者肝损害的血清学改变特点。方法收集225例慢性肝病(包括慢性乙型肝炎,慢性丙型肝炎,乙、丙肝病毒合并感染引起慢性肝炎或肝硬化,肝炎后肝硬化)患者的肝穿病理标本;所有病例均常规检测肝功能、血清HBVDNA、HBV血清标志物、血清HCVRNA,抗-HCV。所有肝活检标本均用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,做苏木素-伊红染色,进行肝炎分级分期,HBsAg、HBcAg免疫组化,HBVDNA、HCVRNA原位杂交检测。结果①重度慢性肝炎患者:HBV/HCV合并感染的患者(B加C组)谷-丙转氨酶(ALT)、谷-草转氨酶(AST)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)水平与HCV单独感染(C组)患者相比差异无显著性(P>0.05),而比HBV单独感染的患者(B组)低(P<0.05)。②非重度慢性肝炎患者:三组的血清学改变差异无显著性(P>0.05)。③C组与B加C组患者的发病年龄相似(P>0.05),但明显大于B组患者(P<0.01)。④单独感染组发病的病程长短差异无显著性(P>0.05),但比合并感染组长,与单纯感染组相比,合并感染组发展为重肝的时间要短(P<0.01)。结论在重度慢性肝炎的患者中,肝功能损害的血清学指标(AST、ALT、TB、DB)不能很好地反映肝内损害严重度。与单纯感染组相比,HBV与HCV合并感染组发展为重度肝炎的时间要短。     

山东地区输血后丙肝患者HGV感染状况及HGV部分核酸序列测定

目的 了解山东地区输血后丙型肝炎患者庚肝病毒感染的状况及ＨＧＶ部分基因核苷酸序列。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＧＶＲＮＡ，并对阳性扩增的产物采用ＰＣＲ技术片段直接克隆法测定。结果 从８６例ＰＴＨ－Ｃ患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性者３１例（３６％），其中一例患者ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与美国原始株和另一例日本株核苷酸同源性比较分别为８６％和８４％。结论 证实山东地区ＰＩＨ－Ｃ患者存在着ＨＧＶ感     

干扰素治疗前后肝组织内HCV—RNA变化分析

目的：探讨干扰素治疗前后,肝组织内丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ－ ＲＮＡ） 的变化与血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 及ＡＬＴ 的关系。方法：对丙型慢性肝炎（ＣＡＨ） 患者２０ 例,经过干扰素（ＩＦＮ） 治疗,使用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ ＰＣＲ） 和原位杂交方法（ＩＳＨ） ,对肝组织内和血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 及ＡＬＴ 值分析。结果：ＩＦＮ 治疗丙型ＣＡＨ 的有效率为７０ ％ ,停药后６ 个月有效率为３０ ％ 。血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 转阴率为５５ ％ ,停药后６ 个月转阴率为１５ ％ 。肝组织中ＨＣＶ－ ＲＮＡ,经治疗消失的有３ 例,占１５ ％ 。结论：肝组织中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 的有无,对ＩＦＮ 疗效的判定非常重要,即使血中ＨＣＶ－ ＲＮＡ 阴性、ＡＬＴ 正常的病例,如果肝组织中有ＨＣＶ－ＲＮＡ 残留,以后血中ＡＬＴ 值上升的可能性很大,应该进行抗病毒的再治疗。     

Fas和FasL在丙型肝炎肝组织中的表达及意义

目的了解丙型肝炎患者肝细胞损伤与Fas抗原表达的关系。方法采用免疾组织化学方法显示Fas抗原与Fas配体（FasL）在丙型肝炎肝组织的分布，并同时运用原位杂交方法，检测肝组织中的丙型肝炎病毒（HCV）RNA。结果Fas抗原主要位于肝细胞胞浆。Fas抗原表达阳性细胞在肝小叶中多呈散在或灶状分布，汇管区周围和碎屑样坏死区内阳性表达较强。FasL大多位于肝内浸润的淋巴细胞，某些病例肝细胞胞浆也可呈弥漫强阳性。Fas抗原表达的阳性率与肝组织炎症程度相关。结论在丙型肝炎患者，Fas抗原表达水平与炎症活动度有关，未发现（HCV）RNA原位杂交阳性细胞与表达Fas抗原的肝细胞之间的对应关系。     

乙型肝炎病毒宫内感染的机制

目的 探索乙型肝炎病毒（HBV）宫内传播的机制和时间。方法 孕妇和新生儿血清HBsAg和HBVDNA检测采用ELISA和PCR法,引产胎儿肝组织和胎盘的HBsAg,HＢt HBVDNA检测采用ＡＢＣ免疫组化染色和原位杂交。结果 母亲外周血HBV高浓度（≥0.02ug.L^-1)、先光早产和胎盘毛毛细血管内皮细胞HBV感染导致宫内感染发生的危险性比值比（OR）分别为7.06,13.08和16.15,胎盘HBV感染从孕早期、孕中期至足月分娩愈来愈严重且广泛,在足月分娩胎盘中,从母面蜕膜细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮细胞HBV感染率呈逐渐下降趋势,但胎儿宫内感染的OR值却越来越大,1例孕19wk引产胎儿肝组织中检出HBVDNA和抗原。结论 胎儿宫内感染的发生可经2条途径,即血源性和细胞性,宫内感染可发生孕9wk前,但主要时期是在孕晚期。     

应用双重原位杂交技术定位检测肝细胞癌中乙型,丙型肝炎病毒

探索乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒是否可同时感染同一宿主细胞。联合应用地高辛标记探针和生物素标记探针的双标记方法,成功建立起非放射性双重原位杂交技术,并应用这一技术检测了１０例肝细胞性肝癌及癌周细胞细胞内乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染情况。     

Extrahepatic and Intrahepatic Replication and Expression of Hepatitis C Virus

HepatitisCvirus(HCV)isthemajorpathogenofpost--transfusionalhepatitiswithachroniccourseinupto60%ofindividuals,leadingtocirrhosisandeventuallytohepatocellularcarcinomain20%ofindividuals[1'2].HCVcontainsasingleplusstrandRNAwhichissimilartopestivirusandflavivirusingenomestructures.HCVRNAcanbedetectedinsera,livertissues,peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andsalivaglandsbypolymerasechainreaction(PCR)assay['-'j.Inthisstudy,theinsituhybridizationandimmunohistochemicaltechniqueusingdigoxinla…