脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素

目的　建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法。方法　对pH、2 酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果　用双试剂连续监测法 ,试剂Ⅰ :10 0mmol/LN ,N 二乙醇胺基乙酸缓冲液 (pH 8.80 ) ,含 2 酮基异乙烯酸钠 3.0mmol/L、NADH 0 .3mmol/L、亮氨酸脱氢酶 2 .0kU/L。试剂Ⅱ :试剂Ⅰ中加入脲酶 70kU/L。本法线性范围血清 0 .5～ 15 0mmol/L ,尿液 8.0～ 6 5 0mmol/L。血清和尿液的平均回收率分别为 10 2 .1%和 10 1.5 %。血清批内和批间平均CV分别为 1.0 2 %和 1.70 % ;尿液批内平均CV为 1.98%。本法 (Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法 (X)对比相关良好 (血清Y =0 .992X +0 .0 4 0 ,r=0 .993;尿液Y =0 .990X +0 .6 1,r=0 .991)。胆红素 <32 5 μmol/L、血红蛋白 <5g/L、抗坏血酸 <80 0 μmol/L、三酰甘油 (TG) <7.5mmol/L和NH+ 4 <0 .5mmol/L对测定无明显干扰。结论　本法简便、准确、线性范围广 ,可用于常规自动分析。     

尿素酰基裂解酶酶偶联法测定血清总钙

目的 介绍尿素酰基裂解酶酶偶联测定血清总钙的方法。方法 双试剂两点法；缓冲液为三乙醇胺（TEA，pH8.0,200mmol/L）；试剂I：含NaHCO326.0mmol/L,NADPH 0.4mmol/L,α－酮戊二酸8.0mmol/L，尿素酰基裂解酶115U／L，GLDH43．0kU/L；试剂Ⅱ：含NaCO3 26.0mmol/L,ATP6.2mmol/L。结果 方法线性范围为0．5－5．0mmol/L，批内和批间平均变异系数分别为2．13％和2．69％。平均回收率为102．7％ 。本法（Y）与邻甲酚酞络合酮法（OCPC法，X1）比较：r＝0．981，Y1＝1．02X1－0．021，与偶氮胂Ⅲ法（X2）比较：r＝0．978，Y＝0．99X2＋0．03。血清胆红素高达300μmol/L，血红蛋白4g/L，镁2.5mmol/L，NH4^ 2.0mmol/L,Trig 8.0mmol/L对本法无明显干扰。结论 本法具有简便、准确、快速，适用于自动分析等特点。     

血清和尿液中简易、敏感的尿素测定方法

体液中尿素含量的测定有重要意义。早年所用的化学测定法如邻苯二醛（O—phthalaldehyde）法和二乙酰—肟法（diacetylmonoxime）已被酶法测定取代。所有酶法都基于尿素酶（EC3．5．1．5）对尿素的水解。然后通过测定pH值的改变．用按电极洲铵或测导电性的升高来得出检样中尿素的含量。也有一些酶法要在酶水解阶段后增加一个光度计测定接的步骤，由于试剂有腐蚀性，这些方法不适宜大多数自动分析仪。脉酶与L一谷氨酸脱氢酶（EC1．4．1．2）交联反应测定尿素的方法广泛应用于配备紫外分光光度计的自动分析仪．可采用终点法，动态法两种方…     

一种简便、灵敏的测定血清及尿液尿素的方法

目前,测定血清及尿液尿素的方法主要有二乙酰-肟法和偶酶联法,前者存在使用腐蚀性试剂、反应必须加热进行等缺点,故难以用于自动生化分析仪,后者虽能进行自动化分析,但试剂成本较高。且由于二者受方法线性范围的限制,测定尿液时都必须先行稀释标本。作者根据尿素酶水解尿素释放出的氨引起反应体系pH 升高这种情况,选择合适的缓冲液和pH 指示剂,建立了一种快速、简便、灵敏的比色分析力法,本法的最大特点是尿液无需稀释,且试剂成本低廉,它不但适用于手工操作,也可进行自动化分析。试剂:1.显色液——内含邻钾酚酞络合剂(OCPC)2.5mmol/L、EDTANa_4 5mmol/L、Tris 30mmol/L 及叠氮钠15.4mmol/L,用1mol/L     

琼脂糖凝胶电泳分离测定各类脂蛋白

本文介绍一种用琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白，继之酶染甘油三酯并定量的方法。试剂6ku／L胆固醇酯酶（CE），4．8ku／L甘油激酶（GK），48ku／L甘油磷酸脱氢酶（GPDH）；300ku／L磷酸丙糖异构酶（TIM），24kU／L甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH），4．8ku／L。心肌黄酶，5mMATP，5mMNAD＋，0.5mMEDTA·Na2，2mM胆酸钠，10mMMgCl2，3mM4-硝基蓝四唑氮（4-NBT）（溶于70％V／V二甲基甲酰胺水溶液中）和0．5％Genapol（V／V）溶于pH8.5,0.2M甘氨酸中。所有酶试剂均以冰冻保存，临用前与基质液混和。方法172份血清标本来自空腹过…     

连续监测法测定腺苷脱氨酶

目的 建立连续监测法测定腺苷脱氨酶的方法。方法 用连续监测法对 pH值、腺苷浓度等反应条件进行实验研究，并对所建立的方法进行评价。结果 用双试剂连续监测法；试剂Ⅰ：含α－酮戊二酸6mmol/L,NADH 0.35mmol/L,ADP0.8mmol/L,EDTA-Na2 0.1mmol/L，谷氨酸脱氢酶1000U／L，试剂Ⅱ：腺苷12mmol/L,均用磷酸盐缓冲液（0．1mol/L);pH7.2。线性范围达97U／L，批内CV＝4．90％，批间CV＝6．53％。与波氏显色法有良好的相关性（r=0.9902)。结论 本法操作简便，结果准确，可用于常规分析。     

新的柠檬酸裂解酶法测定尿液柠檬酸

传统的柠檬酸酶法测定需用柠檬酸裂解酶，苹果酸脱氢酶，乳酸脱氢酶和NADH。作者创立了一种仅用柠檬酸裂解酶的分光光度测定法。测定原理柠檬酸在柠檬酸裂解酶作用下生成a一酮酸（草酸乙酸），在PH65的微酸性条件下与本排反应生成相应的a一酮酸苯炼。在330urn有强的紫外吸收光密度值，与标准管比较得出标本中柠檬酸含量。试剂①柠檬酸裂解酶（120U／gmlH刃）水溶注13．3kU／L放4C稳定一个月，－20C稳定六个月。②246mmol／L本洪水溶液用时取50ml＋2mlH对稀释。③50mmol／LBis－Tris缓冲液（含O．】mmULznSO4，o．Zg／L叠氮钠，用1…     

液体单试剂检测血氨方法的建立

目的配制液体单试剂，建立酶两点动力法测定血浆中血氨含量。方法在荷兰威图科学公司DPU-41型半自动生化仪和美国贝克曼公司CX5-CE型全自动生化仪上研究酶两点动力法，建立实验参数。结果试剂含量：三乙醇胺缓冲液（pH7．4）0．25mol／L，α-酮戊二酸15mmol／L，还原型辅酶0．3mmol／L，谷氨酸脱氢酶大于160U／L。该法最低检出限为1．9μmol／L，线性范围达321μmol／L（r=0．9961），批内CV=2．2％，批间CV=4．4％，平均回收率=99．3％，胆红素〈175．8μmol／L，血红蛋白〈3．4g／L，对测定结果无显著影响。结论本法灵敏度高，线性、精密度好，结果准确，胆红素、血红蛋白干扰小，操作简便，适用于全自动及半自动生化分析仪，可推广运用。     

用肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶的酐酶法鉴定

目的 建立适合于自动化分析的人血清和尿肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶指示系统的酶促动力学测定方法。方法 在反应体系中加入异柠檬酸脱氢酶及其作用底物异柠檬酸，再生由主反应前氨消耗的NADPH和α－酮戊二酸，其后加入镁离子络合剂CyDTA和肌亚氨水解酶的启动试剂启动反应，在此同时NADPH和α－酮戊二酸的再生反应被终止，测定NADPH于340nm处吸光度的变化，计算样品中肌酐的浓度。结果 本法测定线性范围为40－2000μmol／L，批内和常规条件下的变异系数均小于5％，回收率为98．5％，与高效液相色谱法具有良好的相关性（r=0.9930)。乳糜、黄疸、溶血、酮体、乳酸盐、临床常用的治疗药物和高至2mmol/L的氨对测定没有干扰。结论 本法操作简便、精确，推荐作为常规测定方法。     

酶学检测精氨琥珀酸酶方法的建立

目的建立酶学检测精氨琥珀酸酶（ASAL）的方法。方法精氨琥珀酸在ASAL的作用下生成精氨酸和延胡索酸,后者被延胡索酸酶催化生成苹果酸,苹果酸被苹果酸脱氢酶催化生成草酰乙酸,同时NAD^＋（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,即辅酶Ⅰ）还原为NADH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）。pH9．0的肼-甘氨酸缓冲液使反应完全。结果ASAL回收率为97％,在0～87U／L内为线性;批内变异系数（CV）为5．3％,天间CV为6．5％;改良酶学检测方法对255μmol／L胆红素无影响;对0．1g／L血红蛋白有轻度影响。结论所建立的酶学检测方法结果准确可靠,易自动化。     

新酶法测定血清钙

作者建立了一种简便、快速的血清钙动力学测定法。原理为钙能抑制酵母菌脲胺基裂解酶（EC3，5，1，4，5）的酶促反应．测定先用谷氨酸脱氢酶除去内生铵离子，在脲胺基裂解酶、脲、ATP、重碳酸盐、镁与钾离子存在下产生的铵离子与血清钙离子浓度成反比．生成的铵离子浓度可用下法监测，即在2－氧代戊二酸盐和NADPH存在的介质中，于反应体系中加入GLDH后产生NADP＋，监测340nm处吸光度变化可得。在钙离子浓度为1．53～3．08mmol／L范围内，批内CV为1．7％～3．2％（n＝10），日间CV为2．8％～4．1％回收率为92％～112％，其它离子、…     

单一酶法测定血清及尿中镁

本文报告一种以镁离子（Mg2＋）作为激活剂的单一酶异柠檬酸脱氢酶（ICD，NADP＋）测定血清及尿中镁的方法。在两种金属鳌合剂EDTA和乙二醇二乙酸二胺四乙酸（CEDTA）适宜浓度下通过ICD催化异柠檬酸脱氢的正反应使NADP＋还原可测定Mg2＋，线性达20mmol／L以上。日内和日间变异系数分别不超过1．5％和2．6％，血清镁的回收率96％～100％。本法不受胆红素、血红蛋白及脂血的影响，与原子吸收分光度法（AAS）和钙镁特（CMT）法相关良好。本法测定原理如下：异柠檬田十NADP”异柠檬酸脱氨酸酮二酸材料与方法试剂1：每升100mmol／…     

β2-微球蛋白试剂对尿素测定结果的干扰及排除方法

目的探讨尿素测定结果的干扰因素及解决方法。方法将患者标本和高、低浓度的质控血清按单独测定、先测β2-微球蛋白接着测尿素、启用仪器防止交叉污染的程序、调整试剂位置4种方式进行实验,并把怀疑产生交叉污染的试剂当作尿素标本测定。结果β2-微球蛋白的试剂2中含有73．58mmol／L的氨（NH3）,因试剂之间的交叉污染对尿素测定结果产生正干扰。结论自动化分析仪随着使用时间的累加,交叉污染在所难免,应引起高度重视。可启用仪器的防交叉污染程序或调整试剂位置来排除干扰。     

尿素酶—谷氨酸脱氢酶偶联法测定尿素氮(摘要)

本科自制尿素酶(Urease,Sigma 巨豆提取,比活350U/mg 蛋白)和谷氨酸脱氢酶(GLDH,牛肝提取,比活32U/mg 蛋白)用于美国IL-508生化自动分析仪酶偶联法测定尿素氮(参数为37℃,340nm,平衡时间13秒反应时间7秒,标本2.5μl和总反应体积875μl),经实验获得最适试剂配方:Urease12000U/L、GLDH1200U/L、α-酮戊二酸3mmol/     

Camagite试剂在血清镁测定中的应用与探讨

金属染料Camagite［卜门一羟基一4一甲基一二本偶氛卜2蔡酚）能与镁离子在碱性环境中形成桃红色复合物，吸收波峰在500～540urn间．因反应迅速，方法简单，国外已广泛应用于自动分析。我们探讨了Trace公司产品应用于RA1000分析仪的一些因素，试图在方法学上求得一最佳方案．1材料和方法1．！仪3泰尔康RA1000型生化分析仪。1·2试剂Trace产品，包括西部分：1·2·1染料（DYE）：含Camagite0．14mmol／L、KCI77mind／L、PVP003mmVL．1．2．2碱性液（BASE）含KCNI．5mmol／L、KOH14．3mmol／L．1．3标准品4．12mmol／L（10mg／dl…     

新的酶法测定血清钙

作者利用从酵母中提取的尿素酰基裂解酶简便、快速的测定血清钙。该酶是一种多功能酶．在ATP参与下可催化尿素分解，其反应首先是尿素羧化酶的羧化作用，然后通过尿基甲酸盐水解酶样作用出现裂解。本法建立该酶的活性被钙抑制的基础上。反应原理如下。第一步：谷氨酸脱氢酶（GLDH）．2-酮戊二酸和NADpH消除血清中内源性NH第二步：测定尿素酰基裂解酶的反应速率，反应中速率的降低取决于血清中Ca的浓度。第三步：GLDH．NADPH和2-酮戊二酸作用下，NH的生成量与血清中Ca浓度成反比在340um波长检测NADPH浓度的减少值而测出血清Ca浓…     

一种适用于血清和尿液的尿素测定法

作者通过监测脲酶作用前后标本pH值的变化，建立了一种既适用于血清，又可用于不稀释尿液标本的尿素测定法。该法具有灵敏，简便等优点。1原理标本中的尿素在脲酶的作用下生成CO2和NH3，而引起标本的pH值发生变化。以邻甲酸欧络合剂为指示剂，通过使用适当的缓冲液，邻甲酚酞络合剂的吸光度与H+浓度间具有一定的比例关系。通过比色测定PH值变化，与同样处理的标准液进行比较，即可得出标本尿素的浓度。2试剂①显色剂：邻平醋酸络合剂2．smmol／L、Tris30Tnmol／L、NaN。15．4mmol／L、EDTANa：sin．mol／L，最后用lmoL／LHCI调节…     

用三溴羟基苯甲酸代替Trinder反应中的苯酚测定血清葡萄糖

酶法测定血清葡萄糖的显色原理是利用Trinder反应，使过氧化氢氧化色原而显色，以往色原常用本酚．本文采用一种高度灵敏反应的色原（2·4·6-三溴-3-羟基苯甲酸（TBHBA）代替苯酚作了实验探讨[1]‘，结果灵敏度提高了4．09倍，酶试剂仅用0．8ml、明显地降低了成本，结果满意，适宜于手工操作，现将方法及结果报告如下。1材料和方法1．1试剂1．1．1＄酸盐缓冲液（pH7．0）0．2mmol／L磷酸氢二钠61ml，0．2mmol／L磷酸二氢钾39ml，混合即可．1．1．2酶试剂：葡萄糖氧化酶400单位，过氧化物酶0．6mg，4一氨基安替比林10·45mg，叠氮钠100m…     

阿托伐他汀钙致单纯转肽酶异常1例

患者，女性，59岁，体重58kg；父母均患有高脂血症，高血压和糖尿病。2008年5月体格检查时显示血生化指标血脂偏高，表现在总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）偏高，分别是10．8mmol／L（正常3．5～6．5mmol／L）和2．6mmoL／L（正常0．28～1．80mmol／L）。肝功能检查显示正常，丙氨酸氨基转酶（ALT）37U／L（正常0—40U／L），门冬氨酸氨基转移酶（AST）35U／L（正常0—40U／L），谷氨酰转肽酶（GGT）48U／L（正常0—52U／L），亮氨酸氨基肽酶（LAP）49U／L（正常30—70U／L）。     

低密度脂蛋白胆固醇的直接测定法研究

目的用甾类糖苷化合物与胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶制备的高亲和性酶化舍物,结合特殊表面活性剂,通过对测定条件的优化,建立了低密度脂蛋白胆固醇直接法方法。方法本方法线性范围达12mmol／L,与friedewal公式法（以下简称F法）计算结果及日本第一化学株式会社（以下简称日本一化）试剂测定相关性良好,分别为相关系数（r）：0．9955,Y—1．044X1-0．1535;r：0．9989,Y—1．0058X2＋0．0571。批内变异系数（CV）〈1．5％,日间CV〈2．0％,回收率（100土5）％。TG浓度达20mmol／L,抗坏血酸小于4．5mmol／L、血红蛋白小于4．5g／L和胆红素小于540μmol／L时无显著干扰。当用纯的不同浓度的高密度脂蛋白胆固醇加入准确定值的新鲜血清中,观察脂蛋白在血清中的反应。结果纯高密度脂蛋白胆固醇浓度在6．4mmol／L以内对本法无显著干扰。结论本文建立的低密度脂蛋白胆固醇直接测定法,其性能指标符合临床使用要求。标本无需预处理,精密度好,准确性高,适用于各种自动生化分析仪。