活化Mφ培养上清液对VSMCs增殖和Ⅰ、Ⅲ胶原合成的影响

目的观察活化巨噬细胞培养上清液对原代培养VSMCs增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞并制备活化巨噬细胞培养上清液,以细胞计数和MTT染色评价不同浓度和作用时间的巨噬细胞培养上清液对VSMCs增殖的影响,L-^3H脯氨酸掺入法和反转录PCR（RT-PCR）检测Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的变化。结果活化巨噬细胞培养上清液促进VSMCs增殖,细胞计数和MTT染色结果随作用浓度和作用时间渐增;L-3H脯氯酸掺入和RT-PCR示胶原合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达随浓度和时间的增加而上升。结论活化巨噬细胞分泌促进VSMCs增殖和胶原代谢,此作用呈时间和剂量依赖性。     

同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞胶原蛋白合成及其mRNA表达的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 ( Hcy)对血管平滑肌细胞 ( VSMCs)胶原合成的影响 ,并探讨其作用机制。方法 :本实验采用体外培养的大鼠 VSMCs,加入不同浓度的 Hcy,通过 3 H-脯氨酸掺入、α1[ ]型胶原测定观察 Hcy对 VSMCs胶原合成的影响 ,并通过半定量 RT- PCR检测其对 α1[ ]型胶原 m RNA表达的影响。结果 :Hcy促进 VSMCs的胶原合成及 α1[ ]型胶原 m RNA表达 ,并呈剂量依赖效应。结论 :Hcy促进 VSMCs的胶原合成 ,可能是通过促进 α1[ ]型胶原 m RNA表达实现的。提示 Hcy促进胶原合成可能是动脉粥样硬化的发病机制之一     

低氧促进大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成

目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成、总蛋白合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达的影响.方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第24、48小时胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组显著增加,分别增加132%(P＜0.05)和163%(P＜0.01);低氧12 h起Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达,提示低氧对心脏成纤维细胞胶原合成代谢的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.     

西罗莫司对血管平滑肌细胞胶原合成影响的实验研究

目的观察西罗莫司对体外培养的大鼠平滑肌细胞胶原合成以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法体外组织贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,免疫组化胞质α-肌动蛋白染色鉴定,取对数生长期细胞进行实验。实验细胞依据西罗莫司不同作用浓度分为5组,西罗莫司终浓度分别为100、10、1、0．1、0ng／ml（对照组）。每组细胞接种后经同步化,按实验设计进行药物干预,作用24h后加入^3H标记的左旋脯氨酸共同培养12h,收取细胞,加入闪烁液,于液体闪烁计数器中测定L-3H脯氨酸的掺入量（cpm值）。并用RT-PCR法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达,以GAPDH作为内参照,产物明胶电泳后紫外光下成像,用校正后光密度值进行统计分析。结果西罗莫司能够显著抑制平滑肌细胞胶原合成,呈浓度依赖性,L-^3H脯氨酸掺入值经方差分析各浓度组间差异有统计学意义,F=18．936,P〈0．001。两两比较单侧t检验1ng／ml以上组同对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．001）。RT-PCR产物电泳图像分析结果显示Ⅰ型胶原mRNA的表达各浓度组间差异有统计学意义（F=13．244,P〈0．001）,但Ⅲ型胶原mRNA的表达在各浓度组间差异无统计学意义（F=2．409,P=0．070）。结论西罗莫司能够剂量依赖性抑制平滑肌细胞胶原合成以及Ⅰ型胶原mRNA的表达,但对Ⅲ型胶原mRNA的表达影响不显著。     

血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胰星状细胞增殖和胶原合成

目的:研究血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)对大鼠胰星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)增殖和活化的影响.方法:取第4～7代培养的大鼠PSCs,采用无血清DMEM培养液培养48 h使细胞同步静止化后,换含1、10和100 nmol/L Ang Ⅱ的无血清培养液继续培养24 h或48 h;另外,在加入100 nmol/L Ang Ⅱ无血清培养液前加入100 nmol/L AT1受体拮抗剂ZD7155或AT2受体拮抗剂PD123319.分别采用[3H]-胸嘧啶核苷掺入、[3H]-脯氨酸掺入、Western印迹和Northern印迹法动态检测细胞DNA合成速率、胶原合成速率、α-平滑肌动蛋白和Ⅰ型前胶原mRNA表达.结果:与正常对照组比较,1 nmol/L Ang Ⅱ刺激24 h后细胞DNA合成率无显著增加(P>0.05),而10和100 nmol/L处理组细胞DNA合成率显著增加(P值均<0.05);刺激48 h后,1、10和100 nmol/L Ang Ⅱ处理组细胞胶原合成率和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平均明显增加(P值均<0.05),但α-平滑肌动蛋白表达无明显变化(P值均>0.05).与Ang Ⅱ(100 nmol/L)处理组比较,Ang Ⅱ(100 nmol/L) ZD7155(100 nmol/L)处理组细胞DNA合成率、胶原合成率和Ⅰ型前胶原mRNA表达水平均显著下降(P值均<0.01),而Ang Ⅱ(100 nmol/L) PD123319(100 nmol/L)处理组均无明显变化(P值均>0.05).结论:Ang Ⅱ通过AT1受体介导,可剂量依赖性诱导大鼠PSCs增殖和胶原合成,从而参与胰腺纤维化的发生.     

黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的 探讨黄芪对糖尿病足溃疡处成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响.方法 用含/未含黄芪的培养液培养糖尿病足溃疡处成纤维细胞,RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,放免法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果 用含黄芪的培养液培养的糖尿病足溃疡处成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达及培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量高于未含黄芪的培养液培养的细胞,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 黄芪能上调糖尿病足溃疡处成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达和促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成.     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞α1［Ⅰ］及α1［Ⅲ］型胶原mRNA表达的影响

目的：观察同型半胱氨酸（Hcy）对血管平滑肌细胞（VSMCs）胶原合成的影响。方法：采用体外培养的大鼠VSMCs,加入不同浓度的Hcy(0、0.10、0.25、0.50和1.00 mmol•L^-1)作用后,通过测定培养基中羟脯氨酸含量和半定量RT-PCR法检测Hcy对VSMCs胶原合成及对α₁［Ⅰ］、α₁［Ⅲ］型胶原mRNA表达的影响。结果：Hcy促进VSMCs胶原合成及α₁［Ⅰ］型、α₁［Ⅲ］型胶原mRNA表达,并呈剂量依赖效应。结论：Hcy促进VSMCs胶原合成,可能是通过上调α₁［Ⅰ］、α₁［Ⅲ］型胶原mRNA表达实现的。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞α1[Ⅰ]及α1[Ⅲ]型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 (Hcy)对血管平滑肌细胞 (VSMCs)胶原合成的影响。方法 :采用体外培养的大鼠 VSMCs,加入不同浓度的 Hcy(0、 0 .1 0、 0 .2 5、 0 .5 0和 1 .0 0 mm ol· L- 1 )作用后 ,通过测定培养基中羟脯氨酸含量和半定量 RT- PCR法检测 Hcy对 VSMCs胶原合成及对 α1 [ ]、 α1 [ ]型胶原 m RNA表达的影响。结果 :Hcy促进 VSMCs胶原合成及 α1 [ ]型、α1 [ ]型胶原 m RNA表达 ,并呈剂量依赖效应。结论 :Hcy促进VSMCs胶原合成 ,可能是通过上调 α1 [ ]、 α1 [ ]型胶原 m RNA表达实现的。     

石棉纤维诱导的细胞因子对肺成纤维细胞作用的研究

用肺泡灌洗法获取兔肺巨噬细胞，进行体外培养，取其上清液分别用同位素掺入法和MTT比色法测定上清液中炎性细胞因子TNF和IL－6的活性．并将上清液与人胚肺成纤维细胞（WI－38）培养，用同位素掺入法测定成纤维细胞生长增殖和胶原合成。用氯氨-T法分析肺成纤维细胞总羟脯氨酸含量，并用抗TNF抗体和IFNγ进行成纤维细胞增殖和胶原合成抑制试验。结果显示，石棉纤维能刺激AM释放TNF和IL－6，其活性分别为1198U／m、1511U／ml，均高于TiO2对照组。浓度与效应之间有剂量反应关系（P＜0.05）．石棉纤维诱导的AM上清液能促进肺成纤维细胞增殖和胶原合成，用3H－TdR掺入法，cpm均值为2669，14C－Pro掺入法cpm均值为27952，高于TiO2对照和阴性对照，HOP含量明显增高．抗TNF抗体和IFNγ能抑制肺成纤维细胞增殖和胶原告成。     

Effect of RNA interference targeting geminin on proliferation of vascular smooth muscle cells in rats

目的 以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs) Geminin基因的表达观测VSMCs增殖情况及表型标志物.方法 分别利用RT-PCR,Western blot检测VSMCs中Geminin基因、蛋白表达的变化,筛选出干扰效果最为显著的序列用于构建慢病毒包裹的稳定干扰模型.应用[3H] -TdR、EdU掺入试验检测VSMCs增殖的情况;同时使用Western blot分别检测干扰前后相关标志性基因的表达.结果 ①siRNA转染后,以第1亚组干扰效果最为显著,与另外2个阳性亚组及对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).②[3H] -TdR、EdU掺入实验显示:阳性干扰组的掺入量较两对照组明显升高(P＜0.05).③siRNA转染使Geminin基因表达减弱后,阳性组VSMCs合成型标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平显著升高,收缩型标志物平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,α-Actin)表达水平明显降低,与对照组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RNA干扰介导的Geminin基因沉寂可显著增强VSMCs的增殖能力,并有助于VSMCs的表型由收缩型向合成型转化.     

己酮可可碱对TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响

[目的]探讨己酮可可碱对转化生长因子-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响.[方法]用逆转录-聚合酶链反应检测腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达,用Western blot 检测磷酸化细胞外信号调节激酶.[结果]①0.3 mg/mL己酮可可碱与对照组相比,可下调胶原ⅠmRNA表达32%(P＜0.01),其抑制作用呈时间依赖性关系,作用16 h抑制作用达高峰(0.790vs 0.426,P＜0.001).②TGF-β1可诱导腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达上调(132.00vs 592.00,P＜0.001),以及磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(201.67vs 682.00,P＜0.001).③己酮可可碱可抑制TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞胶原Ⅰ mRNA表达上调(0.945vs 0.594,P＜0.01),并可逆转TGF-β1诱导的磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(682.00vs 426.00,P＜0.001),其抑制作用呈剂量依赖关系.[结论]己酮可可碱可下调腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA的基础表达及TGF-β1诱导的过度表达,同时可逆转TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞细胞外信号调节激酶活性增加.     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂(AT1RA)对体外培养的肝星状细胞Ⅰ型胶原蛋白合成及其mRNA表达的影响。方法采用HSC-T6肝星状细胞系作为活化的肝星状细胞的研究模型。将培养的肝星状细胞分为对照组、AngⅡ组、AT1RA组和AngⅡ+AT1RA组。采用ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白的含量。RT-PCR法检测肝星状细胞中Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量及肝星状细胞Ⅰ型胶原mRNA的表达水平,AngⅡ组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),AT1RA组与AngⅡ+AT1RA组均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ能够促进肝星状细胞Ⅰ型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达,而AT1RA能够明显抑制这一作用。     

睾酮对血管平滑肌细胞中雄激素受体mRNA表达的调控

目的观察睾酮对雄性大鼠血管平滑肌细胞中雄激素受体mRNA表达的自身调控作用.方法贴块法培养雄性 SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),Northern印迹分析法检测细胞中雄激素受体mRNA水平;采用细胞计3H]-胸腺嘧啶掺入法观察调控过程中细胞数量和DNA合成变化情况.结果0～4 μmol/L睾酮与静止的VSMCs作用24 h,细胞内ARmRNA表达水平呈剂量相关性增加;生理水平睾酮(40nmol/L)与静止的VSMCs作用不同时间(0～24 h),细胞内ARmRNA表达水平在24 h时方有显著增加;实验过程中细胞数量及DNA合成速率均无明显改变.结论血管平滑肌细胞中存在睾酮对雄激素受体mRNA表达的自身上调作用,调控过程中细胞活力保持稳定.提示 VSMCs中睾酮对AR表达的调控作用部分需要转录水平的参与.     

干扰素α对肝纤维化鼠星状细胞Ⅰ和Ⅲ型前胶原mRNA表达及胶原沉积的影响

目的　观察干扰素α对大鼠肝纤维化时星状细胞增殖、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达和肝脏胶原沉积的影响。方法　以CCl4制造肝纤维化模型 ,培养肝星状细胞 ,抽提RNA ,用地高辛标记Ⅰ、Ⅲ型前胶原和胶原酶cDNA探针 ,Northern杂交分析Ⅰ、Ⅲ型前胶原和胶原酶mRNA表达 ,Dotblot测定大鼠肝Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积。分别用3H TdR和3H 脯氨酸掺入观察干扰素α对星状细胞增殖和胶原合成的影响。结果　干扰素α对3H TdR和3H 脯氨酸掺入的星状细胞 ,在 4、2 4、4 8小时与空白对照比较 ,呈明显抑制作用 ,其抑制率分别为 16%、19%、2 7%。干扰素α浓度≥ 12 5U/ml时呈现明显抑制作用 ,且随浓度增加抑制作用加强。在鼠肝纤维化早、中、晚期 ,干扰素α组星状细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达与模型对照组比较均降低。星状细胞间质胶原酶mRNA表达 :在模型对照组早、中期均高于正常对照组 ,而晚期与正常对照组差异无显著意义 ;在干扰素α组早、中、晚各期 ,星状细胞间质胶原酶mRNA表达与模型对照组差异无显著意义。肝内Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积 :干扰素α组早、中期均低于模型对照组 ,而晚期与模型对照组差异无显著意义。结论　干扰素α可抑制星状细胞的增殖和胶原合成 ,下调肝纤维时Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达 ,减少肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积。     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对肝星状细胞Ⅲ型胶原合成的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对体外培养的肝星状细胞Ⅲ型胶原蛋白合成及其mRNA表达的影响.方法 采用HSC-T6肝星状细胞系作为活化的肝星状细胞的研究模型.将培养的肝星状细胞随机分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组、受体拮抗剂(AT1RA)组和血管紧张素Ⅱ 受体拮抗剂(AngⅡ AT1RA)组.采用ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅲ型胶原蛋白的含量;RT-PCR法检测肝星状细胞中Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果 细胞培养上清液中Ⅲ型胶原蛋白的含量对照组、AngⅡ组和AngⅡ AT1RA组分别为(6.301±0.432)ng/ml、(7.356±0.237)ng/ml和(6.263±0.236)ng/ml,AngⅡ组高于对照组(P＜0.05),AngⅡ AT1RA组显著低于AngⅡ组(P＜0.05).肝星状细胞Ⅲ型胶原mRNA的表达水平对照组、AngⅡ组和AngⅡ AT1RA组分别为2.317±0.015、2.643±0.057和2.330±0.036,AngⅡ组高于对照组(P＜0.05),AngⅡ AT1RA组显著低于AngⅡ组(P＜0.05).结论 血管紧张素Ⅱ能够促进肝星状细胞Ⅲ型胶原蛋白的合成及其mRNA的表达,而血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂能够明显抑制这一作用.     

缺氧对大鼠血管平滑肌细胞表达巨噬细胞游走抑制因子的影响

目的 观察缺氧对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的影响,探讨缺氧在动脉粥样硬化等血管增生性疾病中引起动脉壁损伤的可能机制. 方法 将大鼠 VSMCs细胞株A7r5细胞分别在缺氧(37 ℃、5% CO2、1% O2)及常氧(37 ℃、5% CO2、20% O2)条件下培养不同的时间(2 h、4 h、12 h、24 h、48 h),在相应时间点收集细胞总RNA及培养上清液.用半定量RT-PCR及ELISA方法 分别检测MIF mRNA的表达及VSMCs MIF的蛋白水平变化. 结果 与常氧培养的对照组相比,缺氧不同时间的大鼠VSMCs的MIF mRNA表达均显著增加(P<0.05),并且合成MIF蛋白的水平也明显增加(P<0.05).结论 缺氧能诱导VSMCs MIF的表达,MIF的表达增加可能是缺氧参与动脉粥样硬化等血管增生性疾病发生的机制之一.     

牛磺酸对内毒素致成纤维细胞功能改变的拮抗作用

目的探讨牛磺酸防治内毒素血症致肝纤维化的可能性.方法采用[3H]-脯氨酸([3H]-Pro)掺入、RIA分别测定细胞胶原合成、分泌和透明质酸产生.结果LPS能显著促进NIH3T3细胞[3H]-Pro掺入,胶原分泌和透明质酸产生,并呈时间和剂量依赖性;牛磺酸则可抑制内毒素的这种生物学作用结论牛磺酸能显著抑制由内毒索引起的NIN3T3细胞胶原、透明质酸合成和分泌.     

吡格列酮对肾小管上皮细胞转分化及CTGF表达的影响

目的 探讨吡格列酮能否负性调节转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞(TEMT),以及抑制TGF-β下游介质结缔组织生长因子(CTGF)表达,以阐明吡格列酮抗肾纤维化的作用及机制.方法 将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、TGF-β3 ng/mL诱导组、TGF-β3 ng/mL+DMSO组、不同剂量吡格列酮阻断组.应用倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫组织化学、RT-PCR方法 定性及定量检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);RT-PCR方法 定量检测CTGFmRNA的表达;ELISA法测定培养细胞上清液中Ⅲ型胶原的含量.结果 ①TGF-β诱导组细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态;免疫组织化学染色见大量α-SMA阳性细胞,与对照组相比,α-SMAmRNA表达量增加(P＜0.05);CTGF mRNA表达量增加(P＜0.05);细胞培养上清液中Ⅲ型胶原的含量增加(P＜0.05).②吡格列酮阻断组明显抑制TGF-β诱导的NRK52E细胞形态学改变;各剂量组均能抑制TGF-β诱导的α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达及Ⅲ型胶原分泌(P＜0.05),且呈剂量依赖(P＜0.05);③相关分析显示,CTGF mRNA与α-SMA mRNA、Ⅲ型胶原的分泌呈正相关(r=0.975,0.988,P均＜0.01).α-SMA mRNA与Ⅲ型胶原的分泌呈正相关(r=0.952,P＜0.01).结论 吡格列酮能够抑制TGF-β诱导的TEMT及Ⅲ型胶原的分泌,对肾间质纤维化具有负性调节作用;吡格列酮抑制TGF-β诱导的CTGF表达可能是其负性调节TEMT的机制之一.     

奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用

目的：观察奥曲肽（OCT）对肝星状细胞（HSC）Ⅰ型、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因及蛋白表达的影响,阐明其抗肝纤维化的机制。方法：体外培养rHSC-99细胞,以不同浓度OCT作用24　h后,MTT法观察细胞增殖,ELISA法测定上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原,半定量RT-PCR法检测MMP-2、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：与对照组比较,OCT能显著抑制体外培养的rHSC-99增殖(P<0.05),在一定剂量范围（1～8 μg?L-1）内,随着OCT浓度升高,细胞增殖抑制率增加。与对照组比较,OCT各组细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原浓度明显降低(P<0.05),且Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组比较,OCT组MMP-2 mRNA呈高表达（P<0.05)。结论：OCT能抑制HSC增殖,下调Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA及其蛋白表达,上调MMP-2 mRNA表达水平,这可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

AcSDKP对大鼠活化HSCs增殖及分泌细胞外基质的影响

目的通过N-乙酰基-丝氨酸-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)干预,观察其对活化肝星状细胞(HSCs)的增殖以及合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响。方法大鼠原代HSCs分离、培养和鉴定后,分别给予0.01、0.1、1、10、100nmol/LAcSDKP进行干预,设立空白对照组。MTT法检测AcSDKP干预对HSCs增殖的影响;RT-PCR技术检测活化HSCsⅠ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA表达;酶联免疫法检测培养细胞上清液透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)含量。结果与空白对照组相比,1、10nmol/LAcSDKP干预显著抑制活化HSCs的增殖;1、10nmol/L及0.1～100nmol/LAcSDKP的干预,分别显著抑制HSCsColⅠmRNA和ColⅢmRNA表达;0.1、1、10nmol/L和0.1、1nmol/LAcSDKP干预可分别显著抑制培养上清液HA和LN的表达。结论本实验发现,AcSDKP可抑制活化HSCs合成和分泌ECM,并呈现一定的剂量依赖性,以浓度为1nmol/L时作用最为显著。其作用机制可能与抑制HSCs增殖而使合成和分泌ECM的HSCs数量减少有关。