Effect of Exogenous pl6ink4a and hRbl Genes on Cell Cycle Regulation of Osteosarcoma Cell

To study the effect on regulation of cell cycle of osteosarcoma cell line MG63 tranceduced with exogenous p16ink4a and hRbl genes, pIRES-p16ink4a-hRb1, pIRES-p16ink4a and pIREShRbl plasmids were constructed by gene recombination technology. The recombinant plasmid was transferred into osteosarcoma cell line MG63 by metafectene, and the resistant clones were selected by G418 selective medium, mRNA and protein expression of osteosarcoma cell line were assayed by RT-PCR and Western-Blot respectively. Cell cycle and apoptosis were analyzed by subG1 flow cytometric. Cell proliferation was tested by MTT. In the genome of these transfected target cells, the expression of p16ink4a and hRb1 mRNA and protein were detected respectively in vitro. It was demonstrated with subG1 flow cytometric analysis and MTT method that p16ink4a and hRbl genes cooperation more significantly inhibited cell growth and induced a more marked G1 arrest and apoptosis than p16ink4a/hRb1 alone （P〈0.01）. Coexpression of exogenous p16ink4a with hRbl broke the regulatory feedback loop of p16ink4a-cyclinD1/CDK-hRbl and played a more significant role in inhibiting cell growth as well as inducing cell apoptosis than p16ink4a or hRbl did alone in vitro.     

鼻咽癌细胞中外源性p16表达对CDK4,Cyclin D1及pRb的影响

目的：分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响,探讨其抑制细胞生长的机制。方法：绘制生长曲线,比较细胞倍增时间,分析ＨＮＥ１,＃４－２及＃３－２克隆中细胞增殖状况;利用流式细胞仪分析上述细胞中细胞周期分布的改变;结合Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ方法,分析外源性ｐ１６表达对ＣＤＫ４,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１及ｐＲｂ的影响。结果：生长曲线示,ＨＮＥ－１倍增时间为２３．４ｈ,＃３－２和＃４     

食管鳞癌组织中p16、cyclinD1、CDK4的表达

目的：探讨p16、cyclinD1、CDK4蛋白在食管鳞癌发生中的意义及其相互间的作用。方法：采用LSAB免疫组化染色法,对43例食管癌手术标本的p16、cyclinD1、CDK4蛋白进行标记。结果：在鳞癌组织中,3种抗体的阳性物质存在于细胞核中和／或胞浆中,且从正常鳞状上皮→癌旁不典型增生→鳞癌组织,p16的阳性率逐渐下降,而p16、cyclinD1、CDK4的阳性率却逐渐上升。正常皮皮与癌组织之间的阳性率差异均有显著性（P＜0．05）;随着癌分化程度下降,p16阳性率呈下降趋势,Ⅲ级与Ⅰ级鳞癌之间阳性率差异有显著性（P＜0．05）,但未检出cyclinD1、CDK4与癌分化程度的关系。结论：p16、cyclinD1、CDK4蛋白表达的变化是食管癌发生中的早期事件,三者构成的调节通路障碍可能参与了癌的发生。     

p16 MTS1 INK4A CDKN2与大肠癌

随着分子生物学的研究进展,人们已揭示出肿瘤的发生是遗传物质改变导致的多步骤、多基因事件积累的结果。癌基因的激活以及抑癌基因的缺失或失活是细胞癌变的分子基础,它引起基因的转录和翻译功能的异常,使细胞恶性增殖,最终形成肿瘤。肿瘤抑制基因ｐ１６是近年来发现的一种抑癌基因,它是继 Ｒｂ、ｐ５３基因之后,成为当今肿瘤学、分子生物学和遗传学的研究热点之一。本文就肿瘤抑制基因ｐ１６与大肠癌的关系综述如下。１细胞周期调控的分子机制 高等真核生物的细胞周期分为４个时间：Ｇ１期、Ｓ期 Ｇ２期和Ｍ期。细胞在周期中顺序经…     

p16、edk4细胞周期调节及在中耳胆脂瘤形成中作用的研究进展

p16、cdk4在肿瘤分子生物学中的研究较成熟，但对中耳胆脂瘤作用的研究较少。现将近年有关抑癌基因p16细胞周期研究，中耳胆脂瘤上皮细胞增殖与凋亡的研究，以及p16及cdk4在胆脂瘤形成中作用的研究进展作一综述。     

外源性p16基因稳定转染对喉癌细胞周期和增殖的影响

目的：探索p16基因在喉癌细胞内的表达作用及基因治疗方面的应用前景。方法：采用亚克隆技术，构建p16真核表达载体pCDNA3-p16.利用lipofectamine介导，将外源野生型p16基因导入喉癌细胞系Hep-2，筛选阳性克隆，采用打点杂交技术、免疫荧光、免疫组化、图像分析法观察和分析p16基因的表达。同时以空载体质粒pCDNA3为对照，用流式细胞仪分析瘤细胞生长周期、荧光染色检测细胞凋亡。结果：打点杂交、免疫荧光、免疫组化及图像分析法分析证实转染p16基因的Ｈep-2细胞有外源p16基因的表达，外源基因p16在Hep-2细胞系中的表达能抑制Hep-2细胞系的生长。流式细胞仪计数和免疫荧光检测证实p16能诱导喉癌细胞系Hep-2发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论：导入外源野生型p16基因可抑制喉癌细胞恶性增殖。     

p16^INK4a基因与子宫颈癌及其癌前病变关系的研究进展

随着分子生物学技术的飞速发展,人们越来越认识到抑癌基因在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。p16^INK4a是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因。它在宫颈癌和癌前病变阶段表现为过表达,可作为一种肿瘤标志物用于宫颈癌及癌前病变的临床筛查及诊断中。     

细胞周期相关蛋白CyclinD1、p16在大肠癌中的表达及其意义

目的:探讨细胞周期调控因子在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系.方法:应用免疫组化SP法对70例大肠癌组织及距癌灶3cm以外的癌旁组织、10cm以外的正常组织中CyclinD1和p16进行检测.结果:CyclinD1在大肠癌中过度表达为36/70(51.4%)并与肿瘤的分化程度呈反比,有淋巴结转移的大肠癌,其CyclinD1的阳性率为70.0%,无淋巴结转移的大肠癌阳性率为44.0%,两者相比差异有显著性(P<0.05).p16在大肠癌中为低表达33/70(47.1%),癌旁组织和正常组织中p16的表达分别为57.1%和71.4%.CyclinD1与p16呈负相关关系(P<0.05).结论:CyclinD1的过度表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关;CyclinD1的过度表达和p16的低表达在大肠癌发生中起协同作用;大肠癌的发生机制涉及CyclinD1和p16调节环路中多个基因的异常.     

Effects of Exogenous p16^ink4a Gene on Biological Behaviors of Human Lung Cancer Cells

The effects of exogenous p16ink4a gene on biological behaviors of human lung cancer cell line with homozygous deletion of p16ink4a gene were investigated. Exogenous p16ink4a gene was transfected by lipofectin into human lung cell line A549, in which p16ink4a gene was homozygously deleted. The expression of p16ink4a mRNA and protein was detected by RT-PCR and immunocyto-chemistry, respectively. The changes in the behaviors of the transfected cell lines in vitro and in vivo were observed. In the transfected cell line A549, the exogenous p16ink4a gene could be stably ex-pressed. The growth of A549 cells transfected with p16ink4a gene was obviously slowed down. Flow cytometry revealed that transfection of the exogenous p16ink4a gene resulted in A549 cell lines arrest in G1 phase of cell cycle. The tumorigenicity of these transfected cells in nude mice could be inhib-ited, and the tumor growth of nude mice was significantly suppressed. It was concluded that exoge-nous p16ink4a gene may be stably expressed in human lung cancer cell line A549. The expression of the introduced p16ink4a could block lung cancer cells to entry into S phase of cell cycle and inhibit tumor malignant growth both in vitro and in vivo.     

骨肉瘤中P16蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系

目的探讨凋亡抑制蛋白P16在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测52例骨肉瘤、15例骨软骨瘤及15例正常骨质标本的P16蛋白表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果 P16蛋白在骨肉瘤中的表达显著低于骨软骨瘤和正常骨质（P〈0.05）,在肿瘤的组织学分级方面差别有显著性意义（P〈0.05）,而在性别、年龄、肿瘤直径、病理类型、侵袭及临床分期等方面差别无显著性（P〉0.05）。凋亡指数（AI）在骨肉瘤中有无淋巴结转移、病理分型和组织学分级方面差别有显著性意义（P〈0.05）,有淋巴结转移组比无淋巴结转移组明显降低（P=0.048）;纤维型和其他类型组比软骨母细胞型组明显降低（P=0.031）;骨肉瘤Ⅱ级和Ⅲ级组比Ⅰ级组明显降低（P〈0.05）。骨肉瘤中P16蛋白和AI表达之间存在正相关（r=0.425,P=0.002）。结论抑癌基因p16在骨肉瘤中随着组织学分级的降低,阳性表达率有降低趋势,P16蛋白的失活可能促进肿瘤的恶性进展过程,测定P16蛋白的表达和细胞凋亡可作为判断骨肉瘤恶性程度和预测预后的重要参考指标。     

p16~(INK4a)/p14~(ARF)基因在细胞衰老和肿瘤抑制中的作用研究进展

细胞衰老发生后细胞在形态和生化成分都发生改变,进而发生生理性功能障碍,最终进入凋亡和死亡程序。细胞衰老是生命体在细胞水平防止永生化和恶变、预防肿瘤发生的一种机制。细胞衰老由多种原因引起,近年来的研究发现,p16INK4a-pRb(视网膜母细胞瘤抗癌蛋白)和p14ARF-p53这2条途径的活化与细胞衰老的启动和调节过程密切相关,对细胞衰老的信号传导通路及其调节因子等方面的深入研究,可以进一步认识细胞增生、衰老进程,以及防治肿瘤的规律,并为衰老相关疾病的治疗提示研究方向。     

人脑垂体腺瘤 p16、hst基因和细胞增殖周期检测及其调控机制探讨

目的探讨垂体腺瘤中p16、hst基因表达及细胞增殖周期的改变与其肿瘤发生、瘤体大小、侵袭性生长方式等之间的关系.方法运用RT-PCR、Western blot分别检测70例垂体腺瘤,免疫组化ABC法检测48例垂体腺瘤,FCM技术检测40例垂体腺瘤细胞增殖周期.结果垂体腺瘤中较广泛存在p16 mRNA和p16蛋白表达缺失或低下,分别为78.6% (55/70)和84.3%(59/70),两者成高度正相关(P<0.01).p16表达缺失或低下肿瘤的体积为2.21±0.72 cm3,明显高于阳性表达肿瘤的0.80±0.45 cm3 (P<0.01).侵袭性垂体腺瘤hst表达阳性率为55.6% (10/18),非侵袭性垂体腺瘤hst表达阳性率为13.3% (4/30),有显著性差异(P<0.01).hst表达阳性肿瘤体积为3.68±1.02 cm3,显著大于hst表达阴性肿瘤的体积2.16±1.12 cm3 (P<0.05).细胞增殖周期分析,侵袭性垂体腺瘤DI、PI及S期细胞比例分别为1.38±0.62、11.35±1.26和4.0±1.96,显著高于非侵袭性垂体腺瘤1.17±0.31、7.28±0.80和1.95±1.02 (P<0.05).结论垂体腺瘤组织形态属良性,却存在不同类型的生物学特性.这些生物学特性的改变与其瘤体大小、侵袭性生长方式等肿瘤特性相关,并为垂体腺瘤的个体化诊治及预后的评价提供重要的依据.     

含绿色荧光蛋白和HyTK基因双顺反子腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建一种带有绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）和潮霉素磷酸转移酶和ＨＳＶ－ＴＫ的融合基因（ＨｙＴＫ基因）的新型腺病毒载体，用于简便、快速地了解自杀基因在恶性肿瘤中的转染效率和提高疗效。方法利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖体进入位点（ｉｎｔｅｒｎａｌｒｉｂｏｓｏｍｅｅｎｔｒｙｓｉｔｅ，ＩＲＥＳ），将ＧＦＰ的ｃＤＮＡ与ＨｙＴＫ真核表达载体重组，构建获得含ＧＦＰ和ＨｙＴＫ基因真核表达载体，在Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导下转染ＣＯＳ－７细胞，检测其表达后进一步克隆获得含ＧＦＰ和ＨｙＴＫ基因双顺反子腺病毒载体。结果构建含绿色荧光蛋白和ＨｙＴＫ基因双顺反子腺病毒载体，显示该载体可获得ＨｙＴＫ基因及ＧＦＰ的良好表达。结论含绿色荧光蛋白和ＨｙＴＫ基因双顺反子腺病毒载体的构建为ＨｙＴＫ基因治疗恶性肿瘤用于临床提供了新的治疗工具及随访检测手段。     

非小细胞肺癌中p16及cdk4表达的研究

目的:探讨 p16及 cyclin-dependent kinase 4(cdk4)在非小细胞肺癌中的表达及其与肺癌发生、组织学类型及组织学分化程度的关系。方法:用免疫组织化学方法研究了104例非小细胞肺癌。结果:40.4%的肿瘤完全不表达 p16,84.6%的病例表达 cdk4;cdk4表达强度与组织学分化程度呈反比。结论:提示 p16和 cdk4的表达异常在肺癌的发生和组织分化程度上起重要作用。     

脑胶质瘤中cyclin D1／p16—pRB路径的异常及意义

目的 研究ｃｙｃｌｉｎＤ１／ｐ１６－ｐＲＢ路径在脑胶质瘤中的异常情况，并对其意义进行分析。方法 用免疫且化对２３例脑胶质瘤（包括１４例星形细胞瘤和９例胶质母细胞瘤）及６例正常脑组织中３种因子的表达进行检测，并分析了实验结果与肿瘤分型的关系以及各个因子在此路径中的作用。结果 ２３例肿瘤中有１７例ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１过度表达（７３．９％），１３ｐ１６和８例ｐＲＢ缺失（５６．５％和３４．８％），３种因子的     

p16INK4a蛋白可作为乳腺癌特异性分子标志

目的探讨p16INK4a 蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法收集2014 年~2015 年间手术切除的132 例乳腺癌标 本,采用罗氏全自动免疫组化染色仪进行免疫组织化学染色,检测ER、PR、Her-2、Ki67、CK5/6、和p16INK4a表达,并按照不同 表达模式进行结果判读和分子分型,观察p16INK4在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌免疫表型、分子亚型及临床指标的相关性。 结果132例浸润性乳腺癌中Luminal A型58例、Luminal B型32例、Her-2型21例、basal-like（BLBC）型12例、Normal-like型9 例。p16INK4a蛋白表达阴性（0）、弱阳性（1+）、阳性（2+）和强阳性（3+）表达样本分别占总数的5.30%（7/132）、11.36%（15/132）、 30.30%（40/132）、53.03%（70/132）。按照p16INK4a表达强度,将阴性（0）和弱阳性（1+）病例合并为阴性组（≤1+）、将阳性（2+） 和强阳性（3+）病例合并为阳性组（≥2+）,p16INK4a 阴性（≤1+）表达率为16.67%（22/132）、p16INK4a 阳性（≥2+）表达率为 83.33%（110/132）。按照构成比进行统计分析,发现p16INK4a蛋白的表达强度除在不同年龄分组中具有统计学差异（P<0.05） 之外,与ER、PR、Her-2及分子分型和是否存在转移之间均无统计学差异（P>0.50）。结论p16INK4A代偿性高表达是浸润性乳 腺癌细胞周期异常的主要机制,且p16INK4A可作为浸润性乳腺癌细胞特异性的分子标志,采用IHC技术检测p16 INK4a 的表 达不仅为乳腺癌诊断提供了一种重要方法,也为乳腺癌的机制研究提供有价值的信息。