同种异体软骨细胞移植术后关节软骨蛋白多糖的测定

目的应用Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞移植修复兔全厚关节软骨损伤，对于新生的修复组织进行基质蛋白多糖含量测定，以探讨此方法修复全厚关节软骨损伤的可行性。方法取3个月龄新西兰大白兔关节软骨细胞体外培养扩增，与20％Pluronic F-127凝胶混合。选27只健康同种成年大白兔，人为造成双侧膝关节软骨缺损。实验组软骨缺损处植入培养的软骨细胞／Pluronic F-127混合物，对照组缺损处单纯注入Pluronic F-127凝胶和空白对照。然后，对修复组织进行大体观察及蛋白多糖含量测定。结果移植的软骨细胞-载体复合物中的软骨细胞能良好地生长，12周时再生组织与周围正常软骨组织外观相似，界限模糊。实验组与对照组各时期蛋白多糖含量均有非常显著性差异，实验组不同时期的蛋白多糖含量之间均有显著性差异，实验组12周时蛋白多糖含量与正常软骨组织无显著性差异。结论Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞移植是治疗关节软骨缺损的有效方法。     

抑制同种异体软骨细胞复合支架免疫反应研究进展

损伤或疾病造成的关节软骨缺损在临床上较常见,许多用于修复关节软骨损伤的方法各有优点,但均存在一定缺陷。组织工程学技术为关节软骨缺损的再生与修复提供了新思路,利用体外培养扩增的同种异体软骨细胞复合支架修复软骨缺损已有大量报道。该文就同种异体软骨细胞复合支架修复关节软骨损伤的免疫反应,在软骨细胞免疫原性、免疫反应发生途径、降低免疫反应机制及方法等方面作一综述。     

可注射性生物材料构建同种异体工程化软骨

目的研究在有免疫力的动物体内应用生物材料聚氧化乙烯丙烯凝胶构建同种异体工程化软骨的可行性.方法无菌条件下取新生兔关节软骨,经II型胶原酶消化8～12小时后,将软骨细胞和生物材料复合成细胞浓度为5×107/ml的复合物并移植于兔皮下,并以边注射,边后退的方法做条索状注射,以了解可否形成预定棒状软骨.同时分别设立单独注射细胞和材料两个对照组.分别于4、6、8及12周取材行大体观察,石蜡切片HE染色、SafraninO染色、Masson's三色染色,了解软骨形成情况.结果2周后即可于皮下触及新生结节,4周后取材即有基质分泌及胶原形成.于6周左右软骨接近成熟,生物材料基本吸收.8周、12周软骨基本接近正常软骨.同时可以见到以注射的方式塑形而成的棒状软骨.实验中未见明显的免疫排斥反应.而对照组未见软骨形成.结论生物材料聚氧化乙烯丙烯凝胶具有良好的生物相容性、可降解性、无细胞毒,是较理想的组织工程生物材料;应用该实验方法可在有免疫力的动物体内形成同种异体工程化软骨,并可以通过注射的方法进行简单的塑形.     

软骨细胞移植修复关节软骨的进展

本文扼要介绍了软骨细胞及其影响因素，为软骨细胞提供了立体三维结构的降解材料，并概述了移植软骨细胞与宿主间的免疫学问题，软骨细胞移植的发展前景与存在的问题。     

同种异体兔关节软骨细胞移植实验研究

将幼兔关节软骨细胞复层培养后植入同种成年兔关节软骨面人为缺损部，术后１．５个月－６．５个月采用大体、ＨＥ、甲苯胺兰、番红花精０染色及放射性自显影等方法观察软骨细胞修复缺损情况。结果表明移植术后１．５个月，植入软骨细胞在局部生长，与周围原有软骨组织融合，将缺损填平。２．５个月－６．５个月仍保持透明软骨性质，无纤维化、骨化、血管长入，免疫排斥反应等。     

人胎关节软骨细胞体外培养的生物学特性

目的 研究软骨组织工程中传代软骨细胞与原代的差异。方法 用５个月人胎关节软骨分离培养细胞,观察细胞存活率、贴壁率、生长曲线和组织形态学的改变。结果 ⑴软骨块在４℃下,３ｄ内细胞存活率可达９３．４％～９７．６％。⑵原代细胞为圆形或三角形;第４代有一半转变成梭形,到第６代全部变为长梭形。⑶传代细胞贴壁时间（２～３ｈ）短于原代（４～７ｈ）。玻璃瓶内贴壁率传代细胞为７８．７％～８５．５％,原代８．８％。⑷     

胶原酶消化分离关节软骨种子细胞的优化获取

目的 探讨Ⅱ型胶原酶法消化分离关节软骨种子细胞的优化获取，以期保证获取关节软骨种子细胞的最佳生物活性。方法 采用不同浓度及不同消化时间的关节软骨细胞收获量、细胞存活率及细胞体外培养的生物活性为观察指标，探讨消化酶浓度及消化时间对于种子细胞获取量及细胞活性的影响。结果 种子细胞获取率与消化浓度无显著的线性相关关系；细胞活性在超过2．5h消化时间后显著减弱，部分细胞出现易老化现象；在0．15％消化酶浓度消化2．5h内所获取的种子细胞可达到满意的种子细胞获取率及良好的种子细胞生物活性。结论 适当浓度的胶原酶，在相应的时间内消化分离关节软骨种子细胞，或获取数量多及活性高的关节软骨组织工程种子细胞。     

FGF对兔关节软骨细胞基质胶原和蛋白多糖的影响

关节软骨的损伤与修复是目前骨科临床基础研究的一个重要课题。关节软骨损伤后的修复是极其有限的〔１〕。许多多肽生长因子在关节软骨损伤与修复中起着重要的调节作用，如成纤维细胞生长因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＦＧＦ）对中胚层来源的细胞...     

同种透明软骨移植后蛋白多糖动态变化的实验观察

通过动物实验，利用组织学、组织化学和生物化学等手段，对同种透明软骨移植后不同时期基质中的蛋白多糖含量进行了动态变化观察。结果显示，蛋白多糖含量低对移植的异体软骨能否存活极为重要。     

关节软骨的自分泌调节

目的：综术关节软骨自分泌调节的进展。方法：通过研究在局部环境中,关节软骨的主要自分泌因子在细胞分子水平对关节软骨的代谢、复等方面的调控。结果：ＩＣＦ－１,ＴＧＦ－β,ＦＧＦｓ和ＢＭＰｓ是病损致软骨基质降解时调节关节软骨细胞表型的最重要自分泌因子。ＰＴＨｒＰ为软骨自分泌旁分泌因子,在介调软骨损伤和修复过程中的细胞变化起作用。结论：关节软骨依靠大量的自分泌因子维持软骨细胞的表型和正常基质的代谢,因子间     

Pluronic F-127负载同种异体软骨细胞修复兔全厚关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨Pluronic F-127作为软骨细胞移植载体的可行性。方法:将培养的软骨细胞与20％的Pluronic F-127的混合,移植到兔膝关节软骨缺损处。在移植后4、8、12周对缺损的修复情况进行大体、光镜组织学评估和电镜观察。结果:移植的软骨细胞在载体中生长良好,形成了透明软骨。扫描电镜下可见多数成熟的透明软骨细胞。Pluronic F-127平均降解时间为6～8周,与正常软骨的再生速度基本一致。根据Wakitani制定的评分标准,采用盲法对修复质量作出评价。Pluronic F-127组和对照组的组织学评分在各个时期无显著的差异(P>0.001),而软骨细胞-载体复合体组和对照组相比在各个时期均存在显著的差异(P<0.001)。结论:Pluronic F-127可作为工程化软骨细胞安全有效的载体。     

应用自体脂肪干细胞修复猪关节软骨缺损的初步实验研究

目的 探索自体脂肪干细胞修复猪关节软骨缺损的可行性.方法 从猪背部脂肪组织中获取脂肪干细胞,经过体外培养扩增,以50×106/ml的浓度将脂肪干细胞接种于PLGA(polylacticacid/polyglycolicacid,PLA/PGA,PLGA)中,细胞材料复合物在体外成软骨诱导2周.于猪膝关节软骨非负重区形成2个直径8mm的环形、全层软骨缺损,实验组回植经诱导后的细胞材料复合物,对照组放置单纯支架材料.术后12周取材,缺损修复区行大体观察、组织学HE及藏红花染色、免疫组化检测.结果 术后12周实验组缺损区大部分被修复,缺损被软骨组织填充,修复区表面光滑.组织学染色显示有典型的透明软骨样结构.藏红花染色发现修复组织表达丰富的聚合蛋白多糖.对照组则未能修复关节软骨缺损,缺损区面积增大,表面覆盖薄层纤维组织.结论 猪自体脂肪干细胞可以作为组织工程种子细胞,修复猪关节软骨缺损.     

冷冻保存对软骨细胞活性及超微结构的影响

目的 观察梯度降温冷冻保存方法对关节软骨细胞存活率、代谢活性及软骨基质的影响。方法采用梯度降温技术对兔关节软骨进行低温冷冻保存处理,通过荧光染色、35SO4摄入率及电镜技术了解冻存后软骨细胞的存活率、代谢活性及软骨基质的冷冻损伤。结果采用梯度降温法的软骨细胞存活性率可以达到60％;冷冻保存对软骨细胞的代谢活性有一定的影响,但与对照组的差异无显著性(P>0.05);软骨基质也存在冷冻损伤,表现为基质的微小断裂。结论关节软骨的冷冻损伤不仅表现为软骨细胞活性降低,还存在软骨基质断裂。     

Sizable Scaffold‐Free Tissue‐Engineered Articular Cartilage Construct for Cartilage Defect Repair

This study introduces an implantable scaffold‐free cartilage tissue construct (SF) that is composed of chondrocytes and their self‐produced extracellular matrix (ECM). Chondrocytes were grown in vitro for up to 5 weeks and subjected to various assays at different time points (1, 7, 21, and 35 days). For in vivo implantation, full‐thickness defects (n = 5) were manually created on the trochlear groove of the both knees of rabbits (16‐week old) and 3 week‐cultured SF construct was implanted as an allograft for a month. The left knee defects were implanted with 1, 7, and 21 days in vitro cultured scaffold‐free engineered cartilages. (group 2, 3, and 4, respectively). The maturity of the engineered cartilages was evaluated by histological, chemical and mechanical assays. The repair of damaged cartilages was also evaluated by gross images and histological observations at 4, 8, and 12 weeks postsurgery. Although defect of groups 1, 2, and 3 were repaired with fibrocartilage tissues, group 4 (21 days) showed hyaline cartilage in the histological observation. In particular, mature matrix and columnar organization of chondrocytes and highly expressed type II collagen were observed only in 21 days in vitro cultured SF cartilage (group 4) at 12 weeks. As a conclusion, cartilage repair with maturation was recapitulated when implanted the 21 day in vitro cultured scaffold‐free engineered cartilage. When implanting tissue‐engineered cartilage, the maturity of the cartilage tissue along with the cultivation period can affect the cartilage repair.     

骨关节炎软骨及软骨下骨吡啶并林含量的变化

目的：测定骨关节炎（ＯＡ）软骨及软骨下骨中呢啶并林（Ｐｙｒ）含量的变化。判断Ｐｙｒ在ＯＡ诊断和现活跃程度评价方面的作用。方法：复制成年兔膝关节ＯＡ模型,取有内髁主要负重区关节软骨及软骨下骨,采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定其Ｐｙｒ含量。结果：８周内,关节软骨中Ｐｙｒ含量逐渐下降;软骨下骨中Ｐｙｒ含量在模型术后早期下降,随后逐渐升高。结论：ＯＡ关节软骨及软骨下骨的Ｐｙｒ含量随病程发生变化,可能是造     

同种异体软骨细胞移植修复兔膝关节软骨缺损的免疫反应

目的：探讨同种异体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的免疫学变化。方法：将兔分成软骨细胞移植组及骨基质明胶移植组，用免疫学及组织学方法，研究其免疫反应。结果：软骨细胞移植组术后检到淋巴细胞增殖，植入物局部见到淋巴细胞浸润。结论：同种异体软骨细胞移植存在免疫反应。