补肾中药血清对成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响

背景：课题组拟以骨形态发生蛋白作为研究靶点来认识肾虚骨质疏松症的病理机制。 目的：体外观察补肾中药血清对SD大鼠成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7活性的影响。 方法：采用多次胶原酶消化法体外培养获取新生SD大鼠颅盖骨的成骨细胞；随机将28只SD大鼠分为4组，分别灌胃补肾益精壮骨中药、补中益气颗粒剂和骨疏康颗粒，正常组不灌胃。干预8 d后，通过血清药理学方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48 h。 结果与结论：与正常组相比，补肾组和骨疏康组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平明显增加(P < 0.01)，补脾组成骨细胞骨形态发生蛋白2、7表达水平降低(P < 0.01)。结果表明补肾中药对成骨细胞保持自身功能、维持骨密度的作用上发挥重要的作用，成骨细胞中骨形态发生蛋白2、7可能有促进成骨细胞分化、增殖的功能。     

补肾活血方对去卵巢胶原诱导性关节炎大鼠垂体雌激素受体αmRNA表达的影响

背景：药理学研究显示,补肾活血方中的补肾中药如熟地、葛根等含有黄酮类物质,具有植物雌激素的作用特点,其中异黄酮具有雌激素受体调控剂的作用。 目的：观察自拟补肾活血方对胶原诱导性关节炎大鼠血清雌二醇水平及垂体雌激素受体α mRNA表达的影响。 设计、时间及地点：随机分组设计、对照动物实验, 于2006-05/2008-05在白求恩国际和平医院中心实验室完成。 材料: 健康Wistar雌性大鼠60只,随机分为2组：假手术组(n=10)和手术组(n=50)。手术组在卵巢切除术后2周复制胶原诱导性关节炎模型,选取关节炎指数≥5的大鼠再随机分为4组,每组10只：模型组、补肾活血方、甲氨蝶呤组和补肾活血方+甲氨蝶呤组。补肾活血方所用中药骨碎补、红花、熟地、仙灵脾、丹参、葛根等购自石家庄乐仁堂药店。常规煎煮,离心去杂,浓缩为1.3 kg/L的水煎液,密封分装,4 ℃冷藏备用。 方法：假手术组和模型组灌胃给予生理盐水,2 mL/d;补肾活血组：补肾活血方煎液2 mL/d灌胃;甲氨蝶呤组按2.6 mg/kg剂量灌胃1次/周,体积为2 mL,其余时间生理盐水灌胃2 mL/d;补肾活血方+甲氨蝶呤组按甲氨蝶呤2.6 mg/kg剂量灌胃1次/周,体积为2 mL,另外补肾活血方煎液2 mL/d;各组均持续6周。 主要观察指标：腹主动脉采血用磁分离酶联免疫法检测血清雌二醇水平,同时取大鼠垂体采用反转录-聚合酶链反应检测大鼠垂体雌激素受体αmRNA的表达。 结果：与模型组比较,甲氨蝶呤组雌激素受体α mRNA表达增加,但差异无显著性意义;补肾活血方+甲氨蝶呤组表达明显增加(P < 0.01);补肾活血方表达量高于甲氨蝶呤组,低于补肾活血方+甲氨蝶呤组(P < 0.05);补肾活血方、补肾活血方+甲氨蝶呤组与假手术组差异无显著性意义。与假手术组比较,模型组雌二醇水平明显降低。与模型组比较,3个治疗组雌二醇水平均有不同程度的提高,其中甲氨蝶呤组偏低,与模型组差异无显著性意义(P > 0.05),补肾活血方+甲氨蝶呤组提高最明显,接近正常水平(P < 0.01)。雌二醇与垂体雌激素受体αmRNA呈显著正相关(r=0.483,P < 0.05)。 结论：自拟补肾活血方具有拟雌激素样作用,可提高雌二醇水平,上调垂体雌激素受体αmRNA表达。     

应力缺失致骨质疏松大鼠成骨细胞细胞信号外调节激酶表达及通络生骨胶囊的影响*☆

背景：长期卧床患者和航天员应力缺失导致骨质疏松现象的发生,通络生骨胶囊具有促进骨生成的作用,可能干预应力缺失状态下骨质疏松的发生。 目的：观察应力缺失型骨质疏松动物细胞信号外调节激酶的变化以及通络生骨胶囊对其改善作用。 方法：SD大鼠40只随机分为对照组、模型组、药物高、药物低剂量组,除正常组外以鼠尾悬吊法制备动物应力缺失模型,药物高、低剂量组将通络生骨胶囊按0.6,1.2 g/kg剂量灌胃,1次/d,21 d后,取腿骨,观察骨形态变化及成骨细胞细胞信号外调节激酶的表达水平。 结果与结论：应力缺失导致骨质疏松,对细胞信号外调节激酶总量无显著影响,但显著降低其磷酸化蛋白表达;通络生骨胶囊可显著改善应力造成的骨质疏松状态,但药物高剂量组对磷酸化的细胞信号外调节激酶的表达影响不显著,药物低剂量组则还降低其表达。说明应力缺失通过降低细胞信号外调节激酶磷酸化水平导致骨质疏松,通络生骨胶囊不是通过影响细胞信号外调节激酶通路改善应力缺失导致的骨质疏松的。     

黄精多糖对骨质疏松性骨折大鼠骨代谢因子的影响**☆

背景：骨质疏松性骨折主要原因是雌激素减少所形成的高转换型骨质疏松，采用雌激素虽能够有效地治疗，但长期雌激素替代治疗会引发诸多疾病。 目的：观察黄精多糖对骨质疏松性骨折大鼠骨代谢因子的影响。 方法：6月龄雌性SD大鼠，随机分为对照组(n=8)和骨质疏松性骨折组(n=36)。骨质疏松性骨折组行卵巢切除后建立骨质疏松性骨折动物模型，再以0.066 mg/kg雌激素，400，200，100 mg/kg 黄精多糖进行灌胃，2 d/次，连续35 d。采用Elisa方法测量骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达。 结果与结论：骨质疏松性骨折大鼠的骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶的阳性表达活性升高，给予黄精多糖干预治疗后，高剂量的黄精多糖使骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶的阳性表达活性下降，而在中、低剂量组干预效果不显著。说明高剂量黄精多糖对骨质疏松性骨折大鼠具有降低骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸酶的阳性表达活性的作用，促进骨折愈合的作用。     

补肾方对骨质疏松模型大鼠骨密度及胰岛素样生长因子Ⅰ和肿瘤坏死因子α的影响

背景：研究证实，胰岛素生长因子和肿瘤坏死因子α分别具有调节成骨细胞和破骨细胞功能。 目的：实验拟验证补肾复方中药对骨质疏松模型大鼠骨密度及胰岛素样生长因子Ⅰ、肿瘤坏死因子α的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-09/2007-03在广州中医药大学动物中心和广州中医药大学附属骨伤科共同完成。 材料：选择SPF级6 月龄健康雌性SD大鼠68只，体质量约260~280 g。随机分为空白组和手术组，分别为22只和46只。术后3个月后从两组随机各选出10只以确定造模成功。造模后大鼠随机分为3组，模型组、雌激素组、中药组各12 只。剩余12只为空白对照组。补肾中药主要由淫羊藿、补骨脂、丹参、黄芪等10味中药组成，含生药量为1 430 g/L，由广州中医药大学附属骨伤科医院制剂室提供。 方法：中药组给予补肾中药按4.8 g/kg灌胃，1次/d；雌激素组给予尼尔雌醇按1 mg/kg灌胃，1次/周；模型组和空白组给予蒸馏水按10 mL/kg灌胃，1次/d，连续治疗3个月。 主要观察指标：分别测量各组大鼠全身骨密度、腰椎骨密度、双髋部骨密度，以及外周血清中的胰岛素样生长因子Ⅰ、肿瘤坏死因子α及雌激素含量。 结果：最后进入结果分析64只。①造模组全身骨密度低于空白组（P < 0.05）。②治疗后，中药组和雌激素组的全身骨密度、腰椎骨密度高于模型组（P < 0.05），中药组和雌激素组比较，差异无显著性意义（P > 0.05）。③与模型组比较，中药组能显著降低肿瘤坏死因子α水平和提高雌激素水平(P均< 0.05)，与雌激素组比较差异无显著性意义；中药组还能提高胰岛素样生长因子Ⅰ的含量(P < 0.05)，雌激素组胰岛素样生长因子Ⅰ水平明显均低于其余3组。 结论：中药补肾复方在治疗骨质疏松的过程中类雌激素样作用可能是其主要作用机制，但其对胰岛素样生长因子Ⅰ的影响不同于雌激素。     

雌激素与辛伐他汀序贯法干预对去势大鼠骨质疏松的治疗作用

背景：Frost根据骨重建的概念创建了骨重建干预理论——序贯疗法,即在骨吸收抑制剂之后可给予刺激骨形成的药物。 目的：基于骨重建干预理论,序贯应用雌激素与辛伐他汀干预骨重建吸收期和形成期,观察其对去势大鼠骨质疏松的治疗作用。 方法：3月龄雄性SD大鼠40只,以随机数字表法分为去势组与正常对照组。去势组切除双侧卵巢,正常对照组只进行下腹部皮肤单纯切开术。大鼠去势后1个月,将去势组随机分为3组：序贯组、雌激素组、去势对照组,并开始药物干预：序贯组,皮下注射苯甲酸雌二醇0.1 mg/kg,3 d给药1次,2周后,灌胃给予辛伐他汀5 mg/(kg•d)2周,停药5周,再应用辛伐他汀5 mg/(kg•d)灌胃2周;雌激素组,皮下注射苯甲酸雌二醇0.1 mg/kg,每3 d给药1次,连续用药11周;去势对照组,单纯的饲料喂养,无药物干预。11周后,双能X射线骨密度仪测定股骨骨密度,放射免疫法检测血清白细胞介素6、骨钙素水平。 结果与结论：各治疗组大鼠股骨骨密度、骨钙素水平高于去势对照组(P < 0.05),并且序贯组明显高于雌激素组(P < 0.05)。各治疗组白细胞介素6水平低于去势对照组(P < 0.05),并且序贯组低于雌激素组(P < 0.05)。说明雌激素和辛伐他汀序贯疗法可以通过抑制骨吸收,促进骨形成有效地治疗骨质疏松。     

补肾健脾方干预去势大鼠骨骼肌caspase-3和caspase-8的表达

背景：骨骼肌与骨质疏松症关系密切,导致其衰退的主要原因是细胞的凋亡,这种凋亡可能是Caspase家族蛋白所介导的。 目的：探讨补肾健脾方对去势大鼠骨骼肌caspase-3和 caspase-8调控作用。 方法：SD大鼠48只等随机分为对照组、模型组、中药组、西药组,后3组大鼠摘除双侧卵巢建立骨质疏松模型,对照组仅切除周围少量脂肪组织。造模2周后,中药组给予补肾健脾方(2.979 g/kg)灌胃,西药组给予戊酸雌二醇片(0.104 mg/kg)灌胃,模型组和对照组给予蒸馏水灌胃,1次/d。 结果与结论：①干预12周后,双能X线骨密度仪测量发现,相比于对照组,模型组大鼠左侧股骨的骨密度值和骨矿含量均明显降低(P < 0.01);而中药组和西药组的骨密度值均高于模型组(P < 0.05),且2组骨密度值和骨矿含量接近(P > 0.05)。②酶标免疫分析显示,与对照组相比,模型组骨骼肌中Caspase-3和 Caspase-8表达水平明显上升(P < 0.05)。中药能显著降低大鼠骨骼肌中Caspase-3的表达水平(P < 0.05),而西药能显著减低Caspase-8表达水平(P < 0.05)。③说明补肾健脾方对卵巢切除所致的骨质疏松症有明显的治疗作用,能明显提高骨密度,而且能显著减低Caspase-3的水平,但不能显著减低Caspase-8水平,显示补肾健脾方不是通过死亡受体途径去抑制细胞凋亡的。     

前列腺素E2复合同种异体骨治疗实验性骨缺损

背景：前列腺素E2具有促进骨生长的作用,其与同种异体骨移植块复合能否加速骨缺损的修复有待进一步证实。 目的：观察复合前列腺素E2的同种异体冻干骨移植用于治疗兔实验性骨缺损的疗效,并探讨其作用机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-11/2009-03在华中科技大学同济医学院附属梨园医院老年病研究室完成。 材料：健康雄性新西兰大耳白兔46只,体质量(1.8±0.2) kg,其中6只新西兰大耳白兔取髂骨和肩胛骨以截取骨组织块,深低温冷冻干燥灭菌后经0.01 mg/L和0.1 mg/L前列腺素E2深低温冷冻干燥复合24 h。 方法：40只大耳白兔按数字表随机分为自体骨移植组,异体骨移植组,0.01 mg/L前列腺素E2骨移植组和0.1 mg/L前列腺素E2骨移植组,每组10只。无菌条件下切除桡骨中段1.5 cm骨干和骨膜建立骨缺损实验模型,后分别移植自体骨组织块,异体骨组织,0.01 mg/L前列腺素E2异体骨组织块和0.1 mg/L前列腺素E2异体骨组织块复合。 主要观察指标：术后4周进行患处的骨影像学、组织学检测,测定钙含量及骨形态发生蛋白2表达水平。 结果：前列腺素E2复合的异体骨组织块移植修复骨缺损明显优于未处理的异体骨组织块,局部钙含量和骨形态发生蛋白2表达明显增高,且这些作用呈浓度相关性。骨影像学显示自体骨的骨痂形成速度快于异体骨,而前列腺素E2骨移植组的骨痂形成速度较自体骨移植组快,并与前列腺素浓度呈正相关。组织学检测显示自体骨的骨小梁形成数目多于异体骨,而复合组除了骨小梁形成之外,还有大量的成骨细胞、骨细胞形成,且新生毛细血管丰富。 结论：前列腺素E2复合的异体骨组织块移植能促进骨缺损的愈合,其作用机制可能与增强骨形态发生蛋白2的表达有关。     

雌二醇对铅中毒模型大鼠骨组织及骨代谢指标不能产生影响**

背景：关于铅中毒能否引起骨质疏松症及雌激素对其治疗是否有效尚无共识。 目的：观察雌二醇对去卵巢大鼠和铅中毒大鼠所致骨质疏松症的治疗效果。 方法：雌性大白鼠100只等分成正常对照组、去卵巢模型组、染铅模型组、雌二醇+去卵巢组和雌二醇+染铅模型组。建模后1周雌二醇+去卵巢组和雌二醇+染铅模型组皮下注射雌二醇(100 μg/kg),2次/1周,连续12周。 结果与结论：在去卵巢模型组和铅中毒组中骨钙、骨磷、血钙及血磷均出现降低(P < 0.01),血碱性磷酸酶升高(P < 0.01),骨组织形态呈现骨质疏松的病理改变。雌二醇+去卵巢组的骨代谢生化指标血钙、磷、和碱性磷酸酶和骨组织形态均恢复正常,而雌二醇+铅中毒组的骨代谢生化指标和骨组织形态呈现骨质疏松未出现明显改善迹象。铅中毒组和雌二醇+铅中毒组的骨铅和血铅明显高于正常对照组(P < 0.01)。说明铅中毒可引起骨质疏松的病理改变,雌二醇对去卵巢大鼠的骨质疏松症有良好治疗效果,而对铅中毒所致的骨质疏松症无明显疗效。     

去卵巢后大鼠骨组织中核因子κB受体活化因子配体和骨保护素表达的变化

背景：核因子κB受体活化因子配体在破骨细胞分化、活化和存活的生理过程中起十分重要的作用。骨保护素作为核因子κB受体活化因子配体的诱骗受体,对破骨细胞有相反作用。 目的：观察去卵巢后大鼠骨组织内核因子κB受体活化因子配体、骨保护素mRNA、蛋白表达和骨密度的时间变化规律。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室完成。 材料：6月龄健康雌性SD大鼠50只,体质量300~320 g。随机平均分成去卵巢组和对照组。 方法：建立去卵巢大鼠模型,于术后2,4,6,8,10周取股骨髁。 主要观察指标：测量股骨髁的骨密度,检测骨组织核因子κB受体活化因子配体、骨保护素的mRNA、蛋白表达情况。 结果：去卵巢后大鼠股骨髁的骨密度与对照组相比于第6周开始出现显著降低(P < 0.05);核因子κB受体活化因子配体mRNA水平在第4周达到高峰,蛋白水平在第6周达到高峰,此后均呈持续高表达,与对照组相比,各时间点表达水平差异具有显著性(P < 0.05);骨保护素 mRNA水平在第4周达到高峰,蛋白水平在第2周达到高峰,此后均迅速下降,与对照组相比,各时间点表达水平差异具有显著性(P < 0.05)。 结论：大鼠去卵巢后股骨髁是骨密度变化的敏感部位;核因子κB受体活化因子配体持续高表达,骨保护素表达短期内升高,迅速降低是骨质疏松的直接原因。     

双参口服液对醋酸泼尼松致骨质疏松症大鼠骨质和骨量的影响

背景：双参口服液由人参、丹参组成的复方,初次用于糖皮质激素类药物致导骨质疏松方面的研究。 目的：通过糖皮质激素建立大鼠骨质疏松动物模型,观察双参口服液对大鼠骨质和骨量的干预作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-06/09在广东医学院动物实验中心及药理教研室完成。 材料：双参口服液高剂量制剂是用丹参3.6 kg,人参5 kg,加水水提2次,质量浓度为870 g/L;在此基础上稀释3倍,得到低剂量制剂,质量浓度为290 g/L。醋酸泼尼松原料药为浙江仙琚制药股份有限公司产品。 方法：SPF级3月龄雄性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只。正常对照组上午给予蒸馏水5 mL/(kg•d)灌胃,醋酸泼尼松组给予0.7 g/L醋酸泼尼松混悬液5 mL/(kg•d)灌胃。双参组先给予0.7 g/L醋酸泼尼松混悬液5 mL/(kg•d)灌胃后3 h,分别给双参口服液高、低剂量制剂按5 mL/(kg•d)灌胃。88 d后心脏抽血处死大鼠。 主要观察指标：检测各组大鼠体质量,单位骨中骨矿及骨羟脯氨酸含量;检测各组大鼠左股骨骨密度;右股骨生物力学指标。 结果：长期应用醋酸泼尼松抑制大鼠体质量增长(P < 0.01),骨钙、骨羟脯氨酸含量和骨密度明显减少(P < 0.01或0.05),股骨的最大载荷、弹性载荷和弯曲能量均减小(P < 0.01或0.05)。双参口服液无论高剂量还是低剂量用药对上述指标均有不同程度的改善(P < 0.01或0.05)。 结论：长期应用醋酸泼尼松可致骨质丢失,骨密度降低,骨生物力学特性降低。双参口服液在所用剂量下具有预防醋酸泼尼松致大鼠骨质疏松的作用。     

Expression of bone morphogenetic protein 7 in the cerebral cortex of rats after ischemia-hypoxic injury

BACKGROUND: Some researches demonstrate that exogenous bone morphogenetic protein 7 (BMP-7) can protect ischemic cerebral nerve tissue and promote recovery of motor energy function; however, there is lack of direct evidences of endogenous BMP-7 effect. OBJECTIVE: To observe the expression of endogenous BMP-7 in nerve tissue with ischemic-hypoxic injury and investigate the possible effects on damaged nerve tissue. DESIGN: Observational contrast animal study. SETTING: Department of Anatomy and Histoembryology, Peking University Health Science Center. MATERIALS: The experiment was carried out in the Nerve Researching Laboratory of Anatomy Department, Peking University Health Science Center from October 2006 to March 2007. A total of 25 adult male SD rats weighing 250–300 g and several newborn SD rats were selected from Experimental Animal Center, Peking University Health Science Center. Rabbit-anti-BMP-7 polyclonal antibody was provided by Wuhan Boster Company. METHODS: ① Adult rats were randomly divided into ischemia group (n =10), sham operation group (n = 10) and normal group (n =5). Right external-internal carotid artery occlusion was used to infarct middle cerebral artery of adult rats in the ischemia group so as to copy focal cerebral infarction models. Line cork was inserted in crotch of internal and external carotid artery of adult rats in the sham operation group, while adult rats in the normal group were not given any treatments. ② Cerebral cortex of newborn rats was separated to obtain cell suspension. Cells which were cultured for 10 days were divided into control group and hypoxia/reoxygenation group. And then, cells in the hypoxia/reoxygenation group were cultured in hypoxic incubator for 4 hours and given reoxygenation for 24 hours. MAIN OUTCOME MEASURES: Immunohistochemical method was used to measure expression of BMP-7 in cerebral cortex at 24 hours after ischemia/reperfusion culture and in primary hypoxic culture. RESULTS: ① At 24 hours after cerebral ischemia, expression of BMP-7 in cerebral cortex on ischemic side was stronger than that on non-ischemic side in adult rats; meanwhile, numbers of cell expression were increased. However, expression of BMP-7 was not detected in bilateral cerebral cortex of adult rats in both control group and sham operation group. ② After hypoxia of cerebral cortex in primary culture, positive products of BMP-7 were observed in plasma of neuron, but expression of BMP-7 was not found in normal cerebral cortex. CONCLUSION: Endogenous BMP-7 has protective effects on nerve tissue induced by ischemic-hypoxic injury.     

丹参素对大鼠牙槽骨代谢的影响*

背景：有研究表明胰岛素样生长因子Ⅰ降低是骨丢失的早期标志。 目的：测定大鼠牙槽骨组织中胰岛素样生长因子Ⅰ的活性,探讨丹参素防治牙槽骨骨质疏松症的可能机制。 方法：SD大鼠随机分为对照组、去卵巢组和丹参素组,后两组行双侧卵巢切除,对照组和去卵巢组用蒸馏水灌胃,丹参素组用丹参素12.5 mg/(kg•d)灌胃。给药90 d后取大鼠牙槽骨,检测牙槽骨量、牙槽骨组织中胰岛素样生长因子Ⅰ活性。 结果与结论：与对照组相比,去卵巢组骨小梁面积百分数减少33.88%(P < 0.05),骨小梁分离度增加43.58%(P < 0.05),牙槽骨骨量明显减少,牙槽骨组织中胰岛素样生长因子Ⅰ表达变少、变弱(P < 0.05)。与去卵巢组相比,丹参素组骨小梁面积百分数增加了45.45%(P < 0.05),牙槽骨骨量明显增多,牙槽骨组织中胰岛素样生长因子Ⅰ表达增强(P < 0.05)。结果证实,丹参素能促进牙槽骨组织胰岛素样生长因子Ⅰ活性,防止去卵巢大鼠牙槽骨的丢失。     

腭中缝牵张成骨中骨形成蛋白2的表达

背景：正畸医生常常通过扩大腭中缝矫正上颌骨横向发育不足。骨形成蛋白2可以诱导骨和软骨的形成,促进牵张成骨过程中的骨重建。然而关于骨形成蛋白2在腭中缝牵张成骨中的时间空间表达规律尚不清楚。 目的：观察骨形成蛋白2在大鼠腭中缝牵张成骨过程中的表达规律。 方法：实验选用80只5周龄雄性Wistar大鼠,分为实验组和对照组(包括阴性对照和空白对照)。将初始力值为50 g的腭中缝扩大簧黏接到大鼠两侧上颌牙列上建立大鼠腭中缝牵张模型,牵张1,4,7,14 d后,采用免疫组织化学和实时定量荧光PCR方法分析骨形成蛋白2蛋白和mRNA在各加力时间点的表达。 结果与结论：腭中缝扩张后骨形成蛋白2蛋白表达水平显著增加,且存在时空表达差异,主要定位于腭中缝纤维组织、软骨细胞层、骨细胞和成骨细胞胞浆及其细胞外基质。同时,骨形成蛋白2 mRNA表达也明显上调。提示腭中缝牵张力可刺激骨缝中骨形成蛋白2蛋白和mRNA的合成,在骨缝塑建过程中发挥重要作用。 鼠     

Effects of bone morphogenetic protein-4 on spatial memory and cholinergic expression in the dentate gyrus after fornix-fimbria transection in rats

BACKGROUND: Previous experiments have confirmed bone morphogenetic proteins (BMPs) upregulate cholinergic expression in neurons isolated from the embryonic rat hippocampus and cerebral cortex. Therefore, BMPs could be useful for treating Alzheimer's disease and other neurodegenerative diseases. OBJECTIVE: BMP-4 was infused into the hippocampal dentate gyrus of fornix-fimbria transected rats to test the effects of BMP-4 on cholinergic expression in dentate gyrus neurons, and to observe changes in spatial memory behavior. DESIGN: A randomized controlled animal experiment. SETTING: Department of Neurosurgery and Laboratory for Cell Biology, Institute of Geriatrics, General Hospital of Chinese PLA.MATERIALS: Twenty-seven healthy adult male Sprague Dawley (SD) rats, weighing 250-300 g, were provided by the Laboratory Animal Center of the General Hospital of Chinese PLA. Reagents: BMP-4 (B-2680, Sigma Company) and choline acetyl transferase (ChAT) antibody (AB5042, Chemicon Company) were used in this study. Equipments: a rat stereotaxic instrument (type: SN-2N, Narushige Group, Japan) and Image-prog-plus image analysis software (Media Cybernetics company, USA) were used in this study. The protocol was carried out in accordance with ethical guidelines for the use and care of animals.METHODS: This experiment was performed in the Institute of Geriatrics, General Hospital of Chinese PLA between July 2004 and March 2005. Rats were randomly divided into 4 groups: Alzheimer's disease group (n = 7), normal control group (n = 5), BMP-4-Alzheimer's disease group (n = 8), and model group (n = 7). In the Alzheimer's disease group, the left hippocampal fornix-fimbria of rats was transected to mimic Alzheimer's disease symptoms. In the BMP-4-Alzheimer's disease group, 1 μL BMP-4 (10 mg/L) was perfused into the left dentate gyrus with a microinjector at 1 μL/min. In the model group, 1 μL saline was perfused into the same position by the same method. Twenty-eight days after injection, Morris water maze test was performed in all rats to test spatial memory. Time-to-platform and swim-path length were recorded. Immunohistochemical staining of cholinergic neurons was performed on brain sections containing dentate gyrus. The area covered by ChAT-positive cells was analyzed using an Image-prog-plus image analysis software. MAIN OUTCOME MEASURES: Area covered by ChAT-positive cells in the dentate gyrus. Time-to-platform and swim path-length.RESULTS: Twenty-seven rats were included in the final analysis. In the Alzheimer's disease group, the area covered by ChAT-positive cells was significantly smaller compared with the normal control group (F = 76.03, P < 0.01). The area covered by ChAT-positive cells was significantly larger in the BMP-4- Alzheimer's disease group than in the model group (F = 35.17, P < 0.05), but significantly smaller than in the normal control group (F = 40.17, P < 0.05). Time-to-platform and swim-path length were significantly longer in the Alzheimer's disease group than in the normal control group (F =24.62 and 631.58, respectively, both P < 0.05). Time-to-platform and swim-path length were significantly shorter in the BMP4-Alzheimer's disease group compared with the model group (F = 22.06 and 606.89, respectively P < 0.05).CONCLUSION: Injection of BMP-4 into the dentate gyrus of Alzheimer's disease model rats alleviates central cholinergic system injury and concomitantly improves spatial memory.     

骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠肾脏nephrin表达的影响*★

背景：目前对于骨髓间充质干细胞移植治疗急性肾损伤的研究较多，但对治疗慢性肾脏疾病的研究报道甚少。 目的：观察经腹主动脉近肾动脉处移植的骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠足细胞的修复作用及对肾脏Nephrin mRNA表达的影响。 方法：全骨髓法+贴壁筛选法分离培养纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞用于移植。SD大鼠随机数字表法分为3组：正常组为正常SD大鼠，无任何干预措施；模型组大鼠尾静脉1次注射阿霉素5 mg/kg+当日腹主动脉注入生理盐水1 mL；骨髓间充质干细胞治疗组大鼠尾静脉1次注射阿霉素5 mg/kg+当日腹主动脉注入干细胞1×107 个，体积约1 mL。各组于处理后7，14，28 d 3个时间点各取8只大鼠用于取材。流式细胞仪对骨髓间充质干细胞表面分子进行鉴定，磺基水杨酸-硫酸钠比浊法测24 h尿蛋白，全自动生化分析仪测血生化指标(白蛋白、血脂)，苏木精-伊红染色及透视电镜下观察肾组织的病理变化，RT-PCR检测肾组织Nephrin mRNA的表达。 结果与结论：①与正常组相比，模型组大鼠均出现肾病综合征表现，以腹水、大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症及足细胞足突广泛融合为特征；骨髓间充质干细胞治疗组较模型组则有明显改善。②与正常组相比，模型组大鼠肾组织Nephrin mRNA表达明显降低(P < 0.05)；骨髓间充质干细胞治疗组与模型组相比，肾组织Nephrin mRNA表达有所回升(P < 0.05)。提示骨髓间充质干细胞移植能明显增加阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin mRNA的表达，并对受损的肾脏组织起到一定的保护作用。     

淫羊藿及骨形态发生蛋白2与家兔的骨折愈合*

背景：淫羊藿是防治骨质疏松症的中药,但对骨折愈合的治疗尚缺乏依据。 目的：观察中药淫羊藿对家兔骨折愈合的作用。 方法：建立家兔单侧桡骨3 mm骨折动物模型,随机将其分为空白组、对照组和实验组。空白组予生理盐水灌胃加骨折局部注射生理盐水,实验组予中药淫羊藿熬制液灌胃加骨折局部注射生理盐水,对照组予生理盐水灌胃加骨折局部注射骨形态发生蛋白2。在术后2,4,8周,每组各取4只兔子通过X射线摄片、骨密度测定、生物力学测试(仅8周时)以及组织切片等评价骨折愈合的程度。 结果与结论：在各个时期段,X射线摄片显示实验组和对照组在骨痂的形成、改建及髓腔再通等均比空白组要好。实验组骨密度均优于空白组(P < 0.05),实验组和对照组之间差异无显著性意义(P > 0.05)。实验组生物力学性能优于空白组(P < 0.05),对照组数值介于两者之间。实验组和对照组在胶原纤维、软骨组织、骨小梁及骨基质的形成时期均早于空白组,实验组和对照组之间无显著性差异。提示淫羊藿能促进家兔骨折愈合。