微波-EDTA脱钙技术在免疫组织化学染色中的应用研究

目的探讨微波(MW)—乙烯二胺四乙酸钠(EDTA)快速脱钙技术对骨及软组织抗原活性的影响。方法根据实验条件将待脱钙组织分为4组，即MW—EDTA(15℃)，Jenkins脱钙-固定液(20℃)，10％EDTA(20℃)和10％硝酸(20℃)，其中Mw—EDTA方法中EDTA的浓度分别是4％、7％、10％、13％和16％。应用免疫组织化学路AB染色，光镜观察免疫组织化学染色结果。结果MW—EDTA脱钙的免疫组织化学染色阳性细胞显著高于Jenkins脱钙—固定液(20℃)、10％ED—TA(20℃)及10％硝酸脱钙(20℃)3种脱钙方法，其时间明显缩短。其中用10％和13％浓度的EDTA脱钙的组织，其免疫组织化学染色阳性细胞又明显多于EDTA浓度为4％、7％和16％者。结论以Mw—10％EDTA技术进行组织脱钙，其脱钙时间短、免疫组织化学染色效果好。     

采用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中HSP70的表达及意义

目的:探讨使用组织芯片技术,观察热休克蛋白在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法:以50例鼻咽癌患者鼻咽部存档石蜡标本为观察研究对象,采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织中HSP 70的表达。结果:50例鼻咽癌组织中HSP70阳性表达为72%(36/50),与采用常规制片方法进行免疫组织化学染色片对比,阳性率、阳性表达强度结果基本一致,鼻咽癌中颈淋巴结转移阳性组的HSP70表达高于阴性组,差异具有显著性,P<0.01。结论:HSP70表达与鼻咽癌相关,HSP70可作为评价鼻咽癌患者预后的指标。使用自制组织芯片进行HSP70免疫组织化学染色分析,效果良好,显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组织化学染色和实验分析的良好前景。     

EDTA抗原修复液用于促蓝液的应用和体会

目的探讨EDTA抗原修复液是否可用做HE染色和免疫组织化学染色的促蓝液。方法分别采用HE染色法及免疫组织化学染色对脱钙后骨组织(10例)、冰冻脂肪组织(10例)、平滑肌组织(10例)、甲状腺组织(10例)及肠癌组织进行染色(10例)。分别采用流水冲洗、43℃温水、即用型PBS、pH=9.0 EDTA修复液作为促蓝液进行蓝化。结果在HE染色组的5种蓝化方式中,以EDTA抗原修复液蓝化2min(实验时间为夏天)蓝化最充分、效果最佳、不易脱片、层次分明、细胞核蓝色鲜艳、核膜及染色质形态结构特点清楚、核浆对比度明显;在免疫组织化学染色组,复染苏木精后,经EDTA抗原修复液蓝化2min,各组组织细胞核结构显示清晰,能很好的衬托组化阳性信号。结论 HE染色和免疫组织化学染色均可以将EDTA抗原修复液用于促蓝液,且在免疫组织化学染色中,EDTA抗原修复液的效果与流水冲洗效果相当,而且节省了蓝化的时间。     

肾脏原发性平滑肌肉瘤3例临床病理分析

目的 探讨肾脏原发性平滑肌肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断.方法 对3例肾脏平滑肌肉瘤进行常规HE染色,光镜观察,并同时进行组织化学及免疫组织化学染色.结果 3例显微镜下的形态特点、组织化学及免疫组织化学染色均显示平滑肌源性恶性肿瘤的特点.结论 肾脏原发性平滑肌肉瘤很少见,临床诊断比较困难,但根据其病理特征,结合组织化学及免疫组织化学染色可以确诊.复习国内外有关文献,该类肿瘤恶性度高,且位置深,一般发现已属晚期,故其预后甚差.化疗、放疗效果均不理想,病肾根治性切除术是唯一有效治疗方法 .     

微波-EDTA脱钙技术在免疫组织化学染色中的应用研究

目的探讨微波(MW)-乙烯二胺四乙酸钠(EDTA)快速脱钙技术对骨及软组织抗原活性的影响.方法根据实验条件将待脱钙组织分为4组,即MW-EDTA(15℃),Jenkins脱钙-固定液(20℃),10%EDTA(20℃)和10%硝酸(20℃),其中MW-EDTA方法中EDTA的浓度分别是4%、7%、10%、13%和16%.应用免疫组织化学LSAB染色,光镜观察免疫组织化学染色结果.结果MW-EDTA脱钙的免疫组织化学染色阳性细胞显著高于Jenkins脱钙-固定液(20℃)、10%ED-TA(20℃)及10%硝酸脱钙(20℃)3种脱钙方法,其时间明显缩短.其中用10%和13%浓度的EDTA脱钙的组织,其免疫组织化学染色阳性细胞又明显多于EDTA浓度为4%、7%和16%者.结论以MW-10%EDTA技术进行组织脱钙,其脱钙时间短、免疫组织化学染色效果好.     

微波技术在病理检查过程中的应用

微波技术在病理检查过程中的应用福建省立医院林天铭微波（Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ，简称ＭＷ）是一种波长短、频率高的电磁波，近年来人们成功地将ＭＷ应用于常规的病理检查工作中，包括组织固定、脱水、染色、免疫组织化学染色和电镜等方面。与经典的光镜、免疫组织化学染色...     

免疫组织化学染色技术的应用体会

随着免疫组织化学染色技术的广泛应用,病理学研究产生了划时代的飞跃。根据标记物的不同,免疫组织化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术、免疫酶细胞化学技术、免疫铁蛋白技术、免疫金-银细胞化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等。不同的免疫细胞化学技术各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是相似的,都包括抗体的制备,组织材料的处理。免疫染色,对照试验,显微镜观察等步骤。下面以美国ZYMED公司SP试剂盒免疫组化染色步骤为例谈几点体会。     

免疫组织化学染色技术实际应用体会

随免疫组织化学染色技术的广泛应用,病理学研究产生了划时代的飞跃.根据标记物的不同,免疫组织化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术、免疫酶细胞化学技术、免疫铁蛋白技术、免疫金-银细胞化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等.不同的免疫细胞化学技术各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是相似的,都包括抗体的制备,组织材料的处理,免疫染色,对照试验,显微镜观察等步骤.下面以美国Zymed公司CSA 试剂盒免疫组化染色步骤为例谈几点体会.     

微波技术在大、小脑神经元镀银染色中的应用

以往常用火棉胶镀银染色技术制作大、小脑组织切片，观察大、小脑皮质神经元的微细形态结构，但其制作过程长，不能做连续切片和较薄的切片。且染色过程繁琐，染色效果也不稳定。微波是一种高频电磁波，能产生高热效应和高速分子运动，国内、外少数学者利用微波技术对免疫组织化学染色、网状纤维和胃肠内分泌细胞等镀银染色方法进行了研究。但对大、小脑神经元微波镀银染色尚少见报道，笔者运用微波技术制作大、小脑神经元镀银染色石蜡切片，报告如下。     

两种方法诊断慢性子宫内膜炎的比较

目的比较两种病理学诊断方法诊断慢诊断性子宫内膜炎的差异。方法获取的标本分别采用HE染色法与免疫组织化学染色联合检测CD38、CD138方法诊断慢性子宫内膜炎,比较两组诊断阳性率。结果与HE染色组诊断阳性率(3.57%)相比,免疫组织化学染色联合检测CD38、CD138组诊断阳性率(26.19%)更高,差异有统计学意义(x2=36,P0.05)。结论与传统方法比较,采用免疫组织化学联合检测CD38、CD138方法对诊断慢性子宫内膜炎更具灵敏性和特异性。     

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌 A549细胞增殖抑制作用

目的：研究尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I（ AAVC-I） 对人肺癌A549细胞增殖抑制及凋亡的作用。方法： 采用MTT法检测不同浓度的AAVC-I对A549细胞的24 h 与48 h 抑制率;应用HE染色、Hoechst33258荧光染色,从形态学观察细胞凋亡;采用免疫组化的方法,检测bax蛋白表达的变化。结果： MTT显示,AAVC-I能抑制A549细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;AAVC-I处理24 h 后,镜下可见细胞核固缩,核深染及凋亡小体;免疫组化显示,随药物浓度增加,平均光密度值呈递增趋势,表明bax蛋白表达相应上调。结论：尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌A549细胞具有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与bax表达上调有关。     

前哨淋巴结活检在结直肠癌中的临床应用研究

目的探讨前哨淋巴结活检(SLNB)在结直肠癌根治术中的可行性及其应用价值。方法应用美蓝对43例结直肠癌患者行前哨淋巴结(SLN)定位活检,采用HE染色病理检查法、CK-20免疫组化染色检查法。结果共检出淋巴结705枚,其中SLN 73枚,43例患者中40例检出SLN,平均1.83枚/例。入组患者SLN的转移率明显高于区域淋巴结的转移率(P0.01);免疫组化检测SLN癌转移的敏感性明显高于HE染色,而假阴性明显低于后者。结论结直肠癌根治术中SLN定位具有切实的可行性,能够预测区域淋巴结的转移状况,对指导结直肠癌术中切除范围及术后病理分期和制定综合治疗方案有一定意义。     

OCT 4 immunohistochemistry in postpubertal cryptorchidism

Patients with cryptorchidism are at an increased risk for germ cell testicular cancer. OCT 4 has been shown to be a sensitive and specific marker for some types of germ cell testicular cancer. We undertook this study to establish whether OCT 4 immunohistochemistry is a useful tool in the pathohistologic evaluation of postpubertal patients with cryptorchidism. Seventeen postpubertal patients underwent orchidectomy for cryptorchidism at our center since 1997. Immunohistochemical staining with OCT 4 was performed on these samples. Characteristic OCT 4 nuclear staining was positive in two patients. One patient was correctly diagnosed on previous pathohistological evaluation, while OCT4 immunohistochemical staining revealed previously unidentified intratubular germ cell neoplasia in the other patient. OCT 4 immunohistochemistry can be useful in diagnosing a testicular germ cell tumor in patients with cryptorchidism. If we consider a low number of postpubertal patients with cryptorchidism a benefit of immunohistochemical staining with OCT4, this could favor the use of OCT 4 staining in work-up of cryptorchidism.     

不同抗原修复方法在免疫组化染色的应用比较

目的 研究不同抗原修复方法 对食管癌中免疫组化染色结果 的影响.方法 选取Ki67、IL17、CD4和CDs四种分别定位于细胞核、细胞浆与细胞膜的不同抗原做为免疫组化染色的标记,在食管癌连续切片上应用高压抗原修复和微波抗原修复进行比较分析.结果 抗原高压修复的染色效果要优于微波修复.一方面,CD4抗原高压修复染色的阳性率要高于微波修复染色的阳性率;另一方面,CD8、Ki-67和IL-17高压修复染色的阳性率与微波修复染色的阳性率无显著性差异.结论 在组织不易脱片的情况下,优先考虑使用抗原高压修复;在微波修复与高压修复染色阳性率没有显著性差异的情况下,应该尽可能选择微波修复这种较柔和的方法 以避免组织脱片.     

胰岛素受体在多囊卵巢综合征患者子宫内膜的表达与调控

目的探讨胰岛素受体在多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜的表达与意义。方法用免疫组织化学的方法检测44例PCOS患者与28例对照组子宫内膜胰岛素受体蛋白的表达。结果胰岛素受体蛋白在PCOS增殖期与对照组增殖期子宫内膜的表达差异无统计学意义,PCOS子宫内膜增殖症的腺上皮细胞表达显著高于PCOS增殖期以及对照组增殖期,PCOS分泌期子宫内膜的表达低于对照组分泌期。结论增加的胰岛素受体与超生理剂量的胰岛素结合可能是导致子宫内膜的异常增生的原因之一;胰岛素受体可能参与子宫内膜的转化。     

Apoptosis of a human non-small cell lung cancer (NSCLC) cell line, PLA-801, induced by acutiaporberine, a novel bisalkaloid derived from Thalictrum acutifolium (Hand.-Mazz.) Boivin

Acutiaporberine is a novel ether-linked bisalkaloid isolated from the traditional Chinese medicinal herb Thalictrum acutifolium (Hand.-Mazz.) Boivin (TAB). The present study demonstrates for the first time, by means of nuclear staining, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry, that acutiaporberine induces apoptosis in PLA-801 cells, a cultured human non-small cell lung cancer (NSCLC) cell line. An immunohistochemical assay and western immunoblot analysis showed down-regulation of the bcl-2 gene and up-regulation of the bax and c-myc genes in the acutiaporberine-treated cells. The observations also indicate that acutiaporberine induces apoptosis of PLA-801 cells in a concentration- and time-dependent manner. These results suggest that acutiaporberine may be a potential, natural apoptosis-inducing agent for NSCLC.     

Immunohistochemical studies on tenascin in extrahepatic bile duct remnants of biliary atresia

The expression of tenascin in the extrahepatic bile duct remnants in biliary atresia was investigated using an immunohistochemical method. Tenascin is thought to be a marker of repair of injured tissues based on an immunohistochemical study of a variety of tissues. Twenty-three specimens were obtained from 23 cases (2 correctable type and 21 non-correctable type) of biliary atresia at the time of the definitive operation. Positive tenascin staining was observed in matrices surrounding degenerated epithelium of the bile ductules in the obliterated extrahepatic bile duct. Regarding the correlation between the size of the bile ductule and the degree of positive staining, the larger diameter bile ductules tended to show a higher degree of positive staining. Furthermore, regarding the correlation between the degeneration of epithelium and the degree of staining, the bile ductules with the more significantly denuded epithelium tended to show a higher degree of positive staining. In some specimens classified as non-correctable type, a lumen larger than 1 millimeter in diameter without epithelium was observed. This ductule itself was thought to be the original extrahepatic bile duct because strong tenascin staining was observed surrounding this lumen. These findings suggested that the extrahepatic bile duct might be obliterated after the completion of the hepatobiliary tree system and the bile ductules in the obliterated extrahepatic bile duct might be degenerated in order of their size.     

双环己铜草酰二腙诱导的脱髓鞘小鼠造模方法的改进

目的 改进双环己铜草酰二腙（cuprizone,CPZ）诱导脱髓鞘小鼠模型的制备方法,为治疗脱髓鞘疾病提供更精准快速的动物模型。方法 取60只18~20 g的C57BL/6小鼠,分成空白对照组,CPZ灌胃组（共4组,300 mg·kg^-1,qd,bid,tid,qid）,CPZ饲喂组（即传统模型组）,每组10只。空白对照组及CPZ灌胃组给予正常饲料,CPZ饲喂组给予0.2% CPZ混合鼠饲料连续饲喂6周构建小鼠脱髓鞘模型,通过免疫组化和髓鞘染色技术LFB检测髓鞘脱失情况,并比较CPZ灌胃模型和传统模型诱导小鼠急性髓鞘脱失的差异。结果 作用3周后,4组CPZ灌胃组的小鼠脑胼胝体区髓鞘碱性蛋白MBP染色与对照组相比均明显减少,而传统模型中小鼠脑胼胝体区MBP在第3周并未显著改变,在第6周明显减少。LFB染色结果表明CPZ灌胃3周后小鼠脑胼胝体区染色显著减少。结论 改进后的模型（小鼠CPZ灌胃模型）小鼠在第3周即能出现脱髓鞘现象,能有效缩短时间,具有显著优越性,且CPZ剂量可控,保证模型的精准性。     

不同检测试剂盒及抗原修复方法对环氧化酶-2在乳腺癌中表达的影响

目的观察不同检测试剂盒、不同抗原修复方法及修复液对乳腺癌环氧化酶-2（COX-2）表达的影响。方法①选取即用型和浓缩型COX-2单克隆抗体为70例乳腺癌组织标本进行免疫组化染色标记,浓缩型COX-2以1：80浓度稀释。②实验分为抗原未修复组和抗原修复组,抗原修复组又分别采用高温高压-EDTA缓冲液法（修复1组）、高温高压-枸橼酸缓冲液法（修复2组）、光波/微波-EDTA缓冲液法（修复3组）、光波/微波-枸橼酸缓冲液法（修复4组）做抗原修复处理。结果浓缩型COX-2的表达率明显比即用型COX-2高,且部分即用型阴性者浓缩型阳性,两者相比差异有统计学意义（χ2=25.3,P〈0.01）。各抗原修复组染色效果比抗原未修复组好（P〈0.01）。修复1组与修复3组、修复2组与修复4组相比,修复1组和修复2组抗原修复染色效果好,差异无统计学意义（P〉0.05）;修复1组与修复2组、修复3组与修复4组相比,修复1组和修复3组抗原修复染色效果好,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论即用型COX-2在乳腺癌中的表达存在假阴性,建议使用浓缩型COX-2抗体;光波/微波-EDTA缓冲液法修复COX-2抗原可明显提高免疫组化染色的敏感性,具有定位准确、阳性率高、操作简单、安全、组织结构保存好、不易掉片等优点。     

肺癌组织中错配修复基因hMLH1、hMSH2表达的研究

目的:探讨人类错配修复基因hM LH 1、hM SH 2在肺癌组织中的表达及意义。方法:运用免疫组织化学S-P法对56例肺癌组织中hM LH 1、hM SH 2的表达进行检测。结果:56例肺癌组织中hM LH 1的阳性表达率为35%,hM SH 2阳性表达率为28.6%,分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者(P<0.01),有淋巴结转移者hM LH 1及hM SH 2阳性率低于无淋巴结转移者(P<0.05),不同病理组织学类型之间hM LH 1及hM SH 2表达无显著差别(P>0.05)。结论:hM LH 1及hM SH 2基因的缺陷与肺癌的发生发展过程并与其分化程度及有否淋巴结转移有关。