树舌多糖GF对HepA瘤细胞C-myc蛋白表达的影响

1材料和方法实验动物:昆明种小白鼠,20±2g,雌雄各半,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供.瘤株:由黑龙江肿瘤研究所引进,以腹水传代.无菌取腹水,以0.2ml/只接种于小鼠右侧腋窝下.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞MDM-2基因表达的影响研究

应用免疫组化技术对HepA瘤细胞中MDM-2基因的表达量进行分析,以探讨树舌多糖抗肿瘤的分子机制.目的:研究树舌多糖GF对HepA瘤细胞MDM-2表达的影响.方法:应用SP免疫组化染色技术和多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中MDM-2的表达.结果:树舌多糖组中MDM-2的表达量均显著低于模型组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:初步认为树舌多糖GF可通过降低MDM-2的表达而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras基因表达的影响.方法:运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细包中N-ras mRNA量及N-Ras蛋白的表达量.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras mRNA量及Ras蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:初步认为树舌多糖GF可通过降低N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N—ras、C—myc蛋白表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、c-myc蛋白表达的影响.方法:运用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc蛋白的表达量.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-mye蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc蛋白的表达,抑制He-pA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞凋亡影响的初探

目的 :观察树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞凋亡的影响 ,进一步研究树舌多糖GF抗肿瘤机制。方法 :将实体瘤常规制备成细胞悬液 ,用流式细胞仪进行分析。结果 :树舌多糖组与阴性对照组比较 ,Ap峰明显增高 ,细胞凋亡率、S期细胞数、G2 -M细胞数均有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :树舌多糖GF能够诱导细胞凋亡 ,并且能够使细胞阻滞于S期不进入M期。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞p53基因表达的影响

目的 :为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤组织 p5 3基因表达水平的影响。方法 :用酶联免疫反应测定 p5 3多克隆抗体。结果 :荷瘤对照组 p5 3基因表达较空白对照组增加非常显著 (p <0 .0 1 ) ,而树舌多糖GF组较荷瘤对照组 p5 3基因表达减少非常显著 (p <0 .0 1 ) ,较正常组织有显著差异 (p <0 .0 5 ) ,其 p5 3平均表达量较空白对照组低 ;猪苓多糖对照组较荷瘤对照组 p5 3基因表达水平减少非常显著 (p <0 .0 1 ) ,接近空白对照组 (p >0 .0 5 )。结论 :初步认为树舌多糖GF可能直接作用 (或通过癌基因 )影响HepAcellsp5 3基因的表达频率。     

原位杂交法检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞N—ras基因mRNA表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤细胞癌基因N-ras mRNA水平的影响.方法:应用地高辛标记探针原位杂交技术,检测树舌多糖GF对HepA瘤细胞中癌基因N-ras mRNA丰度的作用.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中mRNA表达量均显著低于模型组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:树舌多糖GF可通过调节N-ras基因mRNA的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞p16基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞p16基因表达的影响，本实验用链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶免疫组化法来测定细胞中p16蛋白含量，通过多媒体图像分析系统分析实验结果，结果表明，树舌多糖GF组，猪苓多糖组与荷瘤对照组比较，p16表达增加均非常显著（P＜0．01），树舌多糖组与猪苓多糖组比较，差异非常显著（P＜0．01），因此可初步认为使抑癌基因p16表达增强，是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一，树舌多糖GF作用后小鼠HepA瘤细胞中p16，Rb基因表达增强，共同作用可启动细胞周期的负反馈调节，细胞周期的负调节增强，从而阻止无限制从G1期进入S期，抑制细胞增殖失控，起到抗肿瘤作用。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞Rb基因表达的影响

目的 探讨树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞Rb基因表达的影响。方法 本实验用链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶免疫组化法来测定细胞中Rb蛋白含量，通过多媒体图像分析系统分析实验结果。结果 树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较，差异均非常显著（P＜0．01），即树舌多糖GF、猪苓多糖能促使HepA瘤细胞中Rb基因表达明显增强；树舌多糖组与猪苓多糖组比较，差异非常显著（P＜0．01），即树舌多糖GF更能明显增强Rb基因表达，优于猪苓多糖。结论 树舌多糖GF抗瘤作用机理之一是作用于抑癌基因Rb并使之表达增强。     

树舌多糖GF对小鼠肝癌H_(22)细胞P53及RB基因的影响

目的:为探明树舌多糖GF对肝癌H22瘤细胞RB基因及P53基因的影响。方法:用ELISA法检测RB基因及P53基因用药前后表达的差异。结果:树舌多糖GF组中P53基因、RB基因的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01)。树舌多糖组、环磷酰胺组无显著差异。结论:树舌多糖GF能使肝癌H22细胞P53及RB基因的表达上调。     

枸杞多糖对衰老小鼠原癌基因c—myc表达的影响

目的：探讨枸杞多糖抗衰老的分子机理。方法：采用老年小鼠和D－半乳糖致衰老小鼠两种衰老动物模型,分别连续灌服枸杞多糖2个月和1个月,应用半定量逆转录－聚合酶链式反应技术（RT－PCR）检测小鼠骨髓原癌基因c-myc表达的变化。结果：老年小鼠和D－半乳糖致衰老小鼠骨髓原癌基因c-myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一（P＜0．001）,给药后则可明显得到抑制（P＜0．05）。结论：抑制原癌基因c-myc表达是枸杞多糖抗衰老分子机理之一。     

树舌多糖GF对荷瘤小鼠H_（22）细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨树舌多糖GF对肝癌H22小鼠抑瘤率及端粒酶活性的影响。方法：用ELISA法检测端粒酶活性。结果：树舌多糖GF对肝癌H22小鼠抑瘤率可达42.25%,树舌多糖GF组和环磷酰胺组与阴性对照组比较,端粒酶活性降低,差异有显著性（P〈0.05）。结论：树舌多糖GF对肝癌H22小鼠具有很强的抑瘤作用,能抑制H22细胞端粒酶的活性。     

从干预C-myc基因的表达探讨十全大补汤对Lewis肺癌转移的影响

目的观察十全大补汤对Lewis肺癌C-myc表达的影响。方法复制小鼠Lewis肺癌模型,运用免疫组化法分析C-myc在小鼠Lewis肺癌组织中的表达及十全大补汤对其表达的影响。结果十全大补汤高、中、低剂量组对小鼠Lewis肺癌均有不同程度的抑瘤作用,以中剂量组最为明显,与模型组比较差异显著;十全大补汤中、高剂量组均能有效降低小鼠Lewis肺癌C-myc的表达,与模型组比较差异显著,以中剂量组最为明显。结论十全大补汤对小鼠Lewis肺癌有抑瘤作用,其机制可能是影响C-myc的表达,从而影响细胞从G0/G1期进入S期,有效地将细胞周期阻滞于G1期,并诱导凋亡发生。     

灵芝多糖对小鼠胃肿瘤活性的体内外抑制作用

目的:通过体外肿瘤细胞抑制实验及体内抗肿瘤实验,探讨灵芝多糖体内外抗肿瘤作用,并阐明其作用机制。方法:体外实验,使用胃癌细胞株MKN45及AGS,分为空白组、顺铂组、灵芝多糖(20,10,5 g·L~(-1))组,加入药物孵育24,48 h后,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。体内实验,60只BALB/c裸鼠随机分为模型组、阿霉素组、灵芝多糖高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg~(-1))组,除空白组外,其余各组使用Walker-256肿瘤细胞移植法建立胃肿瘤模型。1周后,除空白和模型组灌胃蒸馏水外,其余各组给予相应药物灌胃。4周后测量肿瘤大小,并取部分胃组织,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达。结果:与空白组比较,灵芝多糖高、中、低剂量组作用24,48 h后,均可以明显抑制胃癌细胞株MKN45和AGS的生长(P0.05);灵芝多糖高、中剂量组作用24 h均可以有效促进胃癌细胞MKN45和AGS的凋亡(P0.05),可以抑制AGS胃癌细胞的细胞周期,使其停留在G1期(P0.05)。体内实验表明,灵芝多糖高、中剂量组可以有效抑制胃部肿瘤的生长,同时增加Bax基因表达量,抑制Bcl-2基因表达(P0.05)。结论:灵芝多糖具有体内外抑制胃肿瘤细胞生长的作用,其作用与增加Bax基因表达,抑制Bcl-2基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

保健灸法对高月龄大鼠抗氧化能力及脑组织中c-myc表达的影响

目的观察保健灸法对高月龄大鼠抗氧化能力及脑组织中c-myc表达的影响,以探讨保健灸法抗氧化及细胞凋亡的作用。方法 SD雌性大鼠42只,其中青年组14只,10月龄28只,随机分为对照组和保健灸组。实验两个月后采用分光光度法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用免疫组化法检测脑组织中c-myc蛋白的表达水平。结果与青年组比较,12月龄对照组大鼠血清中丙二醛(MDA)含量增多,超氧化物歧化酶(SOD)活性下降,脑组织中c-myc蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与12月龄对照组比较,12月龄保健灸组丙二醛(MDA)含量降低,超氧化物歧化酶(SOD)活性升高,脑组织c-myc蛋白表达水平明显的下降。结论保健灸法可显著降低因增龄而造成的机体内脂质过氧化反应物的增多,具有抗氧化的功能,并且可通过调控c-myc的表达,抑制细胞的凋亡,延缓衰老。     

华蟾素对喉癌细胞生长及癌基因表达的影响

目的:探讨中药华蟾素(cinobufacini,CIN)对体外培养人喉癌 Hep-2细胞生长作用及癌基因表达的影响。方法:应用光镜、电镜、MTT 检测技术及 SP 免疫组化技术,对药物作用后 Hep-2细胞的数量、形态、癌基因 p53及 c-myc 蛋白的表达进行研究。结果:华蟾素对 Hep-2细胞作用在低浓度短时间时促进细胞分裂,增殖和诱导细胞分化;高浓度长时间则抑制细胞生长,促进细胞凋亡。华蟾素对 Hep-2细胞癌基因影响表现为 c-myc 蛋白表达降低,p53蛋白表达变化不明显。结论:华蟾素对喉癌细胞的生长及癌基因有抑制作用,可作为临床喉癌综合治疗的用药之一。     

灵芝多糖对辐射损伤小鼠影响的胸腺代谢组学分析

目的:运用代谢组学方法分析灵芝多糖对辐射损伤小鼠内源性物质代谢的影响,寻找潜在的生物标志物并分析其代谢途径,探讨其作用机制。方法:将30只小鼠随机分为正常组、模型组和灵芝多糖组(给药剂量96 mg·kg^-1),每组10只,前两组给予生理盐水,连续灌胃14 d,在第7天灌胃后2 h,除正常组外,模型组和灵芝多糖组小鼠以X射线进行全身照射。利用UPLC-Q-TOF-MS检测胸腺组织中内源性小分子代谢物,利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLSDA)比较正常组、模型组以及灵芝多糖组内源性小分子代谢物的变化情况,对差异代谢物进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢通路分析。结果:鉴定出34个潜在生物标志物,与模型组相比,发现灵芝多糖组对L-谷氨酸、牛磺酸、磷脂酰胆碱(PC)和溶血磷脂酰胆碱(Lyso PC)等均具有显著的逆转趋势,分别参与牛磺酸和亚牛磺酸代谢、甘油磷脂代谢以及D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢。结论:灵芝多糖可能通过改善辐射模型小鼠胸腺中相关潜在生物标志物表达及其相关代谢通路来发挥辐射防护作用。