不同迁移能力肝癌细胞中干细胞相关基因Nanog、Sox2和Oct4的表达

目的:观察Nanog、Sox2和Oct4干细胞相关基因在四株不同迁移能力肝癌细胞系中的表达.方法:常规细胞培养无迁移能力的HepG2细胞、低迁移能力的MHCC97-L细胞、中迁移能力的LM3细胞及高迁移能力的MHCC97-H细胞,采用免疫荧光组织化学方法观察四株肝癌细胞系中肝癌干细胞相关基因Nanog、Sox2和Oct4的表达.结果:干细胞相关基因Nanog、Oct4和Sox2在四株迁移能力不同的肝癌细胞系中不同程度表达,且在细胞膜、细胞核、细胞浆中的表达量亦不同;Nanog在细胞核表达,并随着细胞迁移能力增强而呈递增趋势;Sox2在不同迁移能力肿瘤细胞中表达无明显规律,而Oct4在高迁移能力肝癌细胞的细胞浆及核中高表达.结论:Nanog、Sox2和Oct4在不同迁移能力肝癌细胞系中均有表达,但无明显规律,推测肝癌干细胞与肝癌的发生可能有密切关系.     

lncRNA SH3BP5-AS1在肝癌中的差异表达及促进肝癌发生机制

目的 探究lncRNA SH3BP5-AS1在肝癌中的差异表达及促进肝癌发生的可能机制。方法 qRT-PCR法检测SH3BP5-AS1在肝癌组织/癌旁组织(n=91)中表达;TCGA数据库可视化软件UALCAN分析SH3BP5-AS1在大样本肝癌组织(n=371)中表达;qRT-PCR检测SH3BP5-AS1在正常肝细胞THLE-2和肝癌细胞系Huh 7、BEL-7405、SNU-387、Hep 3B中表达。siRNA技术沉默SH3BP5-AS1表达后,CCK-8法、细胞克隆形成实验、Edu法检测沉默SH3BP5-AS1对Hep 3B细胞增殖的影响,流式检测沉默SH3BP5-AS1对Hep 3B细胞凋亡、周期的影响。基于肝癌组织中SH3BP5-AS1和TM6SF2表达量,统计并分析表达相关性。结果 SH3BP5-AS1在肝癌组织中高表达;SH3BP5-AS1在TCGA数据库中大样本肝癌组织中高表达;SH3BP5-AS1在不同肝癌细胞系Huh 7、BEL-7405、SNU-387和Hep 3B中均不同程度高表达。siRNA沉默SH3BP5-AS1抑制Hep 3B细胞的增殖能力,促进细胞凋...     

Hsa_circ_0000711在人肝癌细胞系中的功能研究

目的 研究环状RNA hsa_circ_0000711在人肝癌细胞系中的表达以及对肝癌细胞生物学功能的影响.方法 利用RT-qPCR检测环状RNA hsa_circ_0000711在肝癌细胞系的表达;通过小干扰RNA特异性敲低hsa_circ_0000711的表达;通过CCK-8实验检测肝癌细胞系的增殖情况;利用流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡.Western blot检测下调hsa _circ _0000711后Cyclin D1、CDK4、 cleavaed Caspase 3及Bcl-2蛋白的表达水平.结果 Hsa_circ_0000711在肝癌细胞HepG2和SMMC- 7721中明显高表达(P＜0. 05) .与对照组相比,hsa_circ_0000711干扰组的肝癌细胞增殖能力显著降低(P＜0. 05),处于G1期细胞增多(P＜0. 05),且凋亡细胞显著增加(P＜0. 05) .干扰hsa_circ_0000711的表达后,肝癌细胞中Cyclin D1、CDK4和Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P＜0. 05),cleavaed Caspase 3蛋白表达量显著升高(P＜0. 05) .结论 Hsa_circ_0000711可能通过调控细胞周期及凋亡影响肝癌细胞的增殖.     

SETD8抑制剂UNC0379对肝癌细胞增殖、迁移的影响

目的：探究组蛋白修饰酶SETD8在人肝癌细胞系Huh7中的表达,以及SETD8抑制剂UNC0379对肿瘤细胞增殖、迁移过程的影响。方法：RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测人正常肝细胞系LO2和肝癌细胞系Huh7中SETD8的mRNA和蛋白水平,并分析GEO和TCGA数据库中SETD8在肝癌组织的表达。用不同浓度SETD8抑制剂UNC0379处理Huh7细胞后检测SETD8和H4K20me1蛋白表达水平,并通过细胞克隆、CCK-8、划痕和Transwell实验检测细胞的增殖和迁移能力。结果：与LO2相比,Huh7细胞中SETD8的mRNA和蛋白水平均增加。通过对GEO数据库GSE87630和TCGA数据库的分析,发现SETD8在HCC患者肝癌组织中的表达均显著增加。SETD8抑制剂处理后,Huh7细胞中SETD8和H4K20me1的蛋白表达水平下降。CCK-8、细胞克隆结果显示UNC0379可抑制Huh7细胞的增殖过程;Transwell和划痕实验证明UNC0379可抑制Huh7细胞的迁移过程。结论：UNC0379可下调SETD8和H4K20me1表达,并抑制Huh7细胞的增殖、迁移,这种...     

长链非编码RNA CCAT2在肝癌中的作用及其机制

目的 探讨长链非编码RNA CCAT2(LncRNA CCAT2)在肝癌中的作用及机制.方法 选取我院2013年1-6月60例肝癌及其癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其组织中CCAT2的表达,同时培养正常肝细胞L02和人源性肝癌细胞系HepG、H2P、SMMC和HLE细胞,采用qRT-PCR检测细胞中CCAT2的表达,采用siRNA干扰细胞CCAT2表达后,在24、48、72、96 h用CCK-8检测SMMC和HLE细胞增殖;Transwell实验分析细胞迁移和侵袭情况;采用流式细胞仪分析CCAT2对SMMC和HLE细胞周期分布和凋亡的影响;Western blot检测P53、Bcl-2、Caspase-8蛋白的表达.结果 在肝癌组织和肝癌细胞中,CCAT2的表达显著升高(P均＜0.05),CCAT2高表达的患者预后和生存率均较低(P均＜0.05).肝癌细胞中低表达的CCAT2能显著抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭(P均＜0.05).肝癌细胞中低表达的CCAT2也能使肝癌细胞周期停留在Go/G1期并促进细胞凋亡(P均＜0.05).采用siRNA干扰细胞CCAT2表达后,肝癌细胞中P53和Caspase-8蛋白的表达显著升高(P均＜0.05),Bcl-2蛋白的表达显著降低(P＜0.05).结论 CCAT2在肝癌组织和细胞系中高表达,siRNA干扰CCAT2表达后能够抑制细胞增殖、迁移、侵袭以及促进肝癌细胞的凋亡,其机制可能通过升高P53和Caspase-8蛋白的表达和降低Bcl-2蛋白的表达有关.     

肝癌细胞系中DNMTs表达的检测及意义

目的:检测HBV相关肝癌细胞系(Hep3B)与非HBV相关肝癌细胞系(HepG2)中甲基化转移酶(DNAmethyltransferase,DNMT)的表达,分析HBV感染与DNMT表达之间的关系。方法:应用荧光定量PCR(Flurescencequantitative-PCR,FQ-PCR)检测两种肝癌细胞系中DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B、GAPDH基因mRNA表达水平,并将DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B表达水平与参比基因进行比较。结果:DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B在HBV相关细胞系Hep3B中表达分别为:1.26±0.15、0.76±0.15、1.26±0.20、0.66±0.13;在非HBV相关肝癌细胞系HepG2中的表达分别为:0.64±0.11、0.62±0.12、0.48±0.12、0.36±0.10。Hep3B细胞系中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均高于HepG2(P均<0.01)。结论:⑴HBV相关肝癌细胞系Hep3B中存在DNMT过表达;⑵HBV感染可能刺激DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达,进而促进抑癌基因甲基化。     

肝细胞癌组织Bcl-2和Bax蛋白的表达（英文）

目的　探讨原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞凋亡相关蛋白 Bcl- 2和 Bax的表达及其意义 .方法　采用免疫组化ABC法检测 Bcl- 2和 Bax蛋白在 66例人肝癌组织和 2 4例人正常肝组织 ,以及 3株人肝癌细胞系 HCC- 92 0 4 ,SMMC-772 1 ,HHCC和 1株永生化的人正常肝细胞系 QZG的表达情况 ,并分析肝癌组织的 Bcl- 2和 Bax阳性率与其病理分级之间的关系 .结果　 Bcl- 2在正常肝组织的阳性率只有 4.2 % ,而在肝癌组织为 2 5.8%差异显著 (P<0 .0 5) .Bax在正常肝组织的阳性率为 70 .8% ,在肝癌组织为 43.9% ,差异显著 (P<0 .0 5) .肝癌组织的 Bcl- 2和 Bax阳性率与其病理分级之间均未见明显的相关性 (P>0 .0 5) .在正常肝和肝癌组织中 ,Bcl- 2阳性率均明显低于 Bax(P<0 .0 1 ,P<0 .0 5) .在QZG细胞中未见明显的 Bcl- 2阳性信号 ,Bax阳性细胞计数率为 61 % .SMMC- 772 1细胞和 HHCC细胞的 Bcl- 2阳性细胞计数率分别为 1 4 .3%和 1 1 .8% ,Bax阳性细胞计数率分别为 58.3%和 47.1 % .HCC- 92 0 4细胞中未见明显的 Bcl- 2阳性信号 ,Bax阳性细胞计数率为 43.2 % .结论　与正常肝组织相比 ,肝癌组织的 Bcl- 2蛋白低度升高 ,Bax蛋白下降 .正常肝和肝癌组织的 Bcl- 2水平均低于 Bax.肝癌和正常肝细胞系的 Bcl- 2蛋白水平均很     

p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用

目的:观察漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的现象,研究p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用究。方法：用不同浓度的漆树黄酮（50μmol•L-1、100μmol•L-1、200μmol•L-1）处理HepG2细胞24h和100μmol•L-1漆树黄酮处理HepG2细胞不同时间（12h、24h、48h）,流式细胞术和免疫荧光法观察漆树黄酮作用HepG2细胞的凋亡情况; Westem blot法检测漆树黄酮对HepG2细胞p53、Caspase-3 和Caspase-8蛋白的表达情况。结果:漆树黄酮能诱导HepG2细胞凋亡,呈剂量一时间依赖性; 漆树黄酮可增加p53蛋白的表达,降解Caspase-3 、Caspase-8酶原,提高Caspase-3 、Caspase-8活性。p53蛋白的上调与凋亡的发生呈正相关,Caspase-3 、Caspase-8酶原的降解与与凋亡的发生呈负相关。结论:漆树黄酮可诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调p53表达,活化Caspase-3、 Caspase-8有关。     

EpCAM和CD13在不同肝癌细胞系中的表达和乙型肝炎病毒X蛋白对其表达的影响

目的：探讨肝癌干细胞标记物EpCAM和CD13在不同肝癌细胞系中的表达及乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对EpCAM和CD13表达的影响.方法：Western blot检测正常肝细胞系（LO2细胞）和肝癌细胞系（Huh7,Bel-7404,Hep3B,QSG-7701细胞）中肝癌干细胞标记物EpCAM和CD13的表达情况,同时建立稳定转染HBx基因的Bel-7404 （Bel-7404/HBx）细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测转染后EpCAM和CD13表达情况.结果：EpCAM和CD13在不同的肝癌细胞系中表达水平完全不同;转染HBx基因后EpCAM的mRNA和蛋白表达水平明显上调,分别为对照组的（2.04±0.16）和（2.03±0.25）倍;而CD13的mRNA和蛋白表达水平明显下调,分别为对照组的（69±8）％和（55±7）％.结论：肝癌干细胞可能存在多个干细胞亚群,在不同的肝癌细胞中干细胞标记物的表达水平不同,而HBX对不同亚群的影响也不同.     

Gankyrin在肝癌细胞系中的表达

目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及Western blotting检测。结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达。结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达，HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞，进行Gankyrin基因的RNA干涉研究。     

Robo4在实体肿瘤血管新生中的表达及其意义

 目的 了解引导神经发育的Robo4基因在实体肿瘤血管新生中的表达，证实Robo4是肿瘤血管新生特异性标志物（tumor endothelial marker, TEM）。方法 采用RT-PCR技术检测多种不同细胞中Robo4 mRNA的表达情况；采用原位杂交和免疫组化染色检测多种肿瘤组织及其对应正常组织的相邻组织切片中Robo4和CD31在微血管的表达情况。结果RT-PCR显示在包括肿瘤细胞和正常细胞的9种受检细胞株中，Robo4 mRNA特异性表达于血管内皮细胞HUVEC和HMVEC中；Robo4在各种正常组织的微血管中表达极其微弱，而在肿瘤组织的微血管上显著表达；CD31在正常和肿瘤组织的微血管上均显著表达。结论Robo4仅特异性表达于肿瘤血管新生的部位，是肿瘤血管新生标志物。     

趋化因子受体CXCR7在人肝癌细胞株中的表达及意义

目的探讨趋化因子受体(Chemokine receptor,CXCR7)在不同肝癌细胞株中的相对表达强度及意义。方法采用RT-PCR、Western blot法,检测8株不同转移潜能肝癌细胞中趋化因子受体CXCR7在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果 CXCR7在8株肝癌细胞中的表达水平差异存在统计学意义,无论是mRNA水平还是蛋白水平,高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-L、MHCC97-H、HCCLM3)CXCR7的表达明显高于普通转移潜能肝癌细胞株(HepG2、PLC/PRF/5、SMMC-7721、BEL-7402、Hep3B),P<0.01。结论 CXCR7与肝癌的发生、发展及预后有一定的相关性。     

瘦素及其受体蛋白在肝癌细胞中的表达及意义

目的:研究瘦素及其受体在人肝细胞癌细胞株中的表达情况,探讨其在肝癌发生过程中的可能作用。方法:制备人正常肝细胞株L02及人肝细胞癌细胞株HepG2、SMMC7721的细胞爬片,采用免疫组织化学染色法检测上述细胞株中瘦素和瘦素受体蛋白的表达,以医学图文分析系统进行定量分析。结果:人正常肝细胞株L02及人肝细胞癌细胞株HepG2、SMMC7721中均存在瘦素及其受体蛋白的阳性表达,并且瘦素及其受体蛋白的表达水平均是人肝癌细胞株高于人正常肝细胞株,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:瘦素及其受体以双重表达方式存在于人肝细胞癌细胞中,可能在肝癌的发生中起到一定作用。     

癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义

目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况。结果SSX-1、SSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高（53．6％、57．1％）,SSX-2表达阳性率相对较低（35．7％）,其中SSX-1、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例（21．4％）,至少有两种SSX基因表达的有23例（82．1％）。结论癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关,同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向。     

Slit-Robo信号对粘液表皮样癌细胞增殖作用的影响

摘要：目的探讨Slit-Robo信号对粘液表皮样癌细胞系Mc3细胞生长与增殖作用的影响及其作用机制。方法免疫组织化学方
法及流式细胞术细胞内因子检测法检测Mc3细胞Slit2及Robo1蛋白的表达;在Robo1受体胞外区的单克隆抗体R5作用下,以
细胞计数法与软琼脂克隆形成实验观察Mc3细胞生长变化及用流式细胞术细胞内因子检测法检测增殖相关蛋白PCNA的表
达。结果Mc3细胞表达Slit2及Robo1蛋白,并且在R5单克隆抗体作用下,Mc3细胞体外生长能力受到抑制,增殖能力明显减
弱,PCNA蛋白表达水平下降。结论Slit-Robo信号可能影响Mc3细胞的生长增殖能力,对肿瘤细胞内的PCNA有正调控作用,
提示该信号可能参与粘液表皮样癌的发生及发展过程。
     

一组抗人肝癌单抗相应抗原的表达及位点分析

为分析肿瘤细胞的异质性，解决导向诊治中的问题。方法：我们用流工细胞仪定量地测定了四株抗人肝癌单抗在五种不同人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，ＢＥＬ－７４０２，ＱＧＹ－７７０１人肝癌细胞系ＨＨＣＣ，ＨＨＣＣ－９２０４和正常人肝细胞ＱＺＧ中的相应抗原表达及抗原位点分析。结果：Ｈ１８，Ｈ２７和Ｅ５相应抗原在五种人肝癌细胞株中均有表达，Ｆ１１在ＳＭＭＣ－７７２１，ＱＧＹ－７７０１两种肝癌细胞株有表达，但表达     

索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株的建立及基因表达分析

目的 建立索拉菲尼诱导的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)耐药细胞株,筛选出耐药细胞株中的高表达基因,进一步探讨肝细胞癌中与索拉菲尼耐药的相关基因.方法: 选取人肝癌细胞株PLC及Huh7,采用药物间歇诱导法分别建立索拉菲尼诱导的耐药细胞株,运用高通量测序技术(RNA-Seq)测定两株耐药细胞株中高表达基因,运用生物信息学数据库分析高表达基因与肝癌临床生物学指标相关性,筛选出肝癌耐药机制中可能参与的基因.结果: 通过基因测序得到两株肝癌耐药细胞株中的高表达基因,在设定的限定条件下进行进一步筛选, 限定条件为两株耐药细胞中共同表达的基因且表达差异倍数大于4倍,差异具有统计学意义(P<0.05),发现两株耐药细胞共同表达前12位基因符合限定条件,进一步运用Ualcan数据库分析12个基因与肝癌组织表达水平,分期,分级及生存的关系,筛选出符合条件的基因CBX4.结论: 成功构建了索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株,并筛选出与索拉菲尼耐药相关基因CBX4,为进一步耐药机制探讨提供依据.     

索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株的建立及基因表达分析

目的 建立索拉菲尼诱导的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)耐药细胞株,筛选出耐药细胞株中的高表达基因,进一步探讨肝细胞癌中与索拉菲尼耐药的相关基因.方法: 选取人肝癌细胞株PLC及Huh7,采用药物间歇诱导法分别建立索拉菲尼诱导的耐药细胞株,运用高通量测序技术(RNA-Seq)测定两株耐药细胞株中高表达基因,运用生物信息学数据库分析高表达基因与肝癌临床生物学指标相关性,筛选出肝癌耐药机制中可能参与的基因.结果: 通过基因测序得到两株肝癌耐药细胞株中的高表达基因,在设定的限定条件下进行进一步筛选, 限定条件为两株耐药细胞中共同表达的基因且表达差异倍数大于4倍,差异具有统计学意义(P<0.05),发现两株耐药细胞共同表达前12位基因符合限定条件,进一步运用Ualcan数据库分析12个基因与肝癌组织表达水平,分期,分级及生存的关系,筛选出符合条件的基因CBX4.结论: 成功构建了索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞株,并筛选出与索拉菲尼耐药相关基因CBX4,为进一步耐药机制探讨提供依据.     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白

【目的】通过SELDI-TOF-MS技术筛选体外培养人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白。【方法】采用体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性;SELDI-TOF-MS技术结合CM-10芯片检测Bel-7402与Bel-FU蛋白质指纹图谱。【结果】细胞Bel-FU对于5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6倍、3.9倍、37.2倍、16.5倍、3.7倍。在质荷比(M/Z)2 000～50 000的范围内,Bel-FU与Bel-7402间共检测到8个差异蛋白(P<0.05),其中上调蛋白有3个,下调蛋白有5个。【结论】SELDI-TOF-MS技术为筛选肝癌MDR蛋白标志物提供了一个简便、有效的方法。