黄连解毒汤不同提取部位及相关单体对小鼠脾淋巴细胞增殖作用研究

目的:研究黄连解毒汤不同提取部位及小檗碱、黄芩苷、栀子苷、芦丁对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响。方法:建立体外脾T、B淋巴细胞模型,运用MTT比色法分析比较黄连解毒汤的不同提取部位及其主要化学成分与丝裂原(ConA、LPS)共同作用时对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖作用的影响。结果黄连解毒汤全方水提部位(H2O部位)、醇提总部位(EtOH部位)、二氯甲烷萃取部位(CH2Cl2部位)和正丁醇萃取部位(n-Bu部位)对未活化或LPS和ConA诱导的脾T、B淋巴细胞具有不同程度的促进或抑制作用。小檗碱、黄芩苷(10μM)能促进未活化小鼠脾淋巴细胞增殖,而栀子苷、芦丁(50μM)对未活化小鼠脾淋巴细胞的增殖作用不明显。对于脂多糖(LPS)或刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞,小檗碱、黄芩苷、栀子苷、芦丁均能抑制其增殖。结论:黄连解毒汤不同提取部位及其中主要化学成分小檗碱、黄芩苷、栀子苷、芦丁对T、B淋巴细胞均有不同程度的增殖作用。     

六味地黄汤相关成分对蛋白酪氨酸磷酸酶1B的影响

目的 研究六味地黄汤中芍药苷、没食子酸、丹皮酚、梓醇、马钱苷、莫诺苷、桃叶珊瑚苷、23-乙酰泽泻内酯醇B、薯蓣皂苷元9种重要单体成分对蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP-1B)的影响,以筛选PTP-1B的有效抑制剂.方法PTP Assay Kit 1(R-R-L-I-E-D-A-E-pY-A-A-R-G)中孔雀绿磷酸检测法.结果所有单体均有不同程度的抑制PTP-1B的作用,其中莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻内酯醇B、芍药苷、桃叶珊瑚苷的作用较明显,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05,P＜ 0.01).结论莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻内酯醇B、芍药苷、桃叶珊瑚苷等成分可明显抑制PTP-1B,这可能是六味地黄汤降糖、降脂机制之一.     

黄芪皂苷Ⅲ通过IFN-γ介导体外免疫调节作用的研究

目的:黄芪皂苷类单体组分免疫调节作用研究主要集中在黄芪甲苷,而其他单体组分研究相对较少,本研究旨在探讨黄芪皂苷Ⅲ(Astragaloside Ⅲ,As Ⅲ)体外免疫调节活性及初步的作用机制.方法:采用丝裂原ConA(刀豆蛋白)、LPS(脂多糖)分别诱导T、B淋巴细胞增殖为细胞模型,3H-TdR掺入法检测黄芪皂苷Ⅲ对T、B淋巴细胞增殖的影响.酶联免疫吸附法(ELISA)测定黄芪皂苷Ⅲ对ConA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞产生Th型细胞因子(IL-2,IFN一γ)的作用.结果:黄芪皂苷Ⅲ在10 nM时对ConA诱导的正常小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应具有显著的促进作用(P＜0.01);黄芪皂苷Ⅲ(10nM,100nM)对LPS诱导的正常小鼠B淋巴细胞增殖反应亦有一定的促进作用(P＜0.05);黄芪皂苷Ⅲ在10 nM时显著促进ConA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ的产生(P＜0.05),然而对IL-2的分泌无明显的影响.结论:黄芪皂苷Ⅲ可能通过IFN-γ介导免疫调节活性,这一作用机制可能与黄芪临床应用于抗肿瘤免疫、扶正祛邪、缓解化疗药物副作用密切相关.     

11种中药对小鼠淋巴细胞活性及腹腔巨噬细胞功能的影响

目的研究具有免疫调节作用的11种中药水提取物,对小鼠脾淋巴细胞增殖活性以及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。方法采用体外检测不同浓度的11种中药水提取物对正常、ConA及LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响,运用中性红法检测巨噬细胞的吞噬功能。结果黄芩水提取物对正常淋巴细胞的增殖活性无明显影响,对ConA及LPS诱导的脾淋巴细胞增殖活性有显著的抑制作用,其IC50分别为16.54,19.00μg/ml;蒺藜及罗布麻水提取物能够显著促进巨噬细胞吞噬功能。结论黄芩水提取物对小鼠脾淋巴细胞增殖活性具有一定的调节作用,蒺藜及罗布麻对巨噬功能有一定的调节作用。     

川明参对小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响

目的：研究川明参提取物及其活性单体化合物对T淋巴细胞增殖的影响。方法：制备川明参醇提物、石油醚提取物及三个单体化合物大黄酚、8-羟基-5-甲氧基补骨脂素和豆甾醇苷,采用MTT法检测上述样品对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖的作用。结果：川明参醇提物高、中剂量组,石油醚提取物及豆甾醇苷的三个不同剂量组及8-羟基-5-甲氧基补骨脂素低剂量组对小鼠T淋巴细胞增殖反应有不同程度的促进作用。结论：川明参具有一定的免疫调节活性,其提高免疫功能的作用可能是通过增强淋巴细胞转化增殖而实现的。     

金蒿抗流感滴丸对小鼠免疫功能的影响

目的:研究金蒿抗流感滴丸对小鼠免疫系统的影响。方法:采用镜检计数观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力;采用ELISA法测定血清中IgG的含量;采用绵羊红细胞免疫法测定小鼠血清溶血素;采用MTT法检测药物对小鼠T、B淋巴细胞增殖反应的影响。结果:金蒿抗流感滴丸中、高剂量组均能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力(P0.05,P0.01),促进小鼠血清中IgM抗体生成;金蒿抗流感滴丸各剂量组可明显促进小鼠血清中IgG抗体生成;金蒿抗流感滴丸在(156.25-2 500)μg/mL浓度范围内,对ConA诱导的T淋巴细胞和LPS诱导的B淋巴细胞增殖均有显著的抑制作用(P0.01),且随着浓度的增大,其对T、B淋巴细胞增殖的抑制作用逐渐增强。结论:金蒿抗流感滴丸对小鼠免疫功能具有双向调节作用。     

莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞炎症的保护作用及机制研究

目的研究莫诺苷对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成骨细胞MC3T3-E1炎症的保护作用,探讨Caspase、MAPK和NF-κB通路调控机制。方法 TNF-α(50 ng/m L)诱导MC3T3-E1细胞,制备细胞炎症模型;MTT法检测莫诺苷对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并检测不同浓度的莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞活力的影响;ELISA法检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的水平;Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα、IκBα和NF-κB等相关蛋白的表达。结果莫诺苷能够促进正常MC3T3-E1细胞增殖,TNF-α诱导MC3T3-E1细胞增殖受到抑制,而莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞具有保护作用;莫诺苷可以抑制TNF-α诱导MC3T3-E1细胞IL-1β和IL-6的释放;降低Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα蛋白的表达,升高IκBα蛋白表达,对NF-κB p65无明显影响。结论莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1炎症细胞有保护作用,其机制为抑制炎性因子的释放、抑制MAPK和NF-κB通路的激活、抑制凋亡蛋白Caspase的表达,从而抑制MC3T3-E1细胞的凋亡。     

阿里红多糖体外免疫活性的研究

目的:探讨阿里红多糖(FoP)对小鼠体外免疫的调节作用。方法:采用体外淋巴细胞增殖实验考察FoP对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测不同浓度FoP单独作用及其与有丝分裂原ConA、LPS共同作用对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELSA)法检测不同浓度FoP体外刺激对小鼠脾淋巴细胞诱生白介素2(IL-2)、白介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的影响。结果:Fop在25~100μg/m L浓度范围内能显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖,并与Con A、LPS协同促进T、B淋巴细胞增殖,还能诱导脾淋巴细胞分泌IL-2、TNF-α。结论:FoP具有免疫促进作用。     

黄芪皂苷I对Th1免疫反应的调节效应及机制研究

目的研究黄芪皂苷Ⅰ的免疫调节作用以及作用的分子机理。方法构建丝裂原诱导脾淋巴细胞增殖细胞模型,测定黄芪皂苷Ⅰ对Con A诱导T淋巴细胞增殖和LPS诱导B淋巴细胞增殖反应,构建anti-CD3 m Ab抗体诱导T淋巴细胞增殖,RT-PCR检测黄芪皂苷Ⅰ对IL-2、IFN-γ和T-bet mRNA基因表达。结果黄芪皂苷Ⅰ在30n M显著促进Con A刺激T淋巴细胞增殖,差异有显著性意义(P0.05);黄芪皂苷Ⅰ体外用药能够显著上调IFN-γ,T-bet的mRNA表达,而对IL-2表达水平无明显影响。结论黄芪皂苷Ⅰ可能特异性激活转录因子T-bet的转录,促进T淋巴细胞增殖和细胞因子的产生。     

桃叶珊瑚苷对急性脑出血大鼠脑组织IL-1β及NF-κB的影响

目的观察桃叶珊瑚苷对急性脑出血大鼠血肿周围组织白介素-1β(IL-1β)及核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨桃叶珊瑚苷保护脑出血后神经元损伤的机制。方法健康SD大鼠90只按随机数字表法随机分为假手术组、脑出血组、桃叶珊瑚苷组。脑出血组及桃叶珊瑚苷组于大鼠尾壳核区注入自体非肝素抗凝动脉血,建立脑出血动物模型,假手术组于相同部位注入0.9%氯化钠注射液。造模成功后,桃叶珊瑚苷组于术后2 h给予桃叶珊瑚苷4.2 mg/kg,腹腔注射,每日1次。而假手术组及脑出血组在同样时间给予相同剂量0.9%氯化钠注射液。每组设置12 h、2 d、3 d、5 d、7 d等5个时间点,Longa评分法评估神经功能缺损,免疫组化方法检测血肿周围脑组织中IL-1β和NF-κB的表达。结果与脑出血组比较,桃叶珊瑚苷组血肿周围IL-1β和NF-κB表达水平明显下降(P0.05)。结论桃叶珊瑚苷对脑出血后神经元损伤具有保护作用,其机制可能与抑制IL-1β和NF-κB的表达有关。     

六味地黄苷糖中糖苷部位的化学成分研究

目的:对六味地黄苷糖中糖苷部位的化学成分进行研究,阐明其活性的物质基础.方法:用大孔树脂柱色谱制备糖苷部位,用硅胶和反相硅胶柱色谱分离各成分,用MS及NMR技术鉴定结构.结果:分离得到了11个化合物,其中包括9个环烯醚萜苷,1个蒎烷单萜苷,1个酚苷,分别鉴定为7-脱氢马钱素(1),7α-甲氧基莫诺苷(2),7β-甲氧基莫诺苷(3),7α-乙氧基莫诺苷(4),7β-乙氧基莫诺苷(5),莫诺苷(6),獐芽菜苷(7),马钱素(8),芍药苷(9),丹皮酚原苷(10),番木鳖酸(11).结论:该糖苷部位是新药六味地黄苷糖发挥免疫和内分泌调节作用的重要部分.化合物6～8是该部位的主要成分,具有较好的免疫调节作用,是该部位主要活性成分.     

炮制前后山茱萸煎液、溶出层面的比较研究

从煎液、溶出层面对炮制前后山茱萸中活性成分进行比较研究。采用HPLC,中药煎出法,溶出度法对炮制前后山茱萸的活性成分马钱苷、莫诺苷的煎出率与溶出度特征进行比较研究。结果表明,炮制前后活性成分马钱苷、莫诺苷含量变化不明显;与生品相比,制品(煎液)中马钱苷的含量增高明显,而莫诺苷变化不明显;与生品相比,溶出度层面,在肠液中,制品(提取物)马钱苷的溶出度差别不明显,而莫诺苷溶出度增大、差别明显;在胃液中,制品马钱苷、莫诺苷的溶出度均减少、差别明显,但综合考虑临床上服用的煎药剂量,添加煎出率指标后,煎出溶出积=煎出率×溶出度,则在肠液与胃液中,制品的煎出溶出积指标均增大,差别非常明显,提示制品在临床应用方面优于生品。该文提出从煎液、溶出层面比较炮制前后活性成分变化和煎出溶出积指标,用于山茱萸炮制后的质量评价。     

HPLC同时测定山茱萸总苷分散片中莫诺苷和马钱苷的血浆浓度

目的:建立HPLC法同时测定大鼠血浆中莫诺苷和马钱苷含量的方法,并研究山茱萸总苷分散片在大鼠血浆和各组织器官中的药动学行为.方法:Diamonsil C18色谱柱,甲醇-水梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长237 nm,血浆和各组织样品采用甲醇直接沉淀蛋白的方法.结果:血浆中莫诺苷和马钱苷的线性范围分别是0.612 ～ 30.6,0.921～46.0 mg· L-1;日内与日间RSD＜ 15％,回收率在90.2％ ～111.6％.大鼠单次灌胃山茱萸总苷分散片后,在血浆、胃和小肠中检测到莫诺苷和马钱苷.结论:该方法简便、快速、重复性好,适用于莫诺苷和马钱苷血药浓度测定及药动学研究.     

六味地黄丸血中移行成分对氢化可的松致大鼠肾虚动物模型的保护作用

目的:通过研究六味地黄丸血中移行成分对氢化可的松致大鼠肾虚动物模型的保护作用,阐明六味地黄丸补肾的药效物质基础。方法:70只大鼠随机分为空白组、模型组、总组分组、混合组分组、5-羟甲基-2-糠酸(5-HMFA)组、丹皮酚组和六味组共7个实验组,按5 mL/kg体重连续9 d分别灌胃给予蒸馏水、蒸馏水、总组分药液、混合组分药液、5-HMFA药液和丹皮酚药液;第5~9天,除空白组皮下注射生理盐水外,其他各组按5 mL/kg体重每天皮下注射氢化可的松注射液25 mg/kg,于实验的第10天测定体重等10项评价指标。结果:与模型组相比,各给药组动物的检测指标均有明显改善,其中莫诺苷、獐牙菜苷、马钱子苷的混合物组作用最显著。结论:初步确定所分离得到的六味地黄丸的血中移行成分是六味地黄丸补肾的药效物质基础,其中以莫诺苷,獐牙菜苷和马钱子苷的作用最为明显,是补肾的核心成分。     

山茱萸中马钱苷和莫诺苷对照品的制备

目的研究从山茱萸中制备马钱苷和莫诺苷对照品的方法。方法结合大孔树脂富集、硅胶柱色谱、制备HPLC法对山茱萸水提醇沉提取物进行分离纯化,通过UV、1H-NMR、13C-NMR、MS波谱学方法对其分离产物进行结构鉴定。结果所得马钱苷和莫诺苷用归一化法定量,质量分数均大于98%。结论本法简便,制备成本低,所得马钱苷和莫诺苷可作为中药定性、定量分析使用的对照品。     

山茱萸注射液中马钱素与莫诺苷的药代动力学研究

目的 :建立高效液相色谱法同时测定血浆中山茱萸单体成分马钱素和莫诺苷的浓度 ,研究小鼠静注和灌胃给药后体内药代动力学特点。方法 :采用DiamonsilTMC₁₈色谱柱 (4.6mm× 250mm ,5 μm) ,流动相乙腈 甲醇 0.2 %甲酸 (12∶8∶80 ) ,流速 1.0mL·min^-1,检测波长 237nm。结果 :马钱素和莫诺苷的回归方程分别为Y=1.76 4X-0.0615和Y=1.242X-0.00199,r=0.9999(n =9) ;马钱素和莫诺苷的线性范围分别为 0.38～68.2 5mg·L^-1和 0.66～117.2 2mg·L^-1;其最低检测浓度分别为 0.10,0.16mg·L^-1。马钱素的平均回收率及相对标准偏差分别为99.6% (2.0% ) ,102.0% (1.0% ) ,87.9% (7.2%) ,莫诺苷的平均回收率及相对标准偏差分别为 99.2% (2.5 % ) ,104.1% (1.2%) ,92.7%(4.2%) ,该法的日内和日间精密度 (RSD)均小于 6.8%。小鼠静脉注射山茱萸注射液后 ,药动学行为均符合二室模型 ,马钱素和莫诺苷的主要药动学参数T_1/2(α) ,T_1/2(β) ,K₂₁,K₁₂ ,K₁₀ ,V(c) ,AUC ,CL分别为3.2 ,2 5 .1min ,5.997,4 .981,3.564h^-1,0 .5 5 1L·kg^-1,13.59mg·L^-1·h ,1.965L·kg^-1·h^-1;3.6 ,21.5min ,5.926,3.833,3.797h^-1,0.647L·kg^-1,2 7.15mg·L^-1·h,2.457L·^-1·^-1。结论：首次建立了山茱萸注射液中马钱素和莫诺苷血药浓度的HPLC测定方法，阐明了山茱萸中马钱素和莫诺苷的药代动力学参数，方法的专属性强，结果可靠。     

山茱萸去核的作用和方法研究

目的:比较山茱萸去核的作用,优选山茱萸产地加工方法和工艺。方法:比较山茱萸核和肉中的马钱素、莫诺苷含量;以马钱素含量为指标,采用正交试验分别对水烫法和烘法工艺进行优选。结果:山茱萸核中不含马钱素和莫诺苷;烘法的加热温度以及水烫法的加水量和烫的时间对马钱素含量均有明显影响;在60℃烘10 m in后去核为最佳工艺。结论:山茱萸去核的作用是为了去除非药用部位,烘法软化优于水烫法。     

The Hypoglycemic and Synergistic Effect of Loganin,Morroniside, and Ursolic Acid Isolated from the Fruits of Cornus officinalis

Hypoglycemic activity‐guided separation of ethanol extracts from the fruits of Cornus officinalis Sieb. et Zucc (CO) led to the isolation of loganin, morroniside, and ursolic acid. The antidiabetic capacity of CO extracts and related compounds was further investigated in diabetes mellitus mice. The results suggested that both CO extracts and pure compounds could ameliorate diabetes‐associated damages and complications. Oral administration of loganin and morroniside decreased fasting blood glucose levels in diabetes mellitus mice. Ursolic acid exhibited the highest reactive oxygen species scavenging activity and α‐glucosidase inhibitory activity. Notably, we noticed an interesting synergistic effect between loganin and ursolic acid. Given these favorable hypoglycemic properties, C. officinalis, a food and medicinal plant in China, may be used as a valuable food supplement for the treatment of diabetes mellitus. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

六味地黄苷糖片多指标成分的溶出度考察

目的:建立六味地黄苷糖片中多指标成分的溶出度测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用HPLC测定莫诺苷、马钱苷和芍药苷的含量,流动相水(A)-甲醇(B)-乙腈(C)梯度洗脱(0~10 min,76%A,20%B,4%C;10~30 min,76%~69%A,20%~27%B,4%C),检测波长236 nm。采用小杯法,以水为溶出介质,对六味地黄苷糖片中莫诺苷、马钱苷和芍药苷进行溶出度测定。结果:莫诺苷、马钱苷和芍药苷的线性范围分别为4.87~155.75,4.86~155.35,2.83~180.85 mg·L-1,平均加样回收率分别为99.88%(RSD 1.6%),101.10%(RSD 1.8%)和100.20%(RSD 1.4%)。各成分在90 min内的累积溶出度均75%。结论:六味地黄苷糖片批内和批间样品中莫诺苷、马钱苷和芍药苷的累积溶出率差异较小。该溶出度测定方法简便准确、重复性好,适用于六味地黄苷糖片的质量控制。