杜仲总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞增殖的影响，筛选杜仲防治骨质疏松的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮，以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml浓度分别加入新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中，用MTT法评价对成骨细胞增殖的影响。结果50、100μg/ml杜仲总黄酮剂量组的OD570吸光值明显增高，与对照组比较，差异显著（P〈0．05）。结论杜仲总黄酮能直接促进体外成骨细胞的增殖。     

金刚石涂膜材料对成骨细胞骨钙素表达的影响

目的:探讨不同种植材料表面成骨细胞的功能状态.方法:用Wistar大鼠颅顶骨建立体外培养成骨细胞模型,将第三代成骨细胞接种到金刚石涂膜(CVD)、羟基磷灰石(HA)、纯钛(Ti)3种种植材料表面,通过反转录聚合酶链式扩增方法测定成骨细胞骨钙素mRNA.结果:CVD表面的成骨细胞骨钙素mRNA表达比HA出现早,Ti表面未见骨钙素mRNA表达.结论:CVD表面骨钙素的早期表达,推测其有成骨功能,适合成骨细胞生长.     

电离辐射对大鼠类成骨细胞的影响

目的：探讨不同剂量电离辐射后大鼠类成骨细胞生物学性状的改变。方法：成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠乳鼠颅骨中获取传代；将第2代细胞分别进行0，1，4，6，9GY的γ线辐射，检测成骨细胞的增殖，碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌量。结果：细胞增殖，功能和分化受γ线电防辐射抑制的程度不同，1Gy时增即受到抑制，骨钙素分泌量在4Gy时才受到显著地抑制，而碱性磷酸酶活性值甚至在6Gy下抑制作用才有意义。结论：电离辐射后，成骨细胞的增殖，功能和分化均受到抑制，但各指标对电离辐射的敏感性不同。γ     

电离辐射对大鼠类成骨细胞的影响

【目的】探讨不同剂量电离辐射后大鼠类成骨细胞生物学性状的改变。【方法】成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠乳鼠颅骨中获取传代 ;将第 2代细胞分别进行 0、1、4、6、9Gy的 γ线辐射 ,检测成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌量。【结果】细胞增殖、功能和分化受γ线电离辐射抑制的程度不同 ,1Gy时增殖即受到抑制 ,骨钙素分泌量在 4Gy时才受到显著地抑制 ,而碱性磷酸酶活性值甚至在 6Gy下抑制作用才有意义。【结论】电离辐射后 ,成骨细胞的增殖、功能和分化均受到抑制 ,但各指标对电离辐射的敏感性不同。     

等离子喷涂硅灰石涂层对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究硅灰石涂层的细胞相容性和成骨诱导能力。方法 将硅灰石等离子喷涂于Ti-6Al-4V表面，成骨细胞于其表面培养，测定培养液的碱性磷酸酶活性、Ⅰ型前胶原羧基末端前肽和骨钙素的含量，并观察硅灰石涂层表面成骨细胞的形态和数量。结果 培养7～12d，Ⅰ型前胶原羧基末端前肽含量和碱性磷酸酶活性最高；13～21d，骨钙素内含量最高，涂层表面细胞增殖明显。结论 硅灰石涂层具有良好的细胞相容性和成骨诱导能力。     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的 观察瘦素（leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法 培养人成骨细胞,并观察其形态及功能变化。采用MTT比色法检测不同浓度的Leptin对人成骨细胞增殖的影响,同时观察不同浓度Letptin条件下骨钙素浓度的变化,并用细胞总蛋白较正。结果 体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性,培养液中加入β-甘油磷酸及L－抗坏血酸后钙茜素红染色阳性,在加入不同浓度Leptin后1、2、3天,人成骨细胞增殖无显著变化。Leptin可刺激骨钙素分泌,呈浓度依赖性（P＜0．05）,但无时间依赖性（P＞0．05）。结论 Leptin对人成骨细胞增殖无影响,但可刺激人成骨细胞功能。     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的　观察瘦素 (leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法　培养人成骨细胞 ,并观察其形态及功能变化。采用 MTT比色法检测不同浓度的 L eptin对人成骨细胞增殖的影响 ,同时观察不同浓度 L eptin条件下骨钙素浓度的变化 ,并用细胞总蛋白较正。结果　体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型 ,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性、培养液中加入 β-甘油磷酸及 L-抗坏血酸后钙茜素红染色阳性。在加入不同浓度 L eptin后第 1、2、3天 ,人成骨细胞增殖无显著变化。L eptin可刺激骨钙素分泌 ,呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ,但无时间依赖性 (P>0 .0 5 )。结论　 L eptin对人成骨细胞增殖无影响 ,但可刺激人成骨细胞功能。     

健骨颗粒对大鼠成骨细胞OCN、Cbfal的影响

骨质疏松症主要是由于骨形成、骨吸收偶联的破坏,使骨形成减少,骨量降低所导致.成骨细胞是骨形成的关键细胞,而成骨细胞的分化成熟、功能活性与骨形成密切相关.前期在体、体外实验表明.补肾健脾中药健骨颗粒能明显增强成骨细胞的功能活动.     

骨碎补总黄酮对大鼠成骨细胞VEGF和FGF-2表达的影响

目的：观察骨碎补总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF-2）表达以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和矿化结节的影响。方法：在大鼠成骨细胞体系中加入不同浓度的骨碎补总黄酮作用24 h和48 h。采用ELISA和RT-PCR法检测VEGF和FGF-2表达变化,PNPP法检测ALP活性以及von Kossa染色检测矿化结节形成。结果：骨碎补总黄酮可刺激VEGF和FGF-2,使其在蛋白和mRNA水平表达均明显升高,显著提高成骨细胞ALP的活性和促进矿化结节的形成。结论：骨碎补总黄酮可提高成骨细胞VEGF和FGF-2的表达,促进其成骨作用。     

等离子喷涂硅灰石涂层对体外培养成骨细胞的影响

目的研究硅灰石涂层的细胞相容性和成骨诱导能力.方法将硅灰石等离子喷涂于Ti-6Al-4V表面,成骨细胞于其表面培养,测定培养液的碱性磷酸酶活性、I型前胶原羧基末端前肽和骨钙素的含量,并观察硅灰石涂层表面成骨细胞的形态和数量.结果培养7 ～ 12 d,I型前胶原羧基末端前肽含量和碱性磷酸酶活性最高;13 ～ 21 d,骨钙素内含量最高,涂层表面细胞増殖明显.结论硅灰石涂层具有良好的细胞相容性和成骨诱导能力.     

实时荧光定量PCR法检测糖尿病肾病大鼠肾脏中BMP-2与MGP

目的:检测糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏中骨形成蛋白2(BMP-2)和基质Gla蛋白(MGP)的基因表达量的变化规律,探讨其对糖尿病肾病的影响.方法:设对照组(N组)及糖尿病肾病组(DN组,STZ诱导的DN大鼠模型);采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)方法检测4、12、24周DN大鼠及正常大鼠肾脏中BMP...     

血清性激素、甲状旁腺激素和骨钙素的增龄变化及其临床意义

目的 :研究成人性激素 (E2 ,T)、甲状旁腺激素 (PTH)及骨钙素 (BGP)的增龄变化及性别差异 ,并探讨对骨代谢的临床意义 .方法 :正常成人 2 2 9名 (男 12 1,女 10 8) ,年龄 2 0～ 91岁 ,10岁分组 ;放射免疫法测定血清E2 ,T ,M -PTH ,BGP .结果 :女性E2 30～岁开始下降 ,4 0～岁开始显著下降 (P <0 . 0 1) ,5 0～岁下降 92 % ,>80岁下降 97% ;男性T 5 0～岁开始下降 ,6 0～岁开始显著下降 (P <0 . 0 5 ) ,>80岁下降 4 3% ;女性PTH 30～ 4 9岁低谷 ,5 0～岁显著升高 (P <0 . 0 1) ,并形成高峰 ,>80岁仍维持较高水平 ;男性PTH 5 0岁开始升高 ,>80岁仍高于青壮年 ,但差异不显著 (P >0 . 0 5 ) ;女性BGP 30～ 4 9岁低谷 ,5 0～岁显著升高 (P <0 . 0 1) ,6 0岁后逐渐降低 ;男性BGP 5 0～岁无升高 ,6 0岁后进行性降低 ,<80岁最低(P <0 . 0 5 ) .结论 :女性E2 下降早、多、快 ,男性T下降晚、少、缓 .绝经后PTH、BGP显著升高 ,符合绝经后骨代谢“高转换型” ,男、女老年期BGP下降符合老年骨代谢“低转换型” .继发PTH升高在绝经后骨质疏松症的发病中有重要作用 .     

依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响，探讨其治疗骨质疏松的细胞作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞，取第2代细胞，培养液中分别加入不同浓度的依普拉芬，72h后，测定各组细胞培养液中的NO浓度，RT—PCR方法检测各组细胞中eNOSmRNA的表达。结果与阴性对照组相比，各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞培养液中的NO浓度并促进eNOSmRNA的表达（均P〈0．01）。其中10^-8～10^-5mol／L浓度之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以增加成骨细胞NO合成，但进eNOSmRNA的表达，从而发挥其促进成骨作用。     

低频脉冲电磁场对大鼠成骨细胞骨形成的影响及作用机制

目的 观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制。方法 取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合。采用50 Hz 0.6 mT PEMFs处理3、6、9 d后,检测ROBs内的碱性磷酸酶(ALP)浓度;处理0、15、30、60、90、120 min后,检测ROBs内骨形成相关因子(RUNX2)和成骨相关转录因子(OSX)蛋白表达,cAMP浓度,p-PKA、p-CREB和CREB蛋白表达。观察p-CREB核转位情况。采用RNA干扰法干扰IFT88后,检测ROBs内RUNX2、OSX、p-PKA和p-CREB蛋白表达情况。结果 PEMFs处理ROBs 3、6、9 d后,ALP活性值分别为24.356±4.911、37.688±2.151和39.922±5.486,均明显高于相应对照组的18.531±2.401(P=0.0121)、33.675±4.366(P=0.0324)和36.574±1.339(P=0.0134)。PEMFs处理30(P=0.0042和P=0.0058)、60(P=0.0097和P=0.0079)、90 min(P=0.0083和P=0.0098)时,ROBs内的RUNX2和OSX活性均显著高于未处理组;PEMFs处理30(P=0.0012) 和60 min(P=0.0035)时,ROBs内的cAMP浓度明显高于未处理时;PEMFs处理15(P=0.0018)、30(P=0.0087)、90(P=0.0250)和120 min(P=0.0350)时,ROBs内的p-PKA水平明显高于未处理组;PEMFs处理15(P=0.0075)、30(P=0.0017)、60(P=0.0074)和90 min(P=0.0096)时,ROBs内的p-CREB水平明显高于未处理组。PEMFs处理ROBs 15 min后,CREB发生磷酸化并聚集于细胞核内。将PKA、p-PKA与初级纤毛共定位染色,结果发现p-PKA定位于初级纤毛上。RNA 干扰去除初级纤毛后,干扰组的p-PKA(F=78.602,P=0.0270)和p-CREB(F=76.082,P=0.0089)蛋白表达量及RUNX2(F=41.064,P=0.0230)和OSX(F=57.524,P=0.0310)蛋白表达量均明显低于未干扰组。结论 PEMFs可能是通过初级纤毛相关的cAMP/PKA/CREB信号通路促进ROBs骨形成。     

杜仲诱导大鼠bMSCs分化早期成骨/成脂相关基因表达变化

目的：观察杜仲醇提取物诱导骨髓间充质干细胞（bMSCs）分化早期成骨/成脂相关基因表达变化。方法：培养大鼠bMSCs,用杜仲醇提取物分别诱导bMSCs 8 h,1、3、7 d,采用荧光定量PCR（RT-qFCR）的方法检测成骨相关基因Id4、Runx2、ALP和成脂相关基因PPARγ、Adipoq、aP2的表达变化。结果：Id4诱导3 d后表达略有上调;Runx2基本无变化;ALP诱导7 d后显著升高;PPARγ和aP2诱导3 d达最高峰,然后下调;Adipoq诱导7 d显著上调。结论：杜仲对bMSCs的成骨/成脂分化具有双重调节作用,提示杜仲醇提取物中既含有促成骨分化,也含有促成脂分化的成分。     

黄芪种子中总黄酮、总蛋白质和氨基酸的含量测定

目的检测黄芪种子中总黄酮、总蛋白质及氨基酸的含量,为开发利用黄芪种子资源提供依据。方法将黄芪种子用适量石油醚脱脂后,以80％的乙醇为提取溶剂,采用索氏提取法从黄芪种子中提取总黄酮,以芦丁为对照品,采用比色法测定黄芪种子中总黄酮的含量;按照中华人民共和国国家标准（GB5009．5—2010）法测定黄芪种子中总蛋白质含量;按照中华人民共和国国家标准（GB／T5009．124—2003）法狈4定黄芪种子中所含氨基酸的种类及含量。结果黄芪种子中总黄酮的含量为5．168mg·g-1,总蛋白质的含量为41．78％;黄芪种子中含有16种不同的氨基酸,分别是天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸,其总含量为36．15％。结论黄芪种子中总黄酮、蛋白质及氨基酸含量较高,具有良好的开发利用前景。     

体外培养大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子表达检测

目的 探讨体外培养的大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子的表达情况。 方法 体外分离培养大鼠颌骨成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色(ALP)与矿化结节茜素红染色对细胞进行鉴定。应用实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况。 结果 体外培养的大鼠颌骨成骨细胞ALP及矿化结节茜素红染色均为阳性。颌骨成骨细胞在高表达成骨相关基因、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原和骨钙素的同时,在蛋白及基因水平均高表达成血管相关细胞因子血管内皮生长因子、血管生成素1和成纤维生长因子2。 结论 颌骨成骨细胞在成骨分化的同时可通过分泌成血管相关细胞因子参与血管化调控。     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

高温快速消化与国标消化的凯氏定氮法测定蛋白质含量的比较研究

目的比较高温消化与国标消化的凯氏定氮法检测蛋白含量的准确性与稳定性有无差异,以达到简化操作、节省时间的目的。方法分别用国标消化与高温消化法对50 g/L蛋白校准液(重复15次)及15份人血白蛋白样品的蛋白含量进行检测。结果高温消化与国标消化法检测蛋白含量结果:蛋白校准液分别为49.91 g/L±0.00 g/L和49.95 g/L±0.00 g/L(t=1.1602,P<0.05);人血白蛋白样品分别为:97.65 g/L±0.55 g/L和97.61 g/L±0.57 g/L(t=0.5762,P<0.05)。两种检测方法的回归分析Y=0.9987X+0.0797,R2=0.9999。高温消化法的蛋白回收率为98.0%。结论高温快速消化的凯氏定氮法检测蛋白含量结果和国标规定方法无差异,但比国标规定方法可以大大缩短工作时间,提高工作效率,值得进一步推广。