肝细胞癌中Runx3基因启动子区甲基化研究

目的 通过检测肝细胞癌中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况,探讨Runx3基因启动子区域异常甲基化状态在肝细胞癌发生和发展过程中的意义.方法 采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对5种肝癌细胞系和52例肝细胞癌患者肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3种肝癌细胞系Runx3 mRNA在使用药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)前后的表达情况.结果 在肝细胞癌组织中,Runx3基因启动子区域甲基化率占42.3%(22/52),而在相对应的癌旁正常组织中,Runx3基因启动子区域未发现高甲基化现象;Runx3基因启动子区域甲基化状态与患者临床病理参数均无相关关系;在5种肝癌细胞系中,有3种细胞Runx3基因启动子区域存在甲基化异常;用药物5-Aza-CdR处理后的3种肝癌细胞中Runx3 mRNA表达明显增强.结论 Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与肝细胞癌发生早期密切相关,可作为肝细胞癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点.     

胃癌中Runx3表达及其甲基化

目的探讨Runx3表达及其甲基化与胃癌的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测42例胃癌组织、癌旁正常组织及转移淋巴结中Runx3 mRNA的表达,同时用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3甲基化状况。结果胃癌组织、转移淋巴结、癌旁正常组织中Runx3 mRNA的表达相对值分别为0.569±0.131、0.609±0.141、0.871±0.237,胃癌组织、转移淋巴结与癌旁正常组织相比,均有显著性差异（P〈0.05）。胃癌组织、转移淋巴结Runx3甲基化阳性率分别为71.4%、62.5%,两者无显著性差异（P〉0.05）;而癌旁正常组织中未检测到Runx3甲基化。胃癌组织中Runx3甲基化表达与肿瘤的分化程度有关,与性别、肿瘤大小、浸润深度等临床病理特征无关。结论Runx3甲基化是胃癌发生、发展过程中的频繁事件,通过对其检测,可能会对胃癌的早期诊断、治疗提供重要依据。     

比较MSP法与PS法检测胃癌组织中Runx3启动子甲基化

目的 探讨甲基化特异性聚合酶链法(MSP)和焦磷酸测序法(PS)检测Runx3基因甲基化的特异性. 方法 选取150例胃癌患者[依据美国癌症联合委员会(AJCC)分期标准,分肿瘤的早期,进展期两组]胃切除的胃癌标本及50例无癌变胃黏膜标本.分别以MSP法和PS法同时检测其Runx3启动子甲基化程度. 结果 胃癌组织与正常胃黏膜相比,其Runx3基因甲基化程度的差异均有显著性(MSP法:67.3％,40.0％,P=0.002;PS法:76.0％,30.0％,P＜0.001).MSP法显示:Runx3甲基化与肿瘤大小相关(P＜0.05);而PS法分析显示:进展期胃癌的Runx3基因甲基化率高于早期胃癌(P＜0.05);且其甲基化状态与肿瘤的大小(P=0.004)、Lauren分级(P=0.043)、浸润的程度(P＜0.001)、淋巴结转移(P=0.021)及肿瘤TNM临床分期(P=0.045)等临床病理特征之间存在相关性.结论 PS法与MSP法相比,敏感性更高,PS检测结果与临床病理学结果之间存在显著相关性.     

Runx3和胃癌发生发展关系的研究进展

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一．在分子生物学及遗传学研究中发现胃癌的发生与端粒酶激活、基因不稳定性、癌基因激活和抑癌基因失活等多种因素和多基因损伤有关．其中抑癌基因的失活在胃癌发生发展中更常见、更重要。Runx3是新发现的在迄今为止约10余种和胃癌相关的基因中与胃癌关系最密切的抑癌基因，可能是胃癌发生发展中的关键性基因。所以以下将从Runx3的结构功能、调节胃黏膜细胞增殖、凋亡和分化机制，胃癌中Runx3编码蛋白改变．胃癌中Runx3失活机制对Runx3在胃癌的发生和发展过程中的重要作用进行综述。     

人胃癌组织中Runx3、Dnmt1表达及其临床意义

目的研究Runx3和Dnmt1在胃癌组织中的表达以及它们与胃癌临床病理资料之间的关系，并初步探讨其临床意义。方法以70例胃癌患者为研究对象，采用RT-PCR法分别检测胃癌组织及相应正常胃黏膜组织中Runx3mRNA、DnmtlmRNA表达。结果RTPCR检测结果显示胃癌组织中Runx3表达明显低于正常胃黏膜组织（0．5749±0．3580vs1．7252±0．4085，P〈0．05），Dnmt1表达显著高于正常胃黏膜组织（3．3770±1．8498vs1．1186±0．3217，P〈0．05）；Runx3表达下调与胃癌局部浸润深度、组织分化程度及TNM分期密切相关（P〈0．05）；Dnmt1的表达与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、组织学类型、组织分化程度、TNM分期均无明显相关性（p〉0．05）。Runx3与Dnmt1表达呈明显负相关（r=-0．261，P〈0．05）。结论胃癌组织中Runx3低表达、Dnmt1高表达。Runx3表达下调与胃癌局部浸润深度、组织分化程度及TNM分期有关。     

胃癌中Runx3基因突变和甲基化分析及意义

目的:通过检测胃癌组织中runx3基因突变和甲基化异常情况,探讨runx3在胃癌发病过程中的作用。方法:采用聚合酶链反应-单链多态性(PCR-SSCP)和甲基化特异性PCR(MSP)技术对30例胃癌组织runx3基因突变和甲基化改变进行检测。结果:在外显子3发现2例胃癌runx3突变,87%(26/30)胃癌组织标本runx3检测到甲基化改变。结论:runx3基因与胃癌的发生发展有关,在胃癌中runx3的主要失活机制是启动子区域高频甲基化,runx3突变频率低,不是胃癌中runx3的主要失活机制。     

胃癌及癌旁组织多个肿瘤相关基因超甲基化

目的检测胃癌及癌旁组织肿瘤相关基因超甲基化状态,探讨多个肿瘤相关基因启动子超甲基化与胃癌发生的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应,检测23例手术切除的胃癌组织、癌旁组织和10例胃镜活检正常的胃黏膜组织的hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p16和p15基因启动子区域的超甲基化状态。结果正常胃黏膜组织未检测到所选基因的超甲基化,22例(95.7%)胃癌组织和7例(30.4%)癌旁组织中检测到超甲基化。在17例(73.9%)胃癌组织和5例(21.7%)癌旁组织可以检测到2个以上基因的超甲基化;E-cadherin、p15和p16三个基因的甲基化率分别为78.3%、82.6%、60.8%,明显高于hMLH1和GSTP1的34.8%和17.4%。结论胃癌组织和邻近的癌旁组织中可以同时检测到多个肿瘤相关基因的甲基化,启动子区域超甲基化导致的基因功能失活可能发生在胃癌肿瘤形成的早期。     

胃癌及癌旁组织多个肿瘤相关基因超甲基化

目的 检测胃癌及癌旁组织肿瘤相关基因超甲基化状态,探讨多个肿瘤相关基因启动子超甲基化与胃癌发生的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应,检测23例手术切除的胃癌组织、癌旁组织和10例胃镜活检正常的胃黏膜组织的hMLH1、E-cadherin、GSTP1、p16和p15基因启动子区域的超甲基化状态.结果 正常胃黏膜组织未检测到所选基因的超甲基化,22例(95.7%)胃癌组织和7例(30.4%)癌旁组织中检测到超甲基化.在17例(73.9%)胃癌组织和5例(21.7%)癌旁组织可以检测到2个以上基因的超甲基化;E-cadherin、p15和 p16 三个基因的甲基化率分别为78.3%、82.6%、60.8%,明显高于hMLH1和GSTP1的34.8%和17.4%.结论 胃癌组织和邻近的癌旁组织中可以同时检测到多个肿瘤相关基因的甲基化,启动子区域超甲基化导致的基因功能失活可能发生在胃癌肿瘤形成的早期.     

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例（58.2%）检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关（均P〉0.05）;喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关（r=-0.7092,P〈0.01）。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。     

PAQR3基因在胃癌组织中的甲基化状态及其临床意义

目的探讨孕酮和脂联素受体3(Progestin And Adipo Q ReceptorⅢ,PAQR3)基因在胃癌组织中的甲基化状态及其临床意义。方法收集2015年3～9月经病理确诊的原发性胃癌及癌旁组织45对,采用甲基化特异性PCR法检测PAQR3基因启动子区甲基化水平,免疫组化法检测PAQR3蛋白的表达,并分析其与患者肿瘤临床病理特征之间的关系。结果胃癌组织中PAQR3基因启动子甲基化率(44.44%,20/45)显著高于癌旁组织(8.89%,4/45,P0.001),而PAQR3蛋白表达则较癌旁组织显著降低,两者间呈负相关(r=-0.478,P0.01)。PAQR3基因启动子甲基化率及PAQR3蛋白的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P0.01)。结论 PAQR3基因启动子区高甲基化可能是引起胃癌组织PAQR3表达降低的重要原因,有望成为胃癌病情和预后评估的分子标记物以及表观遗传学治疗靶点。     

甲基化特异性PCR检测胃癌p16基因甲基化及其临床意义

目的初步探讨甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR）在胃癌临床诊断中的应用价值。方法选取47例胃癌患者的癌组织及配对的癌旁组织，11例远离肿瘤的正常胃黏膜组织。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果47例胃癌组织标本中，22例（46．2％）在p16基因的启动子区域呈现异常甲基化；47例癌旁组织标本中，28例（58．6％）也检测出甲基化存在；11例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论MSPCR技术对胃癌患者组织标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项具有潜力的胃癌早期诊断新技术。     

胃癌中P16基因启动子区甲基化检测的临床意义

目的：探讨P16基因启动子区域甲基化在胃癌发生和发展过程中的临床意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）对37例胃癌病人手术切除肿瘤组织及其癌旁组织P16基因启动子区域甲基化状态进行检测。结果：P16基因在手术切除的29．7％的胃癌组织和2．7％的癌旁组织发生了甲基化，且与年龄、性别、淋巴结转移以及分化程度等临床病理指标无相关性。结论：P16基因启动子区甲基化可能是肿瘤特异性的（P〈0．05），可作为胃癌早期诊断的分子标记物。     

抑癌基因 Runx3表达下调与胃癌的关系

目的研究抑癌基因 Runx3在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法采用 RT-PCR 技术检测40例胃癌组织中 Runx3基因 mRNA 的表达;用免疫组化 SP 法检测 Runx3蛋白的表达.结果(1)Runx3在胃癌组织中阳性表达率为35.0%,明显低于癌旁正常胃黏膜组织的97.5%,两者间的差异有统计学意义(P<0.05);(2)胃癌组织中 Runx3 mRNA 的表达量明显低于其配对的癌旁正常胃黏膜组织(P<0.01);(3) Runx3 mRNA 的表达与胃癌的肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期有关(均 P<0.05);而与患者的年龄、性别、远处转移、浸润深度无关(均 P >0.05).结论 Runx3基因功能的下调与胃癌的预后密切相关.     

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。     

胃癌DAPK1基因启动子甲基化状况及表达的研究

目的对DAPK1基因甲基化状态、表达进行研究,探讨基因甲基化在胃癌发病中的作用。方法用半定量RT-PCR方法研究胃癌及癌旁组织中DAPK1基因的表达,用甲基化特异性PCR（MSP）对胃癌及癌旁组织中DAPK1基因启动子区甲基化情况进行研究。结果 DAPK1有16例表达下调,6例表达上调,基因在癌旁组织的mRNA表达明显高于癌组织,具有统计学意义（P=0.465）。DAPK1在胃癌组织及癌旁组织中甲基化率均为100%,无统计学意义（P〉0.05）。结论胃癌组织中DAPK1基因表达下降与该基因甲基化无明确相关性。     

乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’CpG岛甲基化状态研究

目的：检测乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域的甲基化状况。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-specific PCR,MSP）方法对乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化状况进行研究。结果：乳腺肿瘤组织中PTEN基因甲基化率为31.5%（29/92）,显著高于癌旁组织和正常组织（P〈0.05）,而癌旁组织和正常乳腺组织中甲基化率均比较低,分别为8.3%（2/24）、6.2%（1/16）,两者差异无统计学意义（P〉0.05）;PTEN基因甲基化与肿瘤组织学类型、年龄及肿瘤大小均无相关性,但与淋巴结转移相关（P〈0.05）,淋巴结转移组PTEN基因甲基化率显著高于无淋巴结转移组。结论：PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化可能是散发性乳腺癌PTEN基因失活的主要机制,参与了乳腺癌的发生发展过程;PTEN基因甲基化可能是乳腺癌发生发展过程中的晚期事件,提示可以考虑将PTEN基因甲基化作为评价乳腺癌肿瘤细胞转移潜能的分子标记。     

胃癌及癌前病变中p16基因启动子异常甲基化研究

目的 探讨p16基因异常甲基化在胃癌发生中的作用.方法 应用甲基化特异性pCR技术检测胃腺癌及癌前病变组织中p16基因甲基化状态,并应用免疫组化染色检测p16蛋白的表达.结果 慢性萎缩性胃炎、重度异型增生及胃腺癌组织p16基因启动子甲基化阳性率分别为11.1%、40%和43.3%.胃腺癌组与浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组及轻-中度异型增生组间p16基因甲基化阳性率差异有显著性(P＜0.05),而与重度异型增生组间差异无显著性(P＞0.05).p16蛋白阳性率在胃腺癌组、重度异型增生、轻-中度异型增生、萎缩性胃炎组和浅表性胃炎组分别为36.7%、40%、85.7%、83.3%和100%;在19例p16基因甲基化阳性病例中,18例p16蛋白缺失.结论 p16基因启动子异常甲基化可能是其在胃癌蛋白表达缺失的主要原因.p16基因启动子异常甲基化可能是胃癌发生的早期事件,在胃癌的发生起重要作用.     

胃癌组织中PTEN、RUNX3基因甲基化与幽门螺杆菌感染的关系

目的 探讨胃癌组织中PTEN、RUNX3基因甲基化与幽门螺杆菌感染的关系.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测100例胃癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织中PTEN、RUNX3基因启动子甲基化情况.所有受检者行胃镜前均进行13 C尿素呼气试验检测幽门螺杆菌感染情况.结果 胃癌组织标本中PTEN基因甲基化率高于...     

胃癌组织中p16基因甲基化分析

目的：探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系。方法：对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用于甲基敏感酶（HpaⅡ）和甲基非敏感酶（MspⅠ）酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5‘-CCGG-3‘位点甲基化进行检测。结果：20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例（25％）和9例（45％）,正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例,有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌（Ⅲa,Ⅳ期各1例）中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者（P＜0．05）。结论：p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去了对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件。