氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞MAPKs的激活及N-乙酰半胱氨酸的干预作用

目的探讨氧化应激对肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar type Ⅱ epithelial cells，ATⅡ）丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases，MAPKs）活化的影响及N-乙酰半胱氨酸（N-Acetylcysteine，NAC）对MAPKs活化及细胞存活凋亡的干预。方法原代培养大鼠ATⅡ，分为4组：正常对照组、NAC组、H2O2组和H2O2＋NAC组。电镜观察H2O2刺激后细胞形态改变；四甲基偶氮唑盐反应比色法（MTT法）检测各组细胞存活率；流式细胞术检测凋亡率和细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测p-ERK、p-p38和p-JNK的表达。结果与正常对照组比较，H2O2刺激后ATⅡ呈典型凋亡改变，细胞存活率下降（P〈0．05），凋亡率和细胞内ROS水平上升（P〈0．05），p-ERK、p-p38和p-JNK的表达也明显增加（P〈0．05），而NAC干预后可提高细胞存活率，降低凋亡率和细胞内ROS水平，并抑制p-ERK、p-p38和p-JNK的表达。结论氧化应激能激活MAPKs并诱导ATⅡ凋亡，NAC通过清除细胞内ROS和抑制MAPKs的磷酸化而对ATⅡ起保护作用。     

JNK信号传导通路在星形胶质细胞缺氧/复氧后损伤的作用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞（astrocyte,AC）缺氧/复氧损伤模型,探讨JNK信号转导通路与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,传至第3代,细胞自然纯化,实验设正常对照组（N）、SP600125组（SP组,10 μmol /L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧＋SP600125组（H/R＋SP组）.分别利用MTT法、AnnexinV/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染法、WB法检测缺氧8 h,复氧4、6、12、24 h时细胞存活率、凋亡率、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）的变化.结果 ①缺氧/复氧后细胞活力出现明显下降,SP600125阻断JNK通路后细胞活力高于H/R组;②缺氧/复氧后细胞凋亡率增加,SP600125阻断JNK通路后能够减轻细胞凋亡.③各组AC的JNK水平无显著变化,缺氧/复氧干预后p-JNK表达上调,用SP600125阻断JNK通路后,H/R＋SP组较H/R组p-JNK水平降低.结论 JNK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧/复氧损伤过程.     

磷酸化JNK介导大肠杆菌诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的研究大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡的机制以及特异性c-jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125的保护作用。方法分别用台盼蓝染色和P1标记流式细胞仪检测E.coli感染不同时间后U937细胞的死亡率及凋亡率；Western blot方法分析JNK信号转导通路的激活情况。结果E.coli可诱导U937细胞凋亡，并且具有时间依赖性，此凋亡过程可被JNK的阻断剂SP600125阻断；在此过程中，JNK在E.coli感染10min和20min时被激活并磷酸化。结论E.coli诱导的U937细胞凋亡依赖JNK信号转导通路；SP600125通过特异性地抑制JNK活性降低E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

p38丝裂原活化蛋白激酶与c-Jun-N末端激酶信号通路反向调控血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞凋亡

目的:研究不同亚型的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),即p38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)和cJun-N末端激酶(JNK)在血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的培养人体足细胞凋亡中的作用.方法:体外培养条件下,分别用ANGⅡ(10-8mol/L)或ANGⅡ与不同的MAPK抑制剂(SB02190、Pl98059、SP600125)处理人体足细胞;应用H-33342和碘化丙啶双染色形态学方法和DNA片段测定法检测细胞凋亡;应用Western印迹检测ANCⅡ刺激的MAPK活性改变.结果:ANGⅡ诱导足细胞凋亡呈时间和剂量依赖性;ANGⅡ刺激p38MAPK,而抑制JNK活性;p38MAPK抑制剂(SB202190)抑制ANGⅡ诱导的足细胞凋亡和p38MAPK活性;SP600125抑制JNK活性而促进了ANGⅡ诱导的足细胞凋亡.结论:ANGⅡ通过激活p38MAPK和抑制JNK活性诱导人体足细胞凋亡.     

氧化应激诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡时NF-κB和Bak的表达变化

目的：探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型（alveolar type Ⅱ,ATⅡ）上皮细胞的凋亡情况及核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB） p65和Bak 表达变化。方法：原代培养大鼠ATⅡ细胞,用过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）500 μmol/L处理不同时间,建立氧化损伤性细胞模型。相差显微镜下观察细胞形态变化。流式细胞仪检测H2O2 刺激后细胞凋亡率的变化。蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测 ATⅡ细胞受 H2O2刺激后NF-κB p65和Bak的表达变化。免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜下观察NF-κB p65的变化和细胞内分布情况。结果：受H2O2刺激 3 h后,ATⅡ细胞体积减小,胞内颗粒数目减少,细胞核固缩。与正常对照组比较,受H2O2刺激1 h和3 h 后,ATⅡ细胞的凋亡率明显上升（P=0.000,P=0.000）。Western blot检测发现H2O2刺激3 h后,细胞核内NF-κB p65的表达明显增加（P=0.000）,ATⅡ 细胞 Bak 蛋白的表达增加（P=0.000）。激光共聚焦显微镜观察发现正常细胞NF-κB p65表达微弱,H2O2刺激3 h后,NF-κB p65 表达明显增强,主要集中分布于细胞核。结论：氧化应激能诱导ATⅡ细胞凋亡,在此过程中 NF-κB p65 在细胞核内的表达增加,Bak 的表达也增加,两者参与了 ATⅡ 细胞的凋亡。     

PLA激活JNK信号通路促进NCI-H292细胞凋亡

目的 探讨多聚左旋精氨酸(PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡的信号通路及分子机制.方法 将加入PLA 的浓度梯度分5组:0、10、20、40、60 mg/L,作用NCI-H292细胞24 h后Western blot法检测每组c-Jun氨基末端激酶( JNK)的磷酸化水平;设对照组、PLA 组(40 mg /L)、SP组(加入特异性JNK通路抑制剂SP600125)、PLA+SP组,加药24 h后流式细胞仪检测每组NCI-H292细胞凋亡率,Western blot法检测各组NCI-H292细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2/Bax、Caspase-3、P-JNK/JNK和β-actin蛋白的表达水平.结果 对照组、PLA组、SP组、 PLA+ SP组 NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13 ±1.07)%、(22.62 ± 1.66)%、(5.69 ± 0.14)%、(8.99 ± 3.73)% ;Western blot 法检测 PLA 诱导 NCI-H292 细胞内BCL-2/Bax比值降低( P＜0. 01),Caspase 3 表达升高( P＜0. 001),PLA诱导NCI-H292 细胞JNK 磷酸化水平增加(P＜0.001 ), SP600125 抑制 PLA 诱导 JNK 磷酸化( P ＜0.001).结论 PLA可能介导JNK信号通路引起NCI-H292细胞凋亡水平增加.     

JNK和Caspase-3在夏枯草引起人淋巴瘤细胞凋亡中的作用

目的 研究夏枯草对淋巴瘤细胞生长的影响及其可能的机制.方法 参考临床常用剂量,采用50 g/L夏枯草(夏枯草组)、50 g/L夏枯草及20 μmol/L c-Jun氨基末端激酶(JNK)特异抑制剂SP600125(SP600125组)处理Raji细胞,以加入同体积生理盐水处理的Raji细胞作对照,应用噻唑蓝比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率,通过Western印迹检测JNK、c-Jun磷酸化水平和半胱氨酰天门冬氨酸(Caspase-3)的表达,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率.结果 夏枯草细胞增殖率(67.32±1.96)%低于其余各组(P<0.05);JNK磷酸化水平(0.48 ±0.03)和c-Jun磷酸化水平(0.46±0.04)在夏枯草组均明显增高(P<0.05),SP600125可抑制c-Jun磷酸化(0.43±0.01);夏枯草组的Caspase-3表达(1.35±0.07)高于其他各组,SP600125使其表达减少(0.79±0.06,P<0.05);细胞凋亡率在夏枯草组中最高(25.32±5.27)%(P<0.05).结论 夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路和Caspase途径导致细胞凋亡实现的.     

JNK信号通路在乙醛刺激的肝星状细胞凋亡中的作用

目的: 观察用特异性c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)特异性阻断剂SP600125阻断JNK信号传导通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)凋亡的影响.方法: 体外培养大鼠HSC株;用不同浓度的SP600125(20,60,100 μg/L)对乙醛(200 μmol/L)刺激的大鼠HSC进行处理,分别以DNA片段凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western Blotting法检测JNK激酶的活性变化.结果: 不同浓度的SP600125(终浓度为20,60,100 μg/L)对乙醛刺激的HSC内p-JNK的水平有明显下调作用,强度呈剂量依赖关系,同乙醛组相比有显著性差异[MVI: (35.6±0.9),(24.4±1.1),(3.4±0.2) vs (48.2±0.9),P<0.05];同时SP600125具有促进HSC凋亡的作用: 空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为[(2.0±0.2)%和(6.0±0.5)% ,两者有显著性差异(P<0.05)],经SP600125处理后细胞凋亡率上升[分别为(11.1±0.4)%,(26.9±0.9)%,(33.1±1.3)%,P<0.05],同乙醛组相比有显著性差异(P<0.05).结论: SP600125通过阻断JNK通路促进HSC凋亡,故JNK信号通路可能参与了HSC的凋亡.     

氧化应激性肠上皮细胞损伤与MAPK信号通路的关系研究

目的观察氧化应激引起肠上皮细胞(IEC-6)损伤后丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的情况,从而探讨氧化应激损伤的机制。方法采用MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500、800、1000、2000μmol/L)H2O2对IEC-6生存率的影响;用WesternBlot法检测H2O2作用不同时间(0.25、0.5、1、2、3、4h)下ERK、JNK以及p38磷酸化的激活情况。结果与正常组相比,随着H2O2刺激浓度的增加,IEC-6的生存率逐渐降低,呈浓度依赖性。当H2O2刺激浓度为200μmol/L时细胞的生存率约为50%。ERK1/2、JNK1/2、p38在H2O2刺激0.25h开始磷酸化,在刺激0.5h达到最高,随后磷酸化水平恢复到基础值。结论氧化应激早期可通过激活ERK、JNK以及p38的磷酸化引起IEC-6的损伤。     

JNK通路及HSP70在热化疗抑制人小细胞肺癌细胞生长中的作用

目的:研究热化疗对小细胞肺癌生长的影响及其可能的机制.方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120 μg/L紫杉醇及20μmol/L JNK特异抑制剂SP600125(热化联合 SP600125组)、单纯43℃加热(单纯热疗组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照.应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过Western印迹法检测JNK、磷酸化JNK(pJNK)和HSP70的表达并对数据进行统计学分析.结果:热化联合组细胞增殖率低于对照组、单纯化疗、单纯热疗及热化联合 SP600125组(P＜0.05);p-JNK表达水平在热化联合组中表达明显增高(P＜0.05),但SP600125可抑制其表达,使热化联合 SP600125组细胞的增殖率相应增高(P ＜0.05);HSP70在热化联合组的表达低于单纯热疗组(P<0.05),细胞增殖率也发生了相应变化.结论:热疗可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种作用可能是通过激活JNK信号转导通路或抑制HSP70的表达完成的.     

JNK与Akt通路在夏枯草抑制人淋巴瘤细胞生长中的作用

目的研究夏枯草对淋巴瘤细胞(Raji细胞)生长的影响及可能的机制。方法参考临床常用剂量,采用50g/L夏枯草(夏枯草组)、50g/L夏枯草+20μmol/LJNK特异抑制剂SP600125(SP600125组)、50g/L夏枯草+1μmol/LAkt特异抑制剂Wortmannin(Wortmannin组)处理Raji细胞,以同体积生理盐水作为对照组,应用MTT法检测各组的细胞增殖率,蛋白免疫印迹法检测各组的JNK和Akt磷酸化水平。结果夏枯草组细胞增殖率低于对照组(P0.05),SP600125组细胞增殖率比夏枯草组增高(P0.05),Wortmannin组细胞增殖率比夏枯草组降低(P0.05);JNK磷酸化水平在夏枯草组中明显升高(P0.05),SP600125可以抑制其磷酸化(P0.05),Wortmannin不能抑制其磷酸化(P0.05);Akt磷酸化水平在夏枯草组中降低(P0.05),SP60015及Wortmannin均可抑制其磷酸化(P0.05)。结论夏枯草可以明显抑制Raji细胞的生长,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路,抑制Akt通路激活实现的。     

c-Jun氨基末端激酶活化在三丁基锡诱导凋亡中的作用及机制

目的：研究c-jun氨基末端激酶（JNK）参与三丁基锡（Tributyltin, TBT）诱导正常人羊膜细胞FL凋亡的分子机制。方法：FL细胞经不同浓度TBT染毒1h后,PI/Annexin V双染色法检测FL细胞凋亡率。Western blot检测FL细胞JNK的磷酸化水平,Bax定位、Bcl-2的磷酸化水平及总Bax和Bcl-2表达水平。结果：与对照组相比,4μmol/L和6μmol/L的TBT染毒剂量组细胞凋亡率明显升高,2μmol/L～6μmol/L剂量组JNK磷酸化水平升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。JNK特异抑制剂SP600125明显降低TBT诱导的FL细胞凋亡率,而JNK特异抑制剂SP600125对Bax定位、Bcl-2的磷酸化水平及总的Bax和Bcl-2表达量无影响。结论：JNK的活化是TBT诱导FL细胞凋亡的重要因素,但JNK介导凋亡的途径并非通过调控凋亡相关因子Bax和Bcl-2。     

淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

【目的】探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响。【方法】(1)体外研究:用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况及信号通路蛋白Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化情况。并进一步观察单独或联合JNK抑制剂SP600125对JNK活化程度的影响,采用蛋白免疫印迹法检测细胞JNK磷酸化水平。(2)体内研究:建立鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型,测定裸鼠移植瘤质量、细胞凋亡和移植瘤组织VEGF表达情况、MVD值。【结果】选择低细胞毒性10、20、50μmol/L剂量的淫羊藿苷进行后续实验。与空白对照组(淫羊藿苷0μmol/L)比较,淫羊藿苷10、20、50μmol/L组CNE-2细胞侵袭细胞数、划痕愈合率降低,细胞VEGF、N-cadherin、Vimentin表达水平明显降低(P 0.05),E-cadherin表达水平与CaMKⅡ、JNK的磷酸化水平升高(P 0.05),均呈剂量依赖性。淫羊藿苷(10μmol/L)可减弱JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。与模型组比较,淫羊藿苷组鼻咽癌裸鼠存活率升高,移植瘤质量减小,移植瘤组织细胞凋亡率升高,VEGF表达水平、MVD值明显下降(P 0.05)。【结论】淫羊藿苷可促进CaMKⅡ/JNK通路激活来抑制鼻咽癌CNE-2细胞的存活、侵袭和迁移能力。     

JNK信号通路对葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖的调控作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路对葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖过程的调控作用。方法体外培养Eca-109细胞,用不同浓度葡萄籽提取物、JNK特异性抑制剂SP600125对Eca-109细胞进行处理,应用噻唑蓝比色法检测细胞增殖,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变,annexinV/碘化丙锭双标记观察细胞凋亡;Western印迹检测磷酸化JNK蛋白表达的变化。结果葡萄籽提取物作用于Eca-109细胞后,细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高,具有时间和剂量依赖性,并伴随磷酸化-JNK蛋白水平上调;加入SP600125能下调磷酸化-JNK的水平,显著降低葡萄籽提取物对Eca-109细胞的增殖抑制率和凋亡率。结论 JNK信号通路参与葡萄籽提取物抑制Eca-109细胞增殖过程的调控,抑制JNK活性可降低葡萄籽提取物对Eca-109细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用。     

MAPKs通路在胰岛素促人乳腺癌细胞系增殖中的机制研究

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路在胰岛素促人乳腺癌细胞MCF-7增殖中的作用机制?方法:通过MTT比色法观察不同浓度(0?25?50?100?200 nmol/L)胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应,及用JNK?ERK1/2通路特异性抑制剂(SP600125?PD98059)阻断MAPKs信号通路对胰岛素促MCF-7细胞增殖效应的影响; Western blot检测胰岛素干预对磷酸化JNK?磷酸化ERK1/2蛋白表达水平的影响以及JNK?ERK1/2?JAK2特异性抑制剂对上述蛋白表达的影响?结果:各浓度胰岛素均能不同程度促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,25 nmol/L胰岛素的促增殖效应最强(P < 0.01);分别用SP600125?PD98059?AG490阻断JNK?ERK1/2?JAK/STAT信号通路均可不同程度抑制胰岛素促MCF-7细胞的增殖效应;胰岛素可诱导MAPKs信号通路中靶蛋白的磷酸化激活,Western blot结果显示,100 nmol/L胰岛素作用于MCF-7细胞5 min后即可磷酸化激活JNK途径,且该活化状态可持续1hr,而ERK1/2蛋白在胰岛素作用30 min后才被磷酸化激活;10 μmol/L PD98059(ERK通路抑制剂)可显著抑制200 nmol/L 胰岛素作用30 min对ERK1/2的磷酸化激活,而20 μmol/L SP600125(JNK通路抑制剂)以及20 μmol/L AG490(JAK/STAT通路抑制剂)对ERK1/2磷酸化激活的抑制作用则不明显?结论:胰岛素可促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖,该增殖效应可能与其激活MAPKs信号通路及下游其他信号转导有关,上述通路的激活可能促进乳腺癌的发生发展?     

SAPK/JNK信号通路在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用研究

目的 用CNE-2Z多细胞球(multicellular spheroids,MCSs)模拟实体瘤,探讨SAPK/JNK信号通路在鼻咽癌放疗群集耐受中的作用.方法 采用liquid overlay技术进行MCSs培养,Western blot法检测X射线照射后信号通路活性变化,SAPK/JNK信号通路特异阻断剂sp-600125作用前后Caspase-3蛋白表达变化;TUNEL法检测sp-600125作用前后、X射线照射后MCSs凋亡率变化.结果 X射线照射后MCSs中SAPK/JNK信号通路表现动态磷酸化过程,其中2h磷酸化水平最高;预先阻断信号通路X射线照射后,细胞凋亡率上调(P＜0.05),caspase-3蛋白表达增高(P＜0.05).结论 SAPK/JNK信号通路短暂激活可能传递生存信号而在鼻咽癌放疗群集耐受中发挥作用,特异性阻断其信号传递上调MCSs凋亡率,这可能与促进caspase-3蛋白表达有关.     

p53在氧化应激下肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激状态下肺泡II型上皮细胞(ATIIcells)凋亡时,activecaspase-3的表达和p53在细胞内分布情况.方法:原代培养大鼠ATII细胞,用500μmol/L过氧化氢(H2O2)处理,建立氧化损伤性细胞模型.经DAPI染色后观察细胞核的形态变化.流式细胞术检测H2O2刺激后细胞凋亡率的变化;蛋白质免疫印迹法检测H2O2刺激后activecaspase-3的表达变化.免疫荧光染色后观察p53的表达和细胞内分布.结果:DAPI染色发现,正常对照组细胞核较大,发出浅蓝色的荧光,而H2O2刺激后,细胞核发生致密浓染,核周出现光晕等改变.与正常对照组比较,随H2O2刺激时间延长,细胞凋亡率显著上升(P<0.05);Western Blot检测发现H2O2刺激后,activecaspase-3蛋白表达增加(P<0.05).激光共聚焦显微镜观察发现正常细胞p53表达微弱,H2O2刺激3h后,p53表达显著增强,主要集中于细胞核.结论:氧化应激能促使activecaspase-3蛋白表达增加及p53细胞核内表达增加,诱导细胞发生凋亡;p53可能通过转录依赖的途径诱导细胞凋亡.     

钙敏感受体参与MAPK通路诱导细胞凋亡信号传导通路的机制研究

目的钙敏感受体(calcium-sensing recetor,CaR)具有七个跨膜区的G蛋白耦联受体,它通过激活PLC系统引起肌浆网释放钙从而引起细胞内钙的升高。CaR与心肌细胞凋亡的关系及相关信号传导途径。方法大鼠乳鼠心肌细胞培养复制缺血再灌注损伤,并分为五组,分别:1)对照组;2)模拟缺血/再灌注组;3)GdCl3 NiCl2 CdCl2组;4)SP600125组;5)SB203580组;观察加入CaR激动剂时CaR的表达情况;MTT法和流式细胞仪观察细胞凋亡;Western Blot检测心肌组织,同时还检测了培养心肌细胞中磷酸化JNK和p38的表达。结果心肌缺血/再灌注和加入CaR激动剂时CaR的表达明显高于对照组,细胞内钙升高幅度明显大于对照组。HE染色、TUNEL和电镜观察发现缺血/再灌注和激动剂组损伤明显,并且凋亡细胞广泛存在。同时,细胞浆中cyt c和Caspase3的表达明显增加,而线粒体中的cyt c和胞浆中的Bcl2的表达下降。磷酸化JNK和p38的表达增多,在加入JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580心肌细胞凋亡率明显下降,磷酸化JNK和p38的表达减少。结论CaR参与大鼠心肌缺血/再灌注损伤介导细胞内钙超载。CaR激活后,通过诱发线粒体损伤而引起cytc-Caspase 3途径促进心肌细胞凋亡;同时亦可激活JNK和p38酪氨酸蛋白激酶途径参与细胞凋亡。     

高氧肺损伤中肺细胞凋亡及JNK信号通路调控机制

目的:观察高氧暴露下肺组织细胞凋亡和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达的变化,并探讨JNK信号转导通路对高氧诱导的肺细胞凋亡的调控机制.方法: 48只3 wk龄Wistar大鼠随机分为空气对照组、高氧暴露3,7,14d组、空气 JNK抑制剂干预组、高氧暴露7 d JNK抑制剂干预组.光镜下观察肺组织病理学改变,末端标记法(TUNEL)分析肺组织细胞凋亡的变化,免疫组化检测肺组织p-JNK的表达分布,Western Blot检测肺组织p-JNK蛋白质的表达含量.结果: 与空气对照组比较,高氧暴露各时间点组肺组织出现典型急、慢性肺损伤的病理学改变,肺组织细胞凋亡指数和p-JNK蛋白表达含量均显著增加(P<0.05),肺组织p-JNK阳性细胞明显增多.JNK抑制剂SP600125在空气和高氧暴露下均能明显阻断JNK的激活(P<0.05),SP600125干预后高氧暴露肺组织细胞凋亡指数显著减少(P<0.05).结论: 细胞凋亡是高氧肺损伤的一个重要病理组织学特点.JNK信号转导通路在高氧肺损伤中被激活,可能发挥促细胞凋亡效应.     

神经酰胺通过JNK-c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡

目的探讨神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6自噬性死亡的影响及其作用机制。方法不同浓度神经酰胺作用于C6细胞后,用MTT法检测细胞的存活率,流式法检测细胞凋亡的改变;Western blotting及电镜的方法观察细胞自噬水平的改变,以及JNK及其下游靶分子c-Jun的磷酸化水平变化;最后进一步借助JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性,观察其对神经酰胺诱导的细胞自噬情况的影响。结果与对照组相比,神经酰胺作用24 h后,C6细胞存活率明显降低,且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,神经酰胺作用24 h后,C6细胞死亡明显升高且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),但其中凋亡性死亡比例较低;神经酰胺作用后细胞内自噬小体数目,LC3B/LC3A的比值,Beclin-1的表达水平,以及JNK和c-Jun磷酸化水平都显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);提前给予JNK特异性抑制剂SP600125抑制JNK的活性后,显著阻断神经酰胺诱导的细胞自噬。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞C6发生自噬性死亡,其诱导胶质瘤细胞发生自噬的机制可能与激活JNK信号通路有关。