中晚期宫颈鳞癌患者治疗前外周血Treg计数分析

背景与目的：中晚期宫颈鳞癌同期放化疗(concurrent chemoradiotherapy,CCRT)治疗前性价比高的疗效判断方法较有限,该研究拟通过检测治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/-调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)亚群计数及血清鳞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag)水平,评价两者预测临床疗效的可行性。方法：采集44例Ⅱ_B~Ⅳ_A期宫颈鳞癌患者行CCRT治疗前的外周血标本,分别利用流式细胞免疫表型分析和酶联免疫法检测外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数及血清SCC-Ag水平。收集临床和病理资料,并统计检验2个指标对疗效的预测作用。结果：治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数在临床有效组低于无效组［(8.78±2.80)% vs (10.95±2.56)%,P<0.05］,血清SCC-Ag在不同临床疗效组间差异无统计学意义,且这2个、指标之间未发现相关性(Spearman’rho=-0.093,P=0.540)。经受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg及血清SCC-Ag最佳界值分别为9.76%与9.50 ng/mL。单因素分析显示,治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数(OR=1.901,95%CI：1.112~3.219,P=0.017)对CCRT疗效有预测作用,而血清SCC-Ag水平无预测作用(OR=0.998,95%CI：0.001~4.253,P=0.897)。多因素Logistic回归分析显示,治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg为独立的临床疗效预测因子(OR=3.115,95%CI：1.253~7.742,P=0.014)。结论：治疗前外周血CD4⁺CD25⁺CD127^Low/- Treg计数用于中晚期宫颈鳞癌患者CCRT临床疗效预测具有可行性。     

不同乳腺癌干细胞亚群的自我更新和致瘤能力差异

目的 分析原代培养乳腺癌细胞中不同乳腺癌干细胞亚群的自我更新、致瘤能力差异。方法 采用流式细胞术和免疫荧光实验,从乳腺癌原代培养细胞中分选、鉴定CD44⁺CD24^-/low、ALDH1⁺和ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low细胞亚群,分析各分选细胞占总肿瘤细胞的比例;通过克隆形成实验观察各组细胞的自我更新能力;通过裸鼠致瘤实验观察各组细胞的致瘤能力。结果 CD44+CD24^-/low细胞占总细胞比例的7.2%,ALDH1⁺细胞所占比例为4.6%,ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low细胞所占比例为1.5%。三组细胞自我更新和致瘤能力由强至弱依次为ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low、ALDH1⁺、CD44⁺CD24^-/low细胞,各组细胞间比较差异均存在统计学意义（P<0.05）。 结论 乳腺癌组织中CD44+CD24-/low、ALDH1⁺和ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low三组乳腺癌干细胞亚群之间的自我更新和致瘤能力有明显差异,ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low亚群细胞具有最强的自我更新和致瘤能力,提示ALDH1⁺CD44⁺CD24^-/low可能是更具有特异性的乳腺癌干细胞标志物。     

过继性免疫治疗对非小细胞肺癌患者外周血T细胞亚群的影响

目的 研究细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞治疗对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者外周血T细胞亚群及一般情况的影响。方法 采集非小细胞肺癌患者外周血,常规方法体外扩增CIK细胞,分三次回输患者体内,流式细胞仪检测非小细胞肺癌患者治疗前与治疗3次后T细胞亚群的变化,分析其与健康对照组相比外周血T细胞亚群的差异,并观察CIK细胞治疗前后患者一般情况变化。结果 与对照组相比,NSCLC患者外周血中CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ 比值显著下降（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前,CD3⁺ T 细胞比例、CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值显著升高（P<0.05）,CD3⁺CD8⁺ T细胞比例显著降低（P<0.05）。CIK细胞治疗后与对照组相比,CD3⁺ T 细胞比例、CD4⁺/CD8⁺T细胞比值显著下降（P<0.05）。CD3⁺CD4⁺ T细胞比例、CD3⁺CD8⁺ T细胞比例升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。CIK细胞治疗前Tregs较对照组显著升高（P<0.05）。CIK细胞治疗后与治疗前相比,Tregs比例显著下降（P<0.05）。结论 CIK细胞输注治疗可以增强NSCLC患者的免疫功能,并改善患者的一般情况,提高生活质量,且未见明显不良反应。     

载脂蛋白C3 转基因小鼠脾脏免疫细胞表型及其活性分析

目的：分析载脂蛋白C3（Apo C3）转基因小鼠脾脏免疫细胞的表型及活性。方法：以12只ICR背景Apo C3转基因小鼠为研究模型,选取鼠龄/性别匹配的野生型小鼠作为对照,采集小鼠球后静脉丛血液,以酶反应显色比色法联合酶标仪测定血浆甘油三酯水平,选取血浆甘油三酯含量≥ 1 000 mg/dL （11.3 mmol/L）的小鼠用于后续实验。取小鼠脾脏制备成单细胞悬液,采用细胞膜表面分子、胞内分子及核内分子染色法,通过流式细胞术检测转基因小鼠和野生型小鼠脾脏免疫细胞频率和表型。再将转基因小鼠或野生型小鼠脾脏细胞与结肠癌细胞MC38分别以1：1、1：3、3：1效靶比共培养72 h后,通过流式细胞术检测CD8⁺ T细胞CD107a的表达。结果：Apo C3转基因小鼠血浆甘油三酯含量较野生型小鼠显著升高（P<0.01）,而体质量差异无统计学意义（P>0.05）。与野生型小鼠相比,Apo C3转基因小鼠脾脏CD3⁺CD8⁺、CD3⁺CD8⁺NKG2D⁺细胞频率明显增多,髓系抑制性Gr-1⁺CD11B⁺细胞频率增加,脾脏NK1.1⁺NK、NK1.1⁺NKG2D⁺细胞的频率明显减少（P均>0.05）;脾脏CD3⁺CD4⁺NKG2D⁺、CD3⁺CD4⁺IL-17⁺细胞频率以及调节性T细胞,NKT细胞,γδT细胞,B细胞和巨噬细胞频率均无明显变化（P均>0.05）。Apo C3转基因小鼠CD8⁺CD62L^-CD44⁺、CD8⁺CD44⁺KLGR1⁺频率升高,以效应性T细胞为主,且CD8⁺ T细胞分泌IFN-γ活性增强;转基因小鼠中CD8⁺ T淋巴细胞CD107a的表达增加差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论：Apo C3转基因小鼠呈现高水平血浆甘油三酯,其免疫细胞表型及活性具有显著变化,其中CD8⁺ T细胞频率及生物活性上调,髓系抑制性细胞频率升高,NK细胞频率降低;并且转基因小鼠中CD8⁺T淋巴细胞对靶细胞杀伤能力增强。     

肝细胞癌组织ICOS+T细胞的多重免疫组织化学检测及其预后价值研究

背景与目的：诱导共刺激分子（inducible costimulator,ICOS）属于B7-CD28免疫球蛋白超家族成员,表达于活化T细胞表面,在T细胞的激活和免疫应答中发挥重要作用;但目前对于ICOS及ICOS+ T细胞在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）肿瘤组织中的表达及其意义尚不清楚。该研究旨在测定ICOS、ICOS⁺ T细胞在HCC患者肿瘤组织中的表达情况并探讨其预后价值。方法：应用组织芯片（tissue microarrays,TMAs）和多重免疫组织化学技术（multiplex immunohistochemistry,mIHC）检测2006—2007年在复旦大学附属中山医院接受手术治疗的358例原发性HCC患者肿瘤组织和癌旁组织中ICOS⁺细胞、ICOS⁺CD4⁺及ICOS⁺CD8⁺ T细胞的浸润密度和ICOS⁺细胞占CD4⁺、CD8⁺ T细胞的百分比。应用Kaplan-Meier法和多因素COX回归模型分析上述指标对患者预后的影响。结果：与癌旁组织相比,ICOS⁺细胞和ICOS⁺CD4⁺ T细胞在肿瘤组织中浸润数量显著增加（P<0.000 1和P=0.009 1）,而ICOS⁺CD8⁺ T细胞则呈相反的降低趋势（P=0.033）;在肿瘤中,ICOS⁺CD4⁺ T细胞的浸润程度显著高于ICOS⁺CD8⁺ T细胞。此外,ICOS⁺CD4⁺和ICOS⁺CD8⁺ T细胞占各自T细胞亚群的百分比在肿瘤组织中均显著增加（P均<0.000 1）。预后分析发现,肿瘤组织中ICOS⁺细胞、ICOS⁺CD4⁺及ICOS⁺CD8⁺ T细胞浸润高的患者总生存期（overall survival,OS）更长,多因素分析证实上述指标是HCC的独立预后良好因素。结论：ICOS在HCC患者的肿瘤组织中高表达,且ICOS⁺细胞、ICOS⁺CD4⁺及ICOS⁺CD8⁺ T细胞是OS的独立预后良好因素,提示上述指标可作为新的HCC预后免疫标志物。     

CD+T细胞及Treg细胞表面PD-1水平与肺癌患者术后预后的关系

目的 探讨CD⁺T细胞及调节性T(Treg)细胞表面程序性死亡受体1(PD-1)水平与肺癌患者术后预后的关系。方法 选取行肺癌根治术的肺癌患者126例,统计术后2年内预后不良发生率,并根据其预后情况将其分为良好组和不良组,单因素分析肺癌患者术后预后不良的影响因素,Logistic回归分析肺癌患者术后预后不良的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析CD⁺T细胞及Treg PD-1水平对肺癌患者术后预后的预测价值。结果 两组肿瘤淋巴结转移(TNM)分期、CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺及Treg PD-1水平比较,均有显著差异(P<0.05);Logistic回归分析显示,CD3⁺、CD3⁺CD4⁺是肺癌患者术后预后不良的独立保护因素,CD3⁺CD8⁺、Treg PD-1是肺癌患者术后预后不良的独立危险因素(...     

结直肠癌及腺瘤患者CD4+、CD8+和CD28+T淋巴细胞的亚群变化及临床意义

背景与目的：结直肠癌（colorectal cancer,CRC）严重影响患者生存。探讨肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）T细胞亚群在CRC和腺瘤中的表达及意义。方法：用免疫组织化学法和流式细胞术对51例健康人（对照组）、46例结直肠腺瘤（腺瘤组）、100例CRC（癌症组）和15例CRC术后（癌术后组）患者进行T细胞亚群检测。结果：① 对照组、腺瘤组及癌症组3组中CD4⁺T细胞的阳性率分别是90.00%、43.75%及32.65%,CD8⁺T淋巴细胞的阳性率分别是30.00%、56.25%及75.51%,CD28⁺T淋巴细胞的阳性率分别是42.86%、30.00%及20.00%。② 对照组、腺瘤组及癌症组3组中CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD28⁺、CD8⁺CD28⁺和CD8^－CD28⁺逐渐降低,CD8⁺、CD8⁺CD28^－逐渐增加（P＜0.05）;癌术前术后T细胞亚群差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：① CRC微环境T细胞亚群中CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD28⁺、CD8⁺CD28⁺和CD8^－CD28⁺呈递减趋势,CD8⁺、CD8⁺CD28^－呈递增趋势,且在癌前病变腺瘤中已逐步出现上述趋势变化。② CRC患者行肿瘤切除术后,其T细胞亚群有所恢复,故在一定程度上,CRC中T细胞亚群的变化可以早期预测结直肠疾病的发展。     

影响Ⅱ、Ⅲ期结直肠癌术后复发或转移的临床因素分析

目的 探讨Ⅱ、Ⅲ期结直肠癌(CRC)患者临床病理特征及其与术后复发或转移的关系。方法 纳入2017年12月至2018年12月云南省肿瘤医院结直肠外科收治行根治性手术治疗的CRC患者150例(经术后病理确诊为Ⅱ、Ⅲ期),分析术后出现复发或转移与临床病理特征的相关性。结果 150例患者有44例出现复发或转移。分化程度(χ²=9.554,P=0.002)、N分期(χ²=6.724,P=0.035)、CD45⁺CD3⁺(χ²=6.194,P=0.045)、CIK细胞比率(χ²=5.624,P=0.018)与Ⅱ、Ⅲ期CRC患者术后出现复发或转移有关。Ⅱ期CRC患者术前外周血CD3⁺T细胞、CD8⁺T细胞比率低于Ⅲ期患者(P=0.019,P=0.012)。Cox回归分析显示,N分期、CA19-9是Ⅱ、Ⅲ期CRC患者术后复发或转移的危险因素。结论 Ⅱ、Ⅲ期CRC患者的分化程度、N分期、免疫功能与术后复发或转移密切相关,联合监测...     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究

目的 通过乳腺癌细胞系及其干细胞的培养,化疗药干预和流式细胞仪筛选鉴定,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例,及富集乳腺癌干细胞相关亚群的方法。方法 通过细胞培养乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,观察生长曲线,比较化疗药物干预下生长情况;利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例;无血清悬浮培养,化疗药(多西紫杉醇、表阿霉素)干预这两种乳腺癌细胞系,观察其是否形成细胞球。结果 (1)MDA-MB-231细胞系倍增时间短,生长速率高于MCF-7细胞系;(2)MCF-7细胞系中可能存在较大比例肿瘤干细胞,其对化疗抵制,能自我更新;(3)化疗敏感性用两独立样本t检验,MCF-7细胞,差异没有统计学意义;MDA-MB-231细胞,差异有统计学意义,提示MDA-MB-231细胞系对该方案化疗较敏感;(4)无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞系未发现明显细胞球;MCF-7细胞系初次无血清培养约6天出现细胞球。加入化疗药筛选后两种细胞,见大部分肿瘤细胞逐渐死亡,未发现明显细胞球;(5)流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中主要是CD44⁺CD24⁺亚群和CD44^-CD24⁺亚群,CD44⁺CD24^-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论 (1)MDA-MB-231细胞系增值较快,恶性度相对较高,其对TA联合化疗药物较敏感;MCF-7细胞系中可能存在少量肿瘤干细胞,对化疗抵制,能自我更新;(2)无血清培养液培养MCF-7细胞系能形成悬浮细胞球;流式细胞仪检测两种细胞系中CD44⁺CD24^-/low细胞比例小;(3)CD44⁺CD24^-/low表型可能不是乳腺癌干细胞唯一特异性的表面标志。     

儿童急性B淋巴细胞白血病缓解期外周血MDSCs的变化及意义

目的:观察儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)缓解期患者外周血髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)的变化,并探讨其原因及可能的意义。方法:分别抽取22例儿童B-ALL行长春新碱、柔红霉素、左旋门冬酰胺酶和强的松(VDLP)方案化疗后缓解期患者和20例健康体检儿童的外周血,流式细胞术检测和分析CD33⁺HLA-DR^-/CD33⁺细胞比例、以及CD14⁺CD33⁺HLA-DR^-和CD15⁺CD33⁺HLA-DR^-两群MDSCs细胞比例的变化,统计分析B-ALL患者和健康对照组之间MDSCs的差异。结果:儿童B-ALL缓解期患者外周血CD33⁺HLA-DR^-MDSCs所占CD33⁺细胞的比例较健康对照组明显降低(P=0.001);单核细胞来源的CD14⁺CD33⁺HLA-DRMDSCs的比例较健康对照组显著降低(P<0.01);粒细胞来源的CD15⁺CD33⁺HLA-DR^- MDSCs比例亦较健康对照组明显降低(P=0.004)。结论:儿童B-ALL患者行VDLP方案化疗后完全缓解期患者外周血MDSCs的比例明显下降,其低水平的MDSCs可能与化疗后机体免疫系统尚未完全正常建立相关。     

基于CD19/IgM亚群分析套细胞淋巴瘤骨髓中T细胞的构比异常

目的:研究T细胞在初诊IV期套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma, MCL)骨髓单个核细胞中的差异表达。方法:首先流式检测健康供者及MCL组中CD19^-/IgM^-,CD19^-/IgM⁺,CD19⁺/IgM^-,CD19⁺/IgM⁺亚群的比例;其次检测CD45⁺CD3⁺T细胞在两组中的总比例;最后检测T细胞在两组四个亚群中的占比。结果:四个亚群在组内有极其显著的差异(P<0.000 1),两组间无统计学差异。T细胞在MCL组占(0.46±0.13)%较健康供者组(1.10±0.06)%显著减少(P=0.025 1)。四个亚群中T细胞占比在健康供者组内有极其显著的差异(P<0.000 1),而MCL组内差异消失(P=0.329 4)。T细胞在MCL组CD19^-/IgM^-亚组中占(0.02±0.01)%较...     

CD44和CD24标记的宫颈癌细胞亚群特性

目的 考察Siha细胞系中的CD44^+/CD24⁺能否富集宫颈癌干细胞。方法 用流式细胞仪分选出CD44⁺/CD24⁺Siha细胞,用无血清悬浮培养观察成球能力、裸鼠移植瘤实验观察成瘤能力、透射电子显微镜观察辐射前后两组细胞形态变化,并通过Transwell侵袭实验比较细胞侵袭能力的差异。结果 耐放疗细胞中CD44^+/CD24⁺Siha细胞比例明显高于其在亲代Siha细胞中的比例;无血清培养CD44⁺/CD24⁺Siha细胞组可以形成致密且体积较大的细胞球,CD44^+/CD24⁺Siha细胞组致瘤时间早,成瘤率高;辐射后CD44⁺/CD24⁺Siha细胞较亲代Siha细胞更抗凋亡;CD44⁺/CD24⁺Siha细胞组的迁移细胞数明显高于亲代Siha细胞组,所有数据均具有统计学意义。结论 CD44⁺/CD24⁺Siha具备部分干细胞特性,CD44⁺/CD24⁺可能成为宫颈癌干细胞特异性表面标志物。     

CD44+CD24-/low在基底样乳腺癌中过表达与其恶性预后的相关性研究

目的探讨乳腺癌干细胞样标志物CD44⁺CD24^-/low在基底样乳腺癌(basal-like breast carcinoma, BLBC)中过表达与BLBC恶性预后的相关性。方法 在乳腺癌基因表达分型的基础上, 根据雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(Her-2)免疫表型的表达选取乳腺癌组织四组:管腔A组、管腔B/C组、Her-2高表达组及三阴性组;对三阴性组检测CK5/6、EGFR, 分为正常乳腺样型和BLBC型两组;对上述5组进行免疫组化Envision法染色, 选用抗体为CD44、CD24, 观察CD44⁺CD24^-/low表型表达并比较BLBC组与其它各组的差异。结果 (1)三阴性组共60例, CK5/6和或EGFR阳性者41例(68.3%), 确定为BLBC;CK5/6、EGFR阴性者19例(31.7%), 确定为正常乳腺样组;(2)CD44⁺CD24^-/low表型在BLBC组中占78.0%(32/41), 相对于管腔A组37.9%(11/29)、管腔B组25.9%(7/27)、Her-2高表达组17.2%(5/29)、正常乳腺样组26.3%(5/21), 表达增高并具有显著性(P＜0.05);(3)所有150例乳腺癌中(可评价145例)具有CD44⁺CD24^-/low免疫表型者其Ki-67指数增高相对于非CD44⁺CD24^-/low表型具有统计学差异(P＜0.001)。结论 BLBC型乳腺癌表达乳腺癌干细胞样标志物CD44⁺CD24^-/low显著高于其它各型乳腺癌, CD44⁺CD24^-/low与BLBC独特的恶性生物学行为相关。     

Raw264.7细胞蛋白和PD-L1抗体在小鼠黑色素瘤(B16)中的抑瘤效果评价

目的探讨小鼠来源白血病毒诱导的肿瘤细胞(Raw264.7)蛋白和程序性死亡-配体(PD-L1)在C57BL/6小鼠黑色素瘤(B16)中的抑瘤效果。方法采用6~8周龄清洁级C57BL/6小鼠30只(雌雄各半),平均分为3组。各组小鼠分别于皮下接种B16细胞(2×10⁵个/只),待小鼠肿瘤平均体积达到100 mm³时,给予治疗。group A:腹腔注射Raw264.7细胞蛋白(50μg/只),每周1次,共2次。group B:腹腔注射PD-L1抗体(600μg/只,本课题组生产纯化),每3天1次,共4次。group C:相同时间点给予等体积生理盐水对照。各组小鼠给药后,测量肿瘤大小,末次测量后,各组小鼠无菌取脾脏,应用流式细胞术分析CD3/4/8⁺T细胞群比例。结果各组荷瘤小鼠给予相应治疗后,组C小鼠肿瘤体积增长迅速,末次测量平均体积达到4004 mm³;组B小鼠增长次之,末次平均体积达到1637 mm³;组A小鼠体积增长最慢,末次平均体积仅为882 mm³(P<0.01)。对小鼠脾脏免疫细胞分析显示,组B小鼠中CD3⁺CD8⁺T cell比例明显上调,平均达到77.65%,而CD3⁺CD4⁺T比例明显下调,仅为11.86%(P<0.01);而组A和组C两组小鼠CD3⁺CD4⁺T和CD3⁺CD8⁺T没有明显区别(P>0.05)。结论制备的RAW264.7细胞灭活蛋白和PD-L1抗体对于B16荷瘤小鼠均有抑瘤作用,且前者效果更为明显。     

幼稚和记忆T 细胞在NSCLC 放疗患者中的表达及其预后价值

  目的  探讨幼稚和记忆T细胞在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）放疗患者外周血中的表达及其与预后的关系。  方法  采用流式细胞仪检测2014年9月至2016年5月解放军307医院40例接受放疗的NSCLC首诊患者,治疗前外周血中幼稚CD4+T细胞、记忆CD4+T细胞、幼稚CD8+T细胞、记忆CD8+T细胞,与14例健康人进行对比,并分析其与临床病理特征及预后的关系。  结果  与健康组相比,NSCLC患者幼稚CD4+T细胞下降（P=0.031）,记忆CD4+T细胞和记忆CD8+T细胞升高（P=0.014、0.005）。与不吸烟患者相比,吸烟患者幼稚CD4+T细胞较低（P=0.043）,记忆CD4+T细胞较高（P=0.024）。与ECOG评分1～2分者相比,0分者幼稚CD8+T细胞较低（P=0.017）,记忆CD8+T细胞较高（P=0.020）。单因素分析显示幼稚CD4+T细胞较高组放疗后中位无进展生存期（median progression free survival,mPFS）更长（17个月vs. 9个月,P=0.044）、记忆CD4+T细胞较高组放疗后mPFS可能更短（9个月 vs. 15个月,P=0.069）。Cox多因素分析显示幼稚CD4+T细胞与患者放疗后无进展生存期（progression free survival,PFS）独立相关（P=0.009）。  结论  NSCLC患者外周血中幼稚T细胞储备下降,记忆T细胞上升。幼稚CD4+T细胞较高可能预示放疗后PFS更长。      

肺腺癌浸润CD8+T细胞表达CD39的机制

目的：探讨肿瘤浸润CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。方法：通过TCGA数据库的肺腺癌(LUAD)组织及正常肺组织转录组数据分析CD39在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异及其对患者预后的影响,分析CD39表达与T细胞浸润、激活的关系。用小鼠LUAD Lewis细胞建立小鼠皮下移植瘤模型,FCM检测淋巴结、脾脏以及移植瘤组织中CD8⁺CD39⁺T细胞。收集Lewis细胞培养上清液作为条件培养基(CCM),免疫磁珠法(MACS)分选CD8⁺T细胞、CD11b⁺细胞;在培养基中分别加入CCM、IL-6和采取非接触或接触培养方式进行培养,探索CD8⁺T细胞表达CD39的可能机制。结果：CD39在LUAD组织中呈低表达(P<0.01),其表达水平与LUAD患者OS、T细胞浸润和激活水平均呈正相关(P<0.05或P<0.001)。FCM检测结果显示,在移植瘤组织中CD8+CD39⁺T细胞的比例明显高于淋巴结及脾脏(P<...     

CD44+/CD24+表型的宫颈癌Siha细胞对顺铂的耐药及机制研究

背景与目的：肿瘤干细胞的存在是肿瘤细胞抗拒化疗的原因之一。该研究探讨CD44⁺/CD24⁺宫颈癌Siha细胞对顺铂的耐药性及相关机制。方法：体外培养Siha细胞,流式荧光激活细胞分选仪分选CD44⁺/CD24⁺Siha细胞,噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测不同浓度顺铂对细胞的体外抑制情况,采用流式细胞仪检测10 μg/mL顺铂作用于CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞24、48和72 h时的细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(quantitutive real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞中Oct-4、ABCG2、Bcl-2的表达,同时设立亲代Siha细胞作为对照。结果：不同浓度顺铂(0.1、1、5、10、15和20 μg/mL)对CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞的增殖抑制作用较亲代Siha细胞小［(88.4±1.5)% vs (92.9±1.5)%,(79.9±1.0)% vs (84.7±1.1)%,(69. 8±0.8)% vs (75.1±2.9)%,(59.0±0.7)% vs (65.8±2.7)%,(49.6±0.9)% vs(52.1±0.5)%,(45.1±0.7)% vs (48.8±1.0)%,P<0.05］;与亲代细胞相比,当10 μg/mL顺铂作用于CD44⁺/CD24⁺Siha细胞时,发现在24、48和72 h时的细胞凋亡率均较小［(3.05±0.16)% vs (5.17±0.27)%,(17.94±2.02)%vs (32.60±4.28)%和(40.14±3.01)% vs (56.62±5.32)%,P<0.05］。qRT-PCR和Western blot实验均显示CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞高表达Oct-4、ABCG2和Bcl-2,与亲代Siha细胞比较差异有统计学意义(P=0.015)。结论：CD44⁺/CD24⁺ Siha细胞可以抵抗顺铂诱导的细胞凋亡,具有化疗抵抗性,并且高表达肿瘤干细胞表面标志物如Oct-4和ABCG2,该结果在宫颈癌肿瘤干细胞的有效分选以及肿瘤靶向治疗方面有深远意义。     

高强度聚焦超声对前列腺癌小鼠的疗效及T细胞亚群的影响

目的探讨高强度聚焦超声（high intensity focused ultrasound, HIFU）对前列腺癌荷瘤小鼠的疗效及T细胞亚群的影响。方法RM-1细胞接种于C57BL6小鼠建立小鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,随机分为肿瘤对照组、HIFU组、放疗组和HIFU联合放疗组。观察治疗后各组的肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积倍增时间（DT）。2周后,通过流式细胞仪检测正常小鼠和荷瘤小鼠外周血CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺ 细胞占白细胞总数的百分比。结果与肿瘤对照组相比,HIFU组、放疗组肿瘤生长延缓,DT显著延长。HIFU组小鼠的CD3⁺(%)、CD4⁺(%)显著高于肿瘤对照组,而放疗组与肿瘤对照组差异无统计学意义。HIFU联合放疗组的DT较HIFU组显著延长,小鼠的CD3⁺(%)、CD4⁺(%)显著高于HIFU组,且CD4⁺(%)显著高于正常小鼠。结论HIFU治疗前列腺癌不仅能局部抑制肿瘤生长,而且能通过对T细胞亚群的影响提高机体的细胞免疫水平。HIFU联合放疗能进一步提高疗效。     

高级别神经胶质瘤放化疗前后T淋巴细胞亚群的变化及与预后的关系

目的:观察高级别胶质瘤患者接受同步放化疗前后,T细胞亚群百分比的变化,并分析其与预后的关系。方法:收集2016年01月至2022年12月首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤内科收治的62例高级别神经胶质瘤患者,同时收集30名健康体检者的血液样本做为对照,抽取患者同步放化疗开始前1天和放化疗结束后第1天空腹外周血5 mL,采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3⁺/CD4⁺、CD3⁺/CD8⁺、CD8⁺/CD28^-、CD8⁺/CD28⁺)水平。结果:治疗前胶质瘤患者的CD3⁺/CD4⁺细胞水平低于健康对照组(P=0.027),同步放化疗前后,CD3⁺/CD4⁺细胞、CD8⁺/CD28^-细胞百分比出现显著下降,而CD3⁺/CD8⁺细胞百分比...     

肿瘤组织T细胞亚群对结直肠癌患者术后疾病进展风险的预测价值

目的 探讨肿瘤组织T细胞亚群对结直肠癌患者术后疾病进展风险的预测价值。方法 选取2018年12月至2020年6月我院收治的102例结直肠癌手术患者为研究对象，患者术后接受辅助治疗6个月，收集患者入院时的临床资料，采用免疫组织化学方法检测患者术后CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺和Foxp3⁺Tregs表达状况。对患者辅助化疗后随访观察1年，根据是否出现疾病进展分为进展组和非进展组，通过多因素Logistic回归分析探讨结直肠癌患者术后疾病进展风险的影响因素。结果 截止2022年1月1日，99例获得随访，其中41例(41.41%)疾病进展归为进展组，58例(58.59%)未发生疾病进展归为非进展组。两组CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺及Foxp3⁺Tregs细胞水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归...