人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

  目的  探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响。  方法  利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体，通过扫描电镜及Western blot 鉴定外泌体。将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理；SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养；SHG449+M0+exosome组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养后，加入标记有PKH-67的外泌体使其进入M0型巨噬细胞。  结果  （1）人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体成功提取，且进入M0型巨噬细胞；（2）外泌体进入胶质瘤细胞SHG449诱导极化的巨噬细胞后细胞形态转化，且M2型巨噬细胞活化标志物Arginase、CD206以及CCL22，TGF-β表达下降（Arginase:P < 0.01，CD206:P < 0.05， CCL22:P < 0.05，TGF-β:P < 0.01），M1型活化标志物iNOS，CD68以及IL-1β，TNF-α表达上升（iNOS:P < 0.01，CD68:P < 0.01，L-1β:P < 0.000 1，TNF-α:P < 0.001）；（3）被外泌体诱导极化的巨噬细胞导致胶质瘤细胞增殖能力下降（P < 0.05），凋亡能力上升（P < 0.000 1）。  结论  人骨髓间质细胞分泌的外泌体可抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2表型转化，并诱导其向M1表型转化，调节肿瘤免疫微环境，从而达到抑癌的作用。     

外泌体双膜蛋白共表达检测平台:基于磁性分离和催化发夹组装

目的 构建基于磁性分离和催化发夹组装（CHA）信号放大策略的外泌体双膜蛋白共表达检测平台。方法 细胞培养与细胞上清液中外泌体的分离纯化和表征。超分辨成像技术与免疫印迹实验表征CD63在外泌体膜上的表达。外泌体与AptEpCAM-T催发链反应电泳图验证EpCAM适配体与外泌体结合。荧光检测法验证CHA核酸序列的可行性、优化反应条件以及验证该方法特异性。结果 超分辨成像技术与免疫印迹实验显示乳腺癌MDA-MB-231细胞来源外泌体富含CD63膜蛋白。外泌体与AptEpCAM-T催发链反应电泳结果显示EpCAM适配体能够识别并结合外泌体。检测平台特异性试验：人正常乳腺上皮细胞外泌体（MCF-10a exo）荧光检测信噪比：1.10±0.01,乳腺癌细胞外泌体（MDA-MB-231 exo）荧光检测信噪比：2.09±0.08。结论 构建基于磁性分离和CHA信号放大策略的外泌体双膜蛋白共表达检测平台。可同时检测外泌体膜上表达的两种蛋白：CD63和EpCAM。乳腺癌细胞外泌体与人正常乳腺上皮细胞外泌体膜蛋白CD63和蛋白EpCAM表达有区分度。     

HIV感染的生物学、流行病学和临床治疗

HIV的结构目前已知AIDS的病原是HIV(Human Immunodeficiency Virus)它属逆转录病毒,结构有外壳和核心两部分。外壳有包膜蛋白由糖蛋白120(gp120)和糖蛋白41(gp41)组成,两者合在一起为糖蛋白160(gp160)。gp120可以和CD4受体紧密结合,CD4存在于机体某些细胞的表面如淋巴、单核和巨噬细胞,其中辅助性T淋巴细胞(T_H)的表面含CD4最丰富,因此它成为HIV感染的主要目标。核心部分有核外膜蛋白P24及内部RNA和逆转录酶。 HIV基因组除了编码核心和包膜蛋白三个     

子痫前期蜕膜巨噬细胞源性外泌体来源miR-146a-5p通过靶向HIF1α抑制滋养细胞的活力和侵袭能力

目的：探究蜕膜巨噬细胞源性外泌体miR-146a-5p对子痫前期滋养细胞的作用及其分子机制。方法：收集子痫前期（preeclampsia,PE）患者和正常妊娠女性蜕膜组织，使用密度梯度法与流式细胞术分选获得巨噬细胞，提取蜕膜巨噬细胞源性外泌体；为了鉴定外泌体，采用透射电镜观察结构，western blot验证外泌体CD63蛋白表达；采用CCK-8检测外泌体对滋养细胞活力的影响；Transwell实验检测滋养细胞迁移变化；qPCR检测外泌体中miR-146a-5p的表达；western blot检测滋养细胞中HIF1α蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测miR-146a-5p与HIF1α是否存在结合位点。结果：巨噬细胞外泌体呈现直径约30～130 nm的中间凹陷“饼状”结构形态，CD63高表达，符合外泌体特征。与正常组相比，PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体显著降低滋养细胞增殖与迁移（P<0.001）。PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体中miR-146a-5p表达量显著下降，蜕膜巨噬细胞源性外泌体处理滋养细胞后滋养细胞中HIF1α蛋白表达显著升高，miR-146a-5p和HIF1α之间存在靶向结合...     

衰老表型肝细胞外泌体对脂多糖致炎软骨细胞的影响及白芍的干预效应

目的  研究衰老表型的肝细胞外泌体对脂多糖(LPS)刺激软骨细胞的影响及白芍的干预效应。方法  提取小鼠肝原代细胞,CCK-8法筛选白芍水煎液干预肝细胞的最佳浓度。随后,肝细胞随机分为空白组、衰老组和白芍组,0.3 mmol·L-1过氧化氢诱导肝细胞衰老,检测肝细胞p16、p21、p53的基因和蛋白表达,观察肝细胞衰老及白芍的干预效应。分别提取各组肝细胞上清中的外泌体,通过电镜、粒径分析、四旋蛋白CD9、CD63、CD81鉴定外泌体。培养小鼠软骨细胞,LPS刺激以模拟KOA炎症环境,检测细胞上清液中TNF-α和IL-1β含量以验证造模成功。PHK67染色标记肝细胞外泌体并观察软骨细胞的摄入情况。将收集的各组肝细胞外泌体用于干预LPS致炎软骨细胞,检测软骨细胞基质降解合成标记物MMP3、MMP13、SOX9、ADAMTS5的基因和蛋白表达水平。结果  经CCK-8法筛选,100 μg·mL-1为白芍水煎液干预肝细胞的最佳浓度。过氧化氢干预后,衰老组中细胞衰老标记物p16、p21、p53的基因和蛋白表达均高于正常组(P < 0.05),而在白芍组则较衰老组降低(P < 0.05)。各组肝细胞所收集外泌体均呈现双层膜结构,形态大小无差异,粒径富集均满足40~120 nm区间,代表性粒径富集于116.8 nm,丰度98%,外泌体标记物四旋蛋白CD9、CD63、CD81均为阳性表达。软骨细胞上清液中,促炎因子TNF-α、IL-1β的含量均在LPS刺激后较刺激前升高(P < 0.01),PHK67染色试剂确认软骨细胞对各组肝细胞外泌体的摄入。衰老组肝细胞外泌体的干预下,软骨细胞基质降解合成标记物MMP3、MMP13、SOX9、ADAMTS5的基因和蛋白表达水平均较空白组肝细胞外泌体干预升高(P < 0.05),而白芍组肝细胞外泌体干预则较衰老组肝细胞外泌体干预降低(P < 0.05)。结论  衰老表型肝细胞外泌体可加剧LPS致炎软骨细胞的退变进程,白芍水煎剂对此环节存在良性干预。      

人脐带间充质干细胞外泌体携带微小RNA-204对心肌缺血再灌注小鼠模型巨噬细胞极化的影响及机制探究

目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)外泌体携带微小RNA-204(miR-204)对心肌缺血再灌注(I/R)小鼠模型巨噬细胞极化的影响及作用机制。方法 hUC-MSC分离、培养并鉴定,检测成脂、成骨分化能力;超速离心法分离hUC-MSC外泌体,纳米颗粒跟踪分析软件、透射电镜、Western blot实验鉴定外泌体中CD81、CD63、肿瘤易感基因101(Tsg101)及钙联蛋白(Calnexin)的表达;将hUC-MSC分为hUC-MSC组、miR-204模拟物组及阴性对照组,qRT-PCR法检测各组细胞及其外泌体中miR-204的表达;将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、I/R组、hUC-MSC外泌体组、阴性对照组和miR-204模拟物组,除假手术组外均通过结扎左前降支动脉构建I/R模型,超声心电图检测小鼠心功能,HE染色观察小鼠心肌组织病理学情况,ELISA检测心肌组织中白细胞介素(IL)1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg-1)及IL-10水平;分离小鼠心肌组织巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞CD11c和CD206蛋白表达情况,ELISA检测巨噬...     

前列腺癌细胞外泌体抑制成骨细胞分化

目的：探讨前列腺癌细胞外泌体对成骨细胞分化的影响。方法：采用ExoQuick?TC试剂盒与超滤法结合分离纯化前列腺癌细胞系PC3的外泌体,通过电镜、外泌体蛋白标志物CD63进行鉴定。用纯化的前列腺癌细胞外泌体处理前成骨细胞,提取总RNA,采用荧光实时定量PCR检测早期成骨分化标志物Runx2、Osx和中期成骨分化标志物 Alp的表达情况。此外利用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色、茜素红染色方法检测成骨分化情况。结果：前列腺癌细胞外泌体可以进入到前成骨细胞中,并且外泌体处理前成骨细胞后,与对照组相比,Alp、Runx2与Osx的表达量显著降低（P < 0.05）,染色结果显示成骨分化受抑制。结论：在前列腺癌中,前列腺癌细胞会分泌出外泌体作用于前成骨细胞,并抑制成骨细胞的分化。     

小鼠肝癌细胞外泌体对树突状细胞成熟与功能的影响

目的 探讨小鼠肝癌细胞(Hepa1-6)来源的外泌体对树突状细胞成熟和功能的影响.方法 提取小鼠Hepa1-6细胞的外泌体,用透射电镜来鉴定外泌体的外形,Western blot方法测定外泌体的标志蛋白CD63和TSG101的表达,使用小鼠Hepa 1-6细胞外泌体冲击树突状细胞(DCs),DCs成熟相关表面分子CD40、CD80、CD83、CD86、MHC-Ⅱ的表达使用流式细胞术检测;将小鼠T淋巴细胞和小鼠Hepa1-6细胞外泌体致敏的DCs一起孵育5d,使用CFSE染色标记和流式法来测定共孵育T细胞的分裂增殖情况.结果 透射电镜可以观察到从Hepa1-6细胞的上清液中收集到的外泌体,表现为圆形或类圆形膜性囊泡样结构,符合外泌体的典型特征;Western blot检测表明小鼠Hepa1-6细胞来源的外泌体表达CD63、TSG101标志性蛋白,不表达细胞色素C;从小鼠Hepa1-6细胞提取来的外泌体致敏DCs,可上调表面MHC-Ⅱ类分子、成熟标志分子CD83和共刺激分子CD40、CD80、CD86(P ＜0.05).且随着外泌体浓度的增加,DC表面分子表达增高;同时可促进T淋巴细胞的增殖(P＜0.05).结论 小鼠Hepa 1-6细胞提取的外泌体可促进DC2.4的朝向成熟表型分化,并促进T细胞的增殖.     

对人免疫缺陷病毒(HIV)的研究

科学家对人艾滋病病毒(HIV)越了解,就越有更多的机会来设计药物和疫苗,以防止HIV攻击人类细胞。在病毒的生活周期中有几个关键期对干扰易感。其中一个是病毒与称为T4淋巴细胞的白细胞结合时期。波士顿的哈佛医学院、哈佛公共卫生学校的一组研究人员正在详细研究其结合过程。Joseph Sodroski、William Haseltine等开始鉴别病毒被膜蛋白参与结合的部位和病毒如何进入细胞。他们的研究还为HIV如何杀死所攻击的细胞提供了解释。当HIV结合T4淋巴细胞时,称为gp120的病毒被膜蛋白附着在称为CD4的受体分子上,     

gp120的致病机制及针对gp120的抗HIV药物研究进展

艾滋病(AIDS)是由HIV感染引起的获得性免疫缺陷综合症,HIV主要侵犯宿主的CD4 T细胞以及表达CD4分子的树突状细胞(DC)、单核-吞噬细胞(MPS)。其致病机制是:首先HIV通过壳膜蛋白gp120与细胞表面的CD4分子结合,与此同时,结合细胞表面的趋化因子受体CCR5和CXCR4,与细胞融合进而侵入细胞内;此外,HIV产生游离的gp120分子,能够发挥特殊的超抗原作用激活体内大量的T细胞,使免疫系统产生病理应答[1]。因此,gp120分子在艾滋病的作用机制中发挥着非常重要的作用,同时也使得其本身成为治疗艾滋病的一个重要的靶点。1 gp120的致病机制1.1 …     

Cbl-b基因沉默增强T细胞对人喉鳞癌细胞Hep-2的免疫杀伤效果

目的研究泛素连接酶（Cbl-b）基因沉默对H9 人T淋巴细胞免疫杀伤人喉鳞癌细胞Hep-2 作用的影响和相关机制。方 法选择12例喉鳞癌患和12例健康对照者,用磁性细胞分离技术分离外周血CD4+T细胞应用RT-PCR法检测Cbl-b的表达水 平。同时,将人T淋巴细胞H9 接种培养于96 孔板,分为4 组：以脂质体转染法将Cbl-b-siRNA 重组序列转染人T淋巴细胞 H9,作为Cbl-b-siRNA组;Cbl-b-siRNA重组序列转染T细胞成功后,在其培养液中加入IL-2 中和抗体,作为anti-IL-2+Cbl-bsiRNA 组;以脂质体转染法将随机阴性对照序列转染的人T淋巴细胞H9 作为阴性组（NC组）;以不做任何处理人T淋巴细 胞H9 为空白组（BC组）。采用倒置荧光显微镜观察人T淋巴细胞H9 的转染效率、以实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹 法检测各组人T 淋巴细胞H9 中Cbl-b mRNA和蛋白表达情况。以细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组人T 淋巴细胞H9 对 Hep-2细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测各组人T淋巴细胞H9表面活化分子CD69、CD25阳性表达率;采用ELISA法检测T细 胞上清液中白介素-2（IL-2）、γ干扰素（INF-γ）水平。结果Cbl-b mRNA在喉鳞癌患者CD4+T细胞中表达升高,与健康对照差异 有显著性（P<0.05）。Cbl-b-siRNA组和阴性组的转染效率分别为（78.30±6.06）%、（77.25±6.38）%,转染效果良好;Cbl-b-siRNA 组人T淋巴细胞H9 的Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量与anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组无显著差异（P>0.05）,但显著低于空白组 和阴性组（P<0.05）;不同效靶比时,Cbl-b-siRNA组Hep-2 肿瘤细胞杀伤率均显著高于anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组、阴性组和空 白组（P<0.05）。Cbl-b-siRNA 组人T淋巴细胞H9 表面活化分子CD69、CD25 阳性表达率均显著高于anti-IL-2+Cbl-b-siRNA 组、空白组和阴性组（P<0.05）;Cbl-b-siRNA 组人T 淋巴细胞H9 上清液中INF-γ、IL-2 水平均显著高于空白组和阴性组（P< 0.05）;空白组与阴性组人T淋巴细胞H9 的Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量、肿瘤细胞杀伤率、表面活化分子CD69、CD25 阳 性表达率、上清液中IL-2、INF-γ水平比较差异均不显著（P>0.05）。结论应用siRNA技术沉默T细胞Cbl-b 基因可有效增强 人T淋巴细胞H9 对人喉鳞癌细胞株Hep-2 体外免疫杀伤作用,其机制可能与T细胞Cbl-b 基因沉默促进人T淋巴细胞H9 分 泌IL-2、加强T淋巴细胞激活有关。     

ABT-737对M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞SKOV3自噬性凋亡与干性特征的影响

目的 探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源外泌体(Exo)处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。方法 利用佛波酯(PMA)与重组人白细胞介素-4(IL-4)诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM,流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达;差速离心法提取外泌体,透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布,Western blot检测外泌体标志蛋白表达,Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况;实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组,采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平,Western blot检测细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62)与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3)表达,肿瘤细胞成球实验检测细胞干性,Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白(CD133、OCT4、SOX2)表达。结果 经PMA与IL-4...     

外泌体对A549细胞增殖、凋亡及迁移功能的影响

目的 观察肺癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响.方法 采用多步超速离心法从肺癌A549细胞的培养液上清中分离出肺癌细胞来源的外泌体,并通过透射电子显微镜观察外泌体形态,利用Western blot 检测其表面跨膜蛋白的表达.采用 MTT 法、ELISA法分别检测外泌体对A549细胞增殖和凋亡的影响;采用Transwell法了解外泌体对A549细胞迁移能力的影响.结果 观察所提取的外泌体大小均匀,形态规则,多为圆形及椭圆形膜性囊泡盘状结构,直径30~100 nm,其外周包被被膜,表面具有丰富的四次跨膜蛋白CD9、CD63等.MTT法提示外泌体对A549细胞具有促增殖作用,且其影响具有时间和剂量依赖特征(P<0.05),ELISA法检测用外泌体共培育后的A549细胞的凋亡情况,结果显示外泌体在一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡(F=365.496,P=0.000).Transwell法观察显示,外泌体具有促进A549细胞迁移运动的作用(F=252.005,P=0.000).结论 肺癌细胞来源的外泌体能促进A549细胞增殖、减少其凋亡、增强其迁移运动的能力.     

趋化因子受体和干扰素诱导蛋白10与HCV、HIV感染相关性的研究

目的：探讨趋化因子受体3（CXCR3）及配体干扰素诱导蛋白10（IP-10）在丙型肝炎病毒（HCV）感染，艾滋病病毒（HIV）感染和HCV／HIV合并感染过程中的表达及意义。方法：采用流式细胞术，检测HCV感染蛆、HIV感染组、HCV／HIV感染组及正常对照组人外周血CD4^＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞表面CXCB3的表达。ELISA方法检测IP-10浓度。结果：除正常对照组外，血清IP-10水平均明显升高，以合并感染升高最为明显；HIV组及合并感染组CD4^＋T淋巴细胞表面CXCR3表达显著降低（P〈0．01），CD8^＋T淋巴细胞表面CXCR3表达显著升高（P〈0．01）；HCV感染组CD4^＋和CD8^＋T细胞表面CXCIB袁迭轻度升高。结论：趋化因子IP-10及淋巴细胞表面受体CXCR3与丙型肝炎病毒／史滋病病毒感染密切相关。     

小鼠肝癌细胞(H22)源外泌体的体内抗肝癌作用研究

目的在荷瘤动物模型观察小鼠肝癌细胞（H22）来源的外泌体（exosomes）激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H22源外泌体免疫小鼠,然后给小鼠皮下注射H22肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润情况。结果该外泌体使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢,小鼠生存率提高。促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,促进CD4^＋和CD^8＋T细胞活化。结论小鼠肝癌细胞（H22）源外泌体能诱导抗肿瘤应答,有效地诱导特异性的杀伤肿瘤细胞活性,有针对亲本细胞的免疫保护作用。     

肝癌外泌体LINC ROR对巨噬细胞炎症反应的影响

目的探究肝癌细胞分泌的外泌体中长链非编码RNA（long intergenic non-coding RNA）LINC ROR对巨噬细胞功能的调节作用。方法差速离心分离得到肝癌细胞PLC/PRF/5上清中的外泌体。电镜和纳米颗粒追踪分析仪检测外泌体形态特征和粒径分布。激光共聚焦荧光显微镜观测外泌体与巨噬细胞的空间相对位置。实时荧光定量PCR技术检测LINC ROR 在外泌体中的表达水平。 ELISA法检测巨噬细胞中LINC ROR 小干扰RNA（siRNA）基因沉默后在脂多糖刺激下促炎症因子白细胞介素（IL）-1β的表达水平。结果肝癌细胞分泌的外泌体呈圆状,直径为100 nm左右,同时观测到巨噬细胞能接收肝癌细胞来源的外泌体。相对于正常肝细胞来源的外泌体,肝癌细胞PLC/PRF/5来源的外泌体中高表达LINC ROR。巨噬细胞中LINC ROR基因沉默后,在脂多糖诱导的炎症反应下,巨噬细胞促炎症因子IL-1β的表达水平明显增强。结论肝癌细胞分泌的外泌体中LINC ROR能对邻近巨噬细胞的炎症反应产生调控作用。     

外泌体lncRNA干扰素诱导GTP酶假基因1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨外泌体长链非编码RNA（lncRNA）干扰素诱导GTP酶假基因1（GVINP1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及临床意义。方法收集2016年10月至2018年2月在湖州师范学院附属第一医院经病理组织学确诊为NSCLC的51例患者外周血51份以及健康体检者45例外周血45份;培养人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）和NSCLC细胞（A549、H1299）,收集选择性培养基;提取血浆外泌体,采用电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;采用RT-PCR法检测GVINP1mRNA表达水平,并分析患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平与其临床特征之间的关系;利用NSCLC细胞选择性培养基和外泌体处理巨噬细胞（RAW264.7）,采用RT-PCR法检测炎症因子mRNA表达水平。结果在电镜下可见NSCLC患者外周血中含有丰富的外泌体,大小为26.7~136.1nm。NSCLC患者和健康体检者血浆外泌体中存在CD9、CD81和Alix蛋白表达;NSCLC患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平明显高于健康体检者（P＜0.05）,其中有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期的NSCLC患者血浆外泌体GVINP1mRNA表达水平较低（均P＜0.05）。与人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）选择性培养基外泌体比较,NSCLC细胞（A549、H1299）选择性培养基外泌体中GVINP1mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与空白对照组（DMEM培养基）相比,BEAS-2B组和NSCLC细胞组选择性培养基中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,而NSCLC细胞组中IL-10mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。与去除外泌体的细胞选择性培养基比较,BEAS-2B和NSCLC细胞选择性培养基外泌体中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,而NSCLC细胞中IL-10mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。结论NSCLC可能通过选择性释放携带GVINP1的外泌体进而影响巨噬细胞表型转化,从而促进肿瘤进展,这为NSCLC治疗提供了新的靶点。     

人类免疫缺陷病毒感染与T淋巴细胞损伤

人类免疫缺陷病毒(HIV)是具有包膜的正链RNA病毒,以人体免疫系统中最重要的CD4+T淋巴细胞为感染和攻击目标,通过损伤细胞膜、干扰细胞自身蛋白合成直接杀伤CD4+T细胞,诱导感染细胞生成某些细胞因子间接杀伤CD4+T细胞,gp120与CD4分子交联,诱导CD4+T细胞凋亡。在HIV感染及多种细胞因子作用下,T淋巴细胞分化为细胞毒性T细胞,特异性识别和清除病毒感染的细胞;分化为调节性T细胞,发挥免疫抑制功能,防止免疫过激;分化为记忆性T细胞,介导再次免疫应答。     

SP94和CD47双修饰外泌体靶向递送PLK1 siRNA治疗肝癌

目的 设计一种基于外泌体高效递送的方法,将治疗性核酸递送到肝癌组织治疗原发性肝癌。方法 构建靶向肝癌的融合表达SP94和CD47的质粒,转染至HEK293T细胞后提取分离外泌体。通过透射电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析、蛋白质印迹法等方法对外泌体进行鉴定。小鼠经尾静脉分别注射200μg DiD标记的未修饰外泌体和SP94修饰的外泌体,采用小动物活体成像仪检测并分析外泌体对肝癌组织的靶向作用。将未修饰外泌体和CD47修饰的外泌体分别与巨噬细胞RAW264.7、小鼠肝癌细胞Hepa1-6共孵育,验证细胞对修饰后外泌体的吞噬情况。通过电穿孔法将Polo样激酶1(PLK1)siRNA加载到不同修饰的外泌体中,再与Hepa1-6细胞共孵育,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平。原发性肝癌模型小鼠经尾静脉注射加载PLK1 siRNA的修饰外泌体,系统研究并分析其对原发性肝癌的治疗效果。结果 SP94修饰增强了外泌体对肝癌组织的靶向作用,CD47修饰减少了外泌体被巨噬细胞吞噬。SP94和CD47双修饰外泌体递送PLK1 siRNA促进了肝癌细胞凋亡。在原发性肝癌模型小鼠中,SP94和CD47双修饰外泌体加载P...     

高糖环境下肾小管上皮细胞来源外泌体诱导巨噬细胞向肌成纤维细胞转化

目的 探讨高糖环境下肾小管上皮细胞来源外泌体诱导巨噬细胞向肌成纤维细胞转化的作用与机制。方法 正常糖(5.5 mmol/L)及高糖(30.0 mmol/L)分别处理人肾小管上皮细胞(HK2)48 h,收集上清液提取并鉴定外泌体;观察人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞是否吞噬PKH67标记的外泌体;通过检测诱导性氮氧化物合酶(iNOS)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、甘露醇受体(CD206)的表达,以确定分化为M1和M2型巨噬细胞的最佳浓度及时间点;激光共聚焦检测CD206与α-SMA、IV型胶原(Col-IV)、纤维连接蛋白(FN)的荧光共表达。qRT-PCR与ELISA法测定转化生长因子受体-β1(TGF-β1)、白细胞介素(IL)-10、IL-6水平。Western blot测定TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白表达。结果 上清液离心获取标本后检测到白细胞分化抗原群63(CD63)和肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)阳性、内质网分子伴侣蛋白(Calnexin)阴性,确认为外泌体并且纯度较高;THP-1巨噬细胞能够吞噬各组外泌体;各组外泌体刺激的最佳浓...