LINC00662通过miR-144/COX-2调控胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的作用研究

目的 探究LINC00662通过miR-144/COX-2轴调节胶质瘤细胞耐药性的机制。方法 qRT-PCR检测胶质瘤组织和癌旁正常组织、U251细胞和U251/替莫唑胺(TMZ)细胞中LINC00662、miR-144和COX-2 mRNA表达水平;双荧光素酶报告系统评估LINC00662、miR-144和COX-2的调控关系。设置空白对照组、敲低LINC00662阴性对照(si-NC)组、敲低LINC00662组、同时敲低LINC00662和抑制miR-144表达组。CCK-8和Edu法分析细胞增殖情况;流式细胞术定量检测细胞凋亡;Western blot分析靶蛋白表达水平。结果 与癌旁正常组织相比,胶质瘤组织中LINC00662和COX-2 mRNA表达显著上调,miR-144表达下调(P<0.05);与U251细胞相比,U251/TMZ细胞中LINC00662和COX-2 mRNA表达显著上调,miR-144表达下调(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实LINC00662靶向结合miR-144,miR-144靶向结合COX-2。与si-NC组相比,敲低LINC00...     

miR-129-5p通过靶向SALL4抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的：探讨miR-129-5p在肝细胞癌（HCC）发展中的作用及其机制。方法：通过实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)检测miR-129-5p在正常血清及肝癌患者血清、人正常肝细胞LO2和人肝癌细胞系中的表达情况。采用脂质体转染技术将miR-129-5p mimics转染至人肝癌细胞HCCLM3细胞,应用Western印迹检测人类婆罗双树样基因-4(SALL4)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)蛋白的表达。通过CCK-8实验、克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验和Transwell实验等检测在体外过表达miR-129-5p对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。此外,通过生物信息学工具、数据库分析和荧光素酶报告基因检测实验,探索miR-129-5p在HCC中的靶点,并探讨靶点SALL4是否介导miR-129-5p对HCC细胞的作用。结果：与正常血清相比,肝癌患者血清miRNA-129-5p表达量显著降低（t=13.32,P<0.001）,与LO2相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B、HCCLM3、BEL-7402和QGY-7703的miR-129-5p表达量均显著降低（...     

程序性死亡配体1在索拉非尼耐药肝癌细胞中的表达和功能

目的 探究PD-L1在索拉非尼耐药肝癌细胞中表达及对其功能的影响。方法 采用浓度递增法构建索拉非尼耐药细胞Hep3B-SR和HepG2-SR,CCK-8法检测IC50并计算耐药系数,Western blot 和qPCR检测耐药基因（P-gp和MRP1）和PD-L1的表达变化。转染siRNA沉默耐药细胞PD-L1的表达并检测沉默效率。沉默PD-L1后,CCK-8法检测IC50并计算耐药系数,检测耐药基因的表达变化,细胞增殖实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Hep3B-SR和HepG2-SR的耐药指数分别为5.4和5.2。耐药细胞中P-gp、MRP1和PD-L1表达较亲本细胞明显上调（P均﹤0.01）。抑制PD-L1表达后,Hep3B-SR和HepG2-SR的耐药指数分别下降为1.8和1.5,P-gp和MRP1的表达明显下调（P均﹤0.01）,显著抑制耐药细胞的增殖、迁移、克隆形成和促进其凋亡（P均﹤0.01）。结论 PD-L1在索拉非尼耐药肝癌细胞中高表达。抑制PD-L1表达可部分逆转索拉非尼耐药肝癌细胞的耐药性使得索拉非尼的抗癌效果明显提高。抑制PD-L1表达后可有效抑制索拉非尼耐药肝癌细胞生长,合用索拉非尼其抗癌效果更强。     

miR-30a-5p表达对结直肠癌发生及转移的影响研究

目的 探讨miR-30a-5p表达对结直肠癌发生及转移的影响。方法 采用HCT116细胞和裸鼠作为研究对象,按miR-30a-5p的转染情况分为miR-30a-5p模拟物组、miR-30a-5p抑制剂组和对照组。采用qRT-PCR法检测各组miR-30a-5p mRNA表达水平。采用划痕实验和Transwell实验分别观察细胞的迁移和侵袭能力。采用Western blotting法检测各组Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平,并采用裸鼠成瘤实验进行进一步验证。结果 在HCT116细胞中miR-30a-5p mRNA表达量（0.29±0.02）较在NCM466细胞中表达量（0.76±0.12）明显更低,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,miR-30a-5p模拟物组细胞侵袭能力明显更弱（P<0.05）,而miR-30a-5p抑制剂组细胞侵袭能力明显更强（P<0.05）;与对照组比较,miR-30a-5p模拟物组细胞迁移能力明显更弱（P<0.05）,而miR-30a-5p抑制剂组细胞迁移能力明显更强（P<0.05）;与对照组比较,mi...     

橄榄苦苷通过circMBOAT2/miR-106a-5p信号通路调控口腔鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的机制

探讨橄榄苦苷对circMBOAT2/miR-106a-5p 信号通路的调控作用及其对口腔鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响。方法 应用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测circMBOAT2和miR-106a-5p在口腔鳞癌组织和癌旁组织中的表达水平。将口腔鳞癌细胞CAL27分为橄榄苦苷（0、200、400、800 μg/mL）组、si-NC组、si-circMBOAT2组、橄榄苦苷800μg/mL+pcDNA-circMBOAT2组。采用RT-qPCR检测各组细胞中circMBOAT2和miR-106a-5p的表达水平,检测并验证circMBOAT2与口腔鳞癌的相关性。应用CCK-8法、集落形成实验、流式细胞术测定CAL27细胞的增殖活力、集落形成能力和凋亡率。应用双荧光素酶实验确定 circMBOAT2和miR-106a-5p靶向关系。结果 口腔鳞癌组织中circMBOAT2表达显著高于癌旁组织（P＜0.05）,miR-106a-5p表达显著低于癌旁组织（P＜0.05）。与橄榄苦苷0μg/mL组比较,橄榄苦苷（200、400、800 μg/mL）组CAL27细胞集落形成数、circMBOAT2水平显著降低（P＜0.05）,抑制率、凋亡率、miR-106a-5p水平显著升高（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-circMBOAT2组CAL27细胞集落形成数显著降低（P＜0.05）,抑制率、凋亡率、miR-106a-5p水平显著升高（P＜0.05）。circMBOAT2与miR-106a-5p直接特异性结合。与橄榄苦苷800 μg/mL组比较,橄榄苦苷800μg/mL+pcDNA-circMBOAT2组CAL27细胞集落形成数显著升高（P＜0.05）,抑制率、凋亡率显著降低（P＜0.05）。结论 橄榄苦苷通过下调circMBOAT2/miR-106a-5p通路可抑制口腔鳞癌细胞CAL27增殖,诱导细胞凋亡。     

miRNA-193a-3p靶向TGF-β2基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨微小RNA（microRNA,miRNA）-193a-3p在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞迁移及凋亡的影响和潜在分子机制。方法：利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测miR-193a-3p在肝癌及其癌旁正常组织中的表达;将miR-193a-3p mimic转染肝癌HepG2细胞系（NC为对照组）,利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验、Transwell实验以及流式细胞仪评估HepG2细胞的活性、迁移及凋亡情况;利用生物信息学分析、qRT-PCR及双荧光素酶报告实验确证miR-193a-3p对下游靶标转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β2的影响;在miR-193a-3p过表达的HepG2细胞中转染TGF-β2质粒,检测过表达TGF-β2对miR-193a-3p诱导HepG2细胞活性、迁移及凋亡的影响。结果：miR-193a-3p在肝癌组织中的表达显著低于正常肝脏组织,差异具有统计学意义（P< 0.01）;与NC组比较,miR-193a-3p组细胞的增殖活性及迁移数量减少,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（分别为：t = 6.11,8.90,11.53,均P< 0.05）,且以时间依赖性方式诱导HepG2细胞凋亡;miR-193a-3p与靶基因TGF-β2的互补结合序列在进化上高度保守,TGF-β2是miR-193a-3p的下游靶标;与miR-193a-3p+ 空质粒组比较,miR-193a-3p+ TGF-β2组肝癌细胞的增殖活性及迁移数量增多,细胞凋亡率显著减少,差异有统计学意义（分别为：t = 3.43,2.88,9.32,均P< 0.05）。结论：miR-193a-3p在肝癌组织中表达减少,miR-193a-3p通过靶向调控TGF-β2基因抑制HepG2细胞的活性和迁移,促进HepG2细胞的凋亡。     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

lncRNA LINC00173通过调节miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC00173通过调控miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞系MG-63,分别将LINC00173过表达载体质粒或空载质粒转染至MG-63细胞,实时荧光定量PCR（qPCR）检测转染效率,采用细胞计数法（CCK-8）和Transwell实验分析MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因实验和qPCR检测LINC00173和miR-130a-5p的靶向调控关系。同时过表达LINC00173和miR-130a-5p,并检测MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果qPCR检测结果显示,与Mock组比较,pc-LINC00173组LINC00173在MG-63细胞中的表达量明显升高（P < 0.01）。转染48 h和72 h后,pc-LINC00173组细胞增殖活力均低于Mock组和pcDNA组（P < 0.01）。Transwell检测结果显示,pc-LINC00173组与Mock组比较侵袭和迁移细胞数明显减少（P < 0.05）。LINC00173与miR-130a-5p之间存在特异性结合位点,与miR-NC组比较,转染miR-130a-5p mimics能够抑制LINC00173-Wt细胞的相对荧光素酶活性（P < 0.01）,与Mock组和pcDNA组比较,pc-LINC00173组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达量均降低（P < 0.01）。与pc-LINC00173组和pc-LINC00173+miR-NC组比较,pc-LINC00173+miR-130a-5p组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达明显升高,吸光度值明显升高,侵袭和迁移细胞数明显增多（P < 0.01）。结论LINC00173能够抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向抑制miR-130a-5p的表达有关。     

miR-146a-5p靶向调控Notch2促进人晶状体上皮细胞线粒体损伤诱导的细胞凋亡

目的 探讨miR-146a-5p在人晶状体上皮细胞线粒体损伤中的调控作用,以及miR-146a-5p靶向调控Notch2表达对细胞凋亡的影响。方法 采用实时定量PCR (qRT-PCR)检测miR-146a-5p在白内障患者晶状体上皮中的表达。将miR-146a-5p模拟物转染人晶状体上皮细胞系SRA01/04,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase 9和caspase 12、线粒体损伤相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9、细胞色素c的表达。qRT-PCR检测NDUFS8、COX5b和ATP5a1 mRNA的表达。免疫荧光检测活性氧（ROS）释放。荧光素酶报告基因实验检测miR-146a-5p和Notch2的3’非翻译区靶向结合。Western blotting检测Notch2下游蛋白。结果 miR-146a-5p增加了SRA01/04细胞ROS的产生,诱发凋亡。miR-146a-5p过表达通过激活caspase 9,阻断线粒体能量代谢,促进线粒体介导的细胞凋亡。Notch2被确认为miR-146a-5p的靶点。结论 miR-...     

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的 探讨microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2（AFAP1L2）对胰腺癌细胞的作用。方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting法检测胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1）及正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）miR-219a-5p、AFAP1L2的表达，采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达，荧光素酶实验观察二者碱基配对关系，进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果 与HPDE细胞比较，胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低（P <0.05）。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达（P <0.05）。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后，与空白对照组（NC组）比较，pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度（OD）值升高（P <0.05），siAFAP1L2组OD值下降（P <0.05），AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后，与miR-NC组比较，miR-219a-5p mimics组OD值下降（P <0.05），miR-219a-5p inhibitor组OD值升高（P <0.05），miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用；上调miR-219a-5p表达，可诱导细胞S期阻滞，导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达；荧光素酶实验显示，miR-219a-5p与AFAP1L2的3''-URT互补结合，miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。     

miR-125a-5p通过黏着斑通路对铝染毒GC2-spd细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-125a-5p在铝染毒小鼠精母细胞系(GC2-spd)模型中对黏着斑信号通路及GC2-spd细胞凋亡的影响。方法 建立铝染毒GC2-spd细胞模型，分为对照组(CG),铝染毒组(ALG),铝染毒组+miR-125a-5p inhibitor阴性对照组(ALG+inhibitor NC)及铝染毒组+miR-125a-5p inhibitor组(ALG+inhibitor);利用RT-qPCR检测ALG与CG细胞中miR-125a-5p的表达情况；利用Western blot检测CG组、ALG组、ALG+inhibitor NC组及ALG+inhibitor组Itga7、Pak4、Akt1、Bax及Caspase-9的表达情况；利用CCK8实验及流式细胞术实验检测各组GC2-spd细胞的活性和凋亡率。结果 RT-qPCR结果显示，与对照组比较，ALG组细胞中miR-125a-5p的表达显著升高；Western blot结果显示，抑制miR-125a-5p的表达后，可显著升高铝染毒GC2-spd细胞中Itga7、Pak4和Akt1的表达，降低Bax及Caspase-9的表达...     

miR-30a-5p调控ECM-受体作用信号通路相关蛋白抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移

目的 探讨miR-30a-5p和细胞外基质（ECM）-受体作用信号通路相关蛋白在肺腺癌细胞进展中发挥的调控作用。方法 将miR-30a-5p模拟物及其阴性对照分别转染到肺腺癌Calu-3细胞内,设为miR-30a-5p模拟物组、模拟物对照组。通过基因集富集分析（GSEA）软件对miR-30a-5p进行通路富集分析。将miR-30a-5p抑制剂及其阴性对照转染到细胞内,设为miR-30a-5p抑制剂组、抑制剂对照组,在miR-30a-5p抑制剂组的细胞中加入ECM-受体相互作用通路蛋白抑制剂,设为miR-30a-5p抑制剂+ECM-受体相互作用抑制剂组。采用qRT-PCR法检测不同处理组细胞中miR-30a-5p mRNA表达水平,采用Western blot法检测肺腺癌细胞系中ECM-受体作用信号通路相关蛋白磷酸化水平,采用噻唑蓝（MTT）实验、细胞划痕愈合实验和Transwell实验分别检测各处理组细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结果 与人正常支气管上皮细胞BEAS-2B比较,肺腺癌细胞系SPC-A1、Calu-3、HCC827、PC14中miR-30a-5p表达水平下调（均P<0...     

抑制LINC00667表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（LncRNA）LINC00667对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 复制类风湿关节炎（RA）模型大鼠,SPF级Wistar大鼠分离踝关节滑膜组织,用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测RA-FLS中LINC00667和miR-19a-3p的表达。在RA-FLS中分别转染si-NC（si-NC组）、si-LINC00667（si-LINC00667组）、miR-NC（miR-NC组）、miR-19a-3p模拟物（miR-19a-3p组）、si-LINC00667与anti-miR-NC（si-LINC00667+ anti-miR-NC组）、si-LINC00667与anti-miR-19a-3p（si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组）。CCK-8法检测各组转染后RA-FLS的增殖抑制率。Transwell法检测RA-FLS迁移、侵袭。Western blotting检测E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）表达。双萤光素酶报告验证LINC00667和miR-19a-3p的靶向关系。结果 RA模型组滑膜组织中LINC00667表达量约为正常组的270%,miR-19a-3p表达量约为正常组的36%（P <0.05）。转染成功后,si-LINC00667组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于si-NC组（P <0.05）,si-LINC00667组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于si-NC组（P <0.05）。LINC00667靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于miR-NC组（P <0.05）,miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于miR-NC组（P <0.05）。si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量低于si-LINC00667+ anti-miR-NC组（P <0.05）,si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量高于si-LINC00667+ anti-miR-NC组（P <0.05）。结论 抑制miR-19a-3p通过靶向LINC00667,抑制RA-FLS的增殖、迁移、侵袭,LINC00667或可用作诊断和治疗RA的靶点     

miR-26a-5p影响肝癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨微小RNA-26a-5p（miR-26a-5p）对腹水来源的高转移人肝癌细胞系SK-HEP-1生物学行为的影响及机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测比较人正常肝细胞LO2及不同人肝癌细胞系（HepG2、BEL-7402、SMMC-7721、MHCC97H和SK-HEP-1）中miR-26a-5p和IL-6mRNA的表达水平。选择低表达水平的SK-HEP-1细胞转染miR-26a-5p模拟物,采用qRT-PCR法和ELISA法检测转染后细胞中miR-26a-5p、IL-6mRNA的表达水平和IL-6的分泌情况。划痕和Transwell实验检测miR-26a-5p对SK-HEP-1细胞转移和侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因检测miR-26a-5p与IL-63''-非编码区（UTR）的靶向结合关系。Westernblot法检测miR-26a-5p对SK-HEP-1细胞中信号转导和转录激活因子3（STAT3）蛋白磷酸化和上皮-间质转化（EMT）相关蛋白的表达变化。采用qRT-PCR法检测miR-26a-5p对EMT相关基因表达水平的影响。结果与LO2相比,人肝癌细胞中miR-26a-5p相对表达量明显下调,IL-6mRNA相对表达量明显上调,其中SK-HEP-1中相对表达量差异最为显著。miR-26a-5p模拟物转染SK-HEP-1细胞后,miR-26a-5p相对表达量显著增高,IL-6mRNA和蛋白相对表达量显著下调。双荧光素酶报告基因实验证实miR-26a-5p与IL-63''-UTR存在序列特异性靶向结合关系。与空白对照组和模拟物对照组相比,miR-26a-5p模拟物明显抑制SK-HEP-1细胞迁移和侵袭的能力,同时显著降低IL-6下游信号STAT3蛋白的磷酸化水平,升高E-钙黏蛋白相对表达量和降低波形蛋白相对表达量。与模拟物对照组相比,miR-26a-5p模拟物显著改变EMT相关基因表达。结论miR-26a-5p通过靶向抑制IL-6mRNA,下调STAT3磷酸化,调控肝癌EMT标志物的基因和蛋白水平的表达,从而逆转肝癌细胞SK-HEP-1迁移和侵袭。     

E26特异性转化变异体4在体外促进肝癌细胞对索拉非尼和顺铂耐药

目的研究E26特异性转化变异体4（ETV4）对肝细胞癌（HCC）顺铂和索拉非尼耐药的影响。方法顺铂耐药HCC细胞株 SMMC-7721（对索拉非尼敏感）和HCC-LM3（对索拉非尼不敏感）经质粒转染诱导ETV4过表达或用siRNA干扰ETV4后，分别 用DMSO、索拉非尼（5 μmol/L）或顺铂（5 μmol/L）刺激48 h并收集总蛋白或总RNA。采用Western blotting、流式细胞术、EdU增 殖检测法检测处理后HCC细胞凋亡水平和增殖能力的变化。利用实时荧光定量PCR（q-PCR）技术检测11例HCC患者肿瘤组 织及配对的癌旁组织中ETV4 mRNA的表达水平。肝癌细胞株经干扰ETV4后，分别用DMSO、索拉非尼或顺铂刺激48 h，利用 q-RCR技术检测早期反应基因3（IER3）的mRNA表达水平。结果肝癌组织中ETV4 mRNA的表达水平显著高于对应的癌旁 组织。在两株肝癌细胞中过表达ETV4能显著减少索拉非尼或顺铂诱导的细胞凋亡，而干扰ETV4能显著增加索拉非尼或顺铂 诱导的细胞凋亡，并显著抑制索拉非尼或顺铂刺激下的细胞增殖能力。此外，在索拉非尼或顺铂的刺激下ETV4能调节IER3的 mRNA表达水平。结论ETV4过表达能促进HCC细胞对索拉非尼或顺铂产生耐药。     

急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义

目的：检测急性髓系白血病（AML）患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法：选取AML患者51例（AML组）和34名同期健康体检志愿者（对照组）作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征（ROC）曲线,计算ROC曲线下面积（AUC）,确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果：在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30～100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低（P<0.01）;ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最...     

肾结石患者肾乳头组织中LINC01197及相关因子的表达研究

目的 探讨肾结石患者肾乳头组织中LINC01197、miR-516b-5p、SIRT3、FoxO1、Ac-FoxO1的表达特点及相关性。方法 选取2021年3月至2023年3月台州市第一人民医院收治的经皮肾镜碎石术治疗的30例草酸钙肾结石患者作为结石组,选取同期行根治性肾切除术（术后均由病理科诊断为透明细胞癌）的30例肾肿瘤患者作为对照组。结石组于术中直视下活检肾乳头及其周围间质组织,对照组收集远离肿瘤（2cm以上）的正常肾乳头组织样本,经病理学诊断后确诊为正常肾乳头组织。检测、比较两组肾乳头组织内LINC01197、miR-516b-5p、SIRT3、FoxO1、Ac-FoxO1表达水平,分析LINC01197、miR-516b-5p、SIRT3之间的相关性。结果 与对照组相比,结石组的肾乳头组织呈现LINC01197和SIRT3低表达、miR-516b-5p和Ac-FoxO1/FoxO1高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关性分析显示LINC01197与miR-516b-5p呈显著负相关（r=–0.751,P<0.05）,LINC01197与SIRT3呈显著正相关（r=0.813,P<0.05）,miR-516b-5p与SIRT3呈显著负相关（r=–0.528,P<0.05）。结论 LINC01197 在肾结石病理进展中具有潜在价值,其参与调节肾结石的发展可能跟miR-516b-5p、SIRT3、FoxO1 有关。     

MSC-exo一种新型细胞递送工具转运靶向基因调控胰腺癌增殖效应分析

目的 观察1种新型细胞递送工具（MSC-exo）转运靶向基因调控胰腺癌增殖效应。方法 透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）和纳米颗粒跟踪分析技术（nanoparticle tracking analysis,NTA）鉴定人间充质干细胞外泌体（human mesenchymal stem cell exosomes,MSC-exo）并转运miR-450a-5p进入CFPAC-1,探讨miR-450a-5p靶向BZW2抑制胰腺癌细胞增殖效应。基因技术处理Pc-BZW2,CCK-8、EdU、细胞划痕、Transwell验证MSC-exo与MSC-exo-miR-450a-5p对细胞的抑制作用。结果 与胰腺正常组织相比miR-450a-5p在胰腺癌组织中低表达（P<0.05）,CFPAC-1细胞MSC-exo-miR-450a-5p外泌体标记蛋白CD63、TSG101表达高于MSC-exo(P<0.05)。CCK-8、EdU、细胞划痕、Transwell实验显示MSC-exo-miR-450a-5p较MSC-exo可显著抑制CF...     

miR-199a-5p通过靶向TGF-β2参与调节肝纤维化进程

目的：探讨miR-199a-5p在肝硬化发生中的作用机制。方法：通过设计合成miR-199a-5p mimics和miR-199a-5p inhibitor序列,对miR-199a-5p进行过表达和抑制研究,利用CCK8、5EdU、Western blotting等方法检测过表达miR-199a-5p对Lx-2细胞增殖活性的影响。以Lx-2细胞cDNA为模板,分别利用TGF-β2 3′UTR的野生型引物序列与miR-199a-5p潜在结合位点突变引物序列进行PCR扩增,获得野生型TGF-β2 3′UTR序列和突变型TGF-β2 3′UTR序列,并通过双荧光报告基因实验揭示TGF-β表达的调控过程。结果：体外实验结果显示,Lx-2细胞转染miR-199a-5p mimics后8、12、24 h,细胞活性均较对照组增加(P<0.05～P<0.01),α-SMA蛋白表达水平较对照组提高(P<0.05);Lx-2细胞转染miR-199a-5p inhibitor后8、12、24 h,细胞活性均较对照组降低(P<0.05～P<0.01),α-SMA表达水平亦较对照组...     

miR-520a-3p靶向ABCG2增强肺鳞癌细胞对多西他赛的敏感性

目的:探讨miR-520a-3p影响肺鳞癌(LUSC)细胞多西他赛(DTX)敏感性的潜在分子机制。方法:收集2017年5月至2018年12月在我院胸部肿瘤外科确诊并进行新辅助化疗的51例LUSC组织标本,采用RT-qPCR检测癌组织中miR-520a-3p的表达,并分析miR-520a-3p水平与DTX化疗耐受和临床病理学特征的相关性。采用RT-qPCR检测LUSC细胞系(H226和H2170)和其对应的DTX耐药细胞系(H226/DTX和H2170/DTX)中miR-520a-3p和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ABCG2)mRNA的表达,采用Western Blot检测上述细胞系中ABCG2蛋白的表达。转染miR-520a-3p模拟物后,采用细胞毒性实验观察LUSC细胞对DTX敏感性的变化,并分别采用RT-qPCR和Western Blot检测ABCG2 mRNA和蛋白水平的变化。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a-3p对ABCG2的靶向调控作用。结果:化疗耐药组新辅助化疗前后肿瘤原发部位的miR-520a-3p表达水平明显降低,同时相关性分析发现,miR-520a-3p低表达与肿瘤低分化、淋巴结转移及高TNM分期显著相关(均为P<0. 05)。miR-520a-3p在DTX耐药细胞系(H226/DTX和H2170/DTX)中的表达水平分别低于对应正常的LUSC细胞系(H226和H2170),而ABCG2的表达却明显升高。上调miRNA-520a-3p后,DTX耐药细胞系(H226/DTX和H2170/DTX)和对应正常的LUSC细胞系(H226和H2170)对DTX敏感性均增强,同时ABCG2在mRNA和蛋白水平的表达均显著下降。双荧光素酶报告基因实验结果提示ABCG2是miR-520a-3p的下游靶基因。结论:miR-520a-3p可逆转LUSC细胞对DTX的耐药性,这一作用可能与负调控肿瘤耐药相关蛋白ABCG2的表达从而抑制药物外排有关。