骨髓间充质干细胞与肿瘤耐药

在儿童血液系统恶性疾病及实体瘤中,肿瘤细胞和骨髓微环境之间存在动态作用。在骨髓微环境中特殊的龛为肿瘤细胞提供一个逃避化疗诱导细胞凋亡的居所并获得耐药表型。骨髓龛中的间充质干细胞(mesenchy-mal stem cells,MSCs)诱导肿瘤细胞生长和存活,并促成一个促进溶骨、肿瘤生长、存活和耐药的微环境。本文重点对骨髓MSCs的生物学特性及其与肿瘤相互作用的研究进展进行综述。     

氯丙嗪对白血病细胞株K562/AO2多药耐药逆转作用的实验研究

目的研究氯丙嗪对阿霉素诱导的K562耐药细胞株(K562/AO2)多药耐药的逆转作用及机制,以便为临床应用提供实验依据.方法 (1)以四氮甲基唑蓝(MTT)法检测氯丙嗪的细胞毒性及其对K562/AO2细胞的耐药逆转作用;(2)以流式细胞术检测氯丙嗪处理前后K562/AO2细胞内柔红霉素(DNR)的蓄积量;(3)以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测氯丙嗪处理前后后K562/AO2细胞中mdr-1 mRNA的表达水平.结果 (1)氯丙嗪在3 μg/ml时对K562/AO2增殖的抑制作用小,抑制率＜5%;(2)氯丙嗪明显增加DNR对K562/AO2的毒性作用(P＜0.05),耐药逆转倍数为1.901;(3)氯丙嗪可明显增强DNR在K562/AO2细胞内的蓄积(P＜0.05);(4)氯丙嗪对K562/AO2细胞mdr-1 mRNA的表达水平无影响.结论氯丙嗪通过增加K562/AO2细胞内DNR的蓄积显著提高 K562/AO2细胞对DNR的敏感性,其逆转白血病细胞多药耐药的机制与mdr-1基因无关,还有待进一步探讨.     

Livin反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响

目的 探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡和耐药的影响.方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体(Lip)介导转染K562细胞,实验分为Lip-ASODN组、Lip-MSODN组、Lip对照组和细胞对照组4组,采用反转录-PCR法检测Livin mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法与膜联蛋白V异硫氰酸荧光素法检测Livin ASODN与K562细胞增殖、凋亡及与高三尖杉酯碱(HHT)耐药的关系.结果 Livin ASODN可显著抑制K562细胞增殖(P<0.01),且作用具有时间和浓度依赖性.终浓度为600 nmol·L-1的Lip-ASODN能明显降低Livin mRNA表达,细胞凋亡率达(36.89±1.08)% (P<0.01),而Lip-MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异均无统计学意义(Pa>0.05).Livin ASODN可增加K562细胞对HHT的耐药性,半数抑制质量浓度为(0.37±0.02)mg·L-1;与HHT及小剂量阿糖胞苷联合应用可显著抑制细胞增殖(P<0.01).结论 Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,增加K562细胞凋亡及其对HHT的敏感性.     

谷氨酸对人骨髓间充质干细胞中Par-4蛋白表达的影响

目的探讨谷氨酸对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中Par-4蛋白表达的影响及意义。方法用BMSCs分离液和密度梯度离心分离和培养人BMSCs,取第3～5代培养的细胞,分别加入小鼠抗人CD29-FITC、CD44-FITC、CD105-FITC、CD45-FITC、CD14-FITC、CD34-FITC单克隆抗体,流式细胞术鉴定其免疫表型。采用0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L等不同剂量谷氨酸处理人BMSCs24h,并设正常对照组。Westernblot测定各组Par-4与突触素1(Synapsin-1)的蛋白表达量,并进行2种蛋白表达的相关性分析。结果在显微镜下,BMSCs呈星形或梭形。流式细胞术鉴定发现培养的细胞中CD29、CD44、CD105表达阳性,而CD45、CD14、CD34表达阴性,符合BMSCs特点。正常对照组Par-4蛋白相对表达量为17.43±5.9,0.1nmol/L、1.0nmol/L、10.0nmol/L谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4蛋白表达依次升高,分别为39.33±8.2、49.45±11.5、86.41±14.9(Pa<0.01)。谷氨酸处理导致BMSCs中Synapsin-1表达下调,并呈剂量依赖性(F=49.1P<0.01)。10.0nmol/L谷氨酸处理24h后,Par-4蛋白的表达与Synapsin-1的表达量呈显著负相关(r=-0.643P<0.01)。结论谷氨酸诱导人BMSCs中Par-4表达升高,并可能使植入到缺血微环境中的BMSCs发挥神经细胞替代的作用受到负面影响。     

脐血间充质干细胞对T淋巴细胞增殖和激活影响的实验研究

目的研究脐血源间充质干细胞(UCB-MSCs)对T淋巴细胞激活和增殖的影响。方法2006—2007年广西壮族自治区人民医院从脐血中分离和培养间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用B r-du法测定细胞增殖率,观察UCB-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测共培养体系中CD6 9细胞水平。结果从脐血获得的MSCs免疫表型分析显示,其不表达HLA-II抗原。对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞,UCB-MSCs对其的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UCB-MSCs与脐带血单个核细胞共培养体系中,CD 69细胞比例降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论UCB-MSCs抑制PHA刺激的T淋巴的增殖及激活,这种抑制特性表明,UCB-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为GVHD的防治提供一条新途径。     

骨髓间充质干细胞的旁分泌作用研究进展

随着近些年来对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)研究的不断深入,其在多种组织损伤中的修复作用也逐步被揭示。而近几年来发现,BMSCs 除了能通过直接分化为靶细胞而发挥修复作用,其旁分泌作用也在对组织的修复过程中发挥重要作用,BMSCs 分泌的多种细胞因子对损伤组织的修复有重要意义。     

骨髓间充质干细胞对损伤心肌细胞的影响及与Wnt/β-catenin信号通路的关系

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)在治疗损伤心肌细胞中的分子机制,明确Wnt/β-catenin信号通路是否在其发挥着作用。方法分离、鉴定并培养心肌细胞72 h后分为3组,A组为正常心肌细胞组、B组为阿霉素损伤组(1 mg/L阿霉素作用心肌细胞4 h建立)、C组为MSCs与损伤心肌细胞共培养组,继续培养72 h后,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,应用Western blot法检测β-catenin、c-Myc、p53蛋白的表达。结果阿霉素损伤组的心肌细胞凋亡率为(26.58±3.89)%,对照组为(0.74±0.65)%,MSCs与损伤心肌细胞共培养组为(7.72±0.90)%,差异有统计学意义(F=98.13,P0.001)。经两两比较发现,阿霉素损伤组的凋亡率高于对照组;而共培养组凋亡率低于阿霉素损伤组,差异均有统计学意义(P0.05)。阿霉素损伤组的β-catenin、c-Myc及p53蛋白表达水平均高于MSCs与损伤心肌细胞共培养组,两组间差异均有统计学意义(P均0.01);对照组上述3种蛋白表达不能测出。结论 MSCs可抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,其分子机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养

目的 分离再生障碍性贫血(再障)患儿骨髓间充质干细胞,进行体外培养,为进一步研究打下实验基础.方法 从再障患儿及正常志愿者骨髓中分离骨髓间充质干细胞,进行体外培养,诱导向成骨细胞、成脂细胞分化和流式细胞仪检测表面标志CD34、CD45、CD73和CD90.绘制生长曲线描述原代和传代细胞生长情况.结果 分离的贴壁细胞经向成骨细胞和脂肪细胞分化诱导培养,分别显示茜素红染色和油红染色阳性;CD73和CD90阳性.生长曲线显示,与正常志愿者相比再障患儿体外培养的骨髓间充质干细胞传代培养中生长能力减低.结论 再障患儿骨髓间充质干细胞存在异常,可能在再障发病机制中起着重要作用.     

间充质干细胞对急性肺损伤作用机制的研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）作为一类来源广泛的低免疫原性多能干细胞已被用于多种危重症疾病及免疫性疾病的细胞治疗研究.大量临床研究显示,MSCs尽管在受损组织中的定植率低,但可以通过旁分泌因子来调节机体免疫、抑制炎症反应、修复受损上皮.儿童急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是严重器官功能障碍时发生最早的并发症,目前尚无有效的药物治疗,病死率高.研究显示MSCs可以有效减轻肺水肿、改善肺功能,降低病死率,对于其作用机制的了解有利于推动MSCs从实验阶段转化为临床应用.本文将重点对MSCs修复ALI的相关机制进行综述.     

大鼠骨髓间充质干细胞与睾丸支持细胞共培养的生物学特征

目的 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在体外与睾丸Sertoli细胞共培养,模拟体内生精微环境条件下的生物学特征.方法 分离、纯化、培养大鼠骨髓MSCs、睾丸Sertoli细胞(SCs)、精原干细胞(SSCs),设SCs组、SCs饲养层+SSCs组、MSCs组、SCs饲养层+MSCs组,均用条件培养基培养,观察各组细胞形态、存活及生长情况,检测各组碱性磷酸酶(AKP)表达情况.结果 与单独培养的MSCs和SCs相比较,共培养之MSCs和SCs存活时间延长,MSCs源性细胞收缩变圆形,折光性增强,可见由细胞间桥连接的圆形双细胞或四细胞,与SSCs一样呈碱性磷酸酶阳性表现.结论 在体外与睾丸Sertoli细胞共培养,模拟体内生精微环境的条件下,MSCs能长期存活,并获得SSCs的部分生物学特征,有可能转分化为生精细胞.     

骨髓间充质干细胞在造血干细胞移植中的作用

骨髓间充质干细胞具有干细胞特性 ,体外培养证实其不仅具有自我更新和多向分化的能力 ,而且来源丰富 ,取材方便 ,多次传代后仍保持干细胞特性 ,主要应用于组织修复、基因治疗和造血干细胞移植等领域。该文就骨髓间充质干细胞在造血干细胞移植中的造血重建、移植物抗宿主病等方面的作用作一综述。     

体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为胰岛素分泌细胞(英文)

目的：探索大鼠骨髓间质干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的方法。为解决胰岛移植物来源匮乏这一问题提供新的思路。方法：采用横向分化技术,将成年大鼠骨髓间质干细胞诱导成为胰岛素分泌细胞。间接免疫荧光法鉴定诱导前后细胞nestin、胰岛素、胰高血糖素、生长抑素及Pdx-1的表达,RT-PCR法检测诱导前后细胞nestin,胰岛素-1,葡萄糖转运子-2,葡萄糖激酶及其转录因子Isl-1,Pdx-1,Pax-4和Pax-6 mRNA的表达;测定24 h胰岛素分泌量和胰岛素刺激实验评价诱导前后细胞的功能。结果：诱导5 h,nestin阳性细胞为(44.6±7.3)％;诱导24 h,nestin阳性细胞增至(61.8±8.4)％;此后,nestin阳性细胞数目开始下降,诱导第14天后,nestin表达基本消失。诱导后的胰岛素分泌细胞可以表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素和Pdx-1等蛋白;表达胰岛素-1、葡萄糖转运子-2、葡萄糖激酶及其多种转录因子mRNA;胰岛素分泌量增加;胰岛素刺激实验反应敏感等。而诱导前MSCc不县备上述特点。结论：大鼠骨髓间质干细胞体外可以诱导成为胰岛素分泌细胞,为胰岛移植开辟新的研究思路。     

非黏附骨髓间充质干细胞的体外培养与鉴定

目的 探讨小鼠骨髓中是否存在非黏附间充质干细胞(BM-NA-MSC),体外能否形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-F),能否在适当的条件下分化为脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞.方法 分离小鼠总骨髓细胞,体外培养,每天转移未贴壁的非黏附骨髓细胞(NA-BMC)到新培养环境中继续培养,每组细胞长满12 d后,亚甲基蓝染色显示形成的克隆,计数克隆个数;在总骨髓细胞培养到第4天时收集未贴壁的NA-BMC到新的培养皿中,待细胞贴壁生长达融合后传代纯化,取第5代细胞接种于向脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞诱导分化的培养液中,2周后分别进行油红染色、抗Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色及茜素红染色检测脂肪滴、Ⅱ型胶原和钙化结节的形成和表达.结果 小鼠骨髓细胞体外培养条件下不仅总骨髓细胞可以形成CFU-F,而且反复转移的NA-BMC也能不断形成CFU-F;给予适当的诱导条件,非黏附来源的骨髓细胞体外能够分化为产生油滴的脂肪细胞、表达Ⅱ型胶原的软骨和具有钙化能力的成骨细胞.结论 小鼠骨髓中存在一类NA-MSC,体外可以形成CFU-F,还可分化为脂肪、软骨和成骨细胞,表现出一定的多分化潜能,为下一步作为种子细胞用于移植实验的研究提供了前提.     

骨髓间充质干细胞在先天性脊椎裂胎鼠脊髓中的分化

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在先天性脊椎裂胎鼠脊髓中的存活与分化,探寻细胞替代治疗先天性脊椎裂的方法。方法用贴壁培养法进行大鼠MSC原代培养并传代,携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒转染第3代骨髓MSC。将转染的MSC注射到先天性脊椎裂胎鼠的脊髓中。母鼠孕20 d时取先天性脊椎裂胎鼠的脊椎,固定脱水后做冷冻切片,免疫荧光方法检测脊髓中EGFP阳性MSC中巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果骨髓MSC中CD90阳性细胞占99%,CD44阳性细胞占95%,不表达CD34。腺病毒-EGFP转染骨髓MSC的转染率为61%。致畸组显性脊椎裂胎鼠占64.3%。移植的MSC存在于脊髓表面或进入脊髓中,部分细胞变为长梭形或多角形。免疫荧光法检测结果显示移植到脊髓中的MSC可表达神经干细胞的标志物Nestin和神经胶质细胞的标志物GFAP。结论带有EGFP的MSC经细胞移植后能在胎鼠脊髓内存活,并能分化为神经干细胞和神经胶质细胞。     

靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中CD2相关蛋白表达的影响及意义

目的 研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响及意义.方法 利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs.采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平.采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡.采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率.Western blot检测hBMSCs CD2AP蛋白表达量.应用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.Par-4-SiRNA可下调hBMSCs Par-4-mRNA水平,抑制率为88%(P＜0.01).而非抑制的对照序列未见抑制作用(P＞0.05).2.流式细胞术检测结果 显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(P＜0.01).而在Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组中,谷氨酸对hBMSCs的凋亡诱导作用被显著抑制,凋亡百分率显著下调为(39.49±5.01)%(P＜0.01).3.Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组,谷氨酸对hBMSCs中CD2AP的下调作用被显著抑制,CD2AP蛋白的表达量显著上升(P＜0.01).结论 靶向抑制Par-4基因的表达能够拮抗谷氨酸诱导的hBMSCs凋亡及CD2AP表达的下调.     

骨髓干细胞可塑性的研究进展

骨髓主要包含造血干细胞和间充质干细胞。前者可以分化成各种成熟的血细胞 ,后者又称为骨髓基质细胞 ,可以分化成多种成熟的间充质组织细胞如脂肪、骨和软骨细胞。最近的研究表明 ,成体骨髓干细胞还能分化成另外一些成熟的非造血细胞 ,包括肝、肾、肺、消化道、心肌和骨骼肌细胞等 ,称为骨髓干细胞可塑性。该文重点介绍骨髓干细胞的分化潜能及分化成非造血细胞的可能机制。     

骨髓干细胞移植与肺损伤修复

近年来,随着对骨髓干细胞多向分化潜能研究的深入,其在肺损伤方面的应用也引起关注。造血干细胞、骨髓间充质干细胞、多能成体祖细胞和侧群细胞能在特定环境下向肺内细胞分化,生成肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和纤维母细胞等,并可进行基因修饰,有望成为囊性纤维化、肺纤维化、肺气肿、原发性肺动脉高压等疾病的治疗手段。但是,骨髓干细胞移植仍然面临许多争议与挑战,还有大量问题尚待解决。     

全反式维甲酸对K562细胞的诱导分化作用

目的：全反式维甲酸(ATRA)对肿瘤细胞具有广泛的抑制增殖、促进分化作用。本研究通过体外培养检测ATRA对K562细胞是否具有诱导分化作用。方法：采用联苯胺染色、瑞氏染色、非特异性酯酶染色、硝基四唑氮蓝还原试验4种不同的染色方法及流式细胞术,观察经1μmol/L及2.5μmol/L ATRA诱导1d,4d,5d后,K562细胞出现诱导分化特征。结果：1μmol/L及2.5μmol/L ATRA均可诱导K562细胞向粒系分化。培养4d,1μmol/L ATRA组61.5％的K562细胞、2.5μmol/L组39％的K562细胞显示出向粒系成熟方向分化;培养5d,处理组的分化细胞数仍明显高于对照组(P<0.05),但两种浓度ATRA的诱导分化强度无统计学差异(P>0.05)。且均未出现向红系或单核细胞方向分化的特征。流式细胞仪检测ATRA诱导前后CD13及CD71的表达,1μmol/L ATRA诱导K562细胞1d,CD13抗原表达阳性率为8.0％,2.5μmol/L组则为6.7％,均高于对照组(2.1％)。培养5d,1μmol/L和2.5μmol/L AFRA组的CD13分别升高到28.1％,37.8％,而CD71则分别下降至1.2％和0.9％。与对照组比差异均具有显著性(P<0.05)。结论：ATRA可诱导K562细胞向粒系成熟方向分化。