食用菌菌渣缓解地黄连作障碍的研究

前期研究认为酚酸类物质的积累可能导致地黄连作障碍。研究发现不同菌渣提取液对酚酸均具有降解效果,其中杏鲍菇菌渣提取液对5种酚酸（对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香草醛和阿魏酸）的总降解率最高,达75.3%。盆栽试验结果表明,施用杏鲍菇菌渣的地黄根际土壤中的对羟基苯甲酸和香草醛,相对含量最低。进一步研究表明施用杏鲍菇菌渣使地黄冠幅、叶片数量、叶长、叶宽和株高等指标接近头茬地黄水平,使重茬地黄块根质量鲜重和干重分别提高2.70,3.66倍,单株梓醇总量提高2.25倍,同时提高了地黄根际土壤中细菌、真菌和放线菌的数量,也提高了地黄根际土壤中蔗糖酶、纤维素酶、脲酶、磷酸酶和过氧化氢酶的活性。这些结果表明,施用杏鲍菇菌渣一定程度上有效地缓解了地黄的连作障碍。     

地黄植株体内miRNAs与其连作障碍关系的研究进展

MicroRNAs是一类内源性小分子的非编码RNA,它通过对其靶基因的降解或抑制翻译来调控基因表达,进而调控植物的生理活动。植物在遇到逆境胁迫时,miRNAs会作用于与逆境相关的基因,启动体内的抗逆机制抵抗不利因素。地黄的连作障碍也是一种胁迫,从miRNAs水平上研究,有利于解读地黄连作障碍的分子机制。该文对地黄体内miRNAs的功能及调控机制进行了综述,并对miRNAs在地黄的研究中进行了展望。     

连作对当归生长的障碍效应及机制研究

目的:通过研究连作当归的生理生化效应,探讨当归的连作障碍机制。方法:测定分析当归的生长指标、叶片光合参数、保护酶活性等生理生化指标和产量、品质的变化。结果:连作导致当归生长发育受阻,药材产量、挥发油含量和浸出物含量下降。连作胁迫使叶片光合色素(Chla,Chlb,Chla/Chlb)含量降低,光合速率降低;叶片保护酶SOD,POD,CAT活性降低;叶片膜脂过氧化作用增强,MDA、脯氨酸和可溶性糖含量增加。结论:连作通过降低植株保护酶活性引起活性氧代谢失调,导致活性氧积累和膜脂过氧化损伤。这种影响的外在表现是植株光合色素含量降低,光合作用强度下降,干物质积累减少,可溶性糖含量升高,生长受抑,病害严重,产量和品质下降。     

地黄连作障碍机制的研究进展与消减策略

本文阐述了连作障碍概念、特征及其危害,结合课题组近年来对地黄连作障碍分子生物学机制的研究成果,从不同层次对地黄连作障碍的成因及作用机制进行了总结,强调植物化感自毒作用是地黄连作障碍的主导因素,指出了地黄对化感自毒作用的感知、传递、响应过程研究的新思路以及对地黄连作障碍的分子机制深化研究的途径。并在前期研究基础上,提出了中药材生产中消减连作障碍的方法和技术策略。     

多元组学背景下地黄连作障碍形成的分子机制研究进展

连作障碍的研究虽然已经有多年的历史,但目前仍没有有效的治疗方法,其根本原因是其形成体系的复杂性。该文从连作植物根际土壤多元因子的互作关系入手,详细阐述了栽培植物连作障碍形成的生理生态机制,提出了栽培药用植物、自毒化感物质和根际微生物间复杂的多元互作是驱动连作障碍形成的根本原因,指出了植物功能基因组学和代谢组学以及微生物宏组学相结合的多元组学技术在深入理解特定生境多因子互作关系研究中的优势。同时,该文以地黄为例,从根际化感自毒物质累积效应、根际微生态的灾变及连作植株的分子响应等多元角度综述了地黄连作障碍形成的分子机制,并详细总结了多元组学技术在这些机制研究中的运用和进展。该文为从分子水平上系统地揭示栽培药用植物连作障碍形成的分子机制提供了新的思路。     

连作地黄cDNA消减文库的构建及分析

目的:通过构建连作地黄cDNA消减文库,探讨地黄连作障碍的分子机制.方法:利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建连作地黄的正反消减文库,通过蓝白斑筛选、PCR的方法鉴定出阳性克隆,并对其进行测序和生物信息学分析.结果:连作地黄cDNA消减文库构建成功,正向和反向消减文库均筛选了300个阳性克隆.测序结果表明:正库、反库分别获得232条、214条特异的EST序列;经NCBI数据库分析,正库、反库中分别有200,195条EST序列的基因具有蛋白功能注释;COG基因功能预测结果表明,正库、反库中分别有60,61条EST序列具有相应的的基因功能分类,涉及21个代谢途径.结论:差异表达基因的功能注释表明,连作对地黄体内的基因表达具有深刻的影响.本研究筛选地黄响应连作的关键基因,为揭示地黄连作障碍的分子机制奠定了基础.     

地黄连作障碍中钙信号系统的异常变化分析

目的:阐述钙信号系统相关基因在头茬、重茬地黄中不同时期、不同组织中的相对表达量;同时利用不同浓度的钙信号阻断剂(异搏定、肝素钠)处理重茬地黄,进一步验证钙信号系统在连作伤害中的作用方式.方法:在前期转录组和连作地黄数字差异表达谱文库构建基础上,筛选鉴定了在连作地黄中差异表达的钙信号体系相关蛋白基因,并利用实时荧光定量PCR技术对钙信号系统相关基因进行时空表达分析;利用不同浓度的钙信号阻断剂(异搏定、肝素钠)处理重茬地黄.结果:12个基因中2个背向细胞质的钙离子通道在重茬地黄中下调表达,10个朝向细胞质的钙离子通道在重茬地黄中上调表达;而施用钙信号阻断剂的重茬地黄中,钙信号响应元件的CBL,CBP,CIBP,PLC等关键基因表达均显著下调,植株的受害程度显著缓解,并接近头茬水平.结论:连作伤害引起了钙由内质网向细胞质中流动,钙信号系统参与了地黄连作毒害的感知、传导和放大过程.     

地黄中响应连作基因的时空表达与分析

目的:前期作者利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了连作地黄的正反消减cDNA文库。该研究从两库中各选5个可能引起地黄连作障碍的基因做时空表达分析,以探讨其在地黄连作障碍中的作用。方法:应用实时荧光定量PCR技术检测这10个基因在正茬、重茬地黄中不同时期不同组织的相对表达量。结果:正库中筛选的5个编码基因(钙依赖性蛋白激酶、SAM合成酶、ACC氧酶、甲基转移酶、钙蛋白酶)在重茬地黄中有较高的表达量,在正茬地黄中几乎无表达;反库中筛选的5个编码基因(RNA依赖的RNA聚合酶、RNA复制酶、依赖于DNA的RNA聚合酶IIa、细胞周期蛋白D、RNA结合蛋白)在正茬地黄中均得到较高表达,而在重茬中却被下调或关闭。结论:参与核心生命过程的关键调控基因(如细胞周期蛋白D、依赖于DNA的RNA聚合酶IIa)在重茬地黄中被抑制或关闭,扰乱了植株正常的基因表达程序,通过钙信号传导和乙烯合成信号,干扰了地黄生长发育的重要代谢过程,从而导致连作地黄植株矮小,发育不良,引起地黄的连作障碍现象。     

地黄化感自毒作用与连作障碍机制的研究进展

在阐述连作障碍概念、危害和表观现象基础上,对地黄连作障碍的成因及作用机制进行了描述,强调植物化感自毒作用是地黄连作障碍的主导因素,结合地黄化感自毒作用的感知、传递、效应过程新思路及作者的最新研究进展,对地黄化感自毒作用与连作障碍的机制从根际土壤、植株响应和基因调控三个不同层次进行分析,并指出了对地黄连作障碍的分子机制进一步深入研究的途径。     

土壤细菌对地黄试管苗和盆栽苗生长的影响

目的 探讨地黄连作障碍的原因和筛选可能具有缓解作用的有益菌.方法 将已分离纯化的土壤细菌菌株接种到试管苗和盆栽苗基部,分别于30 d和60 d后收获,测量苗质量等指标.结果 组培试验表明48个菌株中,有11个对地黄生长具有显著促进作用,另外11个具有抑制或致死作用;盆栽试验揭示16个菌株对地黄苗具有促进作用,13个菌株具有抑制或致死作用.结论 土壤细菌对地黄苗的生长具有显著影响.地黄种植可能导致根际细菌菌群失衡,施用有益细菌可能是解决地黄连作障碍的有效措施.     

地黄饮片HPCE指纹图谱研究

目的:建立地黄饮片HPCE指纹图谱分析方法,并对地黄及其炮制品的指纹谱进行比较。方法:采用高效毛细管电泳法进行色谱分离,以60 mmol/L硼砂(5%甲醇,pH 9.5)为运行缓冲液,分离电压为20 kV,波长为210 nm,以梓醇为参照物,测定其指纹图谱,并作模糊聚类法分析和相似度评价。结果:初步建立了以7个共有峰为特征指纹信息的地黄饮片HPCE指纹图谱;发现少数地黄饮片的指纹图谱有一定差异,生品与其炮制品的指纹谱中共有峰相对峰面积差异显著。结论:方法准确可靠,重现性好,可作为地黄饮片内在质量评价的依据。     

地黄脱毒技术研究

从地黄种茎育出的无菌幼苗上切取下的茎尖,用组织培养方法可诱导成去病毒幼苗。本试验还研究出适宜地黄茎段苗消毒的消毒剂为0.05％HgCl_2。适宜于茎段苗生长的MS培养基的琼脂浓度为0.7％,pH为7。诱导茎尖成苗的培养基为MS 6-BA 0.5 mg/L。繁殖脱毒苗所用的MS培养基为1/4大量元素 1/2微量元素,并用1/2食用白砂糖代替蔗糖,可使快繁成本降低48.7％。     

地黄提芽栽培技术

地黄传统种植方法是用小生地作种栽,进行无性繁殖。从1984年开始,试验用小地黄在育苗床上生芽,然后直接提芽即摘取嫩苗茎种植。这项新技术,经过10多年的反复试验,已获得成功。     

鲜地黄中梓醇提取工艺

对鲜地黄中梓醇的提取方法进行优选 ,采用正交设计法 ,确定了最佳提取工艺 ,即 3倍量甲醇 ,加热回流提取2次。     

地黄低聚糖对小鼠免疫和造血功能的作用

采用免疫学和实验血液学方法，研究和探讨了地黄低聚糖对小鼠免疫功能和造血功能的作用。结果表明：地黄低聚糖４０ｍｇ／ｋｇ可增强正常小鼠的ＰＦＣ反应，而２０、４０ｍｇ／ｋｇ，可提高Ｃｙ抑制小鼠和荷瘤小鼠的ＰＦＣ数及增强荷瘤小鼠的淋巴细胞增殖反应。同时地黄低聚糖１０～４０ｍｇ／ｋｇ可促进骨髓造血祖细胞的增殖与分化。结果提示地黄低聚糖可明显增强免疫抑制小鼠的体液免疫和细胞免疫反应，同时可促进小鼠骨髓造血祖细胞的增殖分化。     

地黄不同炮制品中梓醇的含量测定研究

目的：测定地黄不同炮制品中梓醇的含量。方法：运用薄层扫描法．采用反射锯齿扫描法测定，薄层色谱条件为：硅胶G薄层板，醋酸乙酯-甲醇-水-醋酸(10：2：0．5：0．5)为展开剂，λs 540nm，λR 650nm。结果：地黄不同炮制品中梓醇的含量差异很大．含量依次为鲜地0．55%．生地0．22％，熟地0．13％。结论：该法简便易行，灵敏度高，重现性好．可用于地黄药材及其制剂的质量控制。     

地黄高效叶片离体再生系统的建立△

目的:通过分析不同浓度激素对地黄品种金九的愈伤诱导、再生芽分化等方面的影响,以期建立高效的地黄叶片再生系统,为地黄的快速繁殖和遗传转化研究奠定基础。方法:分析在添加不同浓度NAA、6-BA情况下地黄叶片的愈伤诱导率、再生芽分化率、再生芽生根率和增殖系数。结果:在多个激素浓度组合下均具有较高的叶片愈伤诱导率。最适于金九的叶片再生芽分化的激素浓度为NAA0.1mg·L-1、6-BA2.0mg·L-1。在适宜的激素浓度范围内,金九的再生芽分化率很高,最高可达96.67%。添加0.1mg·L-1的NAA有利于再生地黄植株壮苗和提高生根率。在含有NAA0.1mg·L-1、6-BA0.5mg·L-1的MS培养基上培养,则有利于再生芽的增殖。结论:NAA、6-BA的浓度对叶片再生芽分化、生根和增殖有显著影响。金九可作为地黄的分子生物学研究和遗传转化受体的良好材料。     

不同产地的地黄中梓醇含量比较

 目的：测定不同产地地黄中梓醇含量。方法：薄层扫描法，展开剂为氯仿-甲醇-水(7∶4∶0.5)，显色剂为10%硫酸-乙醇，扫描波长为413nm。结果：回归方程：Y=621.76X+118.69，r=0.9966，平均回收率为99.10％，RSD=2.50％。结论：河南温县产地黄中梓醇含量较高，山东嘉祥产地黄中梓醇含量较低。