人参皂甙Rb1,Rg1和维生素E保护氧化损伤的牛视网膜色素上皮细胞生 …

目的 检测人参皂甙Ｒｂ１,Ｒｇ１和维生素Ｅ是否能抑制次黄嘌呤（ＨＸ）／黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）对培养的牛视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞的氧化损伤作用。方法 建立牛眼ＲＰＥ细胞培养体系以及ＲＰＥ细胞氧化损伤模型。利用ＭＴＴ法观察人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１和维生素Ｅ对氧化损伤的牛ＲＰＥ细胞增殖的影响。结果 加入不同浓度的Ｒｂ１后测得的细胞ＯＤ值普遍较ＨＸ／ＸＯ组的ＯＤ值高,但无显著性差异;当Ｒｇ、＝０．１、１μ     

人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞凋亡的影响

目的检验氧化损伤的牛ＲＰＥ细胞是否存在着凋亡以及人参皂甙Ｒｇ１、Ｒｂ１和维生素Ｅ对其的影响,以期进一步研究ＲＰＥ细胞氧化损害的机理,并试图为预防和治疗与ＲＰＥ细胞相关的视网膜疾病提供有效的手段。方法建立牛ＲＰＥ细胞氧化损伤模型,利用原位末端标记技术测定ＲＰＥ细胞凋亡。结果发生凋亡的ＲＰＥ细胞细胞核染成紫蓝色,形态不一,往往成颗粒状着色,与次黄嘌呤（ＨＸ）／黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）（ＨＸ＝０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１,ＸＯ＝５Ｕ·Ｌ－１）组阳性细胞数相比较,正常对照组Ｒｇ１（０．１ｍｇ·Ｌ－１）组及维生素Ｅ（１０ｍｇ·Ｌ－１）组存在显著性差异（Ｐ＜０．０５）,而与Ｒｂ１（１０ｍｇ·Ｌ－１）组无显著性差异。结论氧化损伤可使培养的牛ＲＰＥ细胞发生凋亡。人参皂甙Ｒｇ１和维生素Ｅ对抗氧自由基对ＲＰＥ细胞损伤的机制可能是通过清除氧自由基、减少ＲＰＥ细胞脂类过氧化的发生,从而有效地抑制ＲＰＥ细胞凋亡,利于ＲＰＥ细胞的生存。     

人在皂甙Rg1,Rb1和维生素E对氧化损伤的牛RPE细胞凋亡的影响

目的 检验氧化损伤的牛ＲＰＥ细胞是否存在着凋亡以及人参皂甙Ｒｇ１、Ｒｂ１和维生素Ｅ对其的影响,以期进一步研究ＲＰＥ细胞氧化损害的机理,并试图为预防和治疗与ＲＰＥ细胞相关的视网膜疾病提供有效手段。方法 建立牛ＲＰＥ细胞氧化损伤模型,利用原位末端标记技术测定ＲＰＥ细胞凋亡。结果 发生凋亡的ＲＰＥ细胞细胞核染成蓝色,形态不一,往往成颗粒状着色,与次黄嘌呤（ＨＸ）／黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）（ＨＸ＝０．１ｍｍｏ     

人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对氧化损伤的牛视网膜色素上皮细胞bcl-2表达的影响

研究证实氧自由基能够诱导细胞凋亡[1,2],而癌基因bcl-2可阻滞细胞凋亡的发生[3,4]。根据以上的研究结果,我们研究了氧化损伤的牛视网膜色素上皮(retinapigmentepithelium,RPE)细胞bcl-2表达水平的变化和人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E(VitE)对它的影响,以期进一步研究RPE细胞氧化损害的机制,并试图利用上述药物人为地干预RPE细胞凋亡,从而提供预防和治疗与RPE细胞相关的视网膜疾病的有效手段。1　材料和方法1.1　主要试剂牛眼球购买于北京市清真食品厂,Rb1、Rg1购于中国药品生物检定所,维生素E(Sigma公司),细胞培养基DMEM(dulbeccomi…     

人参皂甙Rg1、Rb1和维生素E对氧化损伤的牛视网膜色素上皮细胞bc1-2表达的影响

研究证实氧自由基能够诱导细胞凋亡[1,2],而癌基因bcl-2可阻滞细胞凋亡的发生[3,4].     

维生素E对大剂量蓝光诱导损伤视网膜色素上皮细胞的影响

目的:研究维生素E(Vit E)对大剂量蓝光诱导人视网膜色素上皮(hRPE)细胞损伤的影响,为减少蓝光损伤hRPE细胞的预后方案提供思路。方法:用3000±150Lx蓝光建立hRPE细胞损伤模型;利用流式细胞术检测照射时间分别为0、3、6、9、12、24h的6组hRPE细胞凋亡率及活性氧相对量;利用流式细胞术检测照射0h组、照射6h组、照射6h前或后加不同浓度Vit E组(Vit E的浓度分别为10、50、100μmol/L)的hRPE细胞凋亡情况和活性氧相对量,并采用Hoechst 33258试剂染色在荧光显微镜下观察hRPE细胞的荧光强度。结果:与照射0h组相比,照射3、6、9、12、24h组的hRPE细胞活性氧相对量明显增加(均P<0.01),照射6、9、12、24h组的hRPE细胞凋亡率也明显增加(均P<0.01),但照射3h组的hRPE细胞凋亡率无明显增加,差异无统计学意义(P=0.46)。与照射6h组相比,除照射6h前加入10μmol/L的hRPE细胞凋亡率(P=0.66)外,其他加Vit E的实验组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率明显减少、细胞中Hoechst 33258释放蓝色荧光逐渐减弱,且呈浓度依赖(均P<0.01)。与照射0h组相比,加Vit E的6组hRPE细胞活性氧相对量和凋亡率有差异(均P<0.01)。同一浓度的Vit E,除10μmol/L Vit E的hRPE细胞凋亡率在照射前或后加无差异(P=0.08)外,照射后加Vit E组比照射前加Vit E组的hRPE细胞活性氧相对量、凋亡率明显减少(均P<0.01)。结论:hRPE细胞经蓝光照射后出现胞内活性氧相对量增多的现象早于细胞凋亡,清除胞内活性氧是减少大剂量蓝光诱导hRPE细胞损伤的思路。Vit E可保护由大剂量蓝光诱导的RPE细胞损伤,这种效应随Vit E浓度增加而增强,且照射后加入比照射前加入的效果更好。但需要一定剂量的Vit E才能显效,而且无法完全修复损伤。     

虾青素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：：探讨虾青素(astaxanthin,AST)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2 O2)诱导人视网膜色素上皮细胞( retinal pigment epithelial cells,RPE)氧化损伤的保护作用。方法：人RPE细胞系传代培养,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察超微结构变化。结果：MTT结果显示用10-8 mol/L和10-4 mol/L AST处理后, RPE 细胞活性分别提高到53.66％±3.25％和70.43％±2.38％,与氧化损伤组(38.76％±3.74％)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞计数结果显示,预先给予10-8 mol/L和10-4 mol/L的AST作用后, RPE细胞凋亡率分别下降到30.23％±1.91％和12.58％±2.12％,与氧化损伤组(42.50％±1.94％)比较,差异具有统计学意义( P<0.05)。电镜观察结果显示,伴随AST作用浓度的增加,细胞形态亦逐渐得到改善。结论：AST可以抑制H2 O2诱导的人RPE细胞的凋亡,从而为寻求有效的防治视网膜损伤的药物提供可靠的实验依据。     

视网膜色素上皮细胞线粒体DNA的氧化损伤研究

目的研究体外氧化应激模型中视网膜色素上皮(RPE)细胞线粒体DNA(mtDNA)的损伤规律。方法以过氧化氢(H2O2)诱导建立体外RPE细胞氧化应激模型,对模型中细胞mtDNA损伤进行检测,并与细胞存活率和细胞内活性氧(ROS)浓度的变化相比较。结果mtDNA损伤程度随H2O2浓度升高和作用时间延长而增加;较之细胞存活率和ROS浓度改变更为敏感。结论在RPE细胞的氧化应激中存在mtDNA的损伤改变,它与氧化剂之间具有明显的浓度与时间的依赖性。     

氧化损伤对体外培养人视网膜色素上皮细胞PEDF的影响

目的研究氧化损伤对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞表达色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)的影响。方法体外培养人RPE细胞,加入浓度为600μmol.L-1H2O2分别作用不同时间(2h、8h、24h),采用免疫细胞化学法检测PEDF蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PEDF mRNA。结果免疫细胞化学染色对照组即有PEDF的阳性表达,而氧化损伤2h、8h、24h PEDF蛋白阳性表达量逐渐减少,染色由棕黄色变为黄色。各时间段两组结果比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测PEDF mRNA量与PEDF蛋白表达变化一致。结论氧化损伤能促使人RPE细胞PEDF表达下调,并在一定范围内与作用时间有关。     

P-糖蛋白对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞氧化损伤的抑制作用

目的探讨P-糖蛋白对H₂O₂诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤的抑制作用。方法取人RPE细胞株D407细胞,放入体积分数5%CO₂培养箱中用含体积分数10%胎牛血清和双抗的DMEM培养基于37℃传代培养。先将细胞按H₂O₂浓度梯度处理,使用免疫印迹实验和P-糖蛋白荧光性底物罗丹明123蓄积实验确定H₂O₂对P-糖蛋白表达的最佳诱导浓度。预先使用1μmol·L^-1P-糖蛋白抑制剂Tariquidar处理细胞,通过测量细胞内罗丹明123蓄积量检测P-糖蛋白功能活性。将细胞分成3组:对照组、H₂O₂模型组(400μmol·L^-1)、H₂O₂+P-糖蛋白抑制剂组(H₂O₂+Tariquidar),通过检测细胞...     

L-carnitine protects human retinal pigment epithelial cells from oxidative damage

PURPOSE: To determine the efficacy of L-carnitine (LC) against oxidative changes in human retinal pigment epithelium (RPE) cells. METHODS: The RPE cells from human donor eyes were cultured in Hams F-10 medium. The effect of LC on H2O2-induced morphologic changes in the RPE cells was analyzed by light microscopy. Reduction in cell death after the impact of LC treatment on H2O2-treated cells was analyzed by MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assays. In addition, the effect of H2O2 on the activity of RPE-antioxidant enzymes, glutathione (GSH) and superoxide dismutase (SOD), and LC-induced protection was also determined. RESULTS: LC protected the RPE cells by inhibiting the peroxide-induced cytopathic effect from 50% to 10%. Nuclear condensation observed in 40% of the H2O2-treated cells decreased to 20% after LC treatment. The MTT assays demonstrated that 100 microM oxidant caused appreciable cell death, which was reduced by LC treatment; however, 100% protection was not achieved. Significant peroxide-induced cell death was seen within 5 hr of H2O2 treatment, and a quantifiable reduction was observed after LC treatment for a similar time period. The change in the antioxidant potential of the RPE induced by oxidative stress was restored by LC treatment, as demonstrated by an increase in GSH and SOD activities. CONCLUSIONS: LC is capable of protecting the RPE cells from H2O2-induced oxidative damage, implying that micronutrients can have a positive effect and can play an important role in the treatment of oxidation-induced ocular disorders. Further studies are needed to understand the mechanism of LC-induced protection to the RPE cells.     

可见光对视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的 观察可见光对体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞内活性氧(ROS)、8-羟基-2＇-脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)和8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(hOGG1)表达的影响。方法 人RPE-19细胞按1∶4至1∶6传代培养。取第4～6代80％融合细胞用于实验。细胞分为白光、红光、蓝光照射组和对照组,细胞平面光照强度为600 Lux。白光、红光分别照射6、12、24、48 h;蓝光照射1、3、6、12 h;对照组以锡纸包裹避光培养。2＇,7＇-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞内ROS表达量,免疫细胞化学(ICG)法检测细胞内8-OHdG表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内hOGG1表达情况。结果 DCFH-DA法检测结果显示,白光、红光照射组分别照射12、24、48 h,蓝光照射组照射1、3、6、12 h,细胞内ROS表达量均升高且随时间延长而增加,与对照组细胞内ROS表达量比较,差异均有统计学意义（F白光=11.611,F红光=6.706,F蓝光=23.259;P＜0.05）。ICG法检测结果显示,白光、红光照射组分别照射12、24、48 h,细胞胞浆8-OHdG表达量增高,照射后12、24 h表达量随时间延长而增加,48 h有所降低,与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较,差异均有统计学意义（F白光 =16.032,F红光=6.378;P＜0.05）;蓝光照射组照射后1、3、6、12 h,细胞胞浆8-OHdG表达量均增高,照射后6、12h细胞胞浆8-OHdG表达量较1、3h细胞胞浆8-OHdG表达量有所降低,但与对照组细胞胞浆8-OHdG表达量比较,差异均有统计学意义(F蓝光=19.484,P＜0.01)。Western blot检测结果显示,白光、红光照射组照射12、24、48 h,蓝光照射组照射6、12h,细胞内hOGG1表达量均增高,与对照组细胞内hOGG1表达量比较,差异均有统计学意义(F白光=15.121,F红光=21.041;F蓝光=12.479,P＜0.05)。结论 白光、红光、蓝光能以时间依赖性方式诱导RPE细胞ROS生成增加并导致RPE细胞DNA氧化损伤。RPE细胞在可见光作用下能增加DNA糖基化酶hOGG1的表达量以对DNA氧化损伤进行修复。     

瘦素对胰岛素抵抗状态下人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响

目的 观察瘦素对胰岛素抵抗状态下人视网膜色素上皮（RPE）细胞氧化损伤的影响。方法 体外培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和胰岛素抵抗组。分别加入 0、10、100 ng/ml瘦素干预24、48、72 h。2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧（ROS）的产生情况;免疫细胞化学法检测细胞内8-羟基-2′-脱氧鸟嘌呤（8-OHdG）的表达量;蛋白质免疫印迹法检测细胞浆中8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1（hOGGl）的表达量。结果 干预后24、48、72 h,正常对照组、胰岛素抵抗组RPE细胞ROS（正常对照组：F=37.136、37.178、49.634;胰岛素抵抗组：F=9.822、28.881、71.150）、8-OHdG表达量（正常对照组：F=88.643、390.920、1039.276;胰岛素抵抗组：F=273.311、299.155、82.237）均随瘦素浓度增加而增加,hOGGl的表达量（正常对照组：F=470.062、1073.113、295.456;胰岛素抵抗组：F=240.032、592.389、527.760）随瘦素浓度的增加而递增,差异均有统计学意义（P＜0.05）。正常对照组、胰岛素抵抗组在相同浓度瘦素干预下,随干预时间延长,胰岛素抵抗组RPE细胞8-OHdG表达量呈现高于正常对照组的趋势。干预后24 h,胰岛素抵抗组RPE细胞hOGGl表达量与正常对照组比较,差异无统计学意义（F=23.392,P＞0.05）;干预后72 h,胰岛素抵抗组PRE细胞hOGGl表达量低于正常对照组,差异有统计学意义（F=129.394,P＜0.05）。在相同浓度瘦素干预下,随干预时间延长,RPE细胞hOGG1表达量呈现先升高后降低的趋势。干预后48 h,正常对照组（F=83.673、268.000、373.492）、胰岛素抵抗组（F=49.021、304.293、294.293）RPE细胞hOGGl表达量均高于干预后24、72 h RPE细胞hOGGl表达量,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 正常状态及胰岛素抵抗状态下瘦素能引起人RPE细胞氧化损伤,随着瘦素浓度的增加、作用时间的延长氧化损伤的程度呈加重趋势;氧化损伤的修复随着时间的延长呈先强后弱的趋势,随着瘦素浓度的增加而呈增强的趋势。     

氧化应激反应对视网膜色素上皮细胞迁移的影响及相关机制的探讨

目的 探讨氧化剂tert-butyl hydroperoxide(TBH)诱导的氧化应激反应对视网膜色素上皮(RPE)细胞迁移的影响。方法 将人RPE细胞内氧化反应产物以Carboxy-H2DCFDA染色标记;细胞的迁移采用改良的Boyden腔测定;其存活及黏附通过MTT比色法测定。肌动蛋白,局部黏附激酶及纽带蛋白的表达采用免疫荧光染色观察。通过蛋白电泳观察分裂原激活的蛋白激酶和局部黏附激酶的表达。结果 TBH处理后RPE细胞内氧化反应产物增加。TBH对RPE细胞迁移的影响呈双向反应,即低浓度促进,高浓度抑制。高浓度TBH降低RPE细胞黏附力,也能减少局部黏附激酶和纽带蛋白的表达,同时。TBH可活化分裂原激活的蛋白激酶。结论 由TBH诱导的氧化应激反应既能刺激也能抑制RPE细胞的迁移。(中华眼科杂志,2005,41：100-105)     

(R)-alpha-lipoic acid protects retinal pigment epithelial cells from oxidative damage

PURPOSE: To determine whether (R)-alpha-lipoic acid (LA) protects cultured human fetal retinal pigment epithelial (hfRPE) cells against oxidative injury and identify the pathways that may mediate protection. METHODS: Cultured hfRPE cells were pretreated with various concentrations of LA for 14 to 16 hours followed by treatment with a chemical oxidant, tert-butylhydroperoxide (t-BuOOH; 0.8 mM, 3 hours). Reactive oxygen species (ROS) production and cell viability were measured using H(2)DCF and MTT assays, respectively. RPE cells were evaluated with fluorescent dyes (SYTOX Orange and SYTO Green; Molecular Probes, Eugene, OR), which differentiate between live and dead cells. Apoptosis was visualized by using the TUNEL assay. Changes in mitochondrial membrane potential were detected by JC-1 dye. Intracellular levels of reduced glutathione (GSH) and oxidized glutathione (GSSG) were measured by HPLC. Regulation of gamma-glutamylcysteine ligase (GCL), the rate-controlling enzyme of GSH production, was assayed by RT-PCR. RESULTS: Pretreatment of hfRPE cells with LA, 0.2 mM and 0.5 mM, significantly reduced the levels of t-BuOOH-induced intracellular ROS, by 23% and 49%, respectively. LA (0.5 mM) prevented oxidant-induced cell death and apoptosis and also increased the viability of oxidant-treated hfRPE cells from 38% to 90% of control. LA upregulated the mRNA expression of GCL, and was protective against t-BuOOH-induced decreases in both mitochondrial membrane potential and intracellular levels of GSH and GSH/GSSG. CONCLUSIONS: The present study suggests that the protective effect of LA involves multiple pathways and that LA could be effective against age-associated increase in oxidative stress and mitochondrial dysfunction in RPE cells.     

凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞生长的影响

目的 探讨凝血酶对视网膜色素上皮细胞的影响。方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞，观察不同浓度的凝血酶对视网膜色素上皮细胞的影响。结果 各浓度的凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有促进增殖的作用。且40U/ml尤为明显。结论 凝血酶对体外培养的视网膜色素上皮细胞具有促进增殖的作用。这为探讨增生性玻璃体视网膜病变的提供了实验依据。